山楂叶黄酮类成分提取纯化工艺研究-孙君凯,王帅,包永睿,等
大孔树脂分离纯化山楂叶中黄酮物质研究项目介绍
大孔树脂分离纯化山楂叶中黄酮类物质研究项目级别：院级起止时间：2015.3-2016.3项目负责人：李静班级学号：122042208项目组成员：王娟（122042206）张莎（122042210）黄伟（132042213）白玉琦（132042205）指导教师：卫静莉职称：教授项目研究目的背景1.黄酮是一种很强的抗氧剂，可有效清除体内的氧自由基，可以阻止细胞的退化、衰老，也可阻止癌症的发生,可改善血液循环，降低胆固醇，大大降低了心脑血管疾病的发病率，也可改善心脑血管疾病的症状。
山楂叶中含有黄酮类化合物，从秋后落叶时的山楂叶中提取黄酮类物质，可治疗冠心病、心绞痛、高血脂、消炎抑菌、防辐射等医疗保健功能。
在我国，山楂叶资源丰富，当果食摘后，一般都把叶子当作废物扔掉，所以有必要对它进行研究和开发利用。
分离纯化山楂叶中黄酮类物质研究是一项变费为宝、利国利民的研究课题。
2.从山楂叶的提取物中分离纯化黄酮类物质，采吸附法从植物粗提物中分离黄酮类化用大孔树脂合物，是最有效的方法之一。
项目主要研究内容、研究方法及实施过程（包括预期目标、实验手段、实施效果等）主要研究内容：首先得到山楂叶的提取液，通过静态吸附从D101、AB-8、X-5、DM301四种树脂中，以黄酮吸附率和解析率为评价指标，筛选出最佳吸附树脂；然后通过正交试验进行动态吸附，得出分离纯化山楂叶中黄酮类化合物的最佳工艺条件。
项目实施手段及过程：查找相关资料，对提取天然植物中的化合物的方法进行了解和熟悉，着重了解用大孔树脂分离纯化黄酮类物质的方法，然后设计出具体的实验方案。
实验方案得到指导老师的指导，组内修改，审核通过后，进行实验的前期准备，如实验的仪器，药品等的准备，购买等。
之后实验，从静态吸附与解吸以及动态吸附与解吸来研究分离纯化山楂叶中黄酮类化合物的适宜工艺条件，通过实验结果进行分析，总结，得出结论。
首先研究静态吸附和解吸试验，以黄酮的吸附率和解析率为指标，选出最佳的吸附树脂。
山楂中黄酮类化合物的提取研究
ＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＴｅｃｈｎｉｑｕｅｏｆＦｌａｖｏｎｏｉｄｓＦｒｏｍ Ｈａｗｔｈｏｒｎｓ
ＬｉｕＸｕａｎｗａｉ，ＬｕｏＷｅｉｗｅｉ ，ＤｉａｏＱｕａｎｐｉｎｇ，ＪｉＢｉｎｈｕｉ，ＱｉｎＨａｎｑｉ，ＪｉａｎｇＨａｏ
（ＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＡｎｓｈａｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ａｎｓｈａｎ １１４００７，Ｃｈｉｎａ）
２ 试验方法 ２．１ 标准曲线的绘制
称取 ２０ｍｇ芦 丁 标 准 品，用 甲 醇 溶 液 使 其 溶 解，定 容 于 １００ｍＬ容量瓶中，得 ０．２ｍｇ／ｍＬ的黄色透明标准芦丁溶液；并将 所得溶液分别稀释得到 ０．０２ｍｇ／ｍＬ、０．０４ｍｇ／ｍＬ、０．０６ｍｇ／ｍＬ、 ０．０８ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ的 芦 丁 标 准 溶 液。 以 不 加 标 准 溶 液 的
黄酮类化合物是一类存在于自然界并具有 ２－苯基色原酮 结构的化合物。在体内无法自主合成，只能从日常生活的饮食 当中摄入 ［９］。近年来 国 内 外 相 继 开 发 出 黄 酮 类 的 茶 叶、牙 膏、 口香糖等产品［１０］，目前更注重研发纯度更高的保健品和药品。 黄酮作为植物中非常重要的一类次生代谢产物，在植物中广泛 存在，并且一直备 受 关 注，其 因 独 特 的 结 构 而 具 有 良 好 的 抗 氧 化、抗癌、抗菌和 抗 炎 等 功 能。 本 实 验 将 对 黄 酮 类 化 合 物 的 提 取条件进行研究。
甲醇溶液为空白对照，在 １９０ｎｍ～４００ｎｍ间进行紫外光谱扫描， 不同浓度的芦丁标准溶液吸光度的测定波长以最大吸收波长 为标准，绘制出标准曲线［１１］，得到线性方程。
２．２ 单因素试验
２．２．１ 甲醇浓度对黄酮提取的影响 称取 ５份样品，用固定的料液比，固定的时间，以不同浓度
山楂中黄酮提取的研究
经过实验，萃取分离山楂中总 黄 酮 的 最 佳 双 水 相 体 系 条 件 是２５％ ＰＥＧ８００和 １２％ （ＮＨ４）２ＳＯ４，样 品 加 入 量 ３ ｍＬ，ｐＨ＝ ９。在此条件下，黄酮的萃取率能达到９５％以上。因 此，实 验 中 采用 ＰＥＧ／（ＮＨ４）２ＳＯ４双水相体系萃取分离山楂中总 黄 酮 的 方 法是可行的，可 以 作 为 黄 酮 类 化 合 物 萃 取 分 离 的 一 种 有 效 方 法。
摘 要 ：通 过 利 用 紫 外 分 光 光 度 计 测 定 吸 光 度 的 方 法 ，研 究 了 山 楂 中 总 黄 酮 在 ＰＥＧ／（ＮＨ４）２ＳＯ４ 形 成 的 双 水 相 系 统 中 的 萃 取 结 果 ，最 终 的 实 验 结 果 表 明 ：在 ｐＨ＝９的 环 境 下 ，将３ ｍＬ 的 粗 提 液 加 入 到 质 量 浓 度 ２５％ ＰＥＧ８００ 与 质 量 浓 度 １２％ ＰＥＧ／（ＮＨ４）２ＳＯ４ 形 成 的 双 水 相 体 系 中 进 行 分 离 萃 取 ，总 黄 酮 在 上 、下 相 的 分 配 系 数 和 萃 取 率 达 到 最 高 。 从 而 确 定 了 本 实 验 方 法 对 于 萃 取 分 离 山 楂 中 的 总 黄 酮 是 有 效的。
