昆明集约化猪场几种繁殖障碍性疾病的血清学调查

昆明集约化猪场几种繁殖障碍性疾病的血清学调查
杨亮宇，白文顺，王爱茹
(云南农业大学动物科学技术学院，云南昆明 650201)
摘要：应用抗体金标快速检测试纸条对昆明地区12个集约化猪场的236份血清进行了猪瘟、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸障碍综合征以及猪圆环病毒病的抗体检测。

结果表明大部分猪场存在猪瘟、伪狂犬病的威胁，在所检测血清中猪瘟抗体水平在保护范围（1:16～1:128），占27.4%（68/236）；猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸障碍综合征和猪圆环病毒病的抗体水平在保护范围（1:40～1:320），分别占30.13％（66/208）、41.46％（86/212）和占56.0％（44/84）。

通过这次调查我们发现大部分猪场不重视免疫，缺乏科学的免疫程序，其中猪瘟、猪伪狂犬病仍然是昆明地区的主要繁殖障碍性疾病，应加强这两种疾病的免疫预防工作。

关键词：集约化猪场；繁殖障碍性疾病；免疫胶体金技术；抗体检测
近年来，许多集约化猪场妊娠母猪发生流产、死胎、木乃伊胎，产出无活力的弱仔、畸形儿以及不育症等繁殖障碍性疾病，造成巨大的经济损失。

该病是由非传染因素(管理、营养、不利的饲料因素、环境等)与传染因素(病毒、细菌、寄生虫等)独立或联合、同时或相继引起的母猪繁殖障碍，其中病毒性疾病如繁殖与呼吸综合征(又称蓝耳病，PRRS)、伪狂犬病(PR)、日本乙型脑炎(JE)、猪细小病毒(PPV)、猪瘟(HC)是引起母猪繁殖障碍疾病的主要原因[1]。

随着集约化猪场猪的流动和引种工作的频繁，猪繁殖障碍性疾病已成为猪场最重要的疾病之一。

在欧美已将此病列为最重要的疫病之一进行研究，在我国的一些大中型规模化集约猪场都不同程度存在或发生过猪繁殖障碍性疾病[2]。

鉴于母猪繁殖障碍性疾病的发生不是特定病原所引起，一般临诊情况下很难做出明确的诊断，为了有效控制母猪繁殖障碍性疾病，减少胎儿及仔猪的死亡，提高生猪出栏率和养猪的经济效益。

本试验应用抗体金标快速检测试纸条检测了昆明地区12个集约化猪场的236份血清猪瘟抗体、208份血清猪伪狂犬病抗体、212份猪圆环病毒病血清抗体和84份猪繁殖与呼吸障碍综合征抗体，为昆明地区集约化猪场有目的、有重点地开展相应的免疫预防提供准确的科学依据，现将结果报告如下：
1 材料与方法
1.1血清
由昆明地区12个集约化猪场提供，共236份血样，经离心后分离血清，并加防腐剂置4℃冰箱中保存备用。

1.2 检测试纸
猪瘟抗体金标快速检测试纸、猪伪狂犬病抗体金标快速检测试纸、猪繁殖与呼吸障碍综合征抗体金标快速检测试纸、猪圆环病毒病抗体金标快速检测试纸（均由福建省漳州市格林沃生物科技有限公司生产。

）
1.3 操作方法
1.3.1 用1.5ml样品管，采血0.5-1ml加防腐剂，等待检测血清自然析出或用离心机离心10分钟使血清析出。

1.3.2将检测卡平置于桌面上，用吸样管吸取被检血清，在检测卡的椭圆形加样孔内加入2滴约80-100ul。

在室温下反应20分钟判定结果。

（注：检测卡如在4℃保存，必须恢复至室温后方可进行测）。

1.4 结果判断：在15-20分钟内判定结果。

1.4.1试纸无效：在检测线(T)和质控线(C)处都不出现紫红色线，试纸条视为无效。

1.4.2抗体极低或阴性：只在质控区（C）出现一条紫红色线，检测区（T）不出现紫红色线。

1.4.3抗体阳性：在检测区（T）和质控区（C）各出现一条紫红色线。

根据检测区（T）紫红色线的颜色深浅，就可以判断抗体水平的高低：（1）在检测区（T）出现一条颜色较深的紫红色线，在参照图效价
以上，说明抗体滴度较高，不需及时进行疫苗免疫。

