模块二 培养基的配制
培养基的配制-PPT
摆斜面：
◇ 成扎摆放，不需将每支试管单独摆放 ◇ 最好待培养基冷至60℃时摆斜面，以免形 成大量冷凝水
无菌检查：
将灭菌的培养基放在37℃温箱中培养24-48小 时，以检查灭菌是否彻底。
二 消毒与灭菌
实验目的
1、了解掌握常用消毒、灭菌方法的原理。 2、学习掌握干热灭菌和压力蒸汽灭菌操作步骤。
实验原理 干热法
压力蒸汽灭菌
实验内容及实验步骤 (continued)
1、检查水位，放入物品。
2、加盖、拧紧 对称用力 3、加热升温 4、排冷空气 等压力升至0.5kg/cm2时，打开排气 阀，排净冷空气。
5、升温、保压 等锅内压力升至所需数值（通常为
1.03kg/cm2），保持压力20-30分钟。
6、降压、取物
硝酸钾
1g
磷酸氢二钾 0.5 g
NaCl
0.5 g
硫酸镁
0.5g
硫酸亚铁 0.01克
琼脂
15-20g
水
ml
pH
7.2-7.4
马铃薯蔗糖琼脂培养基：
把马铃薯洗净去皮，取200克切成小 块，加水1000毫升，煮沸半小时后， 补足水分。在滤液中加入15克琼脂， 煮沸溶解后加蔗糖20克补足水分 pH值调到7.2～7.4
99 mL无菌水 装三角瓶 6 瓶 9 mL无菌水 试管装 12 支 1 mL 吸管 15 支 牛肉膏蛋白胨固体培养基 斜面 5支
牛肉膏蛋白胨培养基配方：
牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水 pH
3g 10g 5g 15-20g 1000ml 7.4-7.6
淀粉琼脂培养基（高氏培养基） ：
可溶性淀粉 20 g
分装：
操作步骤 (continued)
培养基的配置方法
培养基的配置方法
1. 准备所需的化学试剂和溶剂：如氨基酸、葡萄糖、盐类、维生素、磷酸盐缓冲液等。
2. 将所需化学试剂按照配方比例称量或称取。
3. 将溶剂（通常为蒸馏水）加热至适当温度，然后将化学试剂逐一加入，并充分搅拌使其充分溶解。
4. 调节溶液的pH 值至合适的范围，通常为7.0。
5. 滤过溶液以去除悬浮物和异物。
6. 将溶液分装至培养皿或试管中。
7. 最后，对培养基进行高温灭菌，以杀灭可能存在的微生物污染。
需要注意的是，不同生物、不同细胞株所需的培养基成分、比例和条件可能会有所不同，因此在配置培养基时需要根据具体需求进行调整。
培养基 配制方法
培养基配制方法
要配制培养基，首先需要准备以下原料和设备：蒸馏水、琼脂、葡萄糖、氨基酸、无机盐、pH计、计量瓶、培养皿、加热器等。
1. 准备培养基的配方，包括所需的成分及比例。
2. 用计量瓶将适量的蒸馏水加入容器中。
3. 将容器中的蒸馏水加热至将琼脂完全溶解。
4. 将琼脂溶液冷却至50-60摄氏度后，加入葡萄糖、氨基酸、无机盐等其他成分。
5. 使用pH计检测培养基的pH值，根据需要进行调整。
6. 将培养基倒入培养皿中，并在倒入后迅速将培养皿密封。
7. 将培养皿放置在加热器上进行高温高压灭菌。
8. 灭菌后，将培养基冷却至室温，即可用于培养细菌。
以上就是培养基的配制方法，需要严格按照操作步骤和配方进行。
配制过程中要注意卫生和灭菌，确保培养基的质量和无菌性。
各种培养基配方范文
各种培养基配方范文以下是一些常见的培养基配方：1.LB培养基配方：-水：1000mL-蛋白胨：10g-酵母提取物：5g-NaCl：10g*将以上成分溶解在水中，并调节pH至7.0。
加热至沸腾，搅拌溶解完全后，用纸质过滤器过滤消毒，装入培养瓶中。
2.TSB培养基配方：-水：1000mL-蛋白胨：17g-酵母提取物：3g-葡萄糖：2.5g-NaCl：5g*将以上成分溶解在水中，并调节pH至7.0。
加热至沸腾，搅拌溶解完全后，用纸质过滤器过滤消毒，装入培养瓶中。
3.M9盐基培养基配方：-水：1000mL-Na2HPO4：6g-KH2PO4：3g-NaCl：0.5g-NH4Cl：1g*将以上成分溶解在水中，并调节pH至7.0。
加热至沸腾，搅拌溶解完全后，用纸质过滤器过滤消毒，装入培养瓶中。
4. MacConkey琼脂培养基配方：-水：1000mL-蛋白胨：17g-胆盐混合物：1.5g-红薯提取物：10g-中性红：0.03g-结晶紫：0.001g-蔗糖：10g-氯化钠：5g*将以上成分溶解在水中，并调节pH至7.1、加热至沸腾，搅拌溶解完全后，用纸质过滤器过滤消毒，装入培养瓶中。
5. Sabouraud琼脂培养基配方：-水：1000mL-葡萄糖：40g-氯化钠：5g-氯化钾：1g-磷酸二氢钾：1g-氯化镁：0.5g-氯化钙：0.01g-硫酸亚铁：0.5g-红曲霉素：0.05g*将以上成分溶解在水中，并调节pH至5.6、加热至沸腾，搅拌溶解完全后，用纸质过滤器过滤消毒，装入培养瓶中。
以上是一些常见的培养基配方，不同的微生物或细胞需要不同的培养基来提供适合它们生长和繁殖的营养条件。
因此，在实际使用时，需要根据具体需求和文献资料进行配方的选择和调整。
培养基的配制过程
培养基的配制过程
培养基的配制过程
培养基是实验中常用的培养材料，其质量和性能对试验数据的准确性有很大的影响。
