血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
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1、M蛋白（异常免疫球蛋白）血症：在β-球蛋白区、γ-球 蛋白区或两者之间，出现区带细而浓，有时呈波浪状，在 光密度计扫描图上呈尖陡高峰的M蛋白带。
2、蛋白质缺乏症
3、肾病
4、急慢性炎症
5、肝病：肝硬化出现“β-γ桥”
原发性肝癌在Alb与α1-球蛋白之间出现一小的区 第十四页，共17页。
几种疾病的蛋白电泳(diàn yǒnɡ) 变化
第十二页，共17页。
五、结果(jiē guǒ)与分析：
1.定性(dìng xìng)观察：染色后的薄膜上可显现清 楚的五条区带。
2.定量测定：光密度仪扫描法，洗脱比色法
第十三页，共17页。
六、临床意义
根据电泳图谱，分析每条色带的前后位置、染色深浅及 区带宽窄等，可以判定血清蛋白质有无种类及含量 (hánliàng)的变化，进而帮助诊断疾病。血清蛋白质醋 酸纤维薄膜电泳在临床上常用于分析血、尿等样品中的蛋 白质，供临床上诊断肝、肾等疾病参考。
2.点样：毛面向上，用点样器，在距膜一端约1.5cm处， 与边缘平行直线状点加3~5μL待分离血清。注意取样适 量、均匀；血清线位置适当，粗细均匀，不能有明显扩 散现象。
第十页，共17页。
1.5cm
3.搭桥：首先将双层滤纸铺好，分别(fēnbié)放置于 电泳槽两端，其下端要浸入缓冲液中。然后，将点好 样的薄膜光面向上平直地贴于电泳槽的支架上。注意 桥的方向，点样的一端位于负极，点样线不能搭在滤 纸上。
实验二 血清(xuèqīng)蛋白质 醋酸纤维素薄膜电泳
第一页，共17页。
一、实验(shíyàn)目的
1.了解电泳的基本原理(yuánlǐ)； 2.掌握电泳分离蛋白质的原理(yuánlǐ)； 3.掌握醋酸纤维素薄膜电泳的方法。
第二页，共17页。
二、实验(shíyàn)原理
1.电泳的基本原理
电泳——是带电质点在电场力作用下发生定 向移动的现象。 电泳技术——是利用电泳现象进行物质分离、 纯化(chún huà)及鉴定的技术。
第七页，共17页。
醋纤膜分离血清(xuèqīng)蛋白质的方法
以醋酸纤维素薄膜作为支持介质，于薄膜一端加微 量血清，膜两端连接于缓冲液。电泳分离后再经染色 处理，可将血清蛋白质分成五条主要的区带，从正极 (zhèngjí)依次为清蛋白（Albumin)、α1-球蛋白、 α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白。染料与蛋白质 的结合是与蛋白质的量成正比，可将各条带分别溶于 碱性溶液再进行比色测定，或用一定的有机溶剂是薄 膜透明化后直接用光密度扫描，从而计算出血清蛋白 质的含量。
因此电泳时常采用pH8.6的缓冲液。此时，蛋白质解离带负电荷，
在电场中向正极移动。由于各种血清(xuèqīng)蛋白的等电点不
同，在同一pH下带的电荷数也不同，加上各蛋白质的分子大小也
有差别，因此在电场中的移动速度不同。带电荷多、相对分子量
小的蛋白质泳动较快，带电荷少、相对分子量大的泳动较慢。这
样各种血清(xuèqīng)蛋白质在同一时间内泳动的距离就不同，
和等电点：
Pro
COOH
pH
Pro
COO– pH
Pro
COO–
NH3 +
NH3 +
NH2
碱性电离
pI
酸性电离
等电点 —— 即 pI ( isoelectric point )，当氨 基酸酸碱电离的速度相等(xiāngděng)时，即当蛋白 质所带净电荷为零，呈电中性，此时溶液的pH就是此 蛋白质的等电点PI。
从而可将血清(xuèqīng)蛋白分离成数条区带。
第六页，共17页。
3.醋纤膜分离血清(xuèqīng)蛋白 质的原理
醋酸纤维素薄膜电泳是采用醋酸纤维素薄膜作支持物的 一种电泳技术。
醋酸纤维素薄膜是纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋 酸酯，具有均一的泡沫状结构，渗透性强，对分子移动阻 力小，用它做区带电泳的支持物，用样量少，分离清晰， 对染料无吸附作用，应用范围广，快速简便 ,且染色后的 薄膜可用乙醇和冰醋酸溶液浸泡(jìnpào)透明，透明后 的薄膜便于保存和定量分析，因此目前被广泛用于血清蛋 白、脂蛋白、血红蛋白、糖蛋白、酶的分离和免疫电泳等 方面。
第三页，共17页。
电泳速度(sùdù)的
