sanger法测序原理

sanger法测序原理
Sanger法测序原理
Sanger法（也称为dideoxy链终止法）是一种常用的DNA测序技术，它使得DNA序列能够被快速、准确地测定。

Sanger法的原理是利用到一种特殊的DNA 合成反应以及一些特定的核苷酸分子来在DNA链的不同位置结束DNA的延伸过程并标记位置。

因此，这个技术依赖于基本的DNA合成反应以及一些标记DNA的试剂，它既可手工操作，也可自动化。

Sanger法测序步骤：
首先，我们需要一段待测序列DNA。

这段DNA会被放入PCR反应中进行扩增，得到充足的DNA模板用来进行测序。

然后，我们根据待测序列的特点与实验要求，设计一些特定的引物和PCR反应体系。

其中，引物的选择应考虑引物与待测序列的长度和定位情况，PCR反应的体系应保证PCR反应成功且最大程度地减小错误发生可能性。

接下来，我们将PCR扩增得到的DNA片段在离析凝胶电泳前进行净化处理。

之后，将处理完的DNA片段与离析凝胶进行电泳，并进行可视化处理。

最后，在可视化、净化过的DNA模板片段上进行自动/手动Sanger法反应，进
行文序，生成DNA序列结果等。

Sanger法原理详述：
Sanger法使用的核苷酸分子是dideoxy核苷酸（ddNTP）。

和普通核苷酸不同，它的磷酸连接到糖与碱基之间的3’位上而不是5’位。

因此，一旦对应的ddNTP 被插入到新生链的末端，DNA合成便会被强制停止，而不能进一步延伸。

这就使得我们得以在不同的位置上对DNA进行标记。

我们可以在引物链末端增加一个标记，标记常用异硫氰酸荧光染料的分子，使其与ddNTP结合。

这些带有ddNTP的荧光标记的DNA分子在电泳过程中可以被一一监测并识别，从而得到DNA的序列信息。

Sanger测序使用ddNTP的最大优势在于能够在不同的位置停止DNA合成。

然而，当实验过程中这些ddNTP以不同浓度存在时，由于它们引起的终止可能性是不同的，这可能会导致测序过程出现错误或者预期之外的结果。

为了减少这种误差的可能性，Sanger法通常会将不同的ddNTP （即同一组反应体系中的所有ddNTPs）以等浓度添加到反应管中。

这样一来，就能最小化误差，得到准确的DNA序列结果。

应用：
由于它可以提供高分辨率的DNA序列，Sanger测序法在遗传学、分子生物学、医学等领域都有着广泛的应用。

例如，它可以用于测序基因、分辨种系、检测基因突变等。

在基因组学领域，Sanger法测序一般用于克隆测序、基因测序、伴侣定序等领域的实验研究中。

除此之外，Sanger法测序的结果也被广泛用于精准医学、生物医学、生物工程等领域的研发和应用。