合理配制培养基，是保证实验质量和可靠性的重要一步。
以下分步介绍培养基配制过程。
第一步，准备原料。
准备所需培养基原料，包括氮来源、碳来源、催化剂、维生素、矿物质和无机盐。
这些原料及添加量应按照培养基配方要求准备好。
第二步，蒸馏水灭菌。
所有材料，包括悬浮成分在内的所有培养基，都应使用蒸馏水加热灭菌。
第三步，全部成分混合。
将所有成分混合搅拌均匀，直到培养基完全溶解，形成无色透明液体。
第四步，灭菌处理。
将混合后的培养基放入灭菌器中，以121℃、
15psi的压力对培养基进行30-60分钟的高温杀菌处理。
第五步，检测培养基。
检测培养基的 pH 值，通常可用 pH 计或试纸检测。
第六步，培养基存储。
将灭菌后的培养基储存在4℃的冰箱内，以避免受到可能的污染。
以上就是培养基的配制过程，它可以有效地确保培养基的质量和可靠
性，从而确保实验效果的准确性。
正确的配制培养基非常重要，只有这样才能确保实验的可靠性和准确性。
培养基配制的基本过程
培养基配制的基本过程1、配制溶液向容器内加入所需水量的一部分,根据培育基的配方,称取各种原料,依次加入使其溶解,最终补足所需水分.对蛋白胨、肉膏等物质,需加热溶解,加热过程所蒸发的水分,应在全部原料溶解后加水补足.配制固体培育基时,先将上述已配好的液体培育基煮沸,再将称好的琼脂加入,连续加热至完全溶化.并不断搅拌,以免琼脂糊底烧焦.2、调整pH值用pH试纸(或pH电位计、氢离子浓度比色计)测试培育基的pH值,如不符合需要,可用10%HCl或10%NaOH进行调整,直到调整到配方要求的pH值为止.3、过滤用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培育基过滤.用纱布过滤时,最好折叠成六层,用滤纸过滤时,可将滤纸折叠成瓦棱形,铺在漏斗上过滤.4、分装已过滤的培育基应进行分装.假如要制作斜面培育基,须将培育基分装于试管中.假如要制作平板培育基或液体、半固体培育基,则须将培育基分装于锥形瓶内.分装时,一手捏松弹簧夹,使培育基流出,另一只手握住几支试管或锥形瓶,依次接取培育基.分装时,留意不要使培育基粘附管口或瓶口,以免浸湿棉塞引起杂菌污染.装入试管的培育基量,视试管和锥形瓶的大小及需要而定.一般制作斜面培育基时,每只15150毫米的试管,约装3～4毫升(1/4～1/3试管高度),如制作深层培育基,每只20230毫米的试管约装12～15毫升.每只锥形瓶装入的培育基,一般以其容积的一半为宜.5、加棉塞分装完毕后,需要用棉塞堵住管口或瓶口.堵棉塞的主要目的是过滤空气,避开污染.棉塞应采纳一般新奇、干燥的棉花制作,不要用脱脂棉,以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用.制作棉塞时,要依据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度,揪取手掌心大小一块,铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中,用右手食指插入棉花中部,同时左手食指与姆指稍稍紧握,就会形成1个长棒形的棉塞.棉塞作成后,应快速塞入管口或瓶口中,棉塞应紧贴内壁不留缝隙,以防空气中微生物沿皱折侵入.棉塞不要过紧过松,塞好后,以手提棉塞、管、瓶不下落为合适.棉塞的2/3应在管内或瓶内,上端露出少许棉花便于拔取.塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札,预备灭菌.6、制作斜面培育基和平板培育基培育基灭菌后,如制作斜面培育基和平板培育基,须趁培育基未凝固时进行.(1)制作斜面培育基.在试验台上放1支长0.5～1米左右的木条,厚度为1厘米左右.将试管头部枕在木条上,使管内培育基自然倾斜,凝固后即成斜面培育基.(2)制作平板培育基.将刚刚灭过菌的盛有培育基的锥形瓶和培育皿放在试验台上,点燃酒精灯,右手托起锥形瓶瓶底,左手拔下棉塞,将瓶口在酒精灯上稍加灼烧,左手打开培育皿盖,右手快速将培育基倒入培育皿中,每皿约倒入10毫升,以铺满皿底为度.铺放培育基后放置15分钟左右,待培育基凝固后,再5个培育皿一叠,倒置过来,平放在恒温箱里,24小时后检查,如培育基末长杂菌,即可用来培育微生物.。
培养基及配制模板
2）微量元素 在微量元素中，铁的使用最大，铁 是一些氧化酶的组成成分。同时又是叶 绿素形成的必要条件。 由于培养基的pH较高，所以培养中 几乎都使用不易分解的乙二胺四乙酸铁 这种鳌合物来防止铁的沉淀。
• 硼与蛋白质合成、糖类运输有着密切的关 系； • 铜是某些氧化酶的成分，能够促进离体根 的生长； • 锰参与植物的光合、呼吸代谢； • 钼参与氮素的代谢； • 氯是光合作用水光解的活化剂。 • 微量元素的主要作用是作为酶的辅助 因子或激活剂参与代谢的调节。
1 水和药品
• 水是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过 程的介质和溶媒。它是生命活动过程中不可缺少 的物质。 • 配制培养基母液时要用蒸馏水或重蒸馏水，以保 持母液及培养基成分的精确性，防止贮藏过程发 霉变质。 • 大规模生产时可用自来水。 • 但研究上尽量用蒸馏水，以防成分的变化引起不 良效果。
