一种驴和马及狐狸源性成分快速检测方法的研究

类物种源性成分 ，包括猪 肉 、鸡 肉 、牛羊肉等 １ ３ ５ ／ 。
不同物种检 测范 围最广 的也集 中于 肉类检测例如对 驴 、马源 性成 分 的检 测 ［ ６ － ７ １ 。 目前 ，对 食品 中动物
源性 的荧光定量 Ｐ Ｃ Ｒ 检测研究均缺乏阳性扩增内标
（ Ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ｎ ａ ｌ Ａ ｍ ｐ ｌ ｉ ｉ ｆ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ， Ｉ Ａ Ｃ） 监 控 反 应体 系 ，
词 料阅工与箍测技术 Ｆ ｅ ｅ ｄ Ｐ ｒ ｏ ｃ ｅ ｓ ｓ ｉ ｎ ｇ ａ பைடு நூலகம் ｄ Ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｌ ￣ ｅ ｃ ｈ ｎ ｉ ｑ ｕ ｅ ｓ
２ ０ １ ７ 年 辩５ ａ 卷 第１ 期
一
种驴和 马及狐狸源性成分快速检测 方法 的研究
卞如如 ，范 阳阳 ，刘艳艳 ，霍胜 楠 ，盛 清凯 ，谭睛 晴 ，张全芳 ，张 卉 ，步 迅
１ ６ Ｓ ｒ ＲＮＡ 基 因 为 靶 基 因 ， 分 别 设 计 驴 、马 和 狐 狸
准确 ，加 强食 品标识 管理 ，改进 食品安全和保 护消 费 者利 益 ，应积极 开展动物源性成 分检测方面 的研 究。目前 ， 动物源性 成分鉴别 的方法主要包括物理 、 化 学 、免疫学和 分子生 物学方法 …，其 中以分子生 物 学 为基础 的多 重实 时荧光 Ｐ Ｃ Ｒ法 成 为检 测 的重
（ １ ． 山东省农 业科 学院生物技 术研 究 中一 ２ ２ ，山 东省农 业科学 院应 用生命科 学 实验 室， 山东济南 ２ ５ （ ｝ １ ０ ０ ；
２ ． 山 东省 食 品 药 品 检 验 研 究 院 ， 山 东济 南 ２ ５ ０ １ ０ １ ；
３ ． 山东省农 业科 学院畜牧兽 医研 究所 ，山东省畜禽 疫病防 治与繁育 重点实验 室，山 东济 南 ２ ５ ０ １ ０ （ ） ）
要 工 具 Ｉ 。该 技 术 可 有效 地 检 测 食 品 中 的 重 要 性 肉
源性特异性 引物和探针 ， 成 功建立了能同时检测驴 、 马和狐狸源性成分 的多重实时荧光 Ｐ Ｃ Ｒ体 系 ，同时 可适 用于饲料 、肉类 、奶类 、皮毛类和动物 油脂 类
等动物产品中的驴 、马和狐狸源性成 分的鉴定 。
摘 要 ： 实验 旨在 建 立 快 速 检 测 驴 、马 和 狐 狸 源性 成 分 的 方 法 。 以 驴 、 马和 狐 狸 的 线 粒体 保 守序 列 １ ６ Ｓ ｒ ＲＮ Ａ基 因 为靶 基 因 ，设 计 通 用 引物和 以不 同 荧光 素 标记 的特 异 Ｔ ａ ｑ Ｍａ ｎ 探 针 ，构 建 与通 用引 物共 用的 阳性 扩 增 内标 （ Ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ｎ ａ ｌ Ａ ｍｐ ｌ ｉ ｉ ｆ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ，Ｉ Ａ Ｃ）作 为 Ｐ Ｃ Ｒ 监 控 反 应体 系。 通 过 优 化 Ｐ Ｃ Ｒ 反 应 体 系和 条 件 ，建 立 能 同 时检 测驴 、马 和 狐狸 源性 成 分 的 四重 实时 荧光 Ｐ Ｃ Ｒ 方 法 。结 果表 明 ：利 用驴 、马 、狐 狸 、牛 、猪 、羊 、水 貂 、狗 、鸡 、鸭 、大 豆 、
