血清游离p16^INK4A基因启动子DNA甲基化用于非小细胞肺癌早期诊断的研究
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能也 存在 。通 过对 患者血 清游 离 ｐ １ ６ “ 基 因启动 子 Ｄ Ｎ Ａ异 常 甲基 化 做 工作 特 征 Ｒ Ｏ Ｃ曲线 对 Ｎ Ｓ Ｃ Ｌ Ｃ进
因启动子 Ｄ Ｎ Ａ 异 常 甲 基 化 。 ３组 人 群 ｐ １ ６ “ 基 因
酸（ Ｓ Ａ Ｍ） 为 甲基 供 体 ， 将 甲基 转 移 到 特 定 的碱 基 上
的过程 ， 是 甲基 团 与基 因 组 中 Ｃ ｐ Ｇ 二 核 苷 酸 胞 嘧 的过程 ， 其 结果 可
的Ｄ Ｎ Ａ进入 外周 血所 致 。因此 ， 外 周 血游 离 Ｄ Ｎ Ａ甲
∞ ∞ ∞ ∞ 加 Ｏ 基因启动子 Ｄ ＮＡ 基 化检 测可 能是肺 癌早 期诊 断 的一种 理想介 质 。
特 异性 Ｒ Ｏ Ｃ（ ９ ５ ％Ｃ Ｉ ）
甲基 用 于 肺 癌 早 期 诊 断 （ ％）
阳性 １ ９ ８
２ ７
阴性 ｌ ３ ５ ６
６ ９
总计 ３ ２ ６ ４
９ ６
敏感度 ５ ９ ． ４
８ ７ ． ５ ０ ． ８ ６ （ ０ ． ７ ４— ０ ． ９ ５ ）
ｓ ｕ ｐ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｏ ｒ １ ， ＭＴ Ｓ １ ） １ ３ ］ 。该 基 因 定 位 于 人 染 色 体
热点 ， 是 一个 具 有 良好 研 究 前 景 的 肿 瘤 分子 标 志 物 。 Ｄ Ｎ Ａ Ｃ ｐ Ｇ岛 的高 甲基 化几 乎 在所 有 肿瘤 组 织 中 都可 以检查 到 ， 这 使得 它有 可 能成 为肿瘤 早期 诊 断 的理想 分 子标 志物 。
甲基 化外 ， 肺 部 良性 病变 组患 者 同样 存 在一定 的异 常 基 因启动子 Ｄ Ｎ Ａ异 常 甲基 化并 非肺 癌 患者所 特有 的一 种现象 ， 在其 他疾 病 中可
医 学 研 究杂 志２ ０ １ ３ 年４ 月 第４ ２ 卷 第４ 期
为０ ． ８ ６ ， ９ ５ ％ Ｃ Ｉ ： ０ ． ７ ４— ０ ． ９ ５ （ 表 ２和 图 ２ ） 。
表 ２ 血清游 离 ｐ １ ６
一 一 越躐搭
・论
看 ・
溶 解 释放排 出和肿 瘤 细 胞本 身 的坏 死 和凋 亡 后 释放
的， 就单 个 基 因来 说 ， 肺癌 中 ｐ １ ６
０ ２ Ｏ ４ Ｊ Ｄ ６ Ｏ ８ ０ １ ０ ０
基 因启 动子 的甲
１ ０ ０ 一 特异性 （ ％）
基化程 度较 高 ， 有 ５ ０ ％ ～８ ０ ％ 的 肺 癌 患 者 均 存 在
ｐ １ ６ “ 基 因启 动子 的不 同程度 甲基 化 。
组 别 肺 癌 组 非肺癌组
总 计
