第03章酶enzyme-PPT课件

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邻近效应与定向排列：
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3.表面效应 酶的活性中心多是酶分子内部的疏水“口袋”， 酶反应在此疏水环境中进行，使底物分子脱溶剂 化 (desolvation)，排除周围大量水分子对酶和底 物分子中功能基团的干扰性吸引和排斥，防止水
化膜的形成，利于底物与酶分子的密切接触和结
合。这种现象称为表面效应(surface effect)。
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概念
研究各种因素对酶促反应速度的影响， 并加以定量的阐述。

影响因素包括有 酶浓度、底物浓度、pH、温度、 抑制剂、激活剂等。
※ 研究一种因素的影响时，其余各因素均恒定。
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一、底物浓度对酶促反应速度的影响
研究前提
1.单底物、单产物反应； 2.酶促反应速率一般在规定的反应条件下，用单位时间
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一、酶的分子组成中常含有辅助因子

单纯酶 (simple enzyme) 结合酶 (conjugated enzyme) 蛋白质部分：酶蛋白 (apoenzyme)
全酶 (holoenzyme) 辅助因子 (cofactor)
小分子有机化合物
金属离子
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辅助因子分类（按其与酶蛋白结合的紧密程度）
金属酶(metalloenzyme)
金属离子与酶结合紧密，提取过程中不
易丢失。
金属激活酶(metal-activated enzyme)
金属离子为酶的活性所必需，但与酶的
结合不甚紧密。
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金属离子的作用： 1.参与催化反应，传递电子； 2.在酶与底物间起桥梁作用； 3.稳定酶的构象； 4.中和阴离子，降低反应中的静电斥力等。
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第一节 酶的分子结构与功能
The Molecular Structure and Function of Enzyme
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酶的不同形式
单体酶：仅具有三级结构的酶。 寡聚酶：由多个相同或不同亚基以非共价键连接组 成的酶。 多酶体系：由几种不同功能的酶彼此聚合形成的多 酶复合物。 多功能酶或串联酶：一些多酶体系在进化过程中由 于基因的融合，多种不同催化功能存在于一条多肽 链中，这类酶称为多功能酶。
酶 活 性
心肌梗死酶谱
正常酶谱
肝病酶谱
1
2
3
4
5
心肌梗死和肝病病人血清LDH同工酶谱的变化
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第二节 酶的工作原理
The Mechanism of Enzyme Action
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酶与一般催化剂的共同点： 在反应前后没有质和量的变化； 只能催化热力学允许的化学反应； 只能加速可逆反应的进程，而不改变 反应的平衡点。
W.Szostak 研究室首先报道了具有 DNA 连接酶活 性DNA片段，称为脱氧核酶(deoxyribozyme)。
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The Nobel Prize in Chemistry 1946
James Batcheller Sumner
John Howard Northrop
Wendell Meredith Stanley
甲基、甲烯基、甲炔基、 四氢叶酸 甲酰基等一碳单位
叶酸
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二、酶的活性中心

必需基团(essential group) 酶分子中氨基酸残 基侧链的化学基团中， 一些与酶活性密切相关 的化学基团。
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酶的活性中心 (active center)
指必需基团在空间结构上彼此靠近，组 成具有特定空间结构的区域，能与底物特异
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能
量
非催化反应活化能
一般催化剂催 化反应的活化能
酶促反应 活化能
底物 反应总能量改变 产物 反 应 过 程
酶促反应活化能的改变
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（二）酶-底物复合物的形成
酶底物复合物
E+S
ES
(过渡态)
E+P
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1. 诱导契合作用使酶与底物密切结合 酶与底物相互接近时，其结构相互诱导、相 互变形和相互适应，进而相互结合。这一过 程称为酶-底物结合的诱导契合(induced-fit) 。
Vmax [S] 将(5)代入(4)得米氏方程式： V = ──── Km + [S]
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（二）Km与Vm是有意义的酶促反应动力学参数