A 无机大量母液(扩大10倍配1L )
硝酸钾 硝酸铵 硫酸镁 磷酸二氢钾 氯化钙
托盘天平 百分电子天平
成分
称量工具
注意：无机大量母液中的各种物质在混合过程中 有些离子易产生沉淀，应使每种物质先充分溶解， 再进行混合，而且钙盐最后缓慢加入进去。
B 无机微量母液（扩大100倍配1000ml）
硼酸，硫酸铜， 硫酸锰，硫酸锌， 氯化钴，钼酸钠， 碘化钾
成分
称量工具
万分电子天平
C 铁盐（扩大100倍1000ml）
铁盐
硫酸亚铁， Na2-EDTA
注意：铁盐选用硫酸亚铁而不用硫酸铁，是因为它 溶解后易产生红色的氢氧化铁沉淀。
在装有800ml 蒸馏水的烧杯中加入2粒氢氧化钠。溶解后 加入3.73g EDTA-Na2，加热使其全部溶解，然后边搅拌边慢 慢加入2.78g FeSO4.7H2O直至全部溶解，冷却后定容至 1000ml，置于冰箱中备用。
培养基配方及配制方法
培养基配方及配制方法培养基是一种用于寄养和培养细胞、微生物、组织等生物体的基质。
其配方的选择和配制方法对于不同的生物体和研究目的有很大的差异。
以下是一般常用的培养基配方及简单的配制方法：1. LB培养基（Luria-Bertani）LB培养基是常见的用于大肠杆菌等细菌的培养基，其配方包括：- 1% 蛋白胨（tryptone）: 添加营养源和能量- 0.5% 酵母粉（yeast extract）: 提供维生素和生长因子-1%NaCl（氯化钠）:调节渗透压-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积配制方法：将蛋白胨、酵母粉和NaCl加入蒸馏水中，调整pH至7.0，将混合液体加热至溶解，过滤杂质，如需固化则加入1.5%的琼脂。
2. YPD培养基（Yeast extract-Peptone-Dextrose）YPD培养基常用于酵母菌的培养，其配方包括：- 1% 酵母提取物（yeast extract）: 提供维生素和生长因子- 2% 蛋白胨（peptone）: 为细菌提供碳源和能量- 2% 葡萄糖（dextrose）: 为细菌提供碳源和能量-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积配制方法：将酵母提取物、蛋白胨和葡萄糖加入蒸馏水中，调整pH至7.0，将混合液体加热至溶解，过滤杂质，如需固化则加入2%的琼脂。
3. DMEM培养基（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）DMEM培养基是常用的哺乳动物细胞培养基，其配方包括：-10%胎牛血清（FBS）:提供生长因子和营养物质- 1% 青霉素-链霉素溶液（Penicillin-Streptomycin Solution）: 防止细菌污染- 1% L-谷氨酰胺（L-Glutamine）: 提供细胞代谢所需的基础物质-DMEM基础培养液:包括氨基酸、维生素等成分-蒸馏水：使混合液体稀释至所需体积配制方法：将胎牛血清、青霉素-链霉素溶液、L-谷氨酰胺和DMEM基础培养液加入蒸馏水中，调整pH值至7.4，混合均匀即可。
实验室常用培养基配方
实验室常用培养基配方1. 营养琼脂培养基（Nutrient Agar）营养琼脂培养基是最为常用的一种培养基，用于微生物的一般培养、分离和鉴定，其配方如下：-水：1000mL-肉浸膏或胨：三到五克-水解酪蛋白：五克-氯化钠：五克-琼脂：十五克2. 培养基ONE（BHI Agar）培养基ONE用于灭菌后的微生物收集、保存和复苏，配方如下：-砂糖：十五克-胨：二十克-水：1000mL-酵母膏：二十克-酵母蛋白胨：十克-溶血素：十克-十％NaCl：五百毫升-甘油：百毫升3. 霍乱弧菌选择性琼脂培养基（TCBS Agar）TCBS Agar用于霍乱弧菌的分离和检测，配方如下：-水：1000mL-TCBS粉：一百克4. MacConkey琼脂培养基（MacConkey Agar）MacConkey琼脂培养基是一种选择性琼脂培养基，用于大肠杆菌的分离和检测，配方如下：-水：1000mL-肉浸膏：十七克-水解酪蛋白：十五克-氯化钠：五克-紫蘑菇素：六十毫克-琼脂：十五克5. Sabouraud琼脂培养基（Sabouraud Agar）Sabouraud琼脂培养基用于真菌的分离和培养-水：1000mL-葡萄糖：四十克-琼脂：十五克-氯化钠：五克-氯已二维硫酸钾：二十克这些仅仅是一些常见的培养基配方，实验室常根据不同微生物的要求而有所调整。
此外，还有许多特殊的培养基用于特殊微生物的培养和分离，如MRS培养基用于乳酸菌、EC培养基用于大肠杆菌O157:H7等。
在使用培养基时，需要注意权威的文献和生产厂家的指导。
培养基配方
培养基配方一、哺乳动物培养基1、DMEM培养基DMEM培养基低糖(干粉) D2902 10X1L 含L-谷氨酰胺和1000 mg/L的葡萄糖。
