格列齐特对糖尿病大鼠心肌的保护作用及其机制

格列齐特对糖尿病大鼠心肌的保护作用及其机制
潘文强，王书凡，丁伯平，黄帧桧△
（皖南医学院药理学教研室及中药药理国家三级实验室，安徽芜湖２４１００２）
【摘要】　目的：观察格列齐特对糖尿病大鼠心肌保护作用及其可能的机制。

方法：将６０只健康ＳＤ大鼠随机分为正常组（ＮＣ，ｎ＝１０），造模组（ｎ＝５０）给予高糖高脂饲料４周后，腹腔注射ＳＴＺ（４５ｍｇ／ｋｇ）建立糖尿病大鼠模型，随机抽取以ＦＢＧ≥１６．７ｍｍｏｌ／Ｌ作为糖尿病模型建立成功。

将造模成功的３８只糖尿病大鼠随机分为模型组（ＭＣ，ｎ＝９）、格列齐特组（Ｇｌｉｃ，８０ｍｇ／ｋｇ，ｎ＝１０）、格列本脲组（Ｇｌｉｂ，２．５ｍｇ／ｋｇ，ｎ＝１０）、法舒地尔组（Ｆａｓ，１０ｍｇ／ｋｇ，ｎ＝９
）；ＮＣ组和ＭＣ组灌胃等容积蒸馏水，Ｇｌｉｃ组和Ｇｌｉｂ组灌胃给药，Ｆａｓ组采用腹腔注射。

各组大鼠每天给药一次，每周记录体质量及空腹血糖（ＦＢＧ），持续８周。

实验结束时取血并测定心脏质量，计算心脏质量指数（ＨＷＩ）；测定各组糖化血红蛋白（ＨｂＡ１ｃ）、总胆固醇（ＴＣ）、甘油三酯（ＴＧ）、高密度脂蛋白（ＨＤＬ Ｃ）、低密度脂蛋白（ＬＤＬ Ｃ）含量以及血清丙二醛（ＭＤＡ）水平和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性；通过ＨＥ和Ｍａｓｓｏｎ染色，观察心肌病理变化和组织胶原纤维水平；ＴＵＮＥＬ染色观察并计算心肌细胞凋亡率；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测心肌组织中ＲｈｏＡ、ＲＯＣＫ１、ｅＮＯＳ、Ｂｃｌ ２和Ｂａｘ蛋白表达。

结果：与ＮＣ组比较，ＭＣ组ＦＢＧ、ＨＷＩ、ＨｂＡ１ｃ、ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ Ｃ、ＭＤＡ水平，心肌组织胶原沉积和心肌细胞凋亡率以及心肌组织中ＲｈｏＡ、ＲＯＣＫ１、Ｂａｘ蛋白明显升高，ＳＯＤ活性及ＨＤＬ Ｃ、ｅＮＯＳ、Ｂｃｌ ２和体重显著降低（
Ｐ＜０．０１）；与ＭＣ组相比，Ｇｌｉｃ组ＦＢＧ、ＨＷＩ、ＨｂＡ１ｃ、ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ Ｃ和ＭＤＡ等指标明显下降，心肌组织胶原沉积及心肌细胞凋亡减轻，心肌组织ＲｈｏＡ、ＲＯＣＫ１、Ｂａｘ蛋白表达下调（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５），大鼠体重和血清中ＳＯＤ活性，ＨＤＬ Ｃ升高，ｅＮＯＳ、Ｂｃｌ ２蛋白水平升高（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）。

与Ｇｌｉｃ组相比，Ｇｌｉｂ组与Ｆａｓ组体重、血脂、ＦＢＧ、ＨＷＩ、ＭＤＡ以及心肌纤维化和心肌细胞凋亡水平升高，ＳＯＤ和Ｂｃｌ ２降低，Ｇｌｉｂ组心肌组织ＲｈｏＡ、ＲＯＣＫ１、Ｂａｘ蛋白表达上调（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）。

