胃癌患者外周及肿瘤组织中CD4+T淋巴细胞上Tim-3的表达及其临床意义

意义 。方 法 ： 收集２ ０ １ ３ 年１ 月至 ２ ０ １ ４ 年 １月间首 次入住 郑 州 大学 附属肿 瘤 医院普 外科 ５ ４ 例Ｇ Ｃ患者的 全
血标本 及其 中８ 例 Ⅲ期 Ｇ Ｃ患 者 的 肿 瘤 组 织 和 癌 旁组 织 标 本 ， 采 用流 式法检 测 Ｔ ｉ ｍ ． ３ 和Ｐ Ｄ ． １ 在Ｃ Ｄ ４ Ｔ淋 巴
于 Ｉ ， Ⅱ期 Ｇ Ｃ患者及 对照 组 。结论 ： Ｇ Ｃ患者 外周 血及 肿瘤 组织 中Ｃ Ｄ ４ Ｔ细胞 上抑 制性 受体 Ｔ ｉ ｍ． ３ 和Ｐ Ｄ 。 １ 的表 达升 高 ， 可能与 Ｃ Ｄ ４ ￣ Ｔ细胞功 能耗竭 ， 肿 瘤 细胞 免疫 逃逸 ， 促进 Ｇ Ｃ病情进 展有 关 。 关键 词 胃肿 瘤 ； Ｃ Ｄ ４ Ｔ淋 巴细胞 ； Ｔ细胞耗 竭 ； Ｔ ｉ ｍ． ３ ， Ｐ Ｄ ． １
１ ． ４ ４ ％ ． ０ ． ８ ５ ％， Ｐ＝０ ． ０ ０ ６ ０ （ Ｔ ｉ ｍ一 ３ Ｐ Ｄ ． ｒ） ｌ 。Ｔ ｉ ｍ ． ３ 、 Ｐ Ｄ． １ 和Ｔ ｉ ｍ． ３ Ｐ Ｄ ． １ 在 肿瘤 组织 中 Ｃ Ｄ ４ 细胞上 的表 达
高 于其在 癌 旁组 织及 外周 血 中的表达 。Ｔ ｉ ｍ 一 ３ Ｐ Ｄ． １ － 在 Ⅲ／ Ⅳ期 Ｇ Ｃ患者 外周血 Ｃ Ｄ ４ Ｔ细胞 上 的表达 明显 高
细胞 上 的表达 。 结在 Ｇ Ｃ患者 外周血 Ｃ Ｄ ４ Ｔ淋 巴细胞上 的表 达 水平 明显 高
于其 在 ２ ５ 例 健 康对 照组 的表 达 Ｉ ２ ． ８ ％ 掷． ２ ． １ ％， Ｐ：０ ． ０ ４ １ ８ （ Ｔ ｉ ｍ一 ３ ） ； １ ９ ． １ ％ ． １ ２ － ３ ％， Ｐ＜０ ． ０ ０ ０ １ （ Ｐ Ｄ． １ ） ；
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实 用 医学杂志 ２ ０ １ ７ 年第 ３ ３ 卷第 １ 期
胃癌 患者 外 周及 肿 瘤 组 织 中 Ｃ Ｄ ４ ＋ Ｔ 淋 巴细 胞 上 Ｔ ｉ ｍ 一 ３的表 达及 其 临床 意 义
徐本玲 袁龙 袁鹏 陈广玉 秦 鹏 王振 雷 高全立
摘要 目的 ： 探讨Ｔ ｉ ｍ一 ３ 和Ｐ Ｄ ． １ 在 胃癌 （ Ｇ Ｃ） 患 者外周 血和 组织 中Ｃ Ｄ ４ ＋ Ｔ淋 巴细胞上 的表 达及 其 临床
胃癌全球范 围 内发病 率处于 恶性 肿瘤 的第 ５ １ 对 象 与 方 法 位， 是 中国的第二大常见肿瘤ｎ ］ 。虽然治疗方式近 年来取得 了一些进展 ， 但进展期 胃癌的 ５ 年生活率 １ ． １ 研究对象 ２ ０ １ ３ 年１ 月至 ２ ０ １ ４ 年１ 月 人 住 郑 仍仅为 １ ６ ． ６ ％ ］ 。免疫系统在清除和控制肿瘤中发 州大学 附属肿瘤 医院普外科 的 胃癌初诊 患者 ， 连 挥重要作 用 ， 免 疫 调 控 失 调 则会 促 进 肿 瘤 的进 展 。 续 入选 。术前未接受过治疗 。患者 的年龄 、 性别、 Ｃ Ｄ ４ Ｔ 细胞在病毒诱导的免疫反应过程 中发挥重要 临 床 病 理 及 分期 等 资 料 均被 采 集 。术 中标 本 均 由 作用 ， 其在肿瘤 患者 中的相关研 究较少 。Ｔ 细胞免 同 一 位 外 科 医 生 留 取 。本 研究 经 郑 州 大学 附 属 肿 疫 球 蛋 白黏 蛋 白结 构域 相 关 分 子 ３（ Ｔ ｃ ｅ ｌ ｌ ｉ ｍ ｍｕ ｎ ｏ ． 瘤 医院医学伦理 委员会批 准实施 ， 标 本 采 集 均 征 ｇ ｌ ｏ ｂ ｕ ｌ ｉ ｎ ｄ ｏ ｍａ ｉ ｎ ａ ｎ ｄ ｍ ｕ ｃ ｉ ｎ ｄ ｏ ｍａ ｉ ｎ ， Ｔ ｉ ｍ一 ３ ） 和程 序性 得 患 者 同意 并 签 署 知情 同意 书 。 