（2）在检测区（T）出现一条颜色较浅的紫红色线，说明抗体效价很低，必须及时接种疫苗。

（3）关于对照卡的使用以对照图星号(*)处说明：当抗体效价大于或等于此处的效价时，猪只对该病毒攻击具有抵抗力。

1.5 诊断依据
1.5.1猪瘟检测结果判断依据
（1）被检样品加样后20分钟可与对照卡的色带滴度进行参考比较。

（2）当被检样品检测线（T）条带的色泽≥对照卡中猪瘟为1:16效价时，说明检测样品中猪瘟抗体的滴度较高，暂不需要进行猪瘟疫苗的接种免疫。

但当抗体效价≥128时，说明猪瘟抗体水平较高，有可能被野毒感染，应进一步观察验证。

（3）当被检样品检测线（T）条带的色泽＜对照卡中1:16效价时，说明检测样品中猪瘟抗体水平较低，不能抵御猪瘟强毒地攻击，需要进行猪瘟疫苗的免疫接种。

（4）当被检样品检测线（T）处无明显色带出现，说明被检测样品中没有猪瘟抗体。

如果猪群健康，应当及时进行猪瘟疫苗接种[3]。

1.5.2猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸障碍综合征、猪圆环病毒病检测结果判断依据
（1）被检样品加样后20分钟可与对照卡的色带滴度进行参考比较。

（2）当被检样品检测线（T）条带的色泽≥对照卡中1:40效价时，说明检测样品中猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸障碍综合征、猪圆环病毒抗体的滴度较高，暂不需要进行疫苗的接种免疫。

但当抗体效价≥1:320时，说明抗体水平较高，有可能存在猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸障碍综合征、猪圆环病毒病的隐性感染，应进一步观察验证。

（3）当被检样品检测线（T）条带的色泽＜对照卡中1:40效价时，说明检测样品中猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸障碍综合征、猪圆环病毒病抗体水平较低，不能抵御病毒强毒地攻击，需要进行疫苗的免疫接种。

（4）当被检样品检测线（T）处无明显色带出现，说明被检测样品中没有猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸障碍综合征、猪圆环病毒病的抗体。

如果猪群健康，应当及时进行猪瘟疫苗接种。

2 结果
2.1 猪瘟的免疫情况
由表1可知，在所检测的12个猪场236份血清中，有6个猪场抗体水平不整齐，其中A、B、L、I 猪场为未免猪场，但抗体水平却很高且很不整齐，说明已经有猪瘟感染的存在；C、D、E猪场抗体水平不整齐也无详细的免疫记录，说明已经有猪瘟感染的存在；F、J未免猪场抗体水平较低，需要加紧疫苗接种；G猪场刚刚做过猪瘟免疫接种，所以表现出抗体水平比较高、需要细致观察；H场猪瘟抗体水平大部分超过正常值，根据临床提示，仔猪较弱，较难饲养的情况，该猪场可能存在繁殖障碍型和温和型猪瘟。

建议使用猪瘟兔化弱毒疫苗以中和高滴度的抗体，如不能中和，应淘汰抗体滴度较高的种猪，以确保猪场的安全[4]；K场抗体水平正常暂时不需要免疫接种。

表1 检测猪血清中猪瘟抗体效价的分布
Table 1 The titer distribution of serum antibody against HC in detected swine
样品来源检测数<1:16 1:16-1:128 >1:128 免疫合格率（%）
A 20 4 2 14 10.0
B 20 0 8 12 40.0
C 21 3 9 9 42.9
D 18 3 6 9 33.3
E 20 8 4 8 20.0
F 21 15 0 6 0
G 18 0 6 12 33.3
H 20 0 0 20 0
I 16 6 4 6 25.0
J 20 20 0 0 0
K 24 0 20 4 83.3
L 18 3 9 6 50.0 合计236 62 68 106 27.4
2.2 猪伪狂犬病免疫情况
由表2可知，在所检测的11个猪场208份血清中，A、B猪场为未免猪场抗体水平不均衡，说明存在伪狂犬病；K场抗体水平正常，暂时不需要免疫接种；C、D、E、F、G、H、J、L猪场抗体水平较低，需要加紧疫苗免疫[5]。

