盐酸多西环素对人工感染猪传染性胸膜肺炎的临床试验效果的研究

2019年第11期（总第216期）
盐酸多西环素对人工感染猪传染性胸膜肺炎
的临床试验效果的研究
王德功，任丽花，刘冬，李卓伟，张沛，吕让，杨国辉！
（河北远征药业有限公司，河北省兽药工程技术研究中心，河北石家庄050041）中图分类号：S859.79'6文献标识码:B文章编号：1003-8655（2019）11-0007-04
摘要:本试验通过应用盐酸多西环素颗粒治疗人工诱发猪传染性胸膜肺炎,观察该药的治疗效果,为其临床效果和临床应用提供科学依据#
关键词：猪传染性胸膜肺炎；临床试验;多西环素；
1前言
猪传染性胸膜肺炎（porcine infectious pleuropneumonia,PCP）是一种具有高传染性的呼吸道疾病,以急性岀血性和慢性纤维素坏死为特征。

该病于1957年首次报道，在世界各国家广泛流行，是养猪业公认的世界性的细菌性疾病,同时该病与猪丹毒、猪肺疫等病原易发生混合感染,致使该病一旦发生,发病率及死亡率明显升高，给养殖业带来重大损失。

2试验材料与方法
2.1试验动物、药品及菌株
2月龄、体重10kg左右的二元杂（长白公猪x土母猪）仔猪54头（雌雄各半）,购自四川省名山县兴农养猪场。

猪群健康,未曾接种猪胸膜肺炎放线杆菌疫苗，也无传染性胸膜肺炎感染史。

猪群购入实验动物房圈舍适应性饲养7日后由河北正大鸿福动物药业有限公司生产。

规格：
5kg/袋；批号：090623。

胸膜肺炎放线杆菌（App,编号为259）,血清
I型，购自中国兽医药品监察所。

2.2试验方法
2.2.1疾病模型的建立菌株启用与菌悬液制备：
冻干菌种用适量无菌生理盐水溶解、混匀,恒温匚
试箱接种于TSA（胰胨大豆琼脂）培养基,置于5%验
CO2,37V恒温箱中培养24h,对菌落进行染色观研察，并进行胸膜肺炎放线杆菌16SrRNA基因$ PCR鉴定。

挑取3-5个鉴定确认并纯化的App单菌落，
于TSB（胰胨大豆肉汤）培养基上接种,在37\恒
温条件下培养12〜16h；用平版计数法得到每1ml
原菌液的菌落形成单位（CF'）。

用无菌生理盐水稀
释原菌液后进行染毒建立疾病模型。

开展试验。

受试药物：10%盐酸多西环素预混剂,（以多西环素计）,由河北远征药业有限公司提供。

规格：5kg/袋；批号：090805#
对照药物：3%土霉素预混剂（以土霉素计）,项目基金：国家重点研发计划项目，新型畜禽药创制与产业化（2017YFD0501400）
作者简介：王德功（1981-）,河北石家庄人，工程师，主要从事兽药研发与动物临床试验。

*通讯作者:杨国辉（1979-）,河北石家庄人，兽医师，主要从事动物诊断、治疗、疫病防控等。

染毒途径与染毒量:参考文献并预试,确定3.5〜4.5x107CFU/ml的App菌液,按0.25m1/kg 体重的染毒量，采用一次性鼻腔喷雾法染毒,可获得症状明显、病变典型的放线杆菌胸膜肺炎疾病模型。

染毒:将新鲜制备并计数的App原菌液用无菌生理盐水稀释成3.5〜4.5x107CFU/ml的染毒菌液，按0.25m1/kg体重的染毒量给50头试验猪进行一次性鼻腔喷雾法染毒；另外4
头试验猪给
2019年第11期（总第216期）
予相同剂量的无菌生理盐水。