资助项 目：山 东省农业 重大应用技术 创新课题 （鲁财农指 【 ２ ０ １ ４ １ ３ ８号 ）；山东省科技厅 山 东省优 秀 中青年科 学 家科研 奖励 基金 计划 项 目 （ Ｂ Ｓ ２ ０ １ ０ Ｓ Ｗ０ ２ ４ ）；济 南 市高校 院所 自主创新 项 目
驴肉享有 “ 天上龙 肉，地下驴 肉”的美誉。近
年 来 ，利 用廉 价 肉类 掺 假 驴 肉 的现 象 层 出 不 穷 ，对 人 类 的健 康 造 成 极 大 威 胁 。 为 了 确 保 食 品 标 签 真 实
无法避免 由反应抑制因素而造成假阴性结果。 因此 ， 建 立添加 有外源扩增 内标 的食 品中驴 肉 、马 肉和狐 狸肉的多重荧光定量 Ｐ Ｃ Ｒ俭测方法对食品安全的快 速监管 具有重要 的创新实践意 义。本研究 以线粒体
１ 材 料 与 方 法
１ ． １ 实验材料 生熟驴肉 、 马肉 、 狐狸肉 、 生牛肉 、
生绵羊 肉 、生猪 肉 、生 山羊 肉、生兔肉 、生 鸭肉 、 生鸡 肉 、生鹅 肉 、生 鱼肉 、玉米 、小 麦等均购 自济 南市农 贸市场 。此外 ，１ ５ ０ 份驴 肉产品 ，五香驴 肉 、
收稿 Ｅ ｌ 期 ：２ （ ） １ ６ － ０ ７ － ２ １ ；修 回 日期 ：２ ０ １ ６ － ０ ９ — ０ １
驴 肉火烧 、驴 肉卷 、酱 驴 肉、驴 肉香 肠均购 自于济
南市 各 大超 市 、农 贸 市 场 等 。 １ ． ２ 试 剂 与 仪 器 动 物 组 织 提 取 试 剂盒 为 ＯＭＥ Ｇ Ａ 品牌 。 Ｔ ａ ｑ Ｈ ｏ ｔ ｓ ｔ ａ ｒ Ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｏ ｎ 热 启 动 酶 、ｄ ＮＴ Ｐ ｓ 、
小 麦 、 玉 米等 物 种 检 测 没 有 交 叉反 应 ，证 明该 方 法特 异 性 高 ， 准确 性 好 。 该 方 法模 板 Ｄ ＮＡ 检 测 灵敏 度 为 ｆ Ｊ ． ０ １ ｎ ｇ 。
本研 究建 立 的驴 、马 和狐 狸 源 性 四 重 荧光 实 时 Ｐ Ｃ Ｒ 检 测体 系灵敏 度 高 、特异 性 强 ，能有 效 鉴 别动 物 产 品 中驴 、马和 狐狸 的源 性 成分 ，也 可用 作相 关动 物 皮张 真伪 的鉴 别 方法 。 关键 词 ： １ ６ Ｓ ｒ ＲＮＡ 基 因； 多重 实 时荧 光 Ｐ Ｃ Ｒ 法 ；驴 ；马 ；狐 狸 ；源性 成 分 中 图 分 类 号 ：￥ ８ １ ４ ． ５ 文 献标 识 码 ：Ａ ＤＯＩ 编 号 ：１ ０ ． １ ９ ５ ５ ６ ／ ｊ ． ０ ２ ５ ８ — ７ ０ ３ ３ ． ２ ０ １ ７ — ０ １ — １ Ｏ Ｏ