所有试剂均为分析纯。 １．２ 山 楂 粗 提 液 的 制 备
准 确 称 取 山 楂 碎 末 ５ｇ，放 到 烧 杯 中 ，向 烧 杯 中 加 入 ６０％ 乙 醇１２０ｍＬ，混 合 ５ ｍｉｎ，然 后 将 溶 液 转 移 至 ２５０ ｍＬ 容 量 瓶 中， 补 加蒸馏水至刻度，摇匀，充分混合，静置４ｈ后，减压过滤得到 暗红色的山楂粗提液。 １．３ 芦 丁 标 准 溶 液 的 配 制
厂）、恒温 水 浴 锅 （上 海 仪 器 有 限 公 司 ）、干 燥 箱 （江 苏 曙 峰 企 业 ）、分 析 天 平 （莱 阳 化 工 有 限 公 司 ）。
长白山野生山楂叶中黄酮类化合物提取工艺研究
ｌ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 ．
滤 ， 渣 重 复 提 取 １次 ， 并 提 取 液 ， 入 ６ 的 乙 醇 定 容 滤 合 加 ０ 至 １ ０ ， 吸 光 度 。 结 果 表 明 ， 度 在 ６ ℃ 时 提 取 率 随 浸 ０ ｍｌ测 温 Ｏ 提剂 浓 度 递 增 ， 醇 浓 度 超 过 ６ 提 取 率 下 降 。 因 此 ， 择 乙 ０ 选
—－— —
４ ４ ・— ４ － —
过 １０ 提取率下降 。因此 ， 取剂用选 择 １０ 。 ２ ｍｌ 提 ２ ｍｌ ． （ 积 分 数 ） 醇 ， 解 并 定 容 至 ５ ｍｌ准 确 量 取 上 述 溶 液 ２ ２ 各 种 提取 因 素 对 总 黄 酮 提 取 率 的 影 响 体 乙 溶 ０ ， 在 单 因素 试 验 的 基 础 上 ， 择 提 取 温 度 （ 、 醇 浓 度 选 Ａ） 乙 ０ ０ 、 ． ｍｌ２ ０ 、 ． ｍｌ４ ０ 、 ． ｍｌ６ ０ ， 入 ５ ． ｍｌ １ ０ 、 ． ｍｌ３ ０ 、 ． ｍｌ５ ０ 、 ． ｍｌ 加 准 确 称 取 １ ０ 干 燥 至 恒 重 的 芦 丁 ０ ０ ４ ｇ 加 入 ６ ２℃ ．１６ ， Ｏ Ｂ、 Ｃ 为 以 亚 硝 酸 钠 溶 液 ０ ３ ， 匀 ， 置 ６分 钟 后 加 入 １ ％ 硝 酸 铝 （ ） 浸 提 剂 量 （ ） 考 察 因 素 ， 总 黄 酮 提 取 率 为 考 察 指 ． ｍｌ摇 放 ０ 标 ， 用 （３进 行 正 交 实 验 。极 差 分 析 结 果 表 明 ， 响 总黄 选 ３） 影 溶 液 ０ ７ ｍ１摇 匀 ， 置 ６分 钟 后 加 入 ４ 氢 氧 化 钠 溶 液 ４ ．５ ， 放 。 ０ ， ３ ％乙醇定 容 ， 匀 ， 置 １ ｍｌ用 Ｏ 摇 放 Ｏ分 钟 。 用 紫 外 可 见 分 光光 度 计 在 ５０ ｍ 处 测 吸 光 度 Ａ。线 性 回归 方 程 为 ： （，／ １ｎ ｙｔ ｇ ｍ１一 ５ ６ ２ ３ ） ４ ． ９ Ａ＋ １ ６ ９ ７ 其 中 Ｙ为 芦 丁 含 量 ， 为 吸 光 ．８ ９ ， Ａ 度 ，＝ ０ ９ ９ 。 ｒ ．９ ８
山楂叶黄酮提取与测定研究进展
要指 标是 黄酮类 化合 物 的含量 ，其 测
定 方 法 研 究 日益 深 入 。 目前 已 报 道 的
１ 、水提 法 。将 山楂 叶干 燥粉 碎 ，
加水 浸煮 ２～３ 次 ，冷 却后 粗 滤 ，滤液
山楂叶黄酮测定方 法主要有 以下几种 。 （ 一）定性测定
山楂 ，是 我 国特有 的药 果 兼用 树 种 ， 在我 国河 北 、北京 、辽 宁 、河南 、山
（ 二）微波提取法
微 波 提取法 具有 操 作简 单 、副 产 物少 、产率 高及 产 物易 提 纯 等 优 点 ，
还具 有高效 性 和高选 择性 的特 点 。其
东 、山西 、江苏 、云 南 、广西 等地 均
高。
二 、 山楂 叶 黄 酮 的 测 定
结 了山楂 叶的提 取和 测定 方法 ，以期 对 加 强山 楂叶黄 酮 的开发 力度 、提高
其综 合利用水平及 附加值提供依据 。
～
、
山楂 叶 黄 酮 的提 取 方法
（ 一 ） 溶 剂 提 取 法
酶解 法 是 利 用 酶 的高 度 专 一 性 ， 将 山楂 ｎ ｔ ２ １ ￣ 胞 壁 的纤 维 素 以及细 胞 间
农 业 科 学
Ｎｏ ＮＧ ＹＥ ＫＥ Ｘ ＵＥ
山楂 叶黄酮提取 与测 定研 究进展
河 南农 业职 业学 院
摘
焦
镭
石明生
曹乐 民
柴梦 颖
辉 县市九大聚仙农贸有 限公司
赵运华
要 ：综述 了山楂 叶黄酮提取 与检 测的研 究进展 ，分析 了山楂 叶黄酮在相 关产业开发利 用中存在 的问题并提 出了相应的对策。
不同方法提取的山楂叶总黄酮含量的测定
山楂叶系蔷薇科植物山楂 （ 012324567 89::239;9<2 的叶子， 其中含有黄酮类化合物。大量研究表 =54） 明， 黄酮类化合物具降血脂的药理作用。本文用分 光光度法对山楂叶提取物中的总黄酮含量进行测 定。结果报告于下。 " 材料、 方法与结果
ห้องสมุดไป่ตู้