不含酚红和和碳酸氢钠。
50L每升培养基含10.0g干粉。
配制时每升加3.7g碳酸氢钠。
DMEM培养基低糖（干粉）D5523 10×1L 含L-谷氨酰胺和1000 mg/L葡萄糖，不含碳酸氢钠。
2×5L每升培养基含10.0g干粉。
配制时每升加3.7g碳酸氢钠。
5L50L DMEM培养基低糖（干粉）D5030 10×1L 不含L-谷氨酰胺，葡萄糖，酚红，丙酮酸钠和碳酸氢钠。
10L每升培养基含8.3g干粉。
配制时每升加1.0g葡萄糖，0.584g 50L L-谷氨酰胺和3.7g碳酸氢钠。
DMEM培养基低糖（干粉）D5280 10×1L 可以高压消毒。
10L含1000 mg/L的葡萄糖。
不含L-谷氨酰胺和碳酸氢钠。
50L每升培养基含9.6g干粉。
配制时每升加0.584g L-谷氨酰胺和3.7g碳酸氢钠。
DMEM培养基低糖（液体）D5546 500ML 含有1000 mg/L葡萄糖和碳酸氢钠，不含L-谷氨酰胺。
用盐6×500ML 酸维生素B6代替盐酸吡哆醛。
使用前每升加入0.584g L-谷氨酰胺。
24×500ML 1L6×1L DMEM培养基低糖（液体）D5921 100ML 含有1000 mg/L葡萄糖和碳酸氢钠，不含L-谷氨酰胺和酚红。
500ML 用盐酸维生素B6代替盐酸吡哆醛。
使用前每升加入0.584g L-谷氨酰胺。
6×500MLDMEM培养基低糖（液体）D6046 100ML 含有1000 mg/L葡萄糖，L-谷氨酰胺和碳酸氢钠。
用盐酸维500ML 生素B6代替盐酸吡哆醛。
6×500ML1LDMEM培养基低糖（液体）D2429 100ML 1×的培养基含有1000 mg/L的葡萄糖。
培养基的成分和配制方法
培养基的成分和配制方法培养基的成分和配制方法1.营养肉汤培养基牛肉膏 0.3克蛋白胨 1.0克NaCl 0.5克水 100毫升pH 7.0～7.2在烧杯中加水，称取牛肉膏、蛋白胨和NaCl，加热溶化后，调节pH值至7.0～7.2。
分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌即成。
常用于培养细菌。
2.营养琼脂培养基在营养肉汤培养基中增加20克琼脂即成。
常用于培养细菌。
3.肉汁蛋白胨液体培养基牛肉 500克蛋白胨 10克NaCl 5克pH 7.1～7.2取新鲜牛肉500克，去净脂肪、筋腱后，绞碎或剁碎，加水1000毫升浸泡，15℃下放置12小时或50℃下放置半小时。
用纱布将肉汁过滤，补足失水。
向肉汁中加入蛋白胨和食盐。
将肉汁加热，放入苏打（碳酸钠）至红色，调整pH值。
分装，高压蒸汽灭菌。
将上述已灭菌的培养基用棉花滤去凝集的蛋白质，制成液体培养基，如需制成固体培养基，可在每100毫升液体中加入2克琼脂，加热溶化后，分装，再次进行高压蒸汽灭菌。
常用于培养细菌。
4.高氏一号培养基（淀粉琼脂培养基）可溶性淀粉 2克K2HPO4 0.05克MgSO4·7H2O 0.05克KNO3 0.1克NaCl 0.05克FeSO4 0.001克琼脂 2克水 100毫升pH 7.2～7.4在烧杯中加水95毫升，加热至沸腾，取可溶性溶粉2克，用5毫升水调成糊状，倒入沸水中和匀。
再称取其它药品，陆续加入烧杯内（待一种药品溶解后，再加入第二种药品）。
待全部药品溶解后，停止加热，补足失水，调pH值至7.2～7.4。
分装后，高压蒸汽灭菌。
本培养基常用于培养放线菌。
5.马铃薯蔗糖培养基马铃薯 200克蔗糖 10克琼脂 20克水 1000毫升自然pH称取200克马铃薯片，加水1000毫升，煮沸半小时，用纱布过滤，补足失水。
在上述滤汁中加入10克蔗糖、20克琼脂，加热使琼脂熔化。
分装后，高压蒸汽灭菌。
常用于培养酵母菌。
6.麦芽汁培养基将从啤酒厂买来加有啤酒花的麦芽汁，装入锥形瓶中，加塞高压蒸汽灭菌。
实验二常用基础培养基的制备
实验二常用基础培养基的制备同学们大家好欢迎来到微生物检验课堂今天我们做的实验是常用基础培养基的制备。
这节课我们一起来学习三种不同的培养基制备的操作;好那我们开始，这节课的实验原理是：培养基是人工合成的一种混合营养料，用以分离细菌。
基础培养基中含有大多数常见菌生长繁殖所需要的营养物质，并可制成液体、半固体、固体三种不同的性状。
实验项目是细菌培养基的制备，最常见的培养基包括：肉汤培养基的制备普通琼脂平板培养基的制备半固体斜面培养基的制备等三种方法实验目的是：掌握培养基制备方法实验材料有：牛肉膏、蛋白胨，氯化钠、蒸馏水琼脂粉，10%NaOH pH试纸、三角烧瓶量筒，天平酒精灯、等培养基的制备步骤：配料→熔化→测定pH→滤过+分装→灭菌→备用。
肉汤培养基:取1000ml蒸馏水,加人牛肉膏3-5g,蛋白胨10g,氯化钠5g,混合加热溶解，调整pH至7.4-7.6,分装于烧瓶中，可供一般细菌生长。
(2) 普通琼脂培养基:取1000ml肉汤培养基，加入2% ~3%琼脂，加热溶化，过滤,分装于烧瓶或试管中。
(3)半固体培养基:取1000ml肉汤培养基，加人3-5g琼脂，分装于烧瓶或试管中，主要用于保存菌种或观察细菌动力三种培养基分装好后均在全自动高压灭菌器中高压。
