CTAB法所需溶液配置

CTAB法所需溶液配置
一、提取液的配置
1、1M Tris-Hcl（PH 7.5-8.0）10ml
称121.1g Tris（三羟甲基氨基甲烷分子量121.1）溶于800ml水中，搅拌条件下加入浓盐酸（PH调至7.5）。

待接近所需PH时，用稀Hcl准确调PH值至所需值，加入重蒸水至总体积1L，分装，高压灭菌（温度为121℃，时间为30分钟）。

注：如调PH 7.4则大约加浓盐酸70ml，PH 7.6加60ml，PH8.0加42ml
2、5M Nacl 14ml
称292.2g Nacl，溶于800ml蒸馏水中，此时已接近饱和，所以溶解较慢，完全溶解后用蒸馏水定容至1L，分装，高压灭菌。

3、0.5M EDTA（PH 8.0）溶液10ml
称186.1g EDTA-Na2∙2H2O（冰乙二胺四乙酸二钠盐）加入800ml重蒸水，用磁力搅拌器搅拌，加入NaOH（10M）调PH至8.0（只有PH值约等于8.0时EDTA-Na2∙2H2O才能完全溶解，待EDTA-Na2∙2H2O完全溶解后，再用稀NaOH准确调PH=8.0），重蒸水定容至1L，灭菌。

调PH值：①用固体NaOH约20g左右
②用10mol/L的NaOH溶液约70ml
10M NaOH的配置：称取40gNaOH溶于蒸馏水后定容至100ml
4、CTAB 1g
5、ddH2O 65ml
6、2M β-巯基乙醇 4℃保存1ml
方法：1 、2、 3、4、 5加热溶解后加入6（即2M β-巯基乙醇）
二、氯仿/异戊醇（V/V=24：1）：贮于棕色瓶中
取氯仿480ml（即从一瓶中取出20ml），再在瓶中加入异戊醇20ml，摇匀
注：最好现配现用
三、RNase （10mg/ml）
1）称取100mg RNase溶于10ml 10mmol/LTris-cl（PH 7.5），15mmol/L Nacl中，于100℃加热15min，缓慢冷却至室温，分装后于-20℃保存。

2）25mg加2.5ml TE缓冲液，于100℃水浴，加热15min，缓慢冷却至室温，不要贴底，否则会产生絮状沉淀。

注：水浴锅达不到100℃，用电炉子放上闷罐，水多些，放帖底。

3）用水溶解RNase，终浓度10mg/ml，煮沸20min，缓慢冷却，分装，于-20℃下保存。

四、TE（10mmol/L Tris 1mmol /L EDTA）：有7.4、7.6、8.0三种TE溶液
分别由1ml的PH7.4、7.6、8.0的1mol/LTris∙cl缓冲液与0.2mlPH8.0的0.5mol/LEDTA 溶液混合后，用重蒸水定容至100ml
五、异戊醇（5瓶 200份）：-20℃冰柜保存
六、70% 乙醇
70ml无水乙醇加30ml ddH2O。