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（上海第二分 ")" 仪器和试药 %!! 光栅分光光度计 析仪器厂） ； 芦丁标准品 （中国生物制品鉴定所） ； 氢氧 ； 化钠试液 （称取 ’5 氢氧化钠溶于 "$$>? 蒸馏水中） （!#5 亚硝酸钠溶于 #$$>? 蒸馏水中） ； #*亚硝酸钠 硝酸铝 （ 硝酸铝溶于 蒸馏水中） 。 "$* #$5 #$$>? " ) ! 标准曲线的绘制 用 " ) ! ) " 芦 丁 标 准 液 精 密 称 取 芦 丁 !$ ) !>5， 作为对照品溶液。 ,$* 的乙醇溶解并稀释至 "$$>?， 分别置 ")!)! 标准曲线 精密量取 "、 !、 (、 ’、 #、 ,>?， 各加水至 ,>?， 加 #* 亚硝酸钠溶液 !#>? 容量瓶中， 使混匀， 放置 ,>9:， 加 "$* 硝酸铝溶液 ">?， 使混 ">?， 匀， 放置 ,>9:， 加氢氧化钠试液 "$>? 再加水至刻度、 随行试剂空白对照。按分光光度法 摇匀， 放置 "#>9:， 在 #$$:> 波长处测定吸收度， 所取标准液的浓度和吸 收度数据经回归处理， 回归方程为 ! @ $ " ’"+% # A $ " 芦丁浓度在 $) !$! B ") $$#%+-， $ @ $)----。结果表明， !"!>5 C >? 范围内具良好的线性关系。 取山楂叶适量， 用乙醇液加热 ")( 样品的测定 （"） 回流提取， 过滤， 得粗提取液。乙醇浓度的选择： 取山 楂叶适量精密称定， 分别加 +$* 、 %$* 、 ,$* 、 #$* 乙 醇液 +$>?， 回流提取 (D， 过滤， 残渣分别用提取溶剂 洗 ( 遍， 同滤液合并入 "$$>? 量瓶中， 并加乙醇至刻 度， 按标准曲线项下的方法测定总黄酮的含量， 结果 本实 表明， 乙醇浓度在 ,$* 时提取效率最高。因此， 验采用 ,$* 醇作为提取总黄酮溶剂的第一步。
山楂叶总黄酮提取分离及活性研究
山楂叶总黄酮提取分离及活性研究一、本文概述Overview of this article《山楂叶总黄酮提取分离及活性研究》这篇文章主要围绕山楂叶中总黄酮的提取、分离及其生物活性进行深入研究。
山楂叶作为一种天然植物资源，富含黄酮类化合物，这些化合物具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等，对人体健康具有重要的促进作用。
因此，对山楂叶总黄酮的提取分离及其活性研究具有重要的理论价值和实际应用意义。
This article mainly focuses on the extraction, separation, and biological activity of total flavonoids in hawthorn leaves. Hawthorn leaves, as a natural plant resource, are rich in flavonoids, which have various biological activities such as antioxidant, anti-inflammatory, anti-tumor, etc., and have important promoting effects on human health. Therefore, the extraction, separation, and activity research of total flavonoids from hawthorn leaves have important theoretical value and practical application significance.文章首先介绍了山楂叶总黄酮的提取方法，包括传统的溶剂提取法和现代的超声波、微波等辅助提取法，并对各种方法的优缺点进行了比较和分析。
接着，文章详细阐述了山楂叶总黄酮的分离纯化过程，包括粗提物的制备、黄酮类化合物的分离纯化以及纯度鉴定等步骤。
山楂叶片中黄酮类物质的提取工艺与检测
山楂叶片中黄酮类物质的提取工艺与检测1项目设计的意义山楂为蔷薇科植物，资源丰富,叶片中含有的黄酮类化合物具有降压、降血脂、软化血管、增加冠状动脉流量、助消化等药理作用。
随着人们健康观念的更新以及黄酮类化合物越来越广泛的生物活性被发现,其开发利用已成为目前的一个研究热点。
研究证实,山楂叶和果含有相近的营养及药用成分,特别是总黄酮含量远高于果实,有很高的利用价值。
但长期以来,人们只注重果实的利用,而山楂叶则自生自落,白白浪费。
超声波法提取总黄酮具有简单、低成本、快速、有效的优点,且不破坏其有效成分。
为了充分开发利用山楂叶这一丰富的资源,本试验对山楂叶总黄酮的超声波提取工艺条件进行了研究,为进一步合理开发利用山楂资源提供理论依据。
2项目设计的原理2.1超声波提取法原理用超声波法提取黄酮类物质,是目前比较新的方法。
它的原理是超声波的空化作用对细胞膜的破坏有助于黄酮类化合物的释放与溶出,超声波使提取液不断震荡,有助于溶质扩散,同时超声波的热效应使水温基本在57℃,对原料有水溶作用。
因此,超声波法大大缩短了提取时间,提高了有效成分的提取率和原料的利用率，且实验可在室温下进行,设备简单,操作方便,是提取山楂中黄酮类物质的一种有效方法。
2.2测定原理黄酮类化合物主要包括黄酮苷和黄酮醇苷两大部分，三氯化铝与黄酮类化合物作用后，生成黄酮的铅盐络离子，呈黄色，颜色的深浅与黄酮的含量成一定的比例关系，可以定量测定。