Km值的推导
Km与Vmax的意义
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Km值的推导
当反应速率为最大反应速率一半时：
V Vmax[S] Vmax = 2 Km + [S] Km = [S] Km [S] Vmax
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酶的特异性可大致分为以下3种类型：
特定结构的底物，进行一种专一的反应，生成
一种特定结构的产物 。
绝对特异性(absolute specificity)：只能作用于
相对特异性(relative specificity)：作用于一类
化合物或一种化学键。 立体结构特异性(stereospecificity)：作用于立 体异构体中的一种。
第3章 酶 Enzyme
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生物催化剂在生命活动中重要性
酶/生物催化剂的概念和化学本质 生物催化剂：是生物体内具有催化活性的物质。 酶：是指由活细胞产生的具有催化活性的蛋白质。
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酶/生物催化剂的重要性

是生物体能够进行物质代谢，维持生命活动的 必要条件 是许多疾病的发病机制和治疗的药理学基础
关系的数学方程式，即米－曼氏方程式，简称米氏方程
式 (Michaelis equation)。
Ｖ
[S] ：底物浓度 V
＝
── K + [S]
m
Vmax[S]
：不同[S]时的反应速率
Vmax：最大反应速率(maximum velocity)
Ｋm ：米氏常数(Michaelis constant)
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米－曼氏方程式推导基于两个假设： 1. E与S形成ES复合物的反应是快速平衡反应， 而ES分解为E及P的反应为慢反应，反应速率
k1
(2)
k2+k3 k1
= Km （米氏常数）
则(2)变为: ([Et]－[ES]) [S] = Km [ES]
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整理得: 将(3)代入(1) 得
[Et][S] [ES] = ─── Km + [S] k3[Et][S] V = ──── Km + [S]
(3)
(4)
当底物浓度很高，将酶的活性中心全部饱和时， 即[Et] =[ES]，反应达最大速率 Vmax = k3[ES] = k3[Et] (5)
NAD＋（尼克酰胺腺嘌呤二核 苷酸，辅酶I NADP＋（尼克酰胺腺嘌呤二 核苷酸磷酸，辅酶II FMN（黄素单核苷酸） FAD（黄素腺嘌呤二核苷酸）
醛基 酰基 烷基 二氧化碳 氨基
TPP（焦磷酸硫胺素） 辅酶A（CoA）
硫辛酸
钴胺素辅酶类 生物素 磷酸吡哆醛
硫辛酸
维生素B12 生物素 吡哆醛（维生素B6之一）



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一、酶促反应的特点
（一）酶促反应具有极高的效率
酶的催化效率通常比非催化反应高108～1020倍， 比一般催化剂高107～1013倍。
酶的催化不需要较高的反应温度。
酶和一般催化剂加速反应的机理都是降低反应
的活化能(activation energy)。酶比一般催化剂
更有效地降低反应的活化能。

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酶学研究简史
公元前两千多年，我国已有酿酒记载。 一百余年前，Pasteur认为发酵是酵母细胞生命活动的结果。 1878年，Kühne首次提出Enzyme一词。 1897年，Eduard
Buchner用不含细胞的酵母提取液，实现了发
酵。
1926年，Sumner首次从刀豆中提纯出脲酶结晶 。 1982年，Cech首次发现RNA也有催化活性，提出核酶概念。 2019 年， Jack
辅酶 (coenzyme): 与酶蛋白结合疏松，可用透析或超滤的 方法除去。 辅基 (prosthetic group): 与酶蛋白结合紧密，不能用透析或超 滤的方法除去。
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全酶分子中各部分在催化反应中的作用: 酶蛋白决定反应的特异性 辅助因子决定反应的种类与性质
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金属离子是最多见的辅助因子
内底物的消耗量和产物的生成量来表示；
3.反应速率取其初速率，即底物的消耗量很小（一般在 5﹪以内）时的反应速率
4.底物浓度远远大于酶浓度。
在其他因素不变的情况下，底物浓度对反应速 度的影响呈矩形双曲线关系。

