HPLC法检测功能红曲中的洛伐他汀
合集下载
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
收稿日期 :2000 - 01 - 08
2000 年 第 2 期 王春娜 : HPL C 法检测功能红曲中的洛伐他汀
49
红曲在我国的应用源远流长 ,在发酵食品 、食品色素 、中药等领域有着广泛的应用[1 ] . 近年来红曲霉的次级代谢物成为研究热点 ,日本学者远藤章根据李时珍“活血化瘀”的启示 , 从红曲中分离出优良的降血脂药物洛伐他汀 (Lovastatin) [2 ] . 洛伐他汀是 3 - 羟基 - 3 - 甲基 戊二酰辅酶 A ( HM G - CoA) 还原酶的抑制剂 ,HM G - CoA 还原酶是胆固醇生物合成的关键 酶 ,因此 ,洛伐他汀作为降血脂药物于 1987 年被批准上市后 ,很快得到了广泛应用[3 ] . 至今 , 功能红曲的开发研究方兴未艾. 一般红曲降血脂功效甚微 ,这是因为一般红曲中没有降血脂 的有效成分洛伐他汀. 对功能红曲中主要的降血脂成分洛伐他汀进行快速准确的测定 ,对优 化生产工艺 ,控制产品质量 ,具有极其重要的意义.
1 仪器及试剂
111 仪 器 L C - 3A 高效液相色谱仪 ( Shimadzu) , SPD - 1 紫外可见分光检测器 ,100μl 进样器.
112 试 剂 洛伐他汀对照品 ,华北制药厂. 甲醇 ,色谱纯 ;其他试剂均为分析纯. 功能红曲样品由浙
江工业大学提供.
2 方法与结果
211 检测波长的选择 紫外吸收光谱测定结果表明 , 洛伐他汀在 229 、237 、246nm 处 有 3 个 特 征 峰 , 由 于
HPL C 法检测功能红曲中的洛伐他汀
王春娜
(北京农学院基础科学系 ,北京 102206)
摘 要 采用高效液相色谱法 ( HPL C) ,选用 Spherisorb ODS 柱 ,以甲醇2011 %磷酸 (75∶ 25) 分离测定功能红曲中的洛伐他汀 ,检测波长 237nm. 该方法具有良好的线性关系和分 离度 ,重现性好 ,平均回收率为 100143 % ,RSD 为 1182 %. 本文对功能红曲样品进行测定 , 最高洛伐他汀含量为 238121μg/ g. 此法快速 、准确 ,可作为此类产品质量控制方法. 关键词 高效液相色谱 ( HPL C) ,功能红曲 ,洛伐他汀 中图分类号 :O65717 + 2 文献标识码 :A
提取液蒸发至干 ,用 5ml 甲醇复溶 ,待分析用. 对照品溶液 精密称取洛伐他汀标样 10mg ,溶于 50ml 甲醇中 ,得到 200mg/ L 的标准
溶液. 214 标准曲线的绘制
把对照品溶液分别稀释至 100 、50 、25 、1215 、6125mg/ L1 分别取 20ug 进样 1 实验表明 Lovastatin 含量在 6125～100mg/ L 范围内 ,其进样量与色谱峰面积呈线性关系 ,得到直线回 归方程 y = 3 ×10 - 5x - 018541 ,相关系数 R = 019992 ,其中 x 为峰面积 ,y 为样品量. 215 重复性测定
averagerecoveryraterelativestandarddeviationexperimentshowshehighestcontentunc2tionalredkojiapproachhascharacteristicswhichcanservehequalitcontrolmethodhesimilarproductkeywordshigh2performanceliquidchromatographyunctionalredkojilovastatin红曲在我国的应用源远流长在发酵食品食品色素中药等领域有着广泛的应用近年来红曲霉的次级代谢物成为研究热点日本学者远藤章根据李时珍活血化瘀的启示从红曲中分离出优良的降血脂药物洛伐他汀lovastatin甲基戊二酰辅酶ahmgcoa还原酶的抑制剂hmgcoa还原酶是胆固醇生物合成的关键酶因此洛伐他汀作为降血脂药物于1987年被批准上市后很快得到了广泛应用至今功能红曲的开发研究方兴未艾
1979 , 32 (8) ,852～854 [ 3 ]肖国胜等. 洛伐他汀治疗高胆固醇血症的有效性和无害性. 新乡医学院学报 ,1998 ,15 (4) :26 [ 4 ]吴 禾等. 高效液相色谱法测定仙茅中仙茅苷的含量. 药物分析杂志 ,1999 ,12 (2) :105～107
237nm 处的吸收峰最明显 ,因此检测波长选择 237nm ,见图 1.
