实验十一 离体叶绿体光还原反应

实验十一离体叶绿体光还原反应
一、实验目的
了解光合作用在叶绿体中进行的光还原作用；熟悉离体叶绿体的提取方法
二、仪器及药品
1 仪器:离心机、分光光度计、烧杯、试管、移液管
2 药品:提取介质50mmol/L（pH7.5）Tris－HCl缓冲液（内含0.4mol/L蔗糖、10mmol/LNaCl），0.3mol/L 2 . 6 -二氯酚靛酚溶液（用上述提取介质配制）
3 材料：菠菜叶片
三、原理
离体叶绿体能使2 . 6－二氯酚靛酚（DCIP）进行需光还原作用，使染料从蓝色变为无色，这些变化在4－5分钟内呈线性关系。

其反应原理如下：
四、方法步骤
1.离体叶绿体的提取选取生长正常的菠菜叶子洗干净，用吸水纸擦干，去柄及粗脉，称1克叶子。

将叶子剪碎放在研钵中，加入10ml提取介质及少量的石英砂，研磨成匀浆。

把匀浆倒在四层沙布中过滤至离心管中1000 rpm速度离心 3 分钟，弃沉淀，要上清液。

上清液在3000 rpm 离心 5 分钟，弃上清液，
沉淀即是叶绿体；将沉淀用提取介质使叶绿体悬浮。

2. 叶绿体光还原反应的测定取干净试管3 支，按下表加入样品及其它试剂。

3.比色。

将上面的各试管液分别倒入比色杯中，立即在分光光度计（波长620 nm 下）进行测定，读出A值，然后将比色杯取出放在光下照光，每隔1 min，再测定A值（以上设定步骤可进行5 －6次）。

五、实验报告
作出叶绿体对2 . 6－二氯酚靛酚的还原作用的曲线图。

A值为纵坐标，时间（min）为横坐标。