气相色谱法同时测定酱腌菜中山梨酸、脱氢乙酸、苯甲酸的含量

气相色谱法同时测定酱腌菜中山梨酸、脱氢乙酸、苯甲酸的含
量
刘炜;杨晓凤;雷绍荣
【摘要】A method based on capillary gas chromatography was developed to detect sorbic acid, dehydroacetic acid and benzoic acid in pickled vegetables. After being acidified, samples were extracted with ether, separated on a capillary column(HP-FFAP, 30.00 m×0.32 mm×0.25μm)and detected with a flame ionization detector(FID). The result showed that the linear range was 5.0-400.0 mg/L and the linear correlation coefficients of sorbic acid, dehydroacetic acid and benzoic acid were greater than 0.999. The recoveries ranged from 87.6%to 97.7%with RSD(n=5)of 0.8%-3.7%. This method was stable, rapid and repeatable to detect the sorbic acid, dehydroacetic acid and benzoic acid in pickled vegetables.%建立了毛细管柱气相色谱法同时测定酱腌菜中山梨酸、脱氢乙酸、苯甲酸的方法。

样品经盐酸酸化后，乙醚提取，经HP-FFAP（30.00 m×0.32 mm×0.25μm）毛细管柱分离后，
采用火焰离子化检测器（FID）检测酱腌菜样品中山梨酸、脱氢乙酸、苯甲酸的含量。

结果表明，山梨酸、脱氢乙酸、苯甲酸含量分别在5.0～400 mg/L线性良好（r>0.999），平均回收率为87.6%～97.7%，RSD（n=5）在0.8%～3.7%。

该方法快速、准确，适用于同时测定酱腌菜样品中山梨酸、脱氢乙酸、苯甲酸的含量。

【期刊名称】《山西农业科学》
【年(卷),期】2016(044)010
【总页数】4页(P1484-1486,1496)
【关键词】山梨酸;脱氢乙酸;苯甲酸;气相色谱;酱腌菜
【作者】刘炜;杨晓凤;雷绍荣
【作者单位】四川省农业科学院分析测试中心，四川成都610066;四川省农业科学院分析测试中心，四川成都610066;四川省农业科学院分析测试中心，四川成都610066
【正文语种】中文
【中图分类】TS255.53
苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸是我国目前常用的食品防腐剂[1]。

食品防腐剂可抑制食品中微生物的繁殖、杀死食品中含有的有害微生物，以此来防止食品变质的化学过程，同时还不影响食品的味道[2]。

据报道，过多地摄入这些防腐剂会对人体造成伤害，如导致人体酸中毒、抽搐和过度深呼吸[3]，我国对食品防腐剂在食品中的使用都有严格的规定[4]。

因此，对酱腌菜中常用的防腐剂山梨酸、脱氢乙酸、苯甲酸的含量进行检测非常重要。

目前，检测山梨酸、脱氢乙酸、苯甲酸的方法有气相色谱法[5-8]、气相色谱-质谱法[9]、液相色谱法[10-13]等；国标方法主要有《GB/T5009.29—2003食品中山梨酸、苯甲酸的测定》和《GB/T 5009.121—2003食品中脱氢乙酸的测定》[14-15]。

在气相色谱法中，3种防腐剂的前处理方法不尽相同，给日常的检测工作无疑增加了难度及强度。

因此，有必要建立一种同时测定山梨酸、脱氢乙酸、苯甲酸的检测方法。

本研究建立了一种同时测定酱腌菜中山梨酸、脱氢乙酸、苯甲酸的检测方法，样品经盐酸酸化、乙醚提取，用气相色谱火焰离子化检测器分析，该法操作简单快速，
测定结果满意，适合于同时测定酱腌菜样品中3种防腐剂的含量。

1.1 主要仪器与试剂
美国Agi7890A气相色谱仪，配有自动进样品、FID检测器；色谱柱为Agilent HP-FFAP石英毛细管柱（30.00 m×0.32 mm×0.25 μm）。

丙酮为色谱纯；乙醚、无水硫酸钠、氯化钠均为分析纯。

山梨酸、脱氢乙酸、苯甲酸标准品均购自Dr. Ehrenstorfer公司。

1.2 色谱条件
色谱柱：Agilent HP-FFAP石英毛细管柱；载气为氮气（纯度≥99.999%）；恒流模式，流量2 mL/min；尾吹气为氮气，流量为28 mL/min；检测器温度为250℃，空气流量400mL/min，氢气流量30mL/min；进样口温度为200℃，分流进样，分流比为10∶1，进样量为1 μL；柱温采用升温程序：初始温度150℃，以30℃/min速率升至220℃，保持3 min；后运行：220℃保持5 min。

1.3 试验方法
1.3.1 标准溶液配制标准储备液配制：分别称取山梨酸标准品、脱氢乙酸标准品、
苯甲酸标准品各50.0 mg，分别置于3个50 mL容量瓶中，均用丙酮定容至刻度，制成浓度为1 000 mg/L的山梨酸、脱氢乙酸、苯甲酸标准储备液，保存于4℃下。