3主要仪器及试剂KQ-5000DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司,额定功率为500W),754型紫外可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司),JA-5003A型千分之一电子天平,DHG-9146A型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司),RE-52A型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)及其他玻璃仪器。
芦丁为生化试剂，乙醇、硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠等均为分析纯。
4实验内容和步骤4.1山楂叶总黄酮超声波法提取工艺条件的筛选(1)准确称取干燥山楂叶1.000g,加入20mL(料液比1:20)体积分数分别为60%、70%、80%、90%的乙醇,在40℃下以80%超声功率(400W)提取30min,测定其黄酮的提取率。
超声波法提取山楂叶中总黄酮条件研究论文.
本科生毕业设计（论文）题目：超声波法提取山楂叶中总黄酮的条件研究学生姓名：李友鹏刘浩刘高鹏学号：院系：化学工程学院专业年级：2011级应用化学3班指导教师：2015年6月12日摘要总黄酮是指黄酮类化合物，是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分。
山楂叶的化学成份复杂，从山楂叶中分离出的最多的功效组分是黄酮类物质。
利用超声波法，以芦丁为参照品，硝酸铝作显色剂，在510nm波长以分光光度法测定总黄酮含量。
结果测得工作曲线的回归方程为A=0.0091C+0.0023，r=0.9980，a=0.0023，b=0.0091。
线性相关系数R=0.9980。
采用单因素考察法对不同提取溶媒、乙醇浓度、温度、时间、料液比进行总黄酮含量的测定，得出较佳的实验条件为：乙醇的体积分数为70%，料液比1:20、超声温度50℃，超声时间60min，此时得到的黄酮质量为137.555mg。
通过四因素三水平的正交实验，得出影响总黄酮提取率的主要因素为乙醇浓度＞超声温度＞料液比＞超声时间。
关键词：山楂叶；黄酮类化合物；超声波法；分光光度法ABSTRACTRefers to the total flavones, it is a kinds of natural products, widely exist in the plant kingdom, is many effective components of Chinese herbal medicine.Hawthorn complex chemical composition, isolated from hawthorn leaves most of the efficacy ingredient is flavonoids.This experiment using ultrasonic method，use Rutin as reference，Aluminum nitrate as chromogenic agent。
山楂黄酮类成分提取分离及其质量分析研究
山楂黄酮类成分提取分离及其质量分析研究山楂黄酮类成分提取分离及其质量分析研究摘要：山楂是一种传统的中药材，具有广泛的药用价值。
其中，山楂黄酮是主要的活性成分之一。
本研究采用了多种方法进行了山楂黄酮类成分的提取分离及其质量分析研究。
结果显示，醇提法能够提取得到较高含量的山楂黄酮，而硅胶柱层析法可实现山楂黄酮的有效分离。
利用高效液相色谱法（HPLC）对山楂黄酮进行了定性和定量分析，结果显示，提取得到的山楂黄酮主要包括山楂酸、槲皮素和芦丁等成分。
本研究为山楂黄酮类成分的提取分离和质量分析提供了有效的方法和数据支持。
关键词：山楂黄酮；提取分离；质量分析；HPLC一、引言山楂是一种属于蔷薇科的常绿小乔木或灌木，是中国传统中药材中常见的一种。
山楂具有健胃消食、降脂减肥、抗氧化等多种药用价值，近年来越来越受到人们的重视。
而山楂黄酮是山楂中主要的活性成分之一，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性。
因此，研究山楂黄酮的提取分离和质量分析对山楂的药用开发具有重要意义。
二、材料与方法2.1 实验材料本实验采用的山楂样品为新鲜山楂果实，来自中国某地。
针对实验需要，将山楂果实晒干研磨成粉末。
其他实验用品包括乙醇、甲醇、乙酸乙酯、正己烷、硅胶等。
2.2 提取分离方法采用醇提法对山楂样品进行提取。
将山楂粉末置于醇溶液中浸泡一段时间，然后通过过滤将溶液与杂质分离。
之后，进行浓缩，得到山楂黄酮提取物。
采用硅胶柱层析法对山楂黄酮的提取物进行分离。
将提取物溶于适当的溶剂，然后通过硅胶柱进行柱层析。
通过调整各种条件，如溶剂系统、流速、相对极性等，进行山楂黄酮的有效分离。
2.3 HPLC分析方法本实验使用高效液相色谱法（HPLC）对山楂黄酮进行质量分析。
采用C18色谱柱进行分离，流动相采用梯度洗脱。
通过调整流速和波长设置，可以实现对山楂黄酮的定性和定量分析。
三、结果与讨论3.1 山楂黄酮的提取通过醇提法，成功提取得到山楂黄酮提取物。
经过浓缩，得到黄酮提取物的干燥物质量为Xg。
山楂中有效成分的提取工艺研究进展
山楂系蔷薇科植物山里红或山楂的干燥成熟果实,为传统的药食同源植物,具有健胃消食、降脂、维护心脑血管健康等功效。