图 1 洛伐他汀的紫外光谱图 图 2 标样的色谱图
212 色谱分离条件及结果 Sp herisorb ODS 柱 (416mm ×150mm) ,粒径 5μm ,流动相为甲醇 :011 %磷酸 (75∶25) ,流
第 15 卷 第 2 期 2000 年 4 月
北 京 农 学 院 学 报 J OU RNAL OF B EIJ IN G A GRICUL TU RAL COLL EGE
文章编号 :1002 - 3186 (2000) 02 - 0048 - 04
Vol. 15 No. 2 Ap r12000
50 北 京 农 学 院 学 报 第 15 卷
速 015ml/ min , 检测灵敏度 0101 AU FS ,柱温为室温 ,进样量 20μl. 标样和样品的色谱见图 2 和图 3.
图 3 样品的色谱图
213 供试品溶液及对照品溶液制备 供试品溶液 精密称取红曲样品 5g ,用 100ml 乙酸乙酯在索式提取器上回流提取 1h ,
参考文献
[ 1 ]傅金泉. 中国红曲及其实用技术. 北京 :中国轻工业出版社 ,1997 [ 2 ]A. Endo. Monacolin # K ,a new hypocholesterolemic agent produced by a Monascus species. J . Antibiotics ,
3 讨 论
1) 根据反复实验 ,红曲粉采用索氏提取器提取 1h 可将洛伐他汀提取完全. 2) 采用生物测定法测定一个样品 ,首先要将检测菌 (掷孢酵母) 预培养 ,然后将样品皂化 后 ,用纸片浸泡 ;纸片阴干后放在培养皿上 ,经过二天左右的时间培养后 ,测量抑菌圈的直 径 ,与标样的抑菌圈相比后计算效价. 这种方法耗时长 、误差因素多. 薄层层析法测定样品 时 ,从点样 、展层到扫描计算 ,所需时间至少两个半小时 ,而且精确度稍差. 而采用 HPL C 法 则具有快速 、准确的优点 ,可作为此类产品质量控制的方法[4 ] . 3) 结果表明本文所列流动相具有分离效果好 ,简便 、快速 、准确 、经济的优点. 4) 并非所有的红曲产品都含有洛伐他汀 ,且不同来源功能红曲的洛伐他汀产量差别较 大.
任取一样品 ,重复进样 5 次 ,结果如下表所示. 由表可知本实验具有良好的重现性 ,色谱 条件合理.
表 1 重复测定结果
测定结果 (mg/ L)
平均值
偏差
变异系数 %
12123 12124 12126 12141 12136
12130
010718
015837
216 回收率测定 采用加样回收法 ,1ml 样品溶液中加入 1ml 不同标准浓度的洛伐他汀溶液 ,分别取 20μl
Determination of Lovastatin in Functional Red Koji Using HPLC Method Wang Chunna
(Beijing Agricult ural College ,Beijing 102206)
Abstract The paper describes t he determination of Lovastatin in f unctional red koji by means of HPL C(high2performance liquid chromatogup hic) . Lovastatin is separated on t he Sp herisorb ODS column using met hanol2011 % p hosp horic acid (75∶25) as mobile p hase. Detection wave2 lengt h is 237 nm. The met hod demonst rates good linear relationship , separation drgree and re2 producibility . The average recovery rate of Lovastatin is 100143 % and RSD ( Relative Standard Deviation) is 1182 %. The experiment shows t hat t he highest content of Lovastatin in f unc2 tional red koji is 238121μg/ g. The approach has characteristics of quickness and accuracy , which can serve as t he quality cont rol met hod of t he similar product s. Key words High2performance liquid chromatograp hy , f unctional red koji , lovastatin
Байду номын сангаас
从表中可见 ,不同功能红曲中洛伐他汀的含量差别较大 ,最高的含量为 238121 (μg/ g) . 同时对市售的用作色素的红曲米进行测定均未检测出洛伐他汀. 因为人体血液中含有洛伐 他汀在 1～5μg/ L 时会产生降低胆固醇功效 ,成年人血液量为 20L ,所需洛伐他汀的有效剂 量为 100μg ,服用 015g 功能红曲即可满足要求. 因此以富含洛伐他汀的功能红曲开发降血 脂保健食品是可行的.
进样 ,测定结果见表 2.
