结肠炎大鼠模型

结肠炎大鼠模型
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4.1 材料与方法
4.1.1 材料
（一）实验试剂
2，4，6-三硝基苯磺酸购于Sigma 公司
（二）实验仪器
同第三章；FCOM-6124 型半自动生化分析仪，德国倍肯公司
（三）实验日粮组成与营养水平
基础日粮按照NRC(1998)营养标准配制，如表4-1。

（四）实验动物
SD 大鼠购于哈尔滨医科大学实验动物中心。

4.1.2 方法
（一）实验动物分组与处理
选取体重220±10 g 的SD 大鼠400 只，雌雄各半，分别采用醋酸和TNBS/乙醇两种方法复
制大鼠结肠炎模型。

动物饲养于空调室内，室温20±2℃，相对湿度40%-50%，基础日粮如表
4-1，颗粒饲料喂养，自由饮水。

将大鼠随机分为4 组：Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组。

Ⅰ组和Ⅱ组
造模前饲喂4 周鱼油（0.5%的鱼油）后，Ⅰ组继续饲喂含0.5%鱼油日粮，而Ⅱ组饲喂基础日粮；
Ⅲ组在造模后饲喂含0.5%鱼油日粮，而Ⅳ组造模后饲喂基础日粮。

（二）大鼠结肠炎模型的建立
通过广泛文献检索和多次预实验结果，我们选取醋酸和2，4，6-三硝基苯磺酸/乙醇灌肠法两种方法建立结肠炎大鼠实验模型。

醋酸模型的建立参考文献
[140-142]
，大鼠禁食不禁水24h，乙醚轻微麻醉后，用外径为2mm
的硅胶管插入大鼠肛门内约8cm，经管内注入10%的醋酸溶液2ml，10-20s 后注入生理盐水5ml
以消除醋酸的作用，自然清醒后放回笼内正常饲养。

TNBS/乙醇模型的建立参考文献
[143]
复制大鼠结肠炎模型，大鼠禁食不禁水24h，乙醚轻
微麻醉后，用外径为2mm 的硅胶管插入大鼠肛门内约8cm，经管内注入TNBS/50%乙醇溶液
0.85ml，倒立30s，捏紧肛门平放5min 即可，自然清醒后放回笼内正常饲养，实验期为28d。

（三）样品的采集与处理
分别于模型复制成功第24h、7d、14d 和28d 后称重、无菌采取血液后处死大鼠。

大鼠处死
后，迅速剖取结肠，摘取距肛门6-8cm 病变处结肠4-7cm，用于结肠黏膜损伤的观察和结肠病理
学变化的观察。

沿肠系膜纵轴剪开肠腔，冰生理盐水冲洗干净后将肠黏膜向上平铺于平板上，大头针固定后，用放大镜观察炎症及溃疡发生情况（进行肠道黏膜损伤评分观察）。

将采取的部
分结肠组织，固定、石蜡包埋，病理切片（HE 染色），显微镜下观察大鼠结肠病理学变化情况
（四）观察指标
（1）结肠炎大鼠炎症的观察
观察记录大鼠体重、饮食、粪便性状、死亡率、稀便发生率、皮毛、活动等情况。

同时采取粪便测定潜血情况（联苯胺冰醋酸法），综合体重、粪便性状及隐血情况对大鼠疾病活动指数
（The Disease Activity Index，DAI）进行评分
[144]
（表4-2）；肉眼观察结肠黏膜损伤大体情况，
参考结肠黏膜损伤程度评分标准
[145-148]
（表4-3）；结肠组织HE 染色后光镜下观察结肠组织损
伤情况，参考肠组织学损伤评分标准
[149-150]
（表4-4）。

表4-2 DAI 评分标准
Table 4-2 The standards of DAI score
评分体重减轻(%) 粪便性状粪潜血
0 (–) 正常正常
1 1–5
2 5–10 松软潜血(+)
3 11–15
4 >1
5 稀便肉眼潜血
附：粪便性状评分标准(1)正常粪便：成形颗粒样粪便；
(2)松软粪便：不豁附于肛门的糊状、半成形粪便；
(3)稀便：可豁附于肛门的稀水样便
表4-3 结肠黏膜损伤程度评分标准
Table 4-3 The standards of colonic mucosal injury score
评分大体形态
0 黏膜无水肿、充血及溃疡，肠壁无粘连及增生
1 轻度的黏膜水肿、充血、无溃疡
2 黏膜充血、水肿、糜烂、无溃疡
3 黏膜充血、水肿、糜烂、单个溃疡
4 黏膜充血、水肿、糜烂、多个溃疡
5
黏膜充血、水肿、重度糜烂、多个溃疡，
有>1cm
2
溃疡
（4）数据处理
实验结果以
x
x ±S表示，数据统计分析采用SPSS11.5软件进行数据处理。