山楂中富含黄酮类、多糖类、有机酸类和三萜类等主要有效成分。
不同成分的山楂,其性质不同,提取工艺不同,提取效果也不同。
1山楂中黄酮类成分的提取1.1溶剂提取工艺郭艳华等探讨水提取山楂中黄酮的工艺条件,考察浸提时间、温度、料液比、酸度等条件对提取山楂中总黄酮含量的影响;用化学显色反应和紫外光谱初步确定提取产物的黄酮类型;研究山楂黄酮的理化性质。
结果表明,水提取山楂黄酮的适宜工艺条件为提取时间2h,温度50℃,山楂与蒸馏水的料液比为1∶30,酸度p H=8,黄酮得率为4.96%。
张文叶等以山楂浸提液中黄酮提取量为指标,选取浸提时间、乙醇体积分数和料液比(m/V)为主要影响因素,进行山楂黄酮乙醇热浸提工艺的优化研究。
在单因素试验基础上,通过响应面优化得到山楂黄酮的最佳热浸提条件为料液比1∶6,乙醇体积分数60%,浸提时间80min。
此条件下的黄酮提取率达到98.12%.1.2闪式提取工艺杨燕新等通过响应面分析法对山楂果核总黄酮的闪式提取工艺条件进行优化。
分别选取料液比、乙醇浓度、闪式提取时间完成单因素试验,然后通过响应面D e s ig n-E x pe r t软件的B o x-B e h n k e n D e-s ig n程序进行试验设计,优化出山楂果核总黄酮的闪式提取工艺参数,并进行验证。
结果显示,料液比为1∶29(g/m L)、乙醇浓度为49%、闪式提取时间为91s时,山楂果核总黄酮提取率最佳,可达0.644%。
1.3超声提取工艺高世杰等运用均匀试验及正交试验,以黄酮类化合物得率为指标对山楂中黄酮类化合物的超声波水提取工艺进行优化。
在固定超声功率为40k H z的条件下,通过均匀试验设计对超声温度、超声时间、料液比3个因素进行考察,并在均匀设计结果的基础上选取因素水平进行正交试验设计,对提取工艺进行优化。
山楂中黄酮类化合物的提取及成分分析
01 一、背景介绍
目录
02 二、提取方法
03 三、成分分析
04 四、结论
05 参考内容
一、背景介绍
山楂，别名红果，是一种具有极高营养价值的水果。山楂中含有多种有益于 人体健康的化合物，其中包括黄酮类化合物。黄酮类化合物是一类具有生物活性 的天然产物，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种药理作用。因此，提取山楂中的 黄酮类化合物具有重要意义，有助于深入了解其药用价值和保健功能。
通过对不同提取方法的实验设计和数据分析，得出最佳提取条件为：以乙醇 为溶剂，采用超声波提取法，在温度60℃，提取时间40min的条件下，提取出的 黄酮类化合物含量最高。
三、成分分析
1、定性分析
采用气质联用仪（GC-MS）对山楂中黄酮类化合物进行定性分析。通过对比 标准品和样品指纹图谱，初步鉴定出黄酮类化合物的类别和结构。此外，高效液 相色谱（HPLC）也可用于定性和定量分析黄酮类化合物。通过不同色谱条件的设 置，可以分离和检测出不同种类的黄酮类化合物。
2、超声波辅助提取法
超声波辅助提取法是利用超声波的机械作用和空化作用，使植物细胞破碎， 从而释放出黄酮类化合物。该方法具有提取效率高、操作简便、节能环保等优点， 但不适用于工业化生产。
二、现代提取技术
1、超临界流体萃取法
超临界流体萃取法是一种利用超临界流体（如二氧化碳）作为萃取剂的提取 方法。该方法具有提取效率高、操作温度低、无毒无害等优点，但设备投资较大， 适用于实验室研究和工业化生产。
2、定量分析
采用高效液相色谱法（HPLC）对山楂中黄酮类化合物进行定量分析。通过对 比标准品和样品的峰面积或峰高，计算出样品中各黄酮类化合物的含量。另外， 分光光度法也是常用的定量分析方法，其中以紫外-可见分光光度法最为常见。 通过测定样品溶液的吸光度，根据标准曲线计算出黄酮类化合物的含量。
山楂叶片中黄酮类物质的提取工艺与检测(学术论文)
山楂叶片中黄酮类物质的提取工艺与检测一 实验目的1 复习可见分光光度计的使用2 学习超声波提取成分的方法3 掌握利用分光光度计测定含量的方法 二 实验原理1 黄酮含量的测定采用亚硝酸钠－硝酸铝分光光度法，在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在条件下，黄酮类化合物与铝盐生成鳌合物，加入氢氧化钠溶液后显橙红色，即先用亚硝酸钠还原黄酮，再加硝酸铝络合，最后加氢氧化钠溶液使黄酮类化合物开环，生成2－羟基查耳酮而显色，然后使用可见分光光度计在510 nm 波长处定量测定。
2 超声波提取超声波技术是利用超声波产生的强烈振动、空化作用、粉碎作用，将植物中的活性成分提取到溶剂中去。
植物组织中存在的大量水分和微小气泡正好使得超声波的空化作用极易产生，从而使细胞膜的结构受到破坏，提高和改善了组织细胞的通透性，有利于有机物质的溶出。
超声波媒介中传播引起位于路径上的质点进入振动状态，由此触发出强大的加速度引起一种复杂有力的机械搅拌作用。
由于植物组织引起超声波的吸收而使超声波的动能转化为热能，使得植物组织内部温度升高，有利于有机成分的溶出。
该法提取率高、节省溶剂、缩短提取时间、副产物少、简化操作步骤，能达到比常规提取更理想的效果。
三 主要仪器与试剂 1 主要试剂芦丁对照品（购自中国药品生物制品检定所）,硝酸铝（Al(NO3)3.9H2O,分析纯）,亚硝酸钠(分析纯),氢氧化钠（分析纯）,无水乙醇（分析纯，天津大茂化学试剂厂）,山楂叶片（采摘于本校校园）。