表2 检测猪血清中猪伪狂犬病抗体效价的分布
Table 2 The titer distribution of serum antibody against PR in detected swines 样品来源检测数<1:40 1:40-1:320 >1:320 免疫合格率（%）
A 16 4 8 4 50
B 20 8 10 2 50
C 21 21 0 0 0
D 18 18 0 0 0
E 20 20 0 0 0
F 21 18 3 0 14.28
G 18 9 9 0 50
H 16 16 0 0 0
J 20 20 0 0 0
K 20 0 20 0 100
L 18 2 16 0 66.66 合计208 136 66 6 30.13
2.3 猪繁殖与呼吸障碍综合征的免疫情况
由表3可知，在所检测的12个猪场212份血清中，由于A场刚接种完该病毒疫苗免疫，部分猪只所测结果稍高与正常水平；C、D、E、H场部分猪只抗体水平较低；B、F、I、J、L场抗体水平不均衡，说明猪场内存在猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒；因此除了A、K场以外的猪场，其他猪场均需要进行疫苗的免疫接种，由于该病主要多发于冬春季节[6]，所以猪场发病的不是很多。

K场抗体水平正常，暂时不需要免疫接种。

表3 检测猪血清中猪繁殖与呼吸障碍综合征抗体效价的分布
Table 3 The titer distribution of serum antibody against PRRSV in detected swine 样品来源检测数<1:40 1:40-1:320 >1:320 免疫合格率（%）
A 16 0 10 6 62.5
B 20 10 8 2 40
C 21 9 3 9 14.28
D 18 9 9 0 50.00
E 18 9 9 0 50.00
F 21 18 0 3 0
G 18 12 0 6 0
H 16 6 10 0 62.50
I 16 6 4 6 25.00
J 15 6 6 3 40.00 K 15 0 15 0 100 L 18 3 12 3 66.66 合计212 88 86 38 41.46 2.4 猪圆环病毒病的免疫情况
由表4可知，在所检测的5个猪场84份血清中，C、F、J场抗体水平较低，需要接种免疫；E场抗体水平正常，暂时不需要免疫接种；G场所测结果中抗体水平差异较大，部分猪只抗体水平非常高，需要进一步做观察。

猪圆环病毒病是继猪繁殖与呼吸综合征之后出现的又一免疫抑制性疾病，已对世界养猪业造成巨大经济损失[7]，对该病的控制应在做好猪场卫生消毒、降低或避免应激因素、提高饲养管理和断奶仔猪营养水平的基础上，重点采取药物预防控制病原的继发感染，最大限度地降低猪群的死亡率，减少经济损失。

表4 检测猪血清中猪圆环病毒病抗体效价的分布
Table 4 The titer distribution of serum antibody against HC in detected swine
样品来源检测数<1:40 1:40-1:320 >1:320 免疫合格率（%）
C 21 15 6 0 28.57
E 20 0 20 0 100
F 20 10 10 0 50
G 18 0 9 9 50.00
J 15 6 9 0 60.00 合计84 31 44 9 56 2.5猪场中猪瘟、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸障碍综合征、猪圆环病毒病的免疫情况
如表5可知，不同猪场不同疾病的免疫状况相差较大，在12个猪场中猪瘟、伪狂犬免疫合格率在60%以上的猪场仅有一个，其他均在60%以下；猪繁殖与呼吸综合征合格率在60%以上的猪场有四个，但免疫合格率在80-90%的仅有一个，处于抗体水平临界以下的猪场较多；猪圆环病毒病（PCV）的免疫状况也不太理想，因为它是一种免疫抑制性的疾病，在其他疾病的免疫没有做好的情况下，会影响猪圆环病毒病疫苗的免疫效果[8]。