建立放线杆菌胸膜肺炎疾病模型。

222试验分组
试验研$
将染毒的50头试验猪随机分成5组，每组
10头。

其中I、II、III组为试验组，分别给予添加
125ppm、250ppm和500ppm（剂量以多西环素计）
盐酸多西环素预混剂的饲料;IV组为药物对照
组,给予添加500ppm土霉素的饲料;V组为感染
对照组，给予不含任何药物的饲料;4头未染毒
（给予无菌生理盐水）的试验猪作为健康对照,给
予不含任何药物的饲料。

2.2.3给药和饲养管理染毒6h后开始给药。

每
天饲喂2次（试验猪日粮用标准配制的仔猪全价
日粮）,每次添加饲料量以食后槽内有少量余料
为准，自由饮水。

连续饲喂7d,停药后观察7d。

整
个试验期间每日观察记录猪的临床表现;每日清
I扫圈舍,保持清洁干燥;每隔3d对圈舍及周围用
百毒杀喷雾消毒。

2.3试验评价指标
231临床症状观察记录染毒后24h、给药第
7d、停药后第7d各组病猪的临床症状,如食欲、
精神状态、呼吸道症状、体温、排泄物等。

根据相
对应指标标准对各病猪进行评分（0—正常状态,
1—轻度,2—中度,3—严重）,计算各组内病猪的
评分均值，比较组内和组间的差异显著性。

232X光诊断染毒后12h,各组随机选取1头
猪进行肺部X光检查并拍片。

233日增重及饲料转化率称量并记录用药前
（第0d）及停药后第7d各组试验猪的体重,以及
试验期间各组猪的耗料情况,计算各组猪的平均
日增重和饲料转化率,并进行统计学分析。

2.3.4病变观察与病原菌分离停药后第7d,各
试验组猪中随机选择5头剖检,观察胸腔脏器的
病变,按标准进行评分,得岀组内评分均值,比较
各组间的差异显著性。

同时采集肺及胸腔积液进
行病原菌检查。

胸腔脏器评分标准:①色泽正常,无明显的
眼观病变（0分）;②色泽基本正常,只有分散的、
小面积的紫红色区域（1分）;③有水肿、充血甚至
分散岀血,胸腔有少量的积液（2分）;④有大面积
的病灶，肺岀现实变甚至粘连;胸腔有大量积液
和纤维蛋白渗岀物（3分）。

2.4疗效判定标准
1）治愈：连续给药7d后,试验猪的食欲、精
神、呼吸、体温恢复正常（症状评分70）,体重明显
升高；剖检时胸腔脏器没有特异性的病变（评
分!1）；病料中无病原菌的检岀。

治愈率二组内治愈头数/组内给药头数9
100%
2）有效:连续给药7d后，试验猪的食欲、精
神、呼吸、体温基本恢复正常（症状评分!1分）,
体重有所升高；剖检时胸腔脏器病变的评分＜2
分;病料中无病原菌的检岀。

有效率7组内有效头数/组内给药猪头数x
100%
3）无效:连续给药7d后,试验猪的食欲、精
神、呼吸、体温症状未见好转甚至恶化或死亡（症
状评分＞1分）；剖检时胸腔脏器病变的评分"2
分;病料中有病原菌检岀。

3试验数据统计学处理
用SPSS分析软件进行统计分析，计量用土
SD表示,采用方差分析,其中死亡率、有效率、治
愈率等使用卡方检验分析。

4试验结果及分析
4.1疾病模型建立结果
4.1.1临床表现试验猪染毒前精神、食欲良好。

鼻腔喷雾给予胸膜肺炎放线杆菌培养液4h后,
陆续岀现短暂性呕吐、活动少、喜卧、呼吸急促、
直肠温度升高（0.5〜1.0D）等临床症状;染毒12h
后,50头给予胸膜肺炎放线杆菌培养液的猪只都
发病,表现为精神沉郁,摄食减少，呼吸困难,鼻
腔内有泡沫样血性或脓性鼻液，呼吸岀现啰音
、
2019年第11期（总第216期）
喉狭窄音，猪的体温大多升高1.0〜2.5（,部分猪等症状。