2 主要仪器FA1064N 型电子天平（上海精密科学仪器有限公司）SK8200HP 超声清洗器（59 KHz ，220 V ，500 W ，功率可调范围为40%-100%，上海科导超生仪器有限公司）UV-2550紫外可见分光光度计（日本岛津公司）循环水式多用真空泵（SHB-III ，郑州长城科工贸有限公司） 四 实验内容1 对照品溶液的配置准确称取芦丁对照品0.0124 g 于100 mL 烧杯中，加入10mL 无水乙醇溶解，再加入10mL 蒸馏水，然后将溶液定量转移至50 mL 容量瓶中，再用50%乙醇定容至刻度，摇匀，避光保存。
连云港山楂叶黄酮的超声提取及体外活性研究
连云港山楂叶黄酮的超声提取及体外活性研究许瑞波;杨雯雯;万蓓蓓【期刊名称】《井冈山大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2016(037)006【摘要】以连云港花果山山楂叶为原料，以总黄酮提取率为衡量提取工艺的指标。
通过单因素和正交实验设计优化了超声辅助提取山楂叶黄酮的工艺，确定了从山楂叶中提取黄酮的最佳工艺条件：乙醇浓度70%，液料比20：1 mL/g，超声温度70℃，超声时间40 min，提取3次，山楂叶黄酮提取率为2.53%。
此外，采用琼脂平板扩散抑菌法和DPPH•法研究了连云港山楂叶黄酮对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的抑制作用以及抗氧化效应，结果表明山楂叶黄酮具有明显抑菌活性和清除DPPH•的能力。
%Hawthorn leaves as raw material were collected from Huaguo mountain of Lianyungang city and the yield of total flavonoids was used as evaluation indicator. The extraction technology of flavonoids from hawthorn leaves with ultrasonic assisted method was optimized by single and orthogonal experimental design, and the optimal extraction technology was obtained as following: ethanol concentration of 70%, solvent-to-liquid ratio of 20:1 (mL/g), extraction temperature of 70℃, extraction time of 40 min and extraction times of 3. The yield of flavonoids from hawthorn leaves is 2.53%. Moreover, the inhibitory effect of the flavonoids against Staphylococcus aureus, Escherichia coliand Bacillus subtilis was determined by the agar diffusion method, and the antioxidant effect was evaluated by DPPH method. The results showed that theflavonoids extracted from hawthorn leaves had good antibacterial activity and excellent scavenging capacity to DPPH radical.【总页数】6页(P24-29)【作者】许瑞波;杨雯雯;万蓓蓓【作者单位】江苏省海洋资源开发研究院，江苏，连云港222005; 淮海工学院药学院，江苏，连云港 222005;淮海工学院药学院，江苏，连云港 222005;淮海工学院药学院，江苏，连云港 222005【正文语种】中文【中图分类】TS202.3【相关文献】1.山楂叶黄酮的超声提取、精制及抗氧化性研究 [J], 许瑞波;赵跃强;鲁升丽;马利斌;李敏敏;陶磊2.连云港山楂叶黄酮的超声提取及体外活性研究 [J], 许瑞波;杨雯雯;万蓓蓓;3.准噶尔山楂叶总黄酮提取、测定及抗氧化活性研究 [J], 刘伟;欧阳艳;何晓燕;王运莲;刘晓;周双傲;王永平4.Box-Behnken设计优化山楂叶总黄酮提取纯化工艺及其抑菌活性研究 [J], 宋小锋;原增艳;李鹏旭;许平辉;刘勇5.同时测定山楂叶总黄酮中6种黄酮含量及体外抗氧化活性评价 [J], 邓婷;秦涛;徐颖;孙涛因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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70第16卷 第6期 2014 年 6 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 16 No. 6 Jun .，2014山楂叶为蔷薇科植物山里红（Crataeguspinnatifida Bge.var.major N.E.Br.）或山楂（Crataegus pinnatifida Bge.）的干燥叶，性酸，味平；归肝经，具有活血化瘀、理气通脉、化浊降脂的功能。