称取山梨酸、脱氢乙酸、苯甲酸标准品50.0 mg置于50 mL容量瓶中，用丙酮溶解并定容至刻度，制成浓度均为1 000 mg/L的混合标准储备液，保存于4℃下。

使用前，用丙酮稀释成不同浓度的标准使用液。

标准工作液系列的配制：丙酮稀释混合标准溶液得到5.0，10.0，50.0，100.0，200.0，400.0 mg/L的混合标准溶液。

1.3.2 样品的前处理称取
2.50 g酱腌菜样品于50 mL具塞比色管中，加入6
mol/L盐酸1 mL后，分别用25 mL乙醚提取2次，每次振摇2 min后静止，将上层乙醚提取液转移至另一支具塞比色管，合并乙醚提取液。

用40 g/L酸性氯化
钠溶液5 mL洗涤乙醚提取液1次，静止2 min，弃去下层溶液。

加入无水硫酸钠，振摇1 min，将乙醚提取液于35℃旋转蒸发浓缩至近干，5 mL丙酮溶解定容后过0.45 μm滤膜备用。

2.1 色谱柱的选择
考察了山梨酸、脱氢乙酸及苯甲酸在Agilent HP-5（30.00 m×0.32 mm×0.25
μm），Agilent DB-17（30.00 m×0.32 mm×0.25 μm），Agilent HP-FFAP （30.00 m×0.32 mm×0.25 μm）3种不同极性毛细管柱相同的程序升温条件
（初始温度为60℃，以35℃/min速率升至220℃，保持10 min）下的色谱保留行为，结果如图1所示。

综合山梨酸、脱氢乙酸、苯甲酸色谱峰的对称性及峰高
响应情况，结果发现，极性FFAP柱分析山梨酸、脱氢乙酸、苯甲酸时峰形对称，峰高较高，因此，本试验选择HP-FFAP石英毛细管柱。

2.2 色谱条件的优化及其色谱图分析
柱温对化合物的出峰时间和色谱峰形有较大的影响。

在1.2色谱条件下，3种化合物色谱峰形较好，出峰时间短，实现了基线分离，且样品中无干扰杂质峰，表明试验条件良好。

图2为1.2色谱条件下山梨酸、脱氢乙酸、苯甲酸标准品、酱腌菜空白样品及酱腌菜空白加标样品的色谱图。

由图2可知，山梨酸保留时间为2.589 min，脱氢乙酸的保留时间为2.894 min，苯甲酸的保留时间为3.634 min。

2.3 前处理方法的确定
一般生产时防腐剂添加的是山梨酸钾或苯甲酸钠或脱氢乙酸钠，加盐酸酸化后，会形成山梨酸、脱氢乙酸及苯甲酸，因此，极性大大减弱，这样就较容易被弱极性的乙醚所提取，加入酸性氯化钠后，由于盐析作用，会使乙醚层中的微量水尽可能释放出来，促进分层。

另外，试验探讨了乙醚用量对山梨酸、脱氢乙酸及苯甲酸萃取率的影响。

用25
mL乙醚萃取，结果发现，用25 mL乙醚萃取一次山梨酸、脱氢乙酸及苯甲酸的
萃取率大于90%；经过2次25 mL乙醚萃取，山梨酸、脱氢乙酸、苯甲酸能完全萃取。

因此，本试验选择的前处理方法确定为1.3.2分析步骤的前处理方法。

2.4 标准曲线和检出限分析
在本试验条件下，采集不同浓度标准品信号绘制其标准曲线，结果表明，3种防腐剂在质量浓度为5.0～400.0 mg/L时，质量浓度（C）与其峰面积（A）呈良好的线性关系，相关系数均大于0.999。

以S/N＝3计，检出限在0.12～0.21 mg/kg。

3种防腐剂的相关系数和检出限如表1所示。

2.5 方法的准确度和精密度分析
在不含有山梨酸、脱氢乙酸、苯甲酸的酱腌菜样品中分别添加混合标准溶液，使添加质量分数分别为5.0，50.0，200 mg/kg，每个质量分数水平重复5次，按照1.3.2分析步骤处理样品，进行精密度与准确度的测定，3种添加质量分数的方法
回收率及精密度列于表2。

从表2可以看出，该方法的回收率在87.6%～97.7%，RSD在0.8%～3.7%，表明该方法结果准确可靠，重现性良好。

在四川省农业科
学院分析测试中心2015年1月至2016年4月间，有179个酱腌菜样品使用本
研究的方法同时高效检测山梨酸、苯甲酸、脱氢乙酸项目，共有28个样品有检出，其中，23个样品中仅山梨酸检出未超标，3个样品中苯甲酸检出未超标，2个样
品中脱氢乙酸检出未超标。

本研究方法对3种防腐剂山梨酸、脱氢乙酸、苯甲酸的色谱分离效果良好、检出
限低、精密度高、标准曲线范围广、加标回收率高，符合色谱检测的要求。

而且操作简单、分析效率高，同时适合进行大批量样品的检测，能满足各级检测机构的实际检测工作需要。

【相关文献】
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