ｐ ｌ ６ Ｉ 基 因是 ２ Ｏ世 纪 ９ Ｏ年代 克 隆鉴 定 出的一 种 抑癌基 因 ， 该基 因对 很多种 肿瘤 均具 有较 强 的抑制
作 用 因而 又 被 称 为 多 肿 瘤 抑 制 基 因 （ ｍ ｕ ｌ ｔ ｉ ｐ ｌ ｅ ｔ ｕ ｍ ｏ ｒ
图 ２ 血清游离 ｐ １ ６
基 因 启 动 子
本 研究 采用 ＭＳ Ｐ的方 法对 ３ ２例 健康 查 体 者 ， ３ ２
例肺 部 良性 疾 病 患 者 及 ３ ２ 例 Ｉ期 （ Ｔ Ｎ 。 Ｍ。或 Ｔ ： Ｎ 。 Ｍ。 ） Ｎ Ｓ Ｃ Ｌ Ｃ患 者 血 清 游 离 ｐ １ ６ “ 基 因启 动 子
Ｄ Ｎ Ａ 甲基 化 用 于肺 癌 诊 断 的 Ｒ ０Ｃ 曲线
讨
论
Ｄ Ｎ Ａ 甲基 化是 生物 体 在 Ｄ Ｎ Ａ 甲基转 移 酶 （ Ｄ Ｎ Ａ
ｍｅ ｔ ｈ ｙ ｈ ｒ ａ ｎ ｓ ｆ ｅ ｒ ａ ｓ ｅ ， Ｄ ＭＴ ）的催 化下 ， 以Ｓ 一腺 苷 甲硫 氨
Ｄ Ｎ Ａ甲基化 水平 进行 了检 测 ， 研 究 结果 表 明 ， 血 清游 离ｐ １ ６ “ 基 因启动 子 Ｄ Ｎ Ａ异 常 甲基 化 在 Ｎ Ｓ Ｃ Ｌ Ｃ患 者 中检 出率 最 高 （ ６ ２ ． ５ ％） ， 在 肺 部 良性 基 本 组 中检 测 率较低 （ ２ ５ ％） ， 健 康 查 体组 中未 检 测 出 ｐ １ ６ “ 基
序列 ， 但 在 维持 哺乳 动物 的正 常生 长 、 发育、 组织 器 官
分 化 和 细 胞 凋 亡 等 方 面 起 着 至 关 重 要 的作 用 ¨ 。
现， 除肺 癌组 患者存 在 ｐ １ ６ 甲基化情 况 ， 说明ｐ １ ６
基 因启 动子 Ｄ Ｎ Ａ 异常
Ｄ Ｎ Ａ甲基 化改 变 常 发 生 于肿 瘤 形 成 过 程 ， 包 括 全基 因组 水 平 Ｄ Ｎ Ａ 低 甲基 化 和 Ｃ ｐ Ｇ岛 Ｄ Ｎ Ａ 高 甲 基 化¨ 。Ｄ Ｎ Ａ Ｃ ｐ Ｇ 岛高 甲基 化 是 近 年 来 肿 瘤 研 究 的
以形成 ５ 一甲基 胞 嘧 啶 。 甲基化 虽 不 改 变 核 苷 酸
启 动子 Ｄ Ｎ Ａ 甲基化 水平 差异 明显 ， 肺癌 组患 者最 高 。 因此 ， 理 论上 通过 检测 ｐ １ ６ 基 因启 动 子 Ｄ Ｎ Ａ 甲基 化 水平 可 以对上 述 ３组 人群 进 行 区分 。研 究结 果 发
９ Ｐ 区域 ， 全长 ８ ． ５ ｋ ｂ ， 由 ２个 内含子 和 ３个 外 显 子构 成， 基 因全长 ５ ８ ５ ０ ｂ ｐ ， 编码 一个 由 １ ４ ８个 氨 基 酸残 基
组成 的蛋 白质 ， 它 是 一 种细 胞 周 期 调控 蛋 白 ， 可 以参 与 细胞周期 调 控 ， 能 与 细 胞 周 期 调 控 蛋 白 Ｄ 竞 争 性 抑制 Ｃ Ｄ Ｋ ４ 、 Ｃ Ｄ Ｋ ６的活 性， 抑 制 细 胞 的 分 裂 增 殖¨ ’ ］ 。肿瘤 患 者 体 内可 检 出 ｐ １ ６ Ⅲ 基 因 的 甲 基 化， 基 因 甲基 化 具 有 组 织 器 官 特 异 性 和 肿 瘤 特 异 性
