HPLC法同时测定中药复方乳膏中盐酸小檗碱和阿魏酸的含量

HPLC法同时测定中药复方乳膏中盐酸小檗碱和阿魏酸的含量张婷婷;赵军;杨蒙蒙;刘梅
【摘要】目的：建立中药复方乳膏中盐酸小檗碱和阿魏酸的含量测定方法，控制中药复方乳膏的质量。

方法采用反相高效液相色谱法，Inertsil ODS-3（250 mm ×4．6 mm ，5μm ）色谱柱；以乙腈-0．046 mol · L -1磷酸二氢钾（25∶75）为流动相；流速1．0 mL · min-1；检测波长338 nm ；柱温为室温。

结果盐酸小檗碱的质量浓度在1．01～101μg · mL -1范围内线性关系良好，阿魏酸的质量浓度在1．145～114．5μg · mL -1范围内线性关系良好。

盐酸小檗碱和阿魏酸的平均回收率（n＝6）分别为99.6％（RSD＝1．7％）和99．7％（RSD＝1．1％）。

结论该方法操作简便，专属性强，结果准确可靠，可作为中药复方乳膏中盐酸小檗碱和阿魏酸的含量测定方法。

%Objective To establish an HPLC method to simultaneously determine the contents of berberine hydrochloride and ferulic acid in Compound Chinese Medicinal
Cream .Methods The separation was performed on an Inertsil ODS-3(200 mm × 4 .6 mm ,5μm) column;the mobile phase was acetonitrile-0 .046 mol · L -1 potassium dihydrogen phosphate(25∶75 ) at a flow rate o f 1 .0 mL · min-1 ,the detection wavelength was 338 nm ,and the column temperature was room temperature .Results The calibration curves were linear within the range 1 .01-101 μg · mL -1 for berberine hydrochloride and 1 .145-114 .5 μg · mL -1 for ferulic acid . The average recoveries (n=6) were 99 .6% (RSD=1 .7% ) ,and 99 .7%
(RSD=1 .1% ) ,respectively .Conclusion This method is simple ,specific ,and
accurate ,and can be used for the determination of berberine hydrochloride and ferulic acid in Compound Chinese Medicinal Cream .【期刊名称】《西北药学杂志》
【年(卷),期】2014(000)003
【总页数】3页(P245-247)
【关键词】中药复方乳膏;盐酸小檗碱;阿魏酸;高效液相色谱法;含量测定
【作者】张婷婷;赵军;杨蒙蒙;刘梅
【作者单位】第四军医大学唐都医院药剂科，西安 710038;第四军医大学唐都医院药剂科，西安 710038;第四军医大学唐都医院药剂科，西安 710038;第四军医大学唐都医院药剂科，西安 710038
【正文语种】中文
【中图分类】R917
紫外线引起皮肤光损伤，导致一系列皮肤疾病，大量的研究发现，中药中的许多有效成分均具有防紫外线辐射作用，具有高效和毒副作用轻微等优点，成为新型紫外线防治药物。

中药复方乳膏是我院研发的一种主要用于日光性皮肤病治疗的外用制剂，可抗UVA、UVB及UVC即整个紫外波段的紫外线辐射，有效地保护皮肤，其中含有的盐酸小檗碱、阿魏酸是其有效成分。

本文建立了HPLC法在同一波长下同时测定中药复方乳膏中盐酸小檗碱和阿魏酸的含量，方法简便可靠，可用于该制剂的质量控制。

1 仪器与试药
1.1 仪器 Agilent 1200液相色谱仪(Agilent 1200泵、Agilent1200 VWD检测器、Agilent 1200色谱工作站);CP225D电子分析天平(德国Sartorius公司)，BL-
620S电子天平(日本岛津)，KH5200DV型数控超声波清洗器(昆山禾创超声仪器
有限公司)。

1.2 试药乙腈、甲醇(Fisher公司，色谱级)；灭菌注射用水(批号1212075205，
辰欣药业股份有限公司)；盐酸小檗碱(批号110713-200911)；阿魏酸(批号110773-200611，中国药品生物制品检定所)；磷酸二氢钾(批号20091023，天
津市红岩化学试剂厂)；中药复方乳膏(批号130216,130306,130410，第四军医大学唐都医院药剂科自制)。

2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备精密称取盐酸小檗碱对照品2.02 mg、阿魏酸对照品2.29 mg，分别置于10 mL量瓶中，加甲醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，制成各对照品储备液。

分别精密量取上述储备液1.5 mL,置于10 mL量瓶中，用甲醇定量稀
释制成盐酸小檗碱质量浓度为30.3 μg·mL-1、阿魏酸质量浓度为34.35 μg·mL-1的溶液，作为对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备取中药复方乳膏0.5 g，精密称定，置于100 mL锥形瓶中，加甲醇50 mL，超声(功率200 W，频率100 Hz)处理30 min，放冷，转移至50 mL量瓶中，甲醇稀释至刻度，用0.45 μm的微孔滤膜过滤，取续滤液0.5 mL，
置于3 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.3 阴性样品溶液的制备按处方制备不含盐酸小檗碱和阿魏酸的阴性样品乳膏，
按2.2项下方法操作，即得。

2.4 色谱条件色谱柱：Inertsil ODS-3(250 mm ×4.6 mm，5 μm )；流动相：乙腈-0.046 mol·L-1磷酸二氢钾(25∶75 )；流速：1 mL·min-1；检测波长：338 nm；温度：室温；进样量：10 μL。

取上述对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10 μL，注入HPLC仪，在上述色谱条件下依法测定，色谱图见图1。