高压灭菌的主要方法：首先把制备好的培养基放入灭菌器里，把盖子盖好，温度调制121.3摄氏度，时间调制30分钟，开始高压灭菌，好，灭菌时间到了，取出培养基，待冷却后即可以使用。
利用PPT照片展示结果：一下就是三种培养基制备好后的形态。
注意：通过今天的实验我们已经学到了固体培养基，液体培养基，半固体培养基等三种不同培养基的制备，下课后希望大家可以分组讨论本次实验收获。
好同学们，今天的课程就讲到这里，下节课再见。
S2实验二 培养基及其配制(理论)
实验二培养基及其配制（理论）一、培养基成分及作用培养基（culture medium）是植物组织培养的物质基础，也是植物组织培养能否获得成功的重要因素之一。
培养基成分对离体培养植物的生长发育起调控作用。
选择合适的培养基并掌握正确的制备方法是组织培养成功的前提。
（一）植物必需的营养元素植物体内至少含有几十种化学元素，其中大部分元素在植物体内起到一定的生理作用：1、组成各种化合物，参与机体的建造，成为结构物质；2、构成一些特殊的胜利活性物质，参与活跃的新陈代谢；3、这些元素之间相互协调，以维持离子浓度平衡、胶体稳定、电荷平衡等点化学方面的作用；4、在发育方面，特定的元素影响植物的形态发生和组织、器官建成。
Arnon和Stout（1939）提出的确定植物必需营养元素的3个标准：A、缺乏该元素，植物生育发生障碍，不能完成其生活史B、缺乏该元素，就表现为专一的病症，且这种缺素症可以用补充改元素来预防和恢复C、改元素在植物营养生理上表现直接的效果，而不是由于土壤的物理、化学、微生物条件的改进而产生的间接效果。
国内外公认的高等植物所必需的营养元素有16（17）种：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S、Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl、（Ni）在植物中含量差别很大，同一元素在植物不同时期、不同条件下含量也不同。
根据植物体内含量多少，可把这些元素分为：大量营养元素：占干物质重量的0.1%以上；C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S等9种。
微量营养元素：占干物质重量的0.1%以下有的只含0.1mg/kg。
Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl等7种。
（二）培养基营养成分及作用培养基是外植体生长的土壤，它所含有的不同营养元素直接影响着培养材料的生长发育。
培养基中的营养元素以有机物和无机物两类形式存在，绝大多数营养元素以无机物的形式存在。
按照国际植物生理协会的建议：所需浓度> 0.5mmol/L的元素为大量元素所需浓度< 0.5mmol/L的元素为微量元素1、大量元素N是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分，在植物生命活动中占有重要的位置，又称生命元素。
mfc培养基配方
mfc培养基配方
MFC（Microbial Fuel Cell，微生物燃料电池）是一种将有机物质转化为电能的生物电化学设备。
MFC培养基的配方可以根
据实验需要和研究对象的不同而有所变化。
以下是一种常见的MFC培养基配方：
1. 硝酸铵（NH4NO3）：0.5 g/L
2. 磷酸二氢钠（NaH2PO4）：0.5 g/L
3. 硫酸镁（MgSO4·7H2O）：0.2 g/L
4. 氯化钙（CaCl2）：0.02 g/L
5. 氨水（NH4OH）：适量（用于调节pH值）
6. 溶氧饱和度：5-10%
此外，还可根据需求添加一些辅助营养物质，如维生素、微量元素等。
同时，不同研究中也可能采用其他特定的培养基配方。
因此，在进行MFC研究时，一般需要根据具体实验要求来选
择适合的培养基配方。
培养基的配制方法
培养基的配制方法嘿，朋友们！今天咱就来讲讲培养基的配制方法。
这培养基啊，就好比是微生物的“豪华大餐”，得精心准备才行呢！先来说说材料吧，就像做菜得有食材一样。
水那肯定是少不了的，这可是基础中的基础呀。
然后就是各种各样的营养物质啦，什么蛋白胨啊、牛肉膏啊、氯化钠啊等等。
这些东西就像是给微生物准备的美味佳肴，让它们能茁壮成长。
接着就是配制的过程啦。
你得把这些材料按照一定的比例放到容器里，这可不能马虎，多一点少一点都可能影响效果呢！这就好像你做饭放盐，放多了咸死，放少了没味，得恰到好处才行。
然后就是搅拌啦，把它们充分混合均匀，让每一滴“大餐”都营养丰富。
哎呀，你想想，那些微生物在你精心配制的培养基里，那得多开心呀！就像我们吃到了一顿特别美味的饭菜一样。
在配制的过程中，可一定要注意卫生哦！不能让杂菌混进去，不然就像一锅好汤里掉进了一只苍蝇，那可就全毁啦！所以要把容器啊、工具啊都好好消毒。
还有哦，不同的微生物对培养基的要求可不一样呢！就像有的人爱吃甜的，有的人爱吃辣的。
你得根据你要培养的微生物来调整配方和条件。
比如说细菌吧，它们可能就喜欢比较丰富的营养，而真菌可能就需要一些特殊的成分。