结论：格列齐特可改善糖尿病大鼠心肌损伤并减轻心肌细胞凋亡水平，其机制可能与降低血糖，改善氧化应激状态，调控ＲｈｏＡ／ＲＯＣＫ１／ｅＮＯＳ信号通路有关。

【关键词】　大鼠；糖尿病心肌病；格列齐特；格列本脲；氧化应激；凋亡
【中图分类号】Ｒ９６９．３ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１０００ ６８３４（２０２０）０５ ４０２ ００７【ＤＯＩ】１０．１２０４７／ｊ．ｃｊａｐ．５９９９．２０２０．０８６
Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｇｌｉｃｌａｚｉｄｅｏｎｍｙｏｃａｒｄｉｕｍｏｆｄｉａｂｅｔｉｃｒａｔｓ
ａｎｄｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍ
ＰＡＮＷｅｎ ｑｉａｎｇ，ＷＡＮＧＳｈｕ ｆａｎ，ＤＩＮＧＢｏ ｐｉｎｇ，ＨＵＡＮＧＺｈｅｎ ｇｕｉ
△
（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙａｎｄＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｏｆＴＣＭＧｒａｄｅＴｈｒｅｅＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＳｔａｔｅＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅｏｆＰ．Ｒ，
Ｗｕｈｕ２４１００２，Ｃｈｉｎａ）
【ＡＢＳＴＲＡＣＴ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｇｌｉｃｌａｚｉｄｅｏｎｍｙｏｃａｒｄｉｕｍｏｆｄｉａｂｅｔｉｃｒａｔｓａｎｄｉｔｓｐｏｓｓｉｂｌｅｍｅｃｈａ ｎｉｓｍｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＳｉｘｔｙｈｅａｌｔｈｙＳＤｒａｔｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｗｏｇｒｏｕｐｓ：ｎｏｒｍａｌｇｒｏｕｐ（ＮＣ，ｎ＝１０）ａｎｄｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ（ｎ＝５０）．Ｒａｔｓｉｎｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｆｅｄｗｉｔｈｈｉｇｈｇｌｕｃｏｓｅａｎｄｈｉｇｈｆａｔｄｉｅｔｆｏｒ４ｗｅｅｋｓａｎｄｔｈｅｎｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｌｙｉｎｊｅｃｔｅｄｗｉｔｈＳＴＺ（４５ｍｇ／ｋｇ）ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｄｉａｂｅｔｉｃｍｏｄｅｌａｎｄｒａｎｄｏｍｌｙｓｅｌｅｃｔｅｄＦＢＧ≥１６．７ｍｍｏｌ／Ｌａｓａｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｄｉａｂｅｔｅｓｍｏｄｅｌ．Ｔｈｉｒｔｙ ｅｉｇｈｔｄｉａｂｅｔｉｃｒａｔｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ（ＭＣ，ｎ＝９），ｇｌｉｃｌａｚｉｄｅｇｒｏｕｐ（Ｇｌｉｃ，８０ｍｇ／ｋｇ，ｎ＝１０），ｇｌｉｂｅｎｃｌａｍｉｄｅｇｒｏｕｐ（Ｇｌｉｂ，２．５ｍｇ／ｋｇ，ｎ＝１０）ａｎｄｆａｓｕｄｉｌｇｒｏｕｐ（Ｆａｓ，１０ｍｇ／ｋｇ，ｎ＝９）．ＮＣｇｒｏｕｐａｎｄＭＣｇｒｏｕｐｗｅｒｅｇｉｖｅｎｅｑｕａｌｖｏｌｕｍｅｄｉｓｔｉｌｌｅｄｗａｔｅｒｂｙｇａｖａｇｅ，ＧｌｉｃｇｒｏｕｐａｎｄＧｌｉｂｇｒｏｕｐｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｇｌｉｃｌａｚｉｄｅｏｒｇｌｉｂｅｎｃｌａｍｉｄｅｂｙｇａｖａｇｅ，ａｎｄｔｈｅＦａｓｇｒｏｕｐｗａｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｆａｓｕｄｉｌｂｙｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．Ｒａｔｓｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐｗｅｒｅｇｉｖｅｎｏｎｃｅａｄａｙａｎｄｒｅｃｏｒｄｅｄｂｏｄｙｍａｓｓａｎｄｆａｓｔｉｎｇｂｌｏｏｄｇｌｕｃｏｓｅ（ＦＢＧ）ｗｅｅｋｌｙｆｏｒ８ｗｅｅｋｓ．Ａｔｔｈｅｅｎｄｏｆｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ｔｈｅｈｅａｒｔｗｅｉｇｈｔｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄ，ａｎｄｔｈｅｈｅａｒｔｗｅｉｇｈｔｉｎｄｅｘ（ＨＷＩ）ｗａｓｃａｌｃｕｌａｔｅｄ；ｔｈｅｃｏｎ ｔｅｎｔｓｏｆｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ（ＨｂＡ１ｃ），ｔｏｔａｌｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ（ＴＣ），ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ（ＴＧ），ｈｉｇｈｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ（ＨＤＬ Ｃ），ｌｏｗｄｅｎｓｉ ｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ（ＬＤＬ Ｃ），ｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｓｅｒｕｍｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅＭＤＡ）ａｎｄｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ（ＳＯＤ）ｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄ；ｔｈｅｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｏｆｍｙｏｃａｒｄｉａｌｔｉｓｓｕｅｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙＨＥａｎｄＭａｓｓｏｎｓｔａｉｎｉｎｇ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＲｈｏＡ，ＲＯＣＫ１，ｅＮＯＳ，Ｂｃｌ ２ａｎｄＢａｘｐｒｏｔｅｉｎｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＮＣｇｒｏｕｐ，ｉｎＭＣｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＦＢＧ，ＨＷＩ，ＨｂＡ１ｃ，ＴＣ，ＴＧ，ＬＤＬ Ｃ，ＭＤＡ，ｍｙｏｃａｒｄｉａｌｃｏｌｌａｇｅｎｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅａｎｄＲｈｏＡ，ＲＯＣＫ１，Ｂａｘｐｒｏｔｅｉｎｉｎｍｙｏｃａｒｄｉａｌｔｉｓｓｕｅｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ，ｗｈｉｌｅｔｈｅＳＯＤａｃｔｉｖｉｔｙ，ｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＨＤＬ Ｃ，ｅＮＯＳ，Ｂｃｌ ２ａｎｄｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔｗｅｒｅｄｅ ｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０．０１）．ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＭＣｇｒｏｕｐ，ＧｌｉｃｔｒｅａｔｍｅｎｔｄｅｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＦＢＧ，ＨＷＩ，ＨｂＡ１ｃ，ＬＤＬ Ｃ，ＴＧ，
２０４ＣｈｉｎＪＡｐｐｌＰｈｙｓｉｏｌ，２０２０，３６（５）
ＴＣａｎｄＭＤＡ，ｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＳＯＤａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄＨＤＬ Ｃ（Ｐ＜０．０１ｏｒＰ＜０．０５）；ｄｅｃｒｅａｓｅｄｍｙｏｃａｒｄｉａｌｃｏｌｌａｇｅｎｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ，ｉｎ ｈｉｂｉｔｅｄｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅａｐｏｐｔｏｓｉｓ（Ｐ＜０．０１）；ｄｅｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＲｈｏＡ，ＲＯＣＫ１ａｎｄＢａｘｐｒｏｔｅｉｎ；ｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆｅＮＯＳａｎｄＢｃｌ ２ｐｒｏｔｅｉｎ（Ｐ＜０．０１ｏｒＰ＜０．０５）．ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＧｌｉｃｇｒｏｕｐ，ｉｎＧｌｉｂｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆｂｌｏｏｄｌｉｐｉｄｓ，ＢＭ，ＦＢＧ，ＨＷＩ，ＭＤＡ，ｍｙｏｃａｒｄｉａｌｆｉｂｒｏｓｉｓａｎｄｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＳＯＤａｎｄＢｃｌ ２ｗｅｒｅｄｅｃｒｅａｓｅｄ，ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＲｈｏＡ，ＲＯＣＫ１ａｎｄＢａｘｉｎｍｙｏｃａｒｄｉａｌｔｉｓｓｕｅｗｅｒｅｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ（Ｐ＜０．０１ｏｒＰ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｇｌｉｃｌａｚｉｄｅｓｉｇ ｎｉｆｉｃａｎｔｌｙａｌｌｅｖｉａｔｅｓｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｎｊｕｒｙａｎｄｒｅｄｕｃｅｓｍｙｏｃａｒｄｉａｌａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｄｉａｂｅｔｉｃｒａｔｓ，ａｎｄｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｍａｙｂｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｌｏｗｅｒｉｎｇｂｌｏｏｄｇｌｕｃｏｓｅ，ｉｍｐｒｏｖｉｎｇｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓａｎｄｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＲｈｏＡ／ＲＯＣＫ１／ｅＮＯＳｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ．
【ＫＥＹＷＯＲＤＳ】　ｒａｔｓ；　ｄｉａｂｅｔｉｃｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ；　Ｇｌｉｃｌａｚｉｄｅ；　Ｇｌｉｂｅｎｃｌａｍｉｄｅ；　ｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ；　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ
【基金项目】安徽省自然科学基金（０７０４１３１２４）；皖南医学院博
士启动基金（２０１２０３）【收稿日期】２０２０ ０１ ０２【修回日期】２０２０ ０６ ２９　△【通讯作者】Ｔｅｌ：１３８６６３９７５３９；Ｅ ｍａｉｌ：ｚｇｈｕａｎｇ２００６＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ
近年来糖尿病发病率逐年上升，糖尿病心肌病（
ｄｉａｂｅｔｉｃｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ，ＤＣＭ）是由糖尿病引起，与冠心病及微血管疾病发病机制不同的特异性心肌损
害疾病［１］。

