小鼠1,3-βD葡葡糖苷酶1,3-βD glucosidaseELISA试剂盒 操作步骤

小鼠1,3-βD葡葡糖苷酶1,3-βD glucosidaseELISA试剂盒操作步骤
Mouse 1, 3-1, 3 - glucoside enzyme beta D Portugal beta D glucosidaseELISA kit steps
小鼠1,3-βD葡葡糖苷酶
1,3-βD glucosidaseELISA试剂盒操作步骤操作程序：
①加抗体包被→ 4℃过夜，洗涤三次、抛干
②加待检抗原→ 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干
③加酶标抗体→ 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干
④加底物液→ 37℃ 15分钟，加终止液
1,3-βD glucosidaseELISA试剂盒操作步骤显色的重要性
显色是ELISA中的最后一步温育反应，此时酶催化无色的底物生成有色的产物。

反应的温度和时间仍是影响显色的因素。

在一定时间内，阴性孔可保持无色，而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。

适当提高温度有助于加速显色进行。

在定量测定中，加入底物后的反应温度和时间应按规定力求准确。

定性测定的显色可在室温进行，时间一般不需要严格控制，有时可根据阳性对照孔和阴性对照孔的显色情况适当缩短或延长反应时间，及时判断。

OPD底物显色一般在室外温或37℃反应20-30分钟后即不再加深，再延长反应时间，可使本底值增高。

OPD底物液受光照会自行变色，显色反应应避光进行，显色反应结束时加入终止液终止反应。

OPD产物用酸终止后，显色由橙黄色转向棕黄色。

TMB受光照的影响不大，可在室温中置于操作台上，边反应观察结果。

但为保证实验结果的稳定性，宜在规定的适当时间阅读结果。

TMB经HRP作用后，约40分钟显色达顶峰，随即逐渐减弱，至2小时后即可完全消退至无色。

TMB的终止液有多种，叠氮钠和SDS等酶抑制剂均可使反应终止。

这类终止剂尚能使蓝色维持较长时间（12-24小时）不褪，是目视判断的良好终止剂。

此外，各类酸性终止液则
会使蓝色转变成黄色，此时可用特定的波长（450nm）测读吸光值。

1,3-βD glucosidaseELISA试剂盒操作步骤品牌】古朵生物【保存】2-8℃,避光保存【说明书】随货发送或直接联系销售人员索取【有效期】六个月【检测目的】用于测定血清，血浆及相关液体等样本，例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本
小鼠1,3-βD葡葡糖苷酶1,3-βD glucosidaseELISA试剂盒操作步骤
计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制
1. 酶联板：一块（96孔）
2. 标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为10000 pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释成10000 pg/ml，5000 pg/ml ，2500 pg/ml，1250 pg/ml，625 pg/ml，312 pg/ml，156 pg/ml，其原液直接作为最高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用前15分钟内配制。

如配制5000 pg/ml标准品：取0.5ml 10000 pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3. 样品稀释液：1×20ml/瓶。

4. 检测稀释液A：1×10ml/瓶。

5. 检测稀释液B：1×10ml/瓶。

6. 检测溶液A：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液A 1：100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。

如1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

7. 检测溶液B：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液B1：100稀释。

稀释方法同检测溶液A。

8. 底物溶液：1×10ml/瓶。

9. 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10. 终止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

小鼠1,3-βD葡葡糖苷酶。