因启动子 Ｄ Ｎ Ａ 异 常 甲 基 化 。 ３组 人 群 ｐ １ ６ “ 基 因
酸（ Ｓ Ａ Ｍ） 为 甲基 供 体 ， 将 甲基 转 移 到 特 定 的碱 基 上
的过程 ， 是 甲基 团 与基 因 组 中 Ｃ ｐ Ｇ 二 核 苷 酸 胞 嘧 的过程 ， 其 结果 可
的Ｄ Ｎ Ａ进入 外周 血所 致 。因此 ， 外 周 血游 离 Ｄ Ｎ Ａ甲
∞ ∞ ∞ ∞ 加 Ｏ 基因启动子 Ｄ ＮＡ 基 化检 测可 能是肺 癌早 期诊 断 的一种 理想介 质 。
特 异性 Ｒ Ｏ Ｃ（ ９ ５ ％Ｃ Ｉ ）
甲基 用 于 肺 癌 早 期 诊 断 （ ％）
阳性 １ ９ ８
２ ７
阴性 ｌ ３ ５ ６
６ ９
总计 ３ ２ ６ ４
９ ６
敏感度 ５ ９ ． ４
８ ７ ． ５ ０ ． ８ ６ （ ０ ． ７ ４— ０ ． ９ ５ ）
ｓ ｕ ｐ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｏ ｒ １ ， ＭＴ Ｓ １ ） １ ３ ］ 。该 基 因 定 位 于 人 染 色 体
热点 ， 是 一个 具 有 良好 研 究 前 景 的 肿 瘤 分子 标 志 物 。 Ｄ Ｎ Ａ Ｃ ｐ Ｇ岛 的高 甲基 化几 乎 在所 有 肿瘤 组 织 中 都可 以检查 到 ， 这 使得 它有 可 能成 为肿瘤 早期 诊 断 的理想 分 子标 志物 。
甲基 化外 ， 肺 部 良性 病变 组患 者 同样 存 在一定 的异 常 基 因启动子 Ｄ Ｎ Ａ异 常 甲基 化并 非肺 癌 患者所 特有 的一 种现象 ， 在其 他疾 病 中可
医 学 研 究杂 志２ ０ １ ３ 年４ 月 第４ ２ 卷 第４ 期
为０ ． ８ ６ ， ９ ５ ％ Ｃ Ｉ ： ０ ． ７ ４— ０ ． ９ ５ （ 表 ２和 图 ２ ） 。
表 ２ 血清游 离 ｐ １ ６
一 一 越躐搭
・论
看 ・
溶 解 释放排 出和肿 瘤 细 胞本 身 的坏 死 和凋 亡 后 释放
的， 就单 个 基 因来 说 ， 肺癌 中 ｐ １ ６
０ ２ Ｏ ４ Ｊ Ｄ ６ Ｏ ８ ０ １ ０ ０
基 因启 动子 的甲
１ ０ ０ 一 特异性 （ ％）
基化程 度较 高 ， 有 ５ ０ ％ ～８ ０ ％ 的 肺 癌 患 者 均 存 在
ｐ １ ６ “ 基 因启 动子 的不 同程度 甲基 化 。
组 别 肺 癌 组 非肺癌组
总 计
ｐ ｌ ６ Ｉ 基 因是 ２ Ｏ世 纪 ９ Ｏ年代 克 隆鉴 定 出的一 种 抑癌基 因 ， 该基 因对 很多种 肿瘤 均具 有较 强 的抑制