ＤＣＭ的发病机制较为复杂，目前认为氧
化应激、炎症、心肌纤维化、细胞凋亡等参与该病的发生，主要表现为心脏舒缩功能障碍，最终发展为心力衰竭，与正常人相比，ＤＣＭ患者发生心脏疾病的概率明显增加，是导致糖尿病患者死亡的主要原因
之一［２ ５］。

格列齐特（Ｇｌｉｃ）属于第二代磺酰脲类降糖药，临床上广泛用于治疗ＩＩ型糖尿病，Ｇｌｉｃ可以促进胰岛素分泌降低血糖，同时能够降低血小板粘附力，改善血小板聚集，由于其独特的氮杂环结构，Ｇｌｉｃ可以清除氧自由基，因此Ｇｌｉｃ在降糖的同时，对糖尿病
的并发症也有一定的改善作用［６ ７］。

格列本脲
（
Ｇｌｉｂ）同属于磺酰脲类降糖药，本品通过刺激胰岛β细胞释放胰岛素，
其作用强度较强，因此所用剂量明显减少。

盐酸法舒地尔（Ｆａｓ）属于Ｒｈｏ激酶抑制
物，可以抑制高血压和改善心肌肥厚［８］。

目前关于
Ｇｌｉｃ对糖尿病心肌病的研究较少，本实验通过建立糖尿病大鼠模型，分别给予Ｇｌｉｃ、Ｇｌｉｂ和Ｆａｓ，通过与后两者的对比，探讨Ｇｌｉｃ对糖尿病大鼠心肌损伤的影响并探讨其机制，为临床治疗糖尿病心肌病提供理论依据。

１　材料与方法
１．１　实验动物
６０只雄性ＳＤ大鼠，体质量（２２０±２０）ｇ，许可证号：ＳＣＸＫ（浙）２０１４ ０００１，购于南京青龙山繁殖场，温度（２３±２）℃，动物自由饮水和进食。

１．２　实验仪器
ＥＬ ８００多功能酶标仪（ＢＩＯ ＴＥＫ，ＵＳＡ）； ８０℃
冰箱（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ科技公司）；ＭｉｎｉＰＲＯＴＥＡＮ转模系统（美国ＢＩＯ ＲＡＤ公司）；ＢＸ ４１型奥林巴斯显微镜（ＯＬＹＭＰＵＳ公司）；２２Ｒ高速冷冻离心机（
ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ）１．３　药物与试剂
格列齐特（施维雅制药有限公司）；盐酸法舒地尔注射液（天津红日药业股份有限公司）；ＳＴＺ（源叶生物有限公司）；血糖仪和血糖试纸（三诺生物传感股份有限公司）；糖化血红蛋白（ＨｂＡ１ｃ）测定试剂盒、总胆固醇（ＴＣ）测定试剂盒（南京建成有限公司）；ＴＵＮＥＬ试剂盒（南京凯基生物科技发展有限公司）；ＲｈｏＡ、ＲＯＣＫ１、ｅＮＯＳ抗体（Ａｂｃａｍ公司）；ＢＣＬ ２抗体（Ａｆｆｉｎｉｔｙ公司）；Ｂａｘ抗体（北京博奥森生物技术有限公司）
１．４　模型的建立与给药
雄性ＳＤ大鼠６０只，适应性喂养７ｄ，随机选１０只喂养普通饲料作为正常对照组（ＮＣ组），其余５０只喂养高糖高脂饲料４周后，禁食不禁水１２ｈ，使用０．１ｍｏｌ／Ｌ柠檬酸缓冲液配制１％ＳＴＺ溶液，腹腔注射（４５ｍｇ／ｋｇ，ｐＨ４．４）诱导糖尿病。

