Bt基因玉米转化体目标蛋白表达效应研究的开题报告

Bt基因玉米转化体目标蛋白表达效应研究的开题报
告
标题：Bt基因玉米转化体目标蛋白表达效应研究
研究背景：
Bt（Bacillus thuringiensis）基因在农业领域中广泛应用于玉米等作物上，以防治害虫。

玉米经Bt基因转化后，可表达Bt晶体毒素，进而抗拒受害虫。

但是，Bt基因转化体对有害昆虫的抵抗力并不绝对，甚至存在受害虫对Bt基因的抗性。

因此，进一步的研究需要关注Bt基因玉米转化体目标蛋白的表达效应，以增强其防虫能力。

研究目的：
本研究的目的是分别对Bt基因玉米转化体的目标蛋白、即Bt晶体毒素Cry1Ab、Cry2Ab的表达效应进行研究，判断其对玉米叶片和花粉中作物害虫的防治能力，并寻求适当的玉米转化方法，以提高其农业生产效益。

研究内容：
1. 玉米转化方法的优化
选用优质愈伤组织进行初代转化，选择适当的玉米基因转化体诱导剂和转化时间参数，进行优化。

2. Bt基因晶体毒素Cry-1Ab、Cry-2Ab的克隆和表达
从Bt基因中克隆出Cry-1Ab、Cry-2Ab基因序列，进行体外酶切和定向克隆，构建物并转化到工程大肠杆菌中，以表达它们的晶体毒力蛋白。

通过多因素实验，优化表达条件，以保持蛋白的活性和表达量。

3. 表达产物的分析及检测
通过SDS-PAGE和Western blot法等技术，对Cry-1Ab、Cry-2Ab的表达产物进行分析和检测，以确定其是否为纯度高、活性好的目标蛋白。

4. 拟以生物测定法测定Bt晶体毒素在玉米转化体中的毒杀性
正向和反向试验法等技术对Bt晶体毒素在玉米叶片和花粉中害虫的毒杀性进行分析和检测, 处理玉米叶片和花粉样品的处理和收集过程，以最小的影响提高检验结果的准确性。

研究意义：
本研究可为Bt基因玉米转化体的防虫效能提高以及优化玉米转化方法指明方向，将有利于促进我国农村生产技术的发展和转基因生物产品
的生产及贸易活动的转化。