2000 年 第 2 期 王春娜 : HPL C 法检测功能红曲中的洛伐他汀
加入量 (μg) 3163 6125 12150 25100
检出量 (μg) 3162 6111 12179 25148
表 2 回收率试验
回收率 % 99172 97176 102132 101192
平均回收率 % 100143
51
变异系数 % 1182
217 功能红曲的检测结果
表 3 功能红曲检测结果
功能红曲编号 ZH - 1 ZH - 2 ZH - 3
产量 (μg/ g) 57191 15168 24130
功能红曲编号 ZH - 4 ZH - 5 ZH - 6
产量 (μg/ g) 238121 9125 20108
2000 年 第 2 期 王春娜 : HPL C 法检测功能红曲中的洛伐他汀
49
红曲在我国的应用源远流长 ,在发酵食品 、食品色素 、中药等领域有着广泛的应用[1 ] . 近年来红曲霉的次级代谢物成为研究热点 ,日本学者远藤章根据李时珍“活血化瘀”的启示 , 从红曲中分离出优良的降血脂药物洛伐他汀 (Lovastatin) [2 ] . 洛伐他汀是 3 - 羟基 - 3 - 甲基 戊二酰辅酶 A ( HM G - CoA) 还原酶的抑制剂 ,HM G - CoA 还原酶是胆固醇生物合成的关键 酶 ,因此 ,洛伐他汀作为降血脂药物于 1987 年被批准上市后 ,很快得到了广泛应用[3 ] . 至今 , 功能红曲的开发研究方兴未艾. 一般红曲降血脂功效甚微 ,这是因为一般红曲中没有降血脂 的有效成分洛伐他汀. 对功能红曲中主要的降血脂成分洛伐他汀进行快速准确的测定 ,对优 化生产工艺 ,控制产品质量 ,具有极其重要的意义.
1 仪器及试剂
111 仪 器 L C - 3A 高效液相色谱仪 ( Shimadzu) , SPD - 1 紫外可见分光检测器 ,100μl 进样器.
112 试 剂 洛伐他汀对照品 ,华北制药厂. 甲醇 ,色谱纯 ;其他试剂均为分析纯. 功能红曲样品由浙
江工业大学提供.
2 方法与结果
211 检测波长的选择 紫外吸收光谱测定结果表明 , 洛伐他汀在 229 、237 、246nm 处 有 3 个 特 征 峰 , 由 于
HPL C 法检测功能红曲中的洛伐他汀
王春娜
(北京农学院基础科学系 ,北京 102206)
摘 要 采用高效液相色谱法 ( HPL C) ,选用 Spherisorb ODS 柱 ,以甲醇2011 %磷酸 (75∶ 25) 分离测定功能红曲中的洛伐他汀 ,检测波长 237nm. 该方法具有良好的线性关系和分 离度 ,重现性好 ,平均回收率为 100143 % ,RSD 为 1182 %. 本文对功能红曲样品进行测定 , 最高洛伐他汀含量为 238121μg/ g. 此法快速 、准确 ,可作为此类产品质量控制方法. 关键词 高效液相色谱 ( HPL C) ,功能红曲 ,洛伐他汀 中图分类号 :O65717 + 2 文献标识码 :A
提取液蒸发至干 ,用 5ml 甲醇复溶 ,待分析用. 对照品溶液 精密称取洛伐他汀标样 10mg ,溶于 50ml 甲醇中 ,得到 200mg/ L 的标准
溶液. 214 标准曲线的绘制
把对照品溶液分别稀释至 100 、50 、25 、1215 、6125mg/ L1 分别取 20ug 进样 1 实验表明 Lovastatin 含量在 6125～100mg/ L 范围内 ,其进样量与色谱峰面积呈线性关系 ,得到直线回 归方程 y = 3 ×10 - 5x - 018541 ,相关系数 R = 019992 ,其中 x 为峰面积 ,y 为样品量. 215 重复性测定
averagerecoveryraterelativestandarddeviationexperimentshowshehighestcontentunc2tionalredkojiapproachhascharacteristicswhichcanservehequalitcontrolmethodhesimilarproductkeywordshigh2performanceliquidchromatographyunctionalredkojilovastatin红曲在我国的应用源远流长在发酵食品食品色素中药等领域有着广泛的应用近年来红曲霉的次级代谢物成为研究热点日本学者远藤章根据李时珍活血化瘀的启示从红曲中分离出优良的降血脂药物洛伐他汀lovastatin甲基戊二酰辅酶ahmgcoa还原酶的抑制剂hmgcoa还原酶是胆固醇生物合成的关键酶因此洛伐他汀作为降血脂药物于1987年被批准上市后很快得到了广泛应用至今功能红曲的开发研究方兴未艾
1979 , 32 (8) ,852～854 [ 3 ]肖国胜等. 洛伐他汀治疗高胆固醇血症的有效性和无害性. 新乡医学院学报 ,1998 ,15 (4) :26 [ 4 ]吴 禾等. 高效液相色谱法测定仙茅中仙茅苷的含量. 药物分析杂志 ,1999 ,12 (2) :105～107
237nm 处的吸收峰最明显 ,因此检测波长选择 237nm ,见图 1.