死 亡分子 １ （ ｐ ｒ ｏ ｇ ｒ ａ ｍｍ ｅ ｄ ｄ ｅ ａ ｔ ｈ ． １ ， Ｐ Ｄ ． １ ） 是 Ｔ细 胞 表 １ ． ２ 标 本 采 集 治 疗 前 采集 胃癌 患 者 的空 腹 外 周 面重要 的共抑制分子 ， 介导负性调节信号。肿瘤 患 血 标 本 两 管 。一 管 用 Ｅ Ｄ Ｔ Ａ ． Ｎ ａ ２ 抗凝管 ， 另 一 管 用 者Ｃ Ｄ ８ Ｔ 细胞 上 Ｔ ｉ ｍ 一 ３ 和Ｐ Ｄ 一 １ 的表达 与 Ｔ细胞 耗竭 促凝管 。相 同的方法抽取 ２ ５ 例健康人 的外周 血 ２ 有关 ， 封闭Ｔ ｉ ｍ ． ３ 和Ｐ Ｄ ． １ 可以部分恢复 Ｔ 细胞功能 ， ｍ Ｌ 作为对照组 。 增强其抗肿瘤效应 口 ］ 。Ｔ ｉ ｍ ． ３ 在Ｇ Ｃ 患者外周血 ， 肿 组织 标本 的收集及 单细胞悬 液 的制 备 ： 签 署 瘤组织及癌旁组织 Ｃ Ｄ ４ Ｔ 细胞表面有何变化 ， 这些 知情 同意书后 ， 将术 中切下 的肿瘤组织 ， 相对应的 变化 与 Ｇ Ｃ的 临 床 病 理 资 料 有 何 关 系 ， 尚未 见 报 癌 旁组 织放 到 事先 准备 好 的含 有 庆大 霉 素 （ ９ ０ ０ 道 。鉴 于上 述 原 因 ， 本研 究 通 过 检测 Ｔ ｉ ｍ． ３ 及Ｐ Ｄ 一 １ Ｉ Ｕ ／ ｍＬ ） ， 青霉素 （ ５ ０ ０ Ｉ Ｕ ／ ｍＬ ） 和链 霉 素 （ ５ ０ ０ Ｉ ｘ ｇ ／ ｍＬ ） 在Ｇ Ｃ 患者不同组织 中Ｃ Ｄ ４ Ｔ 细胞上的表达并分析 的无血清培养基 中。分别将肿瘤组织和癌旁组织 其临床意义 ， 旨在探讨 Ｃ Ｄ ４ Ｔ 细胞上免疫抑制性受 剪 切 成 １ ～２ ｍ ｍ 的 组 织 碎块 ， 用 消 化 酶混 合 液 （ 胶 体与 Ｇ ｃ发生和发展 的关 系 ， 从而为 胃癌临床治疗 原 酶 Ｉ １ ｇ ／ ｍＬ ， 胶原酶１ Ｖ １ ｘ Ｉ ｇ ／ ｍ Ｌ， Ｄ Ｎ ａ ｓ ｅ ２ ５ ｇ ／ 提供新的思路 。 ｍＬ， ２ ％的 胎 牛 血清 ） 消化 ３ ０ ｍｉ ｎ ， 采用 Ｐ ｅ ｒ ｃ ｏ ｌ ｌ 组 织 样本分离液获得单细胞悬液 。外周血及组织标本 均在采集 ２ ｈ内送 到 实 验 室进 行 下 一 步 检测 。 ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ６ 。 ５ ７ ２ ５ ． ２ ０ １ ７ ． ０ １ ． ２ ９ １ ． ３ 实 验 方 法 流式 法 检 测 Ｔ ｉ ｍ一 ３和 Ｐ Ｄ． １ 在Ｃ Ｄ ４ 基 金 项 目： 河 南 省 医 学 科 技 攻 关 计 划 重 大 项 目（ 编号 ： ２ ０ １ ４ ０ １ ０ １ ６ ） ； 河南省 留学人员科研资助项 目（ 编号 ： 豫 留学函 ２ ０ １ ５ — ５ Ｔ 细胞 上的表达 ： 取外周抗凝 血 ， 肿瘤组织及癌旁 号） ； 郑州市技术研究 与开发经费支持项 目（ 编号 ： １ ５ ３ Ｐ Ｋ Ｊ Ｇ Ｇ ０ ６ １ ） 组织单 细胞悬液各 １ ０ ０ Ｘ Ｉ Ｌ， 分 别 吸取 荧 光 标 记 的 作者单位 ： ４ ５ ０ ０ ０ ８ 郑 州大学 附属肿瘤 医院生物 免疫治疗 科 特异性抗体 （ 抗Ｐ Ｄ ． １ ． Ｆ Ｉ Ｔ Ｃ ， 抗Ｃ Ｄ ４ ． Ｐ ｅ ｒ Ｃ Ｐ — ｃ ｙ ５ ． ５ ， 抗 （ 徐 本玲 ， 高全立 ， 陈广玉 ， 秦鹏 ） ； 郑州大学 附属肿 瘤医院普外科 （ 袁 Ｔ ｉ ｍ 一 ３ ． Ｐ Ｅ， ） 各５ Ｌ加 入 流 式 管 ， ａ ｑ ｕ ａ 用 来 排 除 死 龙， 袁鹏 ， 王振雷） 细胞 ， 混合均匀 ， 置于冰上避光孵育 ２ ０ ｍ ｉ ｎ 。同时设 通 信作 者 ： 高 全立 Ｅ ． ｍ ａ ｉ ｌ ： ｇ ａ ０ ｑ ｕ ａ ｎ ｌ ｎ ＠ａ １ ｉ ｙ ｕ ｎ ． ｃ ｏ ｎ