表5 12个猪场中猪瘟（HC）、猪伪狂犬病（PRV）、猪繁殖与呼吸综合征（PRRSV）、猪圆环病毒病
（PCV）的免疫状况
Table 5 The immunization status of Classical Swine Fever(CSF), Porcine pseudorabies (PR), porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS), Porcine circovirus (PCV) in 12 large pig farms
免疫合格率（%）
平均免疫合格率（%）
疾病种类猪场数
90-100 80-90 70-80 60-70 60以下
HC 12 0 1 0 0 11 27.4
PRV 11 0 0 0 1 10 30.13
PRRSV 12 1 0 0 3 8 41.46
PCV 5 1 0 0 1 3 56
3 讨论
3.1 猪繁殖障碍性疾病是危害养猪业的主要疫病之一，对该病的传统诊断方法有病毒分离鉴定、动物实验等，但由于其操作复杂，费时费力，而且敏感性不高，往往达不到简便、快速和早期诊断的要求。

目前国内外猪繁殖障碍性疾病诊断还是以血清学方法诊断为主，包括免疫胶体金技术、免疫过氧化酶单层细胞试验(IPMA)、血清中和试验（SN）、间接荧光抗体试验（IFA）和酶联免疫吸附试验(ELISA)等[9]，但这些方法都必须在实验室完成，而且需要较好的设备和经过专业训练的人员才能进行，不便于猪场、基层兽医站和猪交易市场开展，而金标快速检测试纸具有操作简便、快速、准确、灵敏度高、直观，结果容易判定等优点，可以在生产一线广泛使用。

3.2 为了从总体上了解昆明地区集约化猪场繁殖障碍性疾病的免疫情况和抗体水平，本试验对12个猪场猪瘟（HCV）、猪伪狂犬病（PRV）、猪繁殖与呼吸综合征（PRRSV）、猪圆环病毒病（PCV）四种疾病的抗体进行检测，结果表明，猪瘟的整体抗体水平较高，在所检测的236份血清中抗体水大于1：128以上的有106份，约为4
4.91%，这可能是引起临床上断奶仔猪爆发猪瘟的一个原因[10]；猪伪狂犬病的整体抗体水平较低，在所检测的208份血清中抗体水平在1：40以下的有136份，约6
5.38%，说明大多数猪场中伪狂犬病的免疫力度不大，应加强猪伪狂犬病的免疫预防工作；猪繁殖与呼吸综合征和猪圆病毒病均为免疫抑制性的疾病，在其他疾病疫苗没有免疫好的情况下，会影响这两种疾病的抗体水平，增加疾病的发病率[11]。

因此，重视免疫预防是减少猪只发病，提高养猪经济效益的根本途径。

影响疫苗效果的因素很多，主要包括猪群自身因素、疫苗质量、免疫方法和途径等因素。

对于检测抗体水平低的猪场，建议从下面几方面入手进行综合防制。

3.2.1 落实生物安全体系
猪场的选择应远离公路、城镇、易于防疫的地方；场区布局合理，生产区与生活区、行政管理区严格分开；场区都应设立消毒池或消毒盆，消毒液定期更换；坚持自繁自养，引种时必须对猪只进行有关疾病的检疫，并在隔离舍进行1-2个月的隔离观察，并且每3周进行抗体监测一次，连续3次监测为阴性的猪场，进行免疫接种和多次彻底的消毒后方可进场合群；实行多进全出制度，降低猪群间交叉感染的机会；降低饲养密度、完善通风设施、加强消毒工作等方面的工作，是保持猪只非特异性防御能力的重要措施。

3.2.2加强饲养管理
良好的饲养管理模式是控制疾病的根本，很多规模化猪场一直把疾病控制看成是兽医的事情，似乎与饲养管理和环境控制关系不大，而且过分依赖疫苗和药物。

饲养管理是控制规模化猪场疾病的关键因素，疫苗效力的充分发挥还需要良好的饲养管理和卫生条件作为保障。

因此要让猪在舒适的环境中生长，用高品质的饲料，保证充足的营养，以增强群体抵抗环境应激和疾病的能力。

要控制好疾病，养猪生产必须做到全进全出，最好采用国内外推荐的仔猪早期隔离断奶（SEW）技术，其要点为早期断奶、隔离多点式生产、全进全出、环境控制以及严格的生物安全措施。