这就好比给小朋友准备食物和给大人准备食物是不一样的道理。
等你把培养基配制好啦，就可以把微生物接种进去啦。
看着它们在里面生长、繁殖，你是不是会有一种成就感呢？就像看着自己种的花慢慢开花一样。
总之呢，配制培养基可不是一件简单的事儿，但也绝对不是什么难到登天的事儿。
只要你用心去做，肯定能配制出完美的培养基来。
相信我，当你看到那些微生物在你配制的培养基里欢快地生长时，你会觉得一切都值了！所以，别犹豫啦，赶紧动手试试吧！。
培养基配制方法
培养基配制方法1.1了解并掌握培养基的配制、分装方法1.2掌握各种实验室灭菌方法及技术。
2原理培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。
由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。
另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。
琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。
加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固。
但多次反复融化，其凝固性降低。
任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。
一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。
3材料3.1器皿及材料天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、分装架、移液管及移液管筒、培养皿及培养皿盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、灭菌锅、干燥箱。
3.2药品试剂蛋白胨、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、琼脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麦芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽计、磷酸铵、5%NaOH溶液、5%HCl溶液。
4流程称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板。
5步骤5.1培养基的制备5.1.1称量药品根据培养基配方依次准确称取各种药品，放入适当大小的烧杯中，琼脂不要加入。
蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。
5.1.2溶解用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中，在放有石棉网的电炉上小火加热，并用玻棒搅拌，以防液体溢出。
待各种药品完全溶解后，停止加热，补足水分。
如果配方中有淀粉，则先将淀粉用少量冷水调成糊状，并在火上加热搅拌，然后加足水分及其它原料，待完全溶化后，补足水分。
各种培养基配方模板
146种培养基配方1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）牛肉膏3g蛋白胨5g氯化钠10g琼脂15~20gpH 7.0~7.2水1000mL2、2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用）可溶性淀粉20g硝酸钾1g氯化钠0.5g磷酸氢二钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g琼脂20g水1000mLpH 7.2～7.4配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。
121℃灭菌20min。
查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用）硝酸钠2g磷酸氢二钾1g氯化钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g蔗糖30g琼脂15~20g水1000mLpH 自然121℃灭菌20min。
4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用）葡萄糖10g蛋白胨5g磷酸二氢钾1g七水合硫酸镁0.5g1/3000孟加拉红100mL（rose bengal，玫瑰红水溶液）琼脂15—20gpH 自然蒸馏水800mL112℃灭菌30min。
临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。
5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用）马铃薯200g蔗糖（或葡萄糖）20g琼脂15—20gpH 自然培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。