结果表明，在上述色谱条件下，样品中的各组分达到基线分离，样品中其他成分对盐酸小檗碱、阿魏酸的测定无干扰。

图1 HPLC图A.阴性样品；B.对照品溶液；C.供试品溶液；1.阿魏酸；2.盐酸小檗碱Fig.1 HPLC chromatogramsA.negative sample without berberine and ferulic acid；B.reference substances；C.sample；1.ferulic acid；2.berberine 2.5 线性实验分别精密量取盐酸小檗碱、阿魏酸对照品储备液适量，置于10 mL
量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成系列质量浓度为1.01，5.05，10.1，30.3，54.54和101 μg·mL-1的盐酸小檗碱对照品溶液和1.145，5.725，11.45，34.35，61.83和114.5 μg·mL-1的阿魏酸对照品溶液，按2.4项下色谱条件下进样测定，记录色谱图，分别以峰面积积分值Y为纵坐标、对照品溶液的质量浓度
X(μg·mL-1)为横坐标，进行线性回归，结果显示，盐酸小檗碱进样质量浓度在
1.01 ～101 μg·mL-1范围内呈良好的线性关系，回归方
程:Y=29.889X+25.459(r=0.999 3)，阿魏酸进样质量浓度在1.145 ～ 114.5
μg·mL-1范围内呈良好的线性关系，回归方程:Y=25.997X-0.155 3(r=0.999 8)。

2.6 精密度实验精密量取含盐酸小檗碱为10.1 μg·mL-1、阿魏酸为11.45
μg·mL-1的对照品溶液10 μL，按2.4项下色谱条件连续进样6次，记录色谱图，计算盐酸小檗碱、阿魏酸的峰面积RSD，分别为2.02%和1.08%(n=6)，表明精
密度良好。

2.7 重复性实验取一批样品(批号130216)6份，按2.2项下方法制备供试品溶液，按2.4项下色谱条件下进样测定，记录色谱图，以峰面积计算盐酸小檗碱、阿魏酸的RSD(n=6)。

盐酸小檗碱在乳膏中的平均含量为1
3.39 mg·g-1，RSD为0.69%；阿魏酸在乳膏中的平均含量为17.39 mg·g-1，RSD为0.67%，表明本法重复性良好。

2.8 稳定性实验将供试品溶液在室温下放置，精密量取同一批号的供试品溶液分别在0，2，4，8，12和24 h 进样10 μL进行测定，结果盐酸小檗碱、阿魏酸的峰面积 RSD分别为0.61%和1.27%，表明供试品溶液均在24 h内稳定。

2.9 加样回收率实验精密称取已知含量的中药复方乳膏(批号：130216)适量，共6份，分别置于10 mL量瓶中，按低、中、高3种质量浓度各精密加入盐酸小檗碱和阿魏酸的对照品溶液适量，加甲醇稀释至刻度，摇匀。

按2.4项下色谱条件进样，记录色谱图，测定含量，并计算样品的回收率，结果见表1、表2。

盐酸小檗碱的平均加样回收率为99.6%，RSD为1.7%，阿魏酸的平均加样回收率为99.7%，RSD为1.1%。

表1 盐酸小檗碱回收率实验结果Tab.1 The result of berberine hydrochloride recovery取样量/μg加样量/μg测得量/μg回收率
/%11.169.0920.08101.8811.169.0920.3099.4911.1611.1122.3399.4611.1611. 1122.16101.0311.1613.1324.6697.2911.1613.1324.5498.14
表2 阿魏酸加样回收率实验结果Tab.2 The result of ferulic acid recovery取样量/μg加样量/μg测得量/μg回收率
/%14.4911.4525.9899.6714.4911.4526.0499.1714.4914.4329.0798.9414.491 4.4329.1198.7014.4917.1831.40101.5914.4917.1831.62100.29
2.10 样品含量测定取3批样品，分别按2.2项下方法制备供试品溶液，在2.4项下色谱条件下进样10 μL，记录色谱图，按外标法以峰面积计算盐酸小檗碱和阿魏酸的含量。

结果：3批样品中盐酸小檗碱含量分别为1
3.44，13.39和13.37 mg·g-1，平均含量为13.40 mg·g-1,RSD为0.26%;阿魏酸含量分别为
17.34,17.32和17.45 mg·g-1，平均含量为17.37 mg·g-1，RSD为0.39%。

3 讨论
取适量盐酸小檗碱和阿魏酸对照品甲醇溶液在200～400 nm波长范围内进行光谱
扫描。

结果在338 nm时盐酸小檗碱和阿魏酸有相交的吸收峰。

在此检测波长下，2种有效成分的响应值较高、检测灵敏度好，在该色谱条件下，2种有效成分均能完全分离，阴性样品无干扰。

故本文选用338 nm 作为检测波长。

方中盐酸小檗碱可抗菌、抗病毒[1]、抗炎[2]、防止内皮损伤、增强血管舒张[3]、对放射线有增敏作用[4]；阿魏酸具有抗氧化、抗菌消炎[5]、化疗增敏及放射保护
作用[6]。

因此，将其制成中药复方乳膏对皮肤作用温和、刺激性小、安全性高。

盐酸小檗碱为生物碱，阿魏酸为有机酸，本文以HPLC法同时测定盐酸小檗碱和
阿魏酸的含量，省时省力，灵敏度高，精确，重复性好，可作为制剂质量控制手段，也可为以后其他类型的两种不同化合物的含量测定提供借鉴。

本实验尝试了不同流动相系统后选择乙腈-0.046 mol·L-1磷酸二氢钾(25∶75 )，盐酸小檗碱峰、阿魏酸峰分离度达到要求，并与杂质峰能够达到基线分离，且1
个条件可同时测定多个指标，实验结果亦表明，HPLC法是该制剂中这2种有效成分定量测定的简单有效方法，同时为进一步探讨该方主要药效学奠定了基础。

【相关文献】
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