3.2.3 制定合理的免疫程序
疫苗的免疫效果与猪体自身的生理状况有很大关系，特别是猪只在各种应激条件下，抗体产生的水平变化很大。

此外，多种疫苗又有可能相互干扰，为确切地了解疫苗在猪体内的免疫情况，猪场应根据每种疫苗的免疫期，定期进行抗体检测，根据抗体水平对免疫程序进行适当调整。

在疫苗的选择方面，能够通过胎盘传染的疾病一般建议选用灭活疫苗。

常见繁殖障碍性疾病的参考免疫程序[12]见表6（由于猪圆环病毒病暂还没有效果明显的疫苗，所以这里不做讨论）。

表6 常见繁殖障碍性疾病的参考疫苗程序
Table 6 The referrence immunization schedule of average Porcine reproductive syndrome
疾病类型猪只类型疫苗类型免疫程序
仔猪
弱毒苗 阴性猪场20日龄和60日龄各免疫1次 阳性猪场0日龄和60日龄各免疫1次 后备猪
弱毒苗 配种前免疫2次 生产母猪
弱毒苗 产后10天免疫1次 猪瘟 种公猪
弱毒苗 经基础免疫后每年免疫2次 后备猪
配种前免疫1次 猪伪狂犬病 种公猪
灭活苗 经基础免疫后每年免疫2次 后备猪
灭活苗 5月龄左右免疫1次，14天后加强1次 生产母猪
灭活苗 配种前免疫，第1次免疫后14天加强1次 猪繁殖与呼吸综合征 种公猪 灭活苗 经基础免疫后每年2次
这样改进过的猪场，猪繁殖障性疾病的发病率明显减少，临床没有观察到流产、死胎、木乃伊胎、产出无活力的弱仔的情况，断奶仔猪发生腹泻、死亡的情况也较少。

通过这次调查我们发现大部分猪场免疫程序不是很合理，甚至有几个猪场连免疫记录都没有，猪瘟、猪伪狂犬病仍然是昆明地区的主要疾病，应加强这两种疾病的免疫预防工作。

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The serology survey of several kind of Porcine reproductives
barrier diseases in pig farmas in Kunming
Y ANG LIANG-yu BAI WEN-shun WANGAI-ru
(Animal Science and Verinary Medicine College ，Yunnan Agricultural University ，Kunming ,650201，China)
Abstract:The serum sample s from 12 intensive pig farms of Kunming were test with the colloid gold technology for antibodies to Classical Swine Fever(CSF), Porcine pseudorabies(PR), porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS), Porcine circovirus(PCV),The results indicate that the majority of pig farmas exist hog cholera and Porcine pseudorabies(PR) , Among 236 Serum samples for Hog cholera ,only 27.4%（68/236）checked sera antibodies titers were 1:16 -1:128， which were regarded as hog cholera threshold of protective level; The threshold of protective level of Porcine pseudorabies(PR), porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS), Porcine circovirus(PCV) was(1:40-1:320); The antibody titers in threshold of protective level of them were 30.13%（68/236），41.46%(66/208) and 56.0%(44/84); From the serology survey we can know that the majority of pig farms did not emphasize the immunity and lacke the scientific,
immunization schedule among the four diseases above Classical Swine Fever(CSF) and Porcine pseudorabies(PR) were main Porcine reproductive syndrome diseases, we should carry on the immunity of Classical Swine Fever(CSF) and Porcine pseudorabies (PR).
Key words：Intensive Pig Farms ；Porcine reproductive syndrome；Immune colloidal gold technique；Antibody detection.
作者简介
杨亮宇（1969——）男（白族），云南剑川人，副教授，硕导，主要从事营养与代谢病研究。

白文顺（1971——）女（纳西族），云南丽江人，讲师，主要从事动物营养与疾病防治研究。

王爱茹（1979——）女（汉族），河北唐山人，在读硕士，主要从事营养与代谢病研究。