PVL阴性MRSA的基因多态性研究

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Mrsa

Mrsa表格医疗机构相关性MRSA与社区MRSA的区别
感染人群感染部位传播途径既往病史感染君菌
株毒力药物敏感
性
HA-MRS A 住院患者，
老年体弱、
慢性病或
危重患者
无明显感
染灶，外
科感染或
侵入性导
管相关感
染、呼吸
机相关肺
炎
医疗机构
内，居家
接触很少
感染
MRSA感
染或定植
史，近期
外科手
术、住院、
使用抗菌
药物及血
液透析史
在社区的
传播能力
有限，通
常没有
PVL基因
多重耐药
CA-MRS A 门诊患者，
多为学生、
运动员、军
人等健康
年轻人
蜂窝织
炎、皮肤
脓肿也有
坏死性社
区获得性
肺炎、骨
关节感染
社区获得
性，可以
在家庭或
运动队内
传染
无病史及
接触医疗
机构
容易发生
社区传
播，常有
PVL基因，
引起坏死
性皮肤或
肺部感染
对多种非
β-内酰胺
类抗生素
敏感
MRSA感染抗生素的选择。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌杀白细胞素基因检测与耐药性分析

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌杀白细胞素基因检测与耐药性分析叶晓涛;卢月梅;马焕丽;袁文斌;张旭;张丽玲;黄衍锋;刘雄伟;罗丹【期刊名称】《中国感染与化疗杂志》【年(卷),期】2013(013)004【摘要】目的采用实时荧光PCR检测耐甲氧西林金葡菌(MRSA)杀白细胞素(PVL)基因,并分析其对抗菌药物敏感性,指导临床合理用药.方法采用双重实时荧光PCR 技术对血液和脓液分离的40株MRSA进行PVL基因检测,并对PVL基因阳性菌株感染患者的临床资料进行分析；VITEK2-compact全自动微生物测试仪进行药敏试验.结果 40株MRSA检出7株PVL基因阳性,阳性率17.5％,PVL基因阳性菌株所致的感染分别为坏死性皮肤软组织感染3例,血流感染3例和乳腺脓肿1例.MRSA携带或不携带PVL基因菌株的药敏试验结果有所不同,未检出对万古霉素不敏感菌株.结论 MRSA携带或不携带PVL基因对抗菌药物敏感性有差异,本地区MRSA-PVL基因阳性率较高,应加强监测.【总页数】4页(P289-292)【作者】叶晓涛;卢月梅;马焕丽;袁文斌;张旭;张丽玲;黄衍锋;刘雄伟;罗丹【作者单位】广东省深圳市龙岗中心医院检验科,广东深圳518116;深圳市人民医院;广东省深圳市龙岗中心医院检验科,广东深圳518116;广东省深圳市龙岗中心医院内科,广东深圳518116;广东省深圳市龙岗中心医院检验科,广东深圳518116;广东省深圳市龙岗中心医院内科,广东深圳518116;广东省深圳市龙岗中心医院检验科,广东深圳518116;广东省深圳市龙岗中心医院检验科,广东深圳518116;广东省深圳市龙岗中心医院检验科,广东深圳518116【正文语种】中文【中图分类】R378.11【相关文献】1.杀白细胞素基因阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药性分析 [J], 王凤玲;张金艳;李红岩;刘静2.杀白细胞毒素基因阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的四环素耐药基因的检测 [J], 李玫君;李素芳3.74例金黄色葡萄球菌杀白细胞素基因检测 [J], 李宏;王星冀;郭秀娟;张金艳;李伟;魏媛媛4.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌杀白细胞素基因检测 [J], 赖奋强; 郭庆昕; 杨滨; 郑韵芳5.老年病房耐甲氧西林金黄色葡萄球菌葡萄球菌染色体mec基因盒基因型和杀白细胞素基因的检测及特点 [J], 朱砚萍;瞿介明;朱惠莉;陆运涛;徐轶;庞立峰;方毅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PVL基因的检测和与肺炎的关系

引物参照Ｌｉｎａ””等报道的核苷酸序列。ＰＣＲ扩增ＰＶＬ基因、产物分析与测序：ＰＶＬ基因经ＰＣＲ扩增，扩增片断氏度为４３３ｂｐ。产物采用琼脂糖凝胶电泳法，用凝胶成像系统观察结果并照相后切胶回收纯化，用双脱氧链末端终止法测序，结果与ＧｅｎＢａｎｋ提供的ＰＶＬ基因核