作 用 因而 又 被 称 为 多 肿 瘤 抑 制 基 因 （ ｍ ｕ ｌ ｔ ｉ ｐ ｌ ｅ ｔ ｕ ｍ ｏ ｒ
图 ２ 血清游离 ｐ １ ６
基 因 启 动 子
本 研究 采用 ＭＳ Ｐ的方 法对 ３ ２例 健康 查 体 者 ， ３ ２
例肺 部 良性 疾 病 患 者 及 ３ ２ 例 Ｉ期 （ Ｔ Ｎ 。 Ｍ。或 Ｔ ： Ｎ 。 Ｍ。 ） Ｎ Ｓ Ｃ Ｌ Ｃ患 者 血 清 游 离 ｐ １ ６ “ 基 因启 动 子
Ｄ Ｎ Ａ 甲基 化 用 于肺 癌 诊 断 的 Ｒ ０Ｃ 曲线
讨
论
Ｄ Ｎ Ａ 甲基 化是 生物 体 在 Ｄ Ｎ Ａ 甲基转 移 酶 （ Ｄ Ｎ Ａ
ｍｅ ｔ ｈ ｙ ｈ ｒ ａ ｎ ｓ ｆ ｅ ｒ ａ ｓ ｅ ， Ｄ ＭＴ ）的催 化下 ， 以Ｓ 一腺 苷 甲硫 氨
Ｄ Ｎ Ａ甲基化 水平 进行 了检 测 ， 研 究 结果 表 明 ， 血 清游 离ｐ １ ６ “ 基 因启动 子 Ｄ Ｎ Ａ异 常 甲基 化 在 Ｎ Ｓ Ｃ Ｌ Ｃ患 者 中检 出率 最 高 （ ６ ２ ． ５ ％） ， 在 肺 部 良性 基 本 组 中检 测 率较低 （ ２ ５ ％） ， 健 康 查 体组 中未 检 测 出 ｐ １ ６ “ 基
序列 ， 但 在 维持 哺乳 动物 的正 常生 长 、 发育、 组织 器 官
分 化 和 细 胞 凋 亡 等 方 面 起 着 至 关 重 要 的作 用 ¨ 。
现， 除肺 癌组 患者存 在 ｐ １ ６ 甲基化情 况 ， 说明ｐ １ ６
基 因启 动子 Ｄ Ｎ Ａ 异常
Ｄ Ｎ Ａ甲基 化改 变 常 发 生 于肿 瘤 形 成 过 程 ， 包 括 全基 因组 水 平 Ｄ Ｎ Ａ 低 甲基 化 和 Ｃ ｐ Ｇ岛 Ｄ Ｎ Ａ 高 甲 基 化¨ 。Ｄ Ｎ Ａ Ｃ ｐ Ｇ 岛高 甲基 化 是 近 年 来 肿 瘤 研 究 的
以形成 ５ 一甲基 胞 嘧 啶 。 甲基化 虽 不 改 变 核 苷 酸
启 动子 Ｄ Ｎ Ａ 甲基化 水平 差异 明显 ， 肺癌 组患 者最 高 。 因此 ， 理 论上 通过 检测 ｐ １ ６ 基 因启 动 子 Ｄ Ｎ Ａ 甲基 化 水平 可 以对上 述 ３组 人群 进 行 区分 。研 究结 果 发
９ Ｐ 区域 ， 全长 ８ ． ５ ｋ ｂ ， 由 ２个 内含子 和 ３个 外 显 子构 成， 基 因全长 ５ ８ ５ ０ ｂ ｐ ， 编码 一个 由 １ ４ ８个 氨 基 酸残 基
组成 的蛋 白质 ， 它 是 一 种细 胞 周 期 调控 蛋 白 ， 可 以参 与 细胞周期 调 控 ， 能 与 细 胞 周 期 调 控 蛋 白 Ｄ 竞 争 性 抑制 Ｃ Ｄ Ｋ ４ 、 Ｃ Ｄ Ｋ ６的活 性， 抑 制 细 胞 的 分 裂 增 殖¨ ’ ］ 。肿瘤 患 者 体 内可 检 出 ｐ １ ６ Ⅲ 基 因 的 甲 基 化， 基 因 甲基 化 具 有 组 织 器 官 特 异 性 和 肿 瘤 特 异 性