用于气滞血瘀、胸痹心痛、胸闷憋气、心悸健忘、眩晕耳鸣、高脂血症[1]。
经前期文献报道及本实验室药效验证，黄酮类成分为山楂叶的主要活性成分，在治疗心脑血管疾病方面疗效显著[2-4]。
本实验针对山楂叶黄酮类有效成分开展提取、纯化工艺优化研究，旨在为其临床合理应用及工业化生产提供参考。
1 仪器与试药1.1 仪器紫外分光光度计（日本岛津公司UV-1750）；ACCULAB ALC-11C.4型电子天平（德国Saritorius 集团）。
1.2 试药山楂叶药材（大连同仁堂药房，经辽宁中医药大学王冰教授鉴定为Crataegus pinnatifida Bge. var. major N.E.Br）；芦丁对照品（批号：0752-9907，中国药品生物制品检定所）；D-21、D-101、AB-8、HPD-300、HPD-600、HPD-700型大孔吸附树脂（河北沧州宝恩化工有限公司）；乙醇、甲醇（天津市科密欧化学试剂有限公司）；水为重蒸馏水。
2 方法与结果2.1 对照品溶液的制备取芦丁对照品适量，精密称定，加60%乙醇制成每毫升含2.0 mg 的溶液，即得。
2.2 标准曲线的绘制精密吸取芦丁对照品溶液0.50、0.75、1.00、1.25、1.50、2.00 mL 分别置于10 mL 量瓶中，加入5%亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀后放置6 min，再加入山楂叶黄酮类成分提取纯化工艺研究孙君凯1，王帅2，3，包永睿2，3，孟宪生2，3（1.辽宁省抚顺市药品检验所，辽宁 抚顺 113006；2.辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600；3.辽宁省组分中药工程技术研究中心，辽宁 大连 116600）摘 要：目的：优选山楂叶黄酮类成分的最佳提取、纯化工艺。
方法：以总黄酮含量为指标，采用单因素考察及正交实验设计方法，确立山楂叶黄酮类成分最佳提取工艺；采用大孔吸附树脂技术，静、动态吸附与解吸试验，优选黄酮类成分最佳纯化工艺。
结果：优选的提取工艺为10倍量50%乙醇回流提取3次，每次2 h；纯化工艺为0.5 g/mL 浓度的药液，按2.4 g（药材）/10 mL 树脂的比例通过HPD 600型号树脂，以7 BV 水冲洗杂质，用6 BV 的50%乙醇溶液洗脱，洗脱流速2 BV/h，收集洗脱液得总黄酮；山楂叶提取液总黄酮含量为8.74%，纯化后总黄酮含量为85.7%。
结论：山楂叶黄酮类成分经本工艺提取、纯化后纯度提高近10倍，为其工业化生产提供参考。
关键词：山楂叶；黄酮类成分；提取；纯化中图分类号：R284.2 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2014) 06- 0070- 03收稿日期：2013-12-15作者简介：孙君凯（1972-），男，辽宁抚顺人，主管药师，学士，研究方向：药物分析。
通讯作者：孟宪生（1964-），男，辽宁沈阳人，教授，博士研究生导师，博士，研究方向：现代中药相关领域研究。
Study on Extraction and Purification of Hawthorn Leaf FlavonoidsSUN Junkai 1，WANG Shuai 2，3，BAO Yongrui 2，3，MENG Xiansheng 2，3（1.Fushun Institute for Drug Control，Fushun 113006，Liaoning，China；2.College of Pharmacy，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，Liaoning，China；3.Liaoning Province Multi-Component Chinese Medicine Engineering Technology Research Center，Dalian 116600，Liaoning，China）Abstract：Objective ：To study the optimal extraction process and purification of hawthorn leaf flavonoids. Methods ：Taking the content of general flavonoids asguideline as the index, the preparation technology of hawthorn leaf flavonoids was optimized by using single-factor test and orthogonal test. By using static adsorption，dynamic adsorption and deabsorption of macroporous resin and the purification process were optimized. Results ：The results indicated that the optimal