121℃灭菌30min。
6、麦芽汁琼脂培养基培养基的配制：(1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。
(2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。
加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
(3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
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3.有机化合物
a.碳水化合物 选用种类：蔗糖（或葡萄糖、果糖）等。 蔗糖浓度：2－3%，胚培养为4－15% 高压灭菌部分糖会分解。 大生产时可用白砂糖。
b.维 生 素
种类： VB1、 VB6、 VB3、Vc 浓度：0.1－1.0mg/L 作用：
VB1 [盐酸硫胺素] 促愈伤组织产生，提 高活力。
第一节 培养基的种类
一、培养基的种类
培养基有几十种，根据不同植物和部 位选用不同的培养基。
培养基的产生最早是Knop（1681）， 以后根据不同目的进行改良产生了多种培 养基。White培养基在40年代用得较多，现 在还常用。而到60和70年代则大多采用MS 等高浓度培养基，可以保证培养材料对营 养的需要，并能生长快、分化快，且由于 浓度高，在配制、消毒过程中某些成分有 些出入，也不致影响培养基的离子平衡。
第一节 培养基的种类
培养基是植物组织培养的重要基质。 在离体培养条件下，不同种植物的组织对 营养有不同的要求，甚至同一种植物不同 部位的组织对营养的要求也不相同，只有 满足了它们各自的特殊要求，它们才能很 好地生长。因此，没有一种培养基能够适 合一切类型的植物组织或器官，在建立一 项新的培养系统时，首先必须找到一合适 的培养基，培养才有可能成功。
（3）细胞分裂素（CTK） A.种类：6－BA KT ZT B.作用：诱导不定芽分化和茎、苗增殖。 C.浓度：0.05－10 mg/mL
5.培养体支持材料
1.琼脂 A.用量6－10g/L B.新买应试凝固力 C.使用优缺点
2.其它 玻璃纤维用种类：青霉素、链霉素、庆大霉素等 B.用量：5～20% C.注意：抗生素对组织生长有抑制作用，使 用要慎重
作用：是蛋白质的组分； 促进器官增殖； 可作有机氮源。
e.天然复合物
• 椰乳：促愈伤组织和细胞培养，用量10－
20%;
• 香蕉泥：对PH值缓冲大，用量150－
200ml/L;
马铃薯：对PH值缓冲大，
用量150－200g/L;
• 水解酪蛋白：浓度100－200mg/L.
• 其他：酵母提取液[YE]、苹果汁、番茄汁 等。
试验中各处理一般都要设有一定的重 复，以取得可靠的试验结果。随试验规模 和要求不同，大多每个项目要有4～10瓶， 每瓶至少3块培养物或3丛小幼苗。
行定容，考虑培养基本身处于热态并还需要灭菌等 要损失部分，因此定容时需要多出近1/10。
视频2-5 定容
3. 调 pH 值 用0.1M NaOH 或HCl调PH值为5.8。 在培养基配方不大变动的情况下可用经验法。可以 将连续三次测定所加入的酸或碱液的平均值作为以 后调整的用量值。调后注意一定要摇动均匀。
8.6
0.86
CoCl2·6H2O 0.025
0.0025
微量
元素 CuSO45H2O
0.025 100 0.0025 1000
10
Na2MOO4·2H2O 0.25
0.025
H3BO3
6.2
0.62
KI
0.83
0.083
MS培养基母液配制的配方
母液 种类
成分
标准量 扩大 称取量 母液体积 用量 （mg） 倍数 （mg） （mL） /L
第三节 母液的配制
（一）母液配制流程
母液配制流程图
MS培养基母液配制的配方
母液 种类
成分
大量 元素
钙盐 铁盐
NH4NO3 KNO3
MgSO4·7H2O KH2PO4
CaCI2·2H2O
FeSO4•7H2O
标准量 扩大 称取量 母液体积 用量 （mg） 倍数 （mg） （ML） /L
1650
82.5
培养基应及时灭菌，防止变质。
视频2-8 培养基灭菌
培养基配制的顺序为：倒水 加热 称取 琼脂入锅加热熔解 加入蔗糖 待琼脂溶化 后加母液 搅拌均匀 然后加激素。
培养基制作视频
视频2-9 培养基母液配制
1 0.5mg/ml的NAA配制方法，要求配100ml。 某培养基为MS+BA2mg/l+NAA0.2mg/l,问：
单元一 母液的配制 单元二 培养基的制备
单元一 母液的配制
1 一般掌握培养基的种类、特点。 2 掌握基本培养基的配方。 3 一般掌握培养基的组成成分和适宜的剂量。
1 掌握基本培养基的配制的配方。 2 掌握培养基母液的配制方法和步骤。
任 务 讲 解
第一节 培养基的种类 第二节 培养基的和成分 第三节 培养基的配制流程
第一节 培养基的种类