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V
Vmax
[S] 当底物浓度较低时 反应速度与底物浓度成正比；反 应为一级反应。
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酶的诱导契合动画
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2.邻近效应与定向排列使诸底物正确定位于 酶的活性中心 酶在反应中将诸底物结合到酶的活性中心，使它 们相互接近并形成有利于反应的正确定向关系。 这种邻近效应(proximity effect)与定向排列 (orientation arrange)实际上是将分子间的反应变 成类似于分子内的反应，从而提高反应速率。
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（三）酶促反应的可调节性
酶促反应受多种因素的调控，以适应
机体对不断变化的内外环境和生命活动的
需要。
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二、酶促反应的机制
（一）酶比一般催化剂更有效地降低反应活化能
酶和一般催化剂一样，加速反应的作
用都是通过降低反应的活化能 (activation energy) 实现的。
活化能：底物分子从初态转变到活化 态所需的能量。
结合并将底物转化为产物。
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活性中心内的必需基团 结合基团 (binding group) 与底物相结合 活性中心外的必需基团 位于活性中心以外，维持酶活性中心应有 的空间构象和（或）作为调节剂的结合部位所 必需。
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催化基团 (catalytic group) 催化底物转变成产物
底物
活性中心以外 的必需基团
Vmax/2
Km值等于酶促反应速率为最大反应速率一半 时的底物浓度，单位是mol/L。
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Km与Vmax的意义
Km值

定义：Km等于酶促反应速率为最大反应速率一 半时的底物浓度。 意义： 1. Km是酶的特征性常数之一，只与酶的结构、 底物和反应环境（如，温度、pH、离子强 度）有关，与酶的浓度无关。 2. Km可近似表示酶对底物的亲和力； 3. 同一酶对于不同底物有不同的Km值。
催化基团
结合基团
活性中心
溶菌酶的活性中心
* 谷氨酸 35 和天 冬氨酸 52 是催化 基团； * 色氨酸 62和 63、 天 冬 氨 酸 101 和 色 氨 酸 108 是 结 合基团； * A~F 为 底 物 多 糖链的糖基，位 于酶的活性中心 形成的裂隙中。
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三、同工酶

定义 同工酶 (isoenzyme)是指催化相同的化 学反应，而酶蛋白的分子结构理化性质乃 至免疫学性质不同的一组酶。
取决于慢反应即 V = k3[ES]。 (1)
2. S的总浓度远远大于 E的总浓度，因此在反应
的初始阶段，S的浓度可认为不变即[S] =[St]。
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米－曼氏方程式推导过程： 稳态：ES的生成速率 = ES的分解速率
k1 ([Et]－[ES]) [S] = k2 [ES] + k3 [ES]
([Et]－[ES])[S] 整理得： [ES] 令： = k2+k3
V
Vmax
[S]
随着底物浓度的增高 反应速度不再成正比例加速；反应 为混合级反应。
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V
Vmax
[S]
当底物浓度高达一定程度 反应速度不再增加，达最大速度； 反应为零级反应
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（一）米－曼氏方程式
酶促反应模式-----中间产物学说：
E+S
k1
k2
ES
k3
E+P

中间产物
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1913 年 Michaelis 和 Menten 提出反应速率与底物浓度
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小分子有机化合物
其主要作用是参与酶的催化过程，在反应中 传递电子、质子或一些基团。
辅酶的种类不多，且分子结构中常含有维生
素或维生素类物质。
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某些辅酶（辅基）在催化中的作用
小分子有机化合物（辅酶或辅基）
转移的基团
氢原子（质子）
名
称
所含的维生素 尼克酰胺（维生素PP）之一 尼克酰胺（维生素PP）之一 维生素B2（核黄素） 维生素B2（核黄素） 维生素B1（硫胺素） 泛酸
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举例
H H H H
H H H M
H H M M
H M M M
M M M M
LDH1 (H4)
LDH2 (H3M)
LDH3 (H2M2)
LDH4 (HM3)
LDH5 (M4)
乳酸脱氢酶的同工酶
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*生理及临床意义
在代谢调节上起着重 要的作用； 用于解释发育过程中 阶段特有的代谢特征； 同工酶谱的改变有助 于对疾病的诊断； 同工酶可以作为遗传 标志，用于遗传分析研 究。
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（三）酶的催化机制呈多元催化作用
1. 一般酸-碱催化作用(general acid-base catalysis)
2. 共价催化作用(covalent catalysis)
3. 亲核催化作用(nucleophilic catalysis)
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第三节 酶促反应动力学
Kinetics of Enzyme-Catalyzed Reaction