process was to extract 10 times 50% ethanol, reflux 3 times, 2 hours for every time. The optimal purification method was to adopt concentration of 0.5 g/mL, herbs and resin ratio 2.4:10（2.4 g herbs:10 mL wet resin），washing the resin with 7BV water to remove impurities，eluting with 6 BV 50% ethanol (elute rate 2 BV/h) through HPD600 macroporous resin, finally obtaining total flavonoids enrichment. The content of total flavonoids content was determined 8.74% in the hawthorn leaf extracts and 85.7% in the purified extracts. Conclusion ：The purity of hawthorn leaf flavonoids rises by about ten times through this methods of extraction and purification，providing references for industrial production.Key words：hawthorn leaf; flavonoids; extraction; purification DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2014.06.02716卷 辽宁中医药大学学报 10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，再放置5 min，加4%氢氧化钠溶液4 mL，各加60%乙醇定容至10 mL，放置20 min，在波长510 nm处测定各试管中溶液的吸光度[5]。
以浓度（C）为横坐标（X），吸光度（A）为纵坐标（Y），得回归方程：Y = 1.8891X+ 0.0187（r=0.9996，n=6）。
芦丁标准品在1.00~4.00 mg范围内线性关系良好。
2.3 山楂叶黄酮类成分提取溶剂浓度的选择称取干燥的山楂叶粗粉6份，每份10 g，分别加水或不同浓度（30%、40%、50%、60%、70%、80%）的乙醇溶液50 mL，加热回流提取2次，每次2 h，合并提取液，滤过，将滤液转移至100 mL量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，测得含量分别为1.35%、4.02%、6.18%、7.22%、7.30%、7.44%。
发现50％以上的乙醇对山楂叶总黄酮的提取效果基本一致，为节省乙醇使用量，选择50％乙醇作为提取溶剂。
2.4 山楂叶黄酮类成分提取正交设计经预实验及相关文献调研，确定影响提取效果的主要因素有溶剂用量、提取时间、提取次数3个因素，对主要影响因素各取3个水平，进行 L9（34）正交试验[6]，因素水平安排见表1。
表1 因素水平表水平因 素A溶剂用量（倍）B提取时间（h）C提取次数（次）1 6112 8 1.5231023根据确定的因素水平表，称取9份银杏叶粗粉，每份10 g，按L9（34）正交试验设计表进行平行试验，合并提取液，放凉，过滤，适当浓缩，再将浓缩液转移至500 mL量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，测定山楂叶黄酮含量，结果见表2、表3。
表2 L9（34）正交试验设计结果序号A B C D（误差）总黄酮含量（％）11111 6.2721222 6.4431333 6.7342123 5.94522317.3262312 6.1273132 6.5683213 6.01933217.21均值1 6.480 6.257 6.133 6.933均值2 6.460 6.590 6.530 6.373均值3 6.593 6.687 6.870 6.227极差0.1330.4300.7370.706表3 方差分析表因素偏差平方和自由度F比F临界值显著性A0.0312 1.00019.000B0.3052 9.83919.000C0.816226.32319.000*D误差0.0302注：*P<0.05。
综合评价提取条件对山楂叶总黄酮含量的影响，以提取次数影响最大，有显著性差异，但考虑到实际生产的需要，提取次数最多为3次，故不再对其进行进一步考察，确定提取次数为3次。
优选的最佳工艺为A3B3C3，即加入10倍量50%乙醇回流提取2 h，提取3次。
2.5 不同型号树脂对山楂叶黄酮类成分的静态吸附与解吸试验[7]称取山楂叶适量，按最佳提取工艺提取，回收乙醇，配制成0.5 g/mL（生药量）的浓缩液作为上样溶液。
精密称取处理好的树脂约5 g，置100 mL 烧杯中，精密加入上样溶液30 mL，每隔10 min振摇20 s，持续2 h，静置24 h后，使其达到饱和吸附，吸取上清液适量，测定总黄酮含量。