方向：
正 F´ F 负
极
–
极
电泳(diàn yǒnɡ)速度
的电大场小力：F=QE
摩擦力 F´= 6πRV
F= F´
运动 (yùndòn g)速度
QE V = 6πR
∝
Q R
第四页，共17页。
QE= 6πRV
2.电泳分离蛋白质的原理
(yuánlǐ)
蛋白质的两性(liǎngxìng)电离
第十五页，共17页。
七、注意事项：
1.点样时,毛面向上,要求样线粗细均匀，无纸。
3.正确连接导线(红色—正极，黑色—负极）。 4.电泳过程(guòchéng)中，严禁再取放薄膜。
第十六页，共17页。
内容(nèiróng)总结
实验二 血清蛋白质
第八页，共17页。
三、主要试剂(shìjì)与器材：
❖ 试剂(shìjì)：血清
❖
巴比妥缓冲液
❖
染色液，漂洗液
❖ 器材：电泳仪，电泳槽
❖
醋酸纤维素薄膜（2×8cm）
❖
血清加样器
第九页，共17页。
四、操作步骤：
1.浸膜：将裁好的醋酸纤维素薄膜浸泡于缓冲液中，充分 浸透后用镊子取出（约20min，直到膜上没有斑点，中 间(zhōngjiān)没有气泡为止）。
第五页，共17页。
❖ 当pH=PI时，所带电荷为0，粒子是静止的；
❖ 当pH>PI时，酸性电离，释放氢离子，带负电，运动方向是从负极 向正极移动；
❖ 当pH<PI时，碱性电离，结合氢离子，带正电，运动方向是从正极 向负极移动；
❖ 当pH距离PI越远时，所带电量越多。
❖
血清(xuèqīng)蛋白质的等电点为4.8～7.5，均低于8.6，
醋酸纤维(cù suān xiān wéi)素薄膜电泳装置示意图
第十一页，共17页。
4.电泳：红正黑负。 电流 2mA/膜 。 电泳时间约 50min 。
5.染色：氨基黑10B, 染色2～3min. 6.脱色：在装有漂洗(piāo xǐ)液的2个漂洗
(piāo xǐ)缸中，依次漂去多余染料，直到 背景漂白为止。
No 醋酸纤维素薄膜电泳。电泳——是带电(dài diàn)质点在电场力作用下发生定向移动的
现象。电泳技术——是利用电泳现象进行物质分离、纯化及鉴定的技术。醋酸纤维素 薄膜电泳是采用醋酸纤维素薄膜作支持物的一种电泳技术。染色液，漂洗液。1.点样 时,毛面向上,要求样线粗细均匀，无明显扩散现象。2.搭桥时,光面向上,点样端置于负 极,样线不能接触滤纸。3.正确连接导线(红色—正极，黑色—负极）。4.电泳过程中， 严禁再取放薄膜
Image
第十七页，共17页。
2、蛋白质缺乏症
3、肾病
4、急慢性炎症
5、肝病：肝硬化出现“β-γ桥”
原发性肝癌在Alb与α1-球蛋白之间出现一小的区 第十四页，共17页。
几种疾病的蛋白电泳(diàn yǒnɡ) 变化
第十二页，共17页。
五、结果(jiē guǒ)与分析：
1.定性(dìng xìng)观察：染色后的薄膜上可显现清 楚的五条区带。
2.定量测定：光密度仪扫描法，洗脱比色法
第十三页，共17页。
六、临床意义
根据电泳图谱，分析每条色带的前后位置、染色深浅及 区带宽窄等，可以判定血清蛋白质有无种类及含量 (hánliàng)的变化，进而帮助诊断疾病。血清蛋白质醋 酸纤维薄膜电泳在临床上常用于分析血、尿等样品中的蛋 白质，供临床上诊断肝、肾等疾病参考。
2.点样：毛面向上，用点样器，在距膜一端约1.5cm处， 与边缘平行直线状点加3~5μL待分离血清。注意取样适 量、均匀；血清线位置适当，粗细均匀，不能有明显扩 散现象。
第十页，共17页。
1.5cm
3.搭桥：首先将双层滤纸铺好，分别(fēnbié)放置于 电泳槽两端，其下端要浸入缓冲液中。然后，将点好 样的薄膜光面向上平直地贴于电泳槽的支架上。注意 桥的方向，点样的一端位于负极，点样线不能搭在滤 纸上。
实验二 血清(xuèqīng)蛋白质 醋酸纤维素薄膜电泳
第一页，共17页。
一、实验(shíyàn)目的
1.了解电泳的基本原理(yuánlǐ)； 2.掌握电泳分离蛋白质的原理(yuánlǐ)； 3.掌握醋酸纤维素薄膜电泳的方法。
第二页，共17页。
二、实验(shíyàn)原理
1.电泳的基本原理
电泳——是带电质点在电场力作用下发生定 向移动的现象。 电泳技术——是利用电泳现象进行物质分离、 纯化(chún huà)及鉴定的技术。
第七页，共17页。
醋纤膜分离血清(xuèqīng)蛋白质的方法