注射７２ｈ后，随机抽取测定ＦＢＧ≥１
６．７ｍｍｏｌ／Ｌ作为糖尿病模型建立成功［９］。

造模成功的３８只糖尿病大鼠随机分
为模型组（ＭＣ组，ｎ＝９）、格列齐特组（Ｇｌｉｃ组，８０
ｍｇ／ｋｇ，ｎ＝１０）、格列本脲组（Ｇｌｉｂ组，２．５ｍｇ／ｋｇ，ｎ
＝１０）、法舒地尔组（Ｆａｓ组，１０ｍｇ／ｋｇ，ｎ＝９）。

Ｇｌｉｃ组和Ｇｌｉｂ组采取灌胃，Ｆａｓ组进行腹腔注射，每天一次，ＮＣ组和ＭＣ组每天灌胃同体积的蒸馏水，连续８周，每周测定一次空腹血糖和体质量，按体重调整给药物剂量。

１．５　状态的观察和指标检测
观察各组大鼠皮毛、状态、精神情况等，每周测定一次体质量和血糖。

实验结束时，使用１０％水合氯醛（３３０ｍｇ／ｋｇ）腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，分离血清并按照试剂盒的要求测定血清Ｈ
ｂＡ１ｃ、ＴＣ、ＴＧ、ＨＤＬ Ｃ、ＬＤＬ Ｃ；按照试剂盒要求测定ＭＤＡ含量和ＳＯＤ活性。

摘取心脏生理盐水冲洗干净后，测定心脏重量，按照公式计算心脏质量指数（ＨＷＩ），ＨＷＩ
３
０４中国应用生理学杂志，２０２０，３６（５）
＝心脏质量／体质量（ｍｇ／ｇ）。

１．６　心肌组织的病理学观察
待大鼠麻醉后腹主动脉取血，快速取出心脏并用生理盐水冲洗，取心脏的三分之一心尖处置于１０％甲醛溶液固定，梯度乙醇脱水后石蜡包埋切片，置于伊红水溶液中进行染色３ｍｉｎ之后，再次脱水封片，显微镜下观察心肌组织病理学的变化。

１．７　心肌纤维化的检测
腹主动脉取血后，摘取心脏生理盐水冲洗，切取心尖组织以１０％甲醛溶液固定，梯度脱水后石蜡包埋后切片，然后进行梯度乙醇脱蜡，按试剂盒要求进行Ｍａｓｓｏｎ染色。

心肌胶原容积分数（ｃｏｌｌａｇｅｎｖｏｌ ｕｍｅｆｒａｃｔｉｏｎ，ＣＶＦ）的计算，每组随机选用５个视野，使用分析软件Ｉｍａｇｅ ＰｒｏＰｌｕｓ６．０进行计算，ＣＶＦ＝胶原面积／视野总面积，取平均值。

１．８　心肌细胞ＴＵＮＥＬ凋亡检测
取心脏的三分之一心尖处置于１０％甲醛溶液固定，常规石蜡切片５μｍ，取石蜡切片按照ＴＵＮＥＬ凋亡试剂盒的要求加入ＴＵＮＥＬ反应液，ＴＵＮＥＬ阳性细胞核内可见棕黄色颗粒，阴性细胞呈现淡蓝色。

在光学显微镜下拍照，每个切片至少观察２０个不重叠区域，每组随机选取５个不同视野，计算每个视野凋亡率＝ＴＵＮＥＬ阳性细胞数／总细胞数×１００％，取平均数。

１．９　Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测心肌ＲｈｏＡ、ＲＯＣＫ１、ｅＮＯＳ、Ｂｃｌ ２和Ｂａｘ蛋白表达
按步骤测定ｒａｓ同源家族成员Ａ（ＲａｓｈｏｍｏｌｏｇｇｅｎｅｆａｍｉｌｙｍｅｍｂｅｒＡ，ＲｈｏＡ）、Ｒｈｏ相关蛋白激酶１（Ｒｈｏａｓｓｏｃｉａｔｅｄｃｏｉｌｅｄｃｏｉｌｆｏｒｍｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅｌ，ＲＯＣＫ１）、内皮型一氧化氮合成酶（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌＮｉｔｒｉｃ ＯｘｉｄｅＳｙｎｔｈａｓｅ，ｅＮＯＳ）、Ｂ淋巴细胞瘤 ２基因（Ｂ ｃｅｌｌｌｙｍｐｈｏｍａ ２，Ｂｃｌ ２）和ＢＣＬ２ ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＸ（ＢＣＬ２ Ａｓ ｓｏｃｉａｔｅｄＸ，Ｂａｘ）的蛋白表达。