图 1 洛伐他汀的紫外光谱图 图 2 标样的色谱图
212 色谱分离条件及结果 Sp herisorb ODS 柱 (416mm ×150mm) ,粒径 5μm ,流动相为甲醇 :011 %磷酸 (75∶25) ,流
第 15 卷 第 2 期 2000 年 4 月
北 京 农 学 院 学 报 J OU RNAL OF B EIJ IN G A GRICUL TU RAL COLL EGE
文章编号 :1002 - 3186 (2000) 02 - 0048 - 04
Vol. 15 No. 2 Ap r12000
50 北 京 农 学 院 学 报 第 15 卷
速 015ml/ min , 检测灵敏度 0101 AU FS ,柱温为室温 ,进样量 20μl. 标样和样品的色谱见图 2 和图 3.
图 3 样品的色谱图
213 供试品溶液及对照品溶液制备 供试品溶液 精密称取红曲样品 5g ,用 100ml 乙酸乙酯在索式提取器上回流提取 1h ,
参考文献
[ 1 ]傅金泉. 中国红曲及其实用技术. 北京 :中国轻工业出版社 ,1997 [ 2 ]A. Endo. Monacolin # K ,a new hypocholesterolemic agent produced by a Monascus species. J . Antibiotics ,
3 讨 论
1) 根据反复实验 ,红曲粉采用索氏提取器提取 1h 可将洛伐他汀提取完全. 2) 采用生物测定法测定一个样品 ,首先要将检测菌 (掷孢酵母) 预培养 ,然后将样品皂化 后 ,用纸片浸泡 ;纸片阴干后放在培养皿上 ,经过二天左右的时间培养后 ,测量抑菌圈的直 径 ,与标样的抑菌圈相比后计算效价. 这种方法耗时长 、误差因素多. 薄层层析法测定样品 时 ,从点样 、展层到扫描计算 ,所需时间至少两个半小时 ,而且精确度稍差. 而采用 HPL C 法 则具有快速 、准确的优点 ,可作为此类产品质量控制的方法[4 ] . 3) 结果表明本文所列流动相具有分离效果好 ,简便 、快速 、准确 、经济的优点. 4) 并非所有的红曲产品都含有洛伐他汀 ,且不同来源功能红曲的洛伐他汀产量差别较 大.
任取一样品 ,重复进样 5 次 ,结果如下表所示. 由表可知本实验具有良好的重现性 ,色谱 条件合理.
表 1 重复测定结果
测定结果 (mg/ L)
平均值
偏差
变异系数 %
12123 12124 12126 12141 12136
12130
010718
015837
216 回收率测定 采用加样回收法 ,1ml 样品溶液中加入 1ml 不同标准浓度的洛伐他汀溶液 ,分别取 20μl
Determination of Lovastatin in Functional Red Koji Using HPLC Method Wang Chunna
(Beijing Agricult ural College ,Beijing 102206)
Abstract The paper describes t he determination of Lovastatin in f unctional red koji by means of HPL C(high2performance liquid chromatogup hic) . Lovastatin is separated on t he Sp herisorb ODS column using met hanol2011 % p hosp horic acid (75∶25) as mobile p hase. Detection wave2 lengt h is 237 nm. The met hod demonst rates good linear relationship , separation drgree and re2 producibility . The average recovery rate of Lovastatin is 100143 % and RSD ( Relative Standard Deviation) is 1182 %. The experiment shows t hat t he highest content of Lovastatin in f unc2 tional red koji is 238121μg/ g. The approach has characteristics of quickness and accuracy , which can serve as t he quality cont rol met hod of t he similar product s. Key words High2performance liquid chromatograp hy , f unctional red koji , lovastatin
Байду номын сангаас
从表中可见 ,不同功能红曲中洛伐他汀的含量差别较大 ,最高的含量为 238121 (μg/ g) . 同时对市售的用作色素的红曲米进行测定均未检测出洛伐他汀. 因为人体血液中含有洛伐 他汀在 1～5μg/ L 时会产生降低胆固醇功效 ,成年人血液量为 20L ,所需洛伐他汀的有效剂 量为 100μg ,服用 015g 功能红曲即可满足要求. 因此以富含洛伐他汀的功能红曲开发降血 脂保健食品是可行的.
进样 ,测定结果见表 2.
2000 年 第 2 期 王春娜 : HPL C 法检测功能红曲中的洛伐他汀
加入量 (μg) 3163 6125 12150 25100
检出量 (μg) 3162 6111 12179 25148
表 2 回收率试验
回收率 % 99172 97176 102132 101192
平均回收率 % 100143
51
变异系数 % 1182
217 功能红曲的检测结果
表 3 功能红曲检测结果
功能红曲编号 ZH - 1 ZH - 2 ZH - 3
产量 (μg/ g) 57191 15168 24130
功能红曲编号 ZH - 4 ZH - 5 ZH - 6
产量 (μg/ g) 238121 9125 20108