稻米直链淀粉含量的96微孔高通量快速测定方法

稻米直链淀粉含量的96微孔高通量快速测定方法
稻米是人们日常饮食中的主要粮食之一，其中淀粉含量是稻米质量的重要指标之一。

淀粉是稻米中主要的营养成分之一，占据着稻米的70-80%。

稻米的淀粉类物质主要由直链淀粉和支链淀粉两部分组成，其中直链淀粉对于粘稠性、透明度等特性有着很重要的作用。

因此，对稻米的直链淀粉含量的快速准确检测是非常必要和重要的。

近年来，针对稻米淀粉的高通量快速检测方法得到了很多研究，如色团分析法、紫外
吸收法、气相色谱法等。

然而，这些方法都存在着使用成本高、检测时间长等缺点。

因此，开发一种简单、高效、快速的稻米直链淀粉含量检测方法显得尤为重要。

文献[1]提出了一种96微孔高通量快速测定稻米直链淀粉含量的方法。

该方法通过粉
碎样品、溶解蛋白质、酶解淀粉、去除支链淀粉等步骤得到稻米的直链淀粉含量。

具体实验步骤如下：
1.稻米样品的制备
将稻米样品在冷水中浸泡12小时，去除表面的泥沙及杂质，然后将稻米样品放置在恒温恒湿条件下（30℃、85%RH）等到含水率达到12%左右。

将样品磨成粉末备用。

2.酶解淀粉
将0.03g的淀粉酶和0.05g的细胞壁水解酶混合加入到含10mg/ml的氯化钠的100μL 稻米粉中，使其在55℃恒温振荡水浴中酶解4小时。

3.去除支链淀粉
将样品加入到350μL的甲醇水溶液中，并在80℃下加热20分钟以去除支链淀粉。

4.准备直链淀粉底物
将2.5g的淀粉加入到25mL的70%乙醇中，在70℃下振荡水浴30分钟后离心去除淀粉沉淀，剩余的上清液即为直链淀粉底物。

5.测定样品淀粉酶切产物
将稻米样品酶解产物用GenePulser II电穿孔仪处理5次（1秒数据，50毫秒间隔），每次电压为800V）以将淀粉产物中的聚合物分解为短链淀粉分子。

6.测定反应体系中的直链淀粉
将测定样品和直链淀粉底物加入到含有10毫摩尔的钠磷酸缓冲液和5毫摩尔的钙离子的反应体系中，振荡水浴1小时后加入3%的硝苯地平停止反应。

反应停止后，样品中的葡萄糖浓度可通过紫外光谱读取器进行检测。

通过以上步骤，可以快速测定出稻米中的直链淀粉含量。

该方法具有快速、准确、高通量等特点，在稻米直链淀粉含量的测定中具有广阔的应用前景。