（4）N6培养基 是1974年朱至清等为水 稻等禾谷类作物花药培养而设计的。其特 点是成分较简单，KNO3和（NH4）2SO4含量高。 在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他植 物的花药培养和其他组织培养。
第二节 培养基的成分
水 无机盐：大量元素
微量元素 有机化合物：碳源
维生素 氨基酸 植物激素 天然提取物 琼脂 其它：PH值、活性炭、抗生素、抗酚类 物质污染的添加剂、生长抑制剂、染色剂…
2 培养基的成分：水、无机盐、有机化合物、 天然提取物、琼脂、活性炭、抗生素等。
母液配制流程图为：确定培养基 称量 3 溶解 定容 母液分装 贴标签
保存于冰箱
1 培养基的种类、特点有哪些？ 2 简述培养基的组成成分、作用和适宜的
剂量。
3 简述培养基母液的配制方法和步骤。
单元二 培养基的配制
1 培养基配制方法和步骤； 2 一般掌握培养基的筛选办法。
养
基
熬
1.培养基熬制
制 1.将2/3水倒入铝锅中，近开锅时加入称好的
蔗糖和琼脂，边煮边搅拌，防止糊底。
2.用旺火煮开，再用文火加热，直至琼脂全
部融化。
3.将量好的培养基母液倒入铝锅中，搅拌均
匀。
视频2-3 培养基熬制
视频2-4 母液的量取
2.定 容 培养基做好后在调整pH值之前，应对培养基进
烟酸 （VB3）
0.5
0.1
有机 盐酸吡哆醇（VB6） 0.5 物
200
0.1
1000
5
盐酸硫胺素（vB1）
0.1
0.02
甘氨酸
2.0
0.4
肌醇
100
视频2-2 药品称量
天平预置 全显示 清零 称药
Fe盐母液的配制 硫酸亚铁和EDTA-Na分别溶解后，冷
却后将Fe盐倒入EDTA-Na中[反之易沉淀]， 然后定容。
第一节 培养基的种类
（2）B5培养基是1968年由Galmborg等为 培养大豆根细胞而设计的。其主要特点是 含有较低的铵，这可能对不少培养物的生 长有抑制作用。从实践得知有些植物在B5培 养基上生长更适宜，如双子叶植物特别是 木本植物。
（3）White培养基是1943年由White为培 养番茄根尖而设计的。1963年又作了改良， 称作White改良培养基。其特点是无机机盐 数量较低，适于生根培养。
第一节 培养基的种类
培养基的名称，多数以发明人的名字来 命名，如White培养基，Murashige和Skoog 培养基（简称MS培养基）。
目前国际上流行的培养基有几十种，常 用的培养基及特点如下：
（1）MS培养基 它是1962年由 Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计 的。特点是无机盐和离子浓度较高，为较 稳定的平衡溶液。
1 熟练掌握培养基配制方法和步骤； 2 熟练掌握培养基的灭菌方法。
任 务 讲 解
第一节 培养基配制流程
第二节 培养基的选择
第一节 培养基配制流程
培养基配制流程图
第一节 培养基配制流程
按做1升培养基计，先倒入2/3左右的水，加 热，称取5.5克琼脂入锅加热熔解，近开锅时，加 入称好的30克蔗糖，待琼脂溶化后，加母液（不 断搅拌，防止糊底）[在加热时量取母液：按表， 用量筒移取大量元素母液20ml，钙盐20ml，用专 一对应的移液管分别吸取微量元素母液10ml、铁 盐母液10ml、有机物母液5ml。]搅拌均匀—— MS0{基本培养基}。然后加激素。
视频2-1 培养基成分
1.水
水是植物原生质体的组成成分，也是 一切代谢过程的介质和溶媒。它是生命活 动过程中不可缺少的物质。配制培养基母 液时要用蒸馏水，以保持母液及培养基成 分的精确性，防止贮藏过程发霉变质，大 规模生产时可用自来水。但在少量研究上 尽量用蒸馏水，以防成分的变化引起不良 效果。
MnSO4
CuSO4
Na2MoO4 ·2H2O
CaCl2 ·2H2O
2.无机元素
总之，植物必需营养元素可组成结构 物质，也可是具有生理活性的物质，如酶、 辅酶以及作为酶的活化剂，参与活跃的新 陈代谢。此外，在维持离子浓度平衡、胶 体稳定、电荷平衡等电化学方面起着重要 作用。当某些营养元素供应不足时，愈伤 组织表现出一定的缺素症状。
视频2-6 调整PH值
4. 激素的添加
在激素的水平变化较小时，尤其在配 制多种培养基时，激素可以在pH值调整后 添加。要求严格时应添加激素后再调整pH 值因激素母液可能影响培养基的pH值。
5. 培养基分装 趁热分装，100ml的三角瓶约装入30～40ml,
30瓶/L。
视频2-7 培养基分装
扎口与灭菌 要求封口松紧适宜，系活扣，便于接种操作。
激素母液浓度： 0.5-1mg/ml，1次配成100 ml 激素溶解： IAA、IBA、GA、ZT先溶95%酒精再定容 NAA先溶于热水或95%酒精再加水； 2,4-D先溶于1mol/L NaOH或酒精再加水； KT、BA先溶于1mol/L HCl再加水。
1 目前国际上流行的培养基有：MS培养基、 B5培养基、White培养基、N6培养基。
VB6 [盐酸吡哆醇] 促根生长。 VB3 [烟酸] 与代谢和胚发育有关。 Vc[抗坏血酸] 防组织褐变。