以醋酸纤维素薄膜作为支持介质，于薄膜一端加微 量血清，膜两端连接于缓冲液。电泳分离后再经染色 处理，可将血清蛋白质分成五条主要的区带，从正极 (zhèngjí)依次为清蛋白（Albumin)、α1-球蛋白、 α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白。染料与蛋白质 的结合是与蛋白质的量成正比，可将各条带分别溶于 碱性溶液再进行比色测定，或用一定的有机溶剂是薄 膜透明化后直接用光密度扫描，从而计算出血清蛋白 质的含量。
因此电泳时常采用pH8.6的缓冲液。此时，蛋白质解离带负电荷，
在电场中向正极移动。由于各种血清(xuèqīng)蛋白的等电点不
同，在同一pH下带的电荷数也不同，加上各蛋白质的分子大小也
有差别，因此在电场中的移动速度不同。带电荷多、相对分子量
小的蛋白质泳动较快，带电荷少、相对分子量大的泳动较慢。这
样各种血清(xuèqīng)蛋白质在同一时间内泳动的距离就不同，
和等电点：
Pro
COOH
pH
Pro
COO– pH
Pro
COO–
NH3 +
NH3 +
NH2
碱性电离
pI
酸性电离
等电点 —— 即 pI ( isoelectric point )，当氨 基酸酸碱电离的速度相等(xiāngděng)时，即当蛋白 质所带净电荷为零，呈电中性，此时溶液的pH就是此 蛋白质的等电点PI。
从而可将血清(xuèqīng)蛋白分离成数条区带。
第六页，共17页。
3.醋纤膜分离血清(xuèqīng)蛋白 质的原理
醋酸纤维素薄膜电泳是采用醋酸纤维素薄膜作支持物的 一种电泳技术。
醋酸纤维素薄膜是纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋 酸酯，具有均一的泡沫状结构，渗透性强，对分子移动阻 力小，用它做区带电泳的支持物，用样量少，分离清晰， 对染料无吸附作用，应用范围广，快速简便 ,且染色后的 薄膜可用乙醇和冰醋酸溶液浸泡(jìnpào)透明，透明后 的薄膜便于保存和定量分析，因此目前被广泛用于血清蛋 白、脂蛋白、血红蛋白、糖蛋白、酶的分离和免疫电泳等 方面。
第三页，共17页。
电泳速度(sùdù)的
方向：
正 F´ F 负
极
–
极
电泳(diàn yǒnɡ)速度
的电大场小力：F=QE
摩擦力 F´= 6πRV
F= F´
运动 (yùndòn g)速度
QE V = 6πR
∝
Q R
第四页，共17页。
QE= 6πRV
2.电泳分离蛋白质的原理
(yuánlǐ)
蛋白质的两性(liǎngxìng)电离
第十五页，共17页。
七、注意事项：
1.点样时,毛面向上,要求样线粗细均匀，无纸。
3.正确连接导线(红色—正极，黑色—负极）。 4.电泳过程(guòchéng)中，严禁再取放薄膜。
第十六页，共17页。
内容(nèiróng)总结
实验二 血清蛋白质
第八页，共17页。
三、主要试剂(shìjì)与器材：
❖ 试剂(shìjì)：血清
❖
巴比妥缓冲液
❖
染色液，漂洗液
❖ 器材：电泳仪，电泳槽
❖
醋酸纤维素薄膜（2×8cm）
❖
血清加样器
第九页，共17页。
四、操作步骤：
1.浸膜：将裁好的醋酸纤维素薄膜浸泡于缓冲液中，充分 浸透后用镊子取出（约20min，直到膜上没有斑点，中 间(zhōngjiān)没有气泡为止）。
第五页，共17页。
❖ 当pH=PI时，所带电荷为0，粒子是静止的；
❖ 当pH>PI时，酸性电离，释放氢离子，带负电，运动方向是从负极 向正极移动；
❖ 当pH<PI时，碱性电离，结合氢离子，带正电，运动方向是从正极 向负极移动；
❖ 当pH距离PI越远时，所带电量越多。
❖
血清(xuèqīng)蛋白质的等电点为4.8～7.5，均低于8.6，
醋酸纤维(cù suān xiān wéi)素薄膜电泳装置示意图
第十一页，共17页。
4.电泳：红正黑负。 电流 2mA/膜 。 电泳时间约 50min 。
5.染色：氨基黑10B, 染色2～3min. 6.脱色：在装有漂洗(piāo xǐ)液的2个漂洗
(piāo xǐ)缸中，依次漂去多余染料，直到 背景漂白为止。
No 醋酸纤维素薄膜电泳。电泳——是带电(dài diàn)质点在电场力作用下发生定向移动的
现象。电泳技术——是利用电泳现象进行物质分离、纯化及鉴定的技术。醋酸纤维素 薄膜电泳是采用醋酸纤维素薄膜作支持物的一种电泳技术。染色液，漂洗液。1.点样 时,毛面向上,要求样线粗细均匀，无明显扩散现象。2.搭桥时,光面向上,点样端置于负 极,样线不能接触滤纸。3.正确连接导线(红色—正极，黑色—负极）。4.电泳过程中， 严禁再取放薄膜
Image
第十七页，共17页。