取心脏组织４５ｍｇ，ＲＩＰＡ裂解液（含磷酸酶和蛋白酶抑制剂）裂解组织，采用ＢＣＡ蛋白测定法检测蛋白浓度，在电泳凝胶中电泳后使用ＰＶＤＦ膜进行转膜。

转膜完成后将膜置于５％脱脂牛奶中孵育２ｈ，再次加入ＲｈｏＡ、ＲＯＣＫ１、ｅＮＯＳ、Ｂｃｌ ２、Ｂａｘ和ＧＡＤＰＨ抗体在４℃下孵育８ｈ以上。

使用辣根过氧化物酶标记的二抗，室温下孵育２ｈ，在凝胶图像分析仪下加入发光液来分析目的条带的光密度，采用ｉｍａｇｅ ｐｒｏＰＬＵＳ处理软件分析图像。

１．１０　统计学处理
数据以均数±标准差（珋ｘ±ｓ）表示，采用ＳＰＳＳ１７．０统计软件进行分析，多组间比较采用单因素方差分析，多组间两两比较采用ＳＮＫ法。

２　结果
２．１　各组大鼠的一般状态观察及血糖和体质量变化
ＮＣ组大鼠皮毛光亮，状态良好，血糖稳定，体质量逐步上升。

ＭＣ组大鼠毛色枯黄，精神萎靡，血糖上升，体质量下降明显。

与ＭＣ组比，Ｇｌｉｃ组上述情况有明显改善，血糖降低，体重增加（Ｐ＜０．０１，表１，表２），Ｇｌｉｂ组血糖降低，体重有所增加，Ｆａｓ组血糖及体重无明显差别。

与Ｇｌｉｃ组相比，Ｇｌｉｂ组和Ｆａｓ组体重下降（Ｐ＜０．０１，表１，表２）。

Ｔａｂ．１　Ｃｈａｎｇｅｓｏｆｆａｓｔｉｎｇｂｌｏｏｄｇｌｕｃｏｓｅ（ＦＢＧ）ｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ（ｍｍｏｌ／Ｌ，珋ｘ±ｓ）
Ｇｒｏｕｐｎ０ ｔｉｍｅ２ｗｅｅｋｓ４ｗｅｅｋｓ６ｗｅｅｋｓ８ｗｅｅｋｓ
ＮＣ１０５．３２±０．４６５．５６±０．４３５．７０±０．３５５．８２±０．４１５．７８±０．２８
ＭＣ９２２．７２±４．０５ ２３．５８±４．５２ ２４．３１±３．５５ ２４．８７±３．２６ ２５．５４±３．０１
Ｇｌｉｃ１０２３．２６±４．６１１９．５４±３．０８＃＃１８．２９±２．５９＃＃１６．２５±３．３１＃＃１４．６８±３．０４＃＃
Ｇｌｉｂ１０２３．８０±５．４１２０．６９±４．７７＃＃１９．３０±３．５７＃＃１８．５４±３．０２＃＃▲１７．０５±３．１６＃＃▲▲
Ｆａｓ９２３．０３±５．０７２３．５５±４．３７▲▲２４．８３±３．０８▲▲２５．３０±３．６２▲▲２５．８３±４．２０▲▲
ＦＢＧ：Ｆａｓｔｉｎｇｂｌｏｏｄｇｌｕｃｏｓｅ；ＮＣ：Ｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌ；ＭＣ：Ｄｉａｂｅｔｅｓｍｏｄｅｌｃｏｎｔｒｏｌ；Ｇｌｉｃ：Ｇｌｉｃｌａｚｉｄｅｇｒｏｕｐ；Ｇｌｉｂ：Ｇｌｉｂｅｎｃｌａｍｉｄｅｇｒｏｕｐ；Ｆａｓ：Ｆａｓｕｄｉｌｇｒｏｕｐ
Ｐ＜０．０１ｖｓＮＣｇｒｏｕｐ；＃＃Ｐ＜０．０１ｖｓＭＣｇｒｏｕｐ；▲Ｐ＜０．０５，▲▲Ｐ＜０．０１ｖｓＧｌｉｃｇｒｏｕｐ
Ｔａｂ．２　Ｃｈａｎｇｅｓｉｎｂｏｄｙｍａｓｓ（ＢＭ）ｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ（ｇ，珋ｘ±ｓ）ＧｒｏｕｐｎＢｅｆｏｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔＢＭＡｆｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔＢＭＮＣ１０３３２．８±１４．１４２６．７±１９．５
ＭＣ９３２７．１±１６．２２２７．８±１３．７
Ｇｌｉｃ１０３３０．７±１７．３３２０．５±１４．５＃＃
Ｇｌｉｂ１０３２３．５±１５．６２８３．１±１５．３＃＃▲▲
Ｆａｓ９３３１．４±１８．４２３１．８±１１．７▲▲
Ｐ＜０．０１ｖｓＮＣｇｒｏｕｐ；＃＃Ｐ＜０．０１ｖｓＭＣｇｒｏｕｐ；▲▲Ｐ＜０．０１ｖｓＧｌｉｃｇｒｏｕｐ２．２　各组大鼠的ＨＷ及ＨＷＩ的变化
与ＮＣ组相比，ＭＣ组心脏质量指数增大（Ｐ＜０．０１，表３）；与ＭＣ组相比，Ｇｌｉｃ组和Ｇｌｉｂ组心脏质量指数降低，Ｆａｓ组无明显改善；与Ｇｌｉｃ组相比，Ｇｌｉｂ组及Ｆａｓ组心脏质量指数增大（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５，表３），提示Ｇｌｉｃ和Ｇｌｉｂ可以改善糖尿病大鼠的心脏肥大，而Ｇｌｉｃ组改善更加明显（Ｐ＜０．０５，表３）。

４
０
４ＣｈｉｎＪＡｐｐｌＰｈｙｓｉｏｌ，２０２０，３６（５）
Ｔａｂ．３　Ｃｈａｎｇｅｓｏｆｃａｒｄｉａｃｗｅｉｇｈｔｉｎｄｅｘｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ（珋ｘ±ｓ）ＧｒｏｕｐｎＨＷ（ｍｇ）ＨＷＩ（％）
ＮＣ１０１２２８±８９２．８７±０．１５
ＭＣ９９３１±６７ ４．０７±０．３３
Ｇｌｉｃ１０９８３±６４２．９８±０．２７＃＃
Ｇｌｉｂ１０９４１±８３３．２２±０．３１＃＃▲
Ｆａｓ９９０７±７４３．９０±０．３５▲▲
ＨＷ：Ｈｅａｒｔｗｅｉｇｈｔ；ＨＷＩ：Ｈｅａｒｔｗｅｉｇｈｔｉｎｄｅｘ
Ｐ＜０．０１ｖｓＮＣｇｒｏｕｐ；＃＃Ｐ＜０．０５ｖｓＭＣｇｒｏｕｐ；▲Ｐ＜０．０５，▲▲Ｐ＜０．０１ｖｓＧｌｉｃｇｒｏｕｐ２．３　各组大鼠的血脂变化
与ＮＣ组相比，ＭＣ组大鼠ＨｂＡ１ｃ、ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ Ｃ水平均有显著升高，ＨＤＬ Ｃ水平降低（Ｐ＜０．０１，表４）；与ＭＣ组相比，Ｇｌｉｃ组ＨｂＡ１ｃ、ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ Ｃ水平均有明显下降，ＨＤＬ Ｃ水平也有所提升（Ｐ＜０．０１，表４），Ｇｌｉｂ组ＨｂＡ１ｃ、ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ Ｃ也有改善（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５，表４），Ｆａｓ组无明显变化。