其中盐酸多西环素高剂量的作用效果最只发生腹泻症状。

攻毒后36〜4,h,感染对照组2显著;中、低剂量的作用效果也较好,与土霉素相当。

头猪死亡。

以相同方式给予无菌生理盐水的4头 4.2.2日增重及饲料转化率称量各组试验猪在
猪未发病。

4.1.2X光诊断染毒12h后,各试验组猪中随机选取1头检查肺部X光o检查结果，健康猪的心、肺视野都无异常；染毒猪的肺部都会岀现不同程度的炎症性病变。

4.1.3剖检与病原菌分离对死亡猪剖解时发现,胸腔内有大量的积液和纤维蛋白渗岀物，肺部充血和岀血严重,心包腔外附着有大量纤维蛋白渗岀物,腹腔脏器没有明显眼观变化。

无菌采集死亡猪的肺组织和胸腔积液用TSA培养基进行分离培养并镜检,可获得革兰氏阴性小球杆菌；PCR 检测分离菌株的16SrRNA基因，得到猪胸膜肺炎放线杆菌16S rRNA基因片段。

4.2药物疗效的结果
4.2.1临床症状改善试验过程中每日观察记录各组猪的临床症状,得岀染毒后24h#给药第7d、停药后第7d各组的症状评分均值，分析比较组内各时间点和组间各时间点症状评分之间的差异，结果见表1。

表1各组试验猪的症状评分结果
（n=10,其中V组给药7日、停药7日n=8）
组别攻毒后24h用药7日停用药7日
I(125) 6.40土 2.46%0.80土1.14a a0.20土0.42a a E(250) 5.80土 2.20a b0.40土0.84a a0.10土0.32a a I(500) 5.30土0.67叫0.20土0.63a a0.00土0.00a a M(土)7.20土 2.44@b0.90土1.37a a0.40土0.52a a V(阳)9.60土 2.50% 2.50土1.69b a 1.75土1.28b a 注:大写字母不同表示差异极显著（P<0.01）,小写字母不同表示差异显著（0.01<P<0.05）,字母相同表示差异不显著（P>0.05），下表同。

上述结果表明，连续7d混饲盐酸多西环素和土霉素，均可有效改善人工感染猪传染性胸膜肺炎的摄食减少、精神沉郁、体温升高、呼吸困难给药前（给药第0d）和停药后第7d的体重，记录
试验期间各组猪的耗料情况,计算岀平均日增重
和饲料转化率（料肉比），结果见表2O
表2试验期间各组猪的日增重及料肉比
（n=10,其中V组n=8）
组别日增重（kg）料肉比
I(125)0.32±0.10b 3.77±0.12ABb
11(250)0.42±0.10C 3.38±0.06Aa
111(500)0.45土0.04C 3.34±0.04Aa
IV(土)0.30土0.07b 3.84±0.12b
V(阳)0.19±0.06A7.05土0.34C
上述结果表明,感染胸膜肺炎放线杆菌的病
猪连续7d混饲盐酸多西环素和土霉素，均能提
高病猪的日增重和饲料转化率（料肉比）。

其中中、高剂量盐酸多西环素的效果为最佳,二者无试显著差异，均显著优于土霉素。

低剂量盐酸多西验环素的效果与土霉素接近。

研4.2.3病变愈合与病原菌消除停药后第7d,各$试验组猪中随机选择5头剖检,观察胸腔脏器病
变并按标准评分,得岀组内评分均值,比较各组
的差异显著性；同时采集各猪的肺组织及胸腔积
液进行病原菌检查。

结果见表3。

上述结果表明，病猪连续7d混饲盐酸多西
环素和土霉素,可有效清除感染猪体内胸膜肺炎
放线杆菌，并可促进病猪体内胸腔脏器病变的好
转和痊愈。

高、中、低剂量组的盐酸多西环素的上
述作用都比土霉素效果好,且高剂量盐酸多西环
素的效果略优于低、中剂量,但低、中剂量之间无
显著差异。

4.2.4有效率及治愈率综合停药7d后各组试
验猪的临床症状改善和恢复、日增重和饲料转化率、胸腔病变和病原菌检岀的情况,按标准进行
试验疗效判定,
可得到各试验组猪的有效率和治
2019年第11期(总第216期)
表3停药后第7d部分病猪胸腔脏器病变评分及病原菌检出情况(n=5)
组别
_一二部分病猪胸腔脏器病变评分
三四五M(x±SD)
病原菌检测
I(125)010100.40±0.55A0/5 "(250)010000.20±0.45A0/5 #(500)000000.00±0.00A0/5叭土)111000.60±0.55A0/5 V(阳)13212 1.80±0.84B3/5愈率，结果见表4。

表4停药7d后各试验组猪的有效率和治愈率
组别猪头数有效率(%)治愈率(%)
I(125)10100(10/10)b80(8/10)b
4(250)10100(10/10)b90(9/10)B
7(500)10100(10/10)b100(10/10)B
叭土)10100(10/10)b80(8/10)b
V(阳)1050(5/10)a20⑵10产
上述结果表明连续"混饲盐酸多西环素
试验研和土霉素,对感染猪传染性胸膜肺炎的病猪均有良好治疗效果。

其中盐酸多西环素的中%高剂量
$组的有效率均为100%，治愈率90%以上；低剂量盐酸多西环素和土霉素的有效率均为100%,治
愈率80%。

盐酸多西环素的中%高剂量组对猪传
染性胸膜肺炎的治疗效果相当,均优于盐酸多西
环素低剂量组和土霉素组。

5结论
该盐酸多西环素制剂预混剂对人工感染猪放线杆菌传染性胸膜肺炎有良好治疗效果。

低
(125ppm)、中(250ppm)、高(500ppm)剂量组均可
有效清除感染猪体内的胸膜肺炎放线杆菌,并可
促进病猪体内胸腔脏器病变的好转和痊愈,显著 改善病猪的临床症状,并能提高给药猪的日增重
和饲料转化率,因此,盐酸多西环素预混剂对猪
传染性胸膜肺炎具有治疗作用。

考虑到盐酸多西环素中(250pp=)、高(500pp=)剂量的治疗效果无明显差异，均优于低剂量(125ppm),故临床使用该盐酸多西环素预混剂治疗猪传染性胸膜肺炎时,推荐剂量为中剂量(250ppm),即每吨饲料添加10%盐酸多西环素预混剂2.5kg,连用7日。

参考文献：
[1]张东超等,猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定及
药敏试验[J].中国畜牧兽医，2016(06)：1604-1609. [2]Liao,Y,et al.Immunoproteomic analysis of outer
membrane proteins and extracellular proteins of
Actinobacillus pleuropneumoniae JL03serotype3[J].
BMC Microbiol,2009.9:172.
⑶张仁良•副猪嗜血杆菌,猪传染性胸膜肺炎放线杆菌
和猪链球菌2型三重PCR方法的建立与应用[D].江
苏:南京农业大学,2011.
⑶李伟，杨阳•多西环素的药理学进展及临床应用概述.
广东畜牧兽医科学,2009,34(6)：3-5.
[4]吴建娜•猪传染性胸膜肺炎的诊断与治疗分析[J]•畜
禽业,2017(12)：22-24.
[5]叶盛恒•替米考星缓释颗粒对猪传染性胸膜肺炎病的
临床疗效研究[J].中国兽医学杂志，2015(5):73-74.
⑹孔祥凯等•氟苯尼考缓释颗粒对人工感染仔猪传染性
胸膜肺炎的药效学研究[J].中国兽医杂志,2014(03)：69-71.
[7]陆莹梅，李建林,吕华林•多西环素药理学及新型制剂
的研究进展[J].湖南畜牧兽医,2015(6)：8-10.
[8]耿智霞，贾兴，等•盐酸多西环素颗粒对自然感染猪传
染性胸膜肺炎的疗效研究[J].黑龙江畜牧兽医，2018
(11)：189-192.。