Ｇｌｉｃ和Ｇｌｉｂ可以调控糖脂代谢，改善血脂，而Ｆａｓ不能。

Ｔａｂ．４　Ｃｈａｎｇｅｓｏｆｂｌｏｏｄｌｉｐｉｄｉｎｒａｔｓｏｆｅａｃｈｇｒｏｕｐ（珋ｘ±ｓ）
ＧｒｏｕｐｎＨｂＡ１ｃ（％）ＴＣ（ｍｍｏｌ／Ｌ）ＴＧ（ｍｍｏｌ／Ｌ）ＨＤＬ Ｃ（ｍｍｏｌ／Ｌ）ＬＤＬ Ｃ（ｍｍｏｌ／Ｌ）
ＮＣ１０６．８２±０．２５１．９２±０．１３１．１０±０．１４０．６０±０．０５１．０４±０．０８
ＭＣ９１４．５１±０．６８ ３．５１±０．２４ ２．３３±０．２５ ０．３２±０．０５ ２．５２±０．３６
Ｇｌｉｃ１０８．７５±０．２８＃＃２．５５±０．３０＃＃１．７２±０．２１＃＃０．４８±０．０９＃＃１．６４±０．２７＃＃
Ｇｌｉｂ１０１１．１３±０．６８＃＃▲▲３．０１±０．２０＃▲１．９６±０．２３＃０．３９±０．０８▲２．０３±０．３１＃▲
Ｆａｓ９１３．８０±０．７７▲▲３．３７±０．２８▲▲２．１８±０．２６▲０．３０±０．０７▲２．６０±０．３３▲▲
ＨｂＡ１ｃ：Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ；ＴＣ：Ｔｏｔａｌｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ；ＴＧ：Ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ；ＨＤＬ Ｃ：Ｈｉｇｈｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ；ＬＤＬ Ｃ：Ｌｏｗｄｅｎ ｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ
Ｐ＜０．０１ｖｓＮＣｇｒｏｕｐ；＃Ｐ＜０．０５，＃＃Ｐ＜０．０１ｖｓＭＣｇｒｏｕｐ；▲Ｐ＜０．０５，▲▲Ｐ＜０．０１ｖｓＧｌｉｃｇｒｏｕｐ
２．４　各组大鼠血清中ＳＯＤ活性及ＭＤＡ含量与ＮＣ组相比，ＭＣ组大鼠血清中ＳＯＤ活性明显降低，ＭＤＡ水平增加；与ＭＣ组相比，Ｇｌｉｃ组ＳＯＤ活性提高，氧化应激损伤物ＭＤＡ含量明显减少，Ｆａｓ组和Ｇｌｉｂ组ＳＯＤ活力也有所提高，ＭＤＡ含量减少（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５，表５）；与Ｇｌｉｃ组相比，Ｇｌｉｂ组及Ｆａｓ组ＳＯＤ活性下降，ＭＤＡ含量增加（Ｐ＜０．０１，表５），提示各治疗组中Ｇｌｉｃ组改善氧化应激最为明显。

Ｔａｂ．５　ＳＯＤａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄＭＤＡｃｏｎｔｅｎｔｉｎｓｅｒｕｍｏｆｒａｔｓｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ（珋ｘ±ｓ）
ＧｒｏｕｐｎＳＯＤ（Ｕ／ｍｌ）ＭＤＡ（μｍｏｌ／Ｌ）
ＮＣ１０２７１．５±２７．３６．２１±０．５５
ＭＣ９１６５．４±２４．３ １６．７１±２．０２
Ｇｌｉｃ１０２４４．１±２６．０＃＃８．３２±１．２５＃＃
Ｇｌｉｂ１０１９３．７±１３．２＃▲▲１１．７５±２．３６＃＃▲▲
Ｆａｓ９１８７．５±１５．１＃▲▲１３．２２±１．２７＃▲▲
ＳＯＤ：Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ；ＭＤＡ：Ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ
Ｐ＜０．０１ｖｓＮＣｇｒｏｕｐ；＃＃Ｐ＜０．０１ｖｓＭＣｇｒｏｕｐ；▲▲Ｐ＜０．０１ｖｓＧｌｉｃｇｒｏｕｐ
２．５　ＨＥ染色观察大鼠心肌组织形态学变化ＮＣ组大鼠心肌细胞排列整齐致密，着色均匀且细胞结构清晰完整，ＭＣ组大鼠心肌细胞排列紊乱，可见大量心肌细胞肌浆溶解，ＭＣ组心肌细胞发生了明显损伤。

与ＭＣ组相比，Ｇｌｉｃ组病变较轻，可见轻度的肌浆溶解，Ｆａｓ组损伤有轻微改善，而Ｇｌｉｂ组未见明显改变（图１，见彩图页Ⅱ）。

２．６　Ｍａｓｓｏｎ染色与ＴＵＮＥＬ染色
Ｍａｓｓｏｎ染色结果显示，ＮＣ组大鼠心肌组织中细胞排列整齐且细胞间质胶原纤维分布很少，染色面积少且染色较淡，ＭＣ组大鼠的心肌组织细胞分布杂乱且细胞间基质较多，被染色的面积明显增大。

与ＭＣ组相比，Ｇｌｉｃ组和Ｆａｓ组心脏组织细胞间隙减小且被染色的组织胶原也明显下降（Ｐ＜０．０１，图２，表６），Ｇｌｉｂ组纤维化有轻微改善（Ｐ＜０．０５，图２，表６）。

Ｇｌｉｃ组与Ｇｌｉｂ组相比，前者改善心肌纤维化更加明显（Ｐ＜０．０１）；Ｇｌｉｃ组与Ｆａｓ组相比，两组之间无明显差异。

提示Ｇｌｉｃ和Ｆａｓ可以明显改善纤维化，而Ｇｌｉｂ有轻微改善作用（图２，见彩图页Ⅱ）。

ＴＵＮＥＬ染色结果显示，正常细胞核呈淡蓝色，凋亡的细胞核呈棕褐色颗粒样（ＴＵＮＥＬ阳性细胞）。

ＮＣ组大鼠心肌细胞整齐且细胞核完整清晰，极少见阳性细胞，ＭＣ组中心肌细胞排列杂乱且细胞核呈褐色的阳性细胞明显增加，淡蓝色正常细胞显著减少，可见凋亡细胞数量明显上升（Ｐ＜０．０１，图３，表６）。

与ＭＣ组相比：Ｇｌｉｃ组和Ｆａｓ组阳性细胞数量明显减少（Ｐ＜０．０１），Ｇｌｉｂ组有轻微改善（Ｐ＜０．０５，图３，表６）。

Ｇｌｉｃ组与Ｇｌｉｂ组相比，Ｇｌｉｃ能显著抑制心肌细胞凋亡（Ｐ＜０．０１）；Ｇｌｉｃ组与Ｆａｓ组相比，Ｇｌｉｃ抑制细胞凋亡作用更明显（Ｐ＜０．０５，图３，见彩图页Ⅱ）。

Ｔａｂ．６　Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌｃｏｌｌａｇｅｎｖｏｌｕｍｅｆｒａｃｔｉｏｎａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｆｒａｃｔｉｏｎｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ（珋ｘ±ｓ）
ＧｒｏｕｐｎＣＶＦ（％）Ａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅ（％）ＮＣ１０６．２８±１．５３５．２０±２．０３
ＭＣ９２０．２３±４．１６ ３２．４３±７．１８
Ｇｌｉｃ１０１０．５７±３．１０＃＃１１．２７±４．１２＃＃
Ｇｌｉｂ１０１６．８７±３．７６＃▲▲２５．０１±５．７６＃▲▲
Ｆａｓ９１３．４２±３．２７＃＃１８．０３±４．１７＃＃▲
Ｐ＜０．０１ｖｓＮＣｇｒｏｕｐ；＃Ｐ＜０．０５，＃＃Ｐ＜０．０１ｖｓＭＣｇｒｏｕｐ；▲Ｐ＜０．０５，▲▲Ｐ＜０．０１ｖｓＧｌｉｃｇｒｏｕｐ
５
０
４
中国应用生理学杂志，２０２０，３６（５）
２．７　Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测心肌ＲｈｏＡ、ＲＯＣＫ１、ｅＮＯＳ、Ｂｃｌ ２和Ｂａｘ的表达
与ＮＣ组相比，ＭＣ组大鼠心肌组织中ＲｈｏＡ、ＲＯＣＫ１及Ｂａｘ蛋白水平显著升高，ｅＮＯＳ和Ｂｃｌ ２表达明显减少（Ｐ＜０．０１，图４，表７）。

给予Ｇｌｉｃ治疗之后，心肌组织中ＲｈｏＡ、ＲＯＣＫ１和Ｂａｘ蛋白明显降低，ｅＮＯＳ和Ｂｃｌ ２表达增加（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）。

给予Ｇｌｉｂ治疗之后，ｅＮＯＳ及Ｂｃｌ ２蛋白水平有轻微提高（Ｐ＜０．０５）。

给予Ｆａｓ治疗之后，ＲｈｏＡ、ＲＯＣＫ１、Ｂａｘ蛋白显著降低（Ｐ＜０．０１），ｅＮＯＳ和Ｂｃｌ ２蛋白表达升高（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５，图４）。

Ｇｌｉｃ组与Ｇｌｉｂ组相比，前者ＲｈｏＡ、ＲＯＣＫ１、Ｂａｘ蛋白表达明显下降，Ｂｃｌ ２蛋白表达升高（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）；与Ｆａｓ组相比，Ｇｌｉｃ组Ｂｃｌ ２蛋白表达上调更加明显（Ｐ＜０．０５，图４，表７）。

Ｆｉｇ．４　ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＲｈｏＡ，ＲＯＣＫ１，ｅＮＯＳ，Ｂｃｌ ２ａｎｄＢａｘｉｎｍｙｏｃａｒｄｉｕｍｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ
Ｔａｂ．７　ＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ（珋ｘ±ｓ，ｎ＝５）
ＧｒｏｕｐＲｈｏＡ／ＧＡＰＤＨＲＯＣＫ１／ＧＡＰＤＨｅＮＯＳ／ＧＡＰＤＨＢｃｌ ２／ＧＡＰＤＨＢａｘ／ＧＡＰＤＨＮＣ０．２０２±０．０１８０．２２６±０．０２００．３５４±０．０１５０．９２３±０．０６６０．３２０±０．０４４ＭＣ０．４３０±０．０５３ ０．４６２±０．０５１ ０．２５３±０．０２１ ０．４５１±０．０６３ ０．６５７±０．０５９ Ｇｌｉｃ０．３０１±０．０３７＃＃０．３１３±０．０２９＃＃０．３３５±０．０２７＃０．７５５±０．０４９＃＃０．４８５±０．０５１＃＃Ｇｌｉｂ０．４０３±０．０４５▲▲０．４４２±０．０３４▲▲０．２８９±０．０２２＃０．５６６±０．０５３＃▲▲０．５７０±０．０５４▲Ｆａｓ０．２６１±０．０２４＃＃０．２９１±０．０２７＃＃０．３０２±０．０２５＃０．６３６±０．０５６＃＃▲０．４０８±０．０４６＃＃ Ｐ＜０．０１ｖｓＮＣｇｒｏｕｐ；＃Ｐ＜０．０５，＃＃Ｐ＜０．０１ｖｓＭＣｇｒｏｕｐ；▲Ｐ＜０．０５，▲▲Ｐ＜０．０１ｖｓＧｌｉｃｇｒｏｕｐ
３　讨论
糖尿病心肌病（ＤＣＭ）作为糖尿病严重的并发症之一，早在１９７２年就曾提出，之后广泛运用于临床医学研究［１０］。

ＤＣＭ的主要病理表现为心肌胶原纤维的大量沉积和心肌细胞异常凋亡，纤维化和凋亡共同作用导致心脏收缩功能障碍，最终引发心力衰竭。

为了评价Ｇｌｉｃ减轻氧化应激和抑制ＲｈｏＡ／ＲＯＣＫ信号通路减轻心肌损伤的作用，并与另一种磺酰脲类降糖药Ｇｌｉｂ和Ｒｈｏ激酶抑制剂Ｆａｓ相比较，本实验通过采用高糖高脂饲料合并ＳＴＺ建立糖尿病大鼠模型。

ＭＣ组大鼠心脏质量指数增加，通过ＨＥ染色发现心肌细胞排列紊乱且细胞发生变形，可见心肌细胞肌浆溶解，Ｍａｓｓｏｎ染色显示心肌细胞排列紊乱且被染色的阳性面积明显增加，ＴＵＮＥＬ染色显示ＭＣ组大鼠心肌细胞大量凋亡，可以看出ＭＣ组心肌损伤严重，这些符合ＤＣＭ的病理特征。

Ｒｈｏ蛋白属于小Ｇ蛋白Ｒａｓ超家族，Ｒｈｏ激酶（ＲｈｏＫｉｎａｓｅ，ＲＯＣＫ）是ＲｈｏＡ的效应子，同属于丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶家族成员，ＲＯＣＫ１蛋白主要在非神经中组织中表达，并在心血管功能中起调节作用，ＲｈｏＡ蛋白参与细胞的多种生理反应，当ＲｈｏＡ被相关受体激活时，可以调控细胞生长与凋亡以及胶原纤维的生成［１１ １２］。

ｅＮＯＳ作为内皮型一氧化氮合酶是ＮＯ的主要生理来源，可以减少血小板聚集，增强心血管抗氧化的能力，维持正常的通透性，糖尿病大鼠缺乏ｅＮＯＳ时会导致心功能紊乱和心肌细胞的凋亡，因此ｅＮＯＳ在调节心血管功能中起到重要作用［１３ １４］。

当ＲｈｏＡ被激活时，下游ＲＯＣＫ蛋白被活化，这种活化能够降低ｅＮＯＳ的ｍＲＮＡ稳定性，最终导致ｅＮＯＳ的表达减少［１５］。

ＲｈｏＡ／ＲＯＣＫ通路可以通过多种途径参与ＤＣＭ的发生与发展中，在高糖环境下，ＲｈｏＡ／ＲＯＣＫ通路被激活，心肌中一氧化氮合酶（ＮＯＳ）生成受阻，导致糖尿病大鼠的心肌抗氧化能力下降，直接或间接损伤心肌组织［１６］。

ＲｈｏＡ／ＲＯＣＫ信号通路还可以通过调控ＪＮＫ（ｃ ｊｕｎＮ ｔｅｒ ｍｉｎａｌＫｉｎａｓｅ）信号通路，增加Ｂａｘ蛋白的表达，从而诱导心肌细胞凋亡增加［１７］。

高糖环境下，ＲｈｏＡ／ＲＯＣＫ通路异常活化可以激活并上调核因子κＢ（ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｋａｐｐａＢ，ＮＦ κＢ）的表达，并激活转化生长因子β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒβ１，ＴＧＦβ１）／Ｓｍａｄ信号通路，最终导致纤维化的形成［１８］。

此外，氧化应激也是导致糖尿病大鼠心肌损伤和细胞凋亡加重的原因之一，长期的高血糖状态会损伤线粒体，增加活性氧的生成，并诱导体内抗氧化酶的糖基化，进一步加重体内抗氧化酶活性的下降甚至消失，心肌细胞的抗氧化能力下降，活性氧簇（ＲＯＳ）直接损伤心肌细胞并导致细胞死亡［１９］。

６
０
４ＣｈｉｎＪＡｐｐｌＰｈｙｓｉｏｌ，２０２０，３６（５）
Ｇｌｉｃ作为第二代磺脲类降糖药物，广泛应用于ＩＩ型糖尿病的临床治疗。

糖尿病大鼠经Ｇｌｉｃ干预后，大鼠ＦＢＧ、ＨＷＩ、ＨｂＡ１ｃ、ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ Ｃ显著降低，ＢＭ、ＨＤＬ Ｃ水平升高，大鼠血清中ＭＤＡ含量降低，ＳＯＤ活性升高，说明Ｇｌｉｃ可以改善糖尿病大鼠的氧化应激，增强心肌抗氧化能力。

通过纤维化染色显示，模型组大鼠发生明显的心肌纤维化，而给予Ｇｌｉｃ可明显改善糖尿病大鼠的心肌纤维化。

通过ＴＵＮＥＬ染色可以看出，Ｇｌｉｃ治疗组心肌细胞凋亡数量显著下降，这一结果与本实验Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测Ｂａｘ和Ｂｃｌ ２蛋白表达结果一致，Ｇｌｉｃ组上调Ｂｃｌ ２蛋白表达，降低Ｂａｘ蛋白水平，Ｇｌｉｃ可以使糖尿病大鼠心肌组织中ＲｈｏＡ及ＲＯＣＫ１蛋白水平明显减少，ｅＮＯＳ表达上升。

综上所述，糖尿病会造成大鼠心肌损伤，促使大鼠心肌ＲｈｏＡ／ＲＯＣＫ信号通路信号激活，导致糖尿病大鼠发生心肌纤维化和细胞凋亡，进一步加重糖尿病大鼠的心肌损伤。

Ｇｌｉｃ可以通过降低血糖，改善心肌纤维化，缓解糖尿病所致的心肌损伤，还可以改善糖尿病大鼠氧化应激，调控ＲｈｏＡ／ＲＯＣＫ１／ｅＮＯＳ信号通路，减少细胞凋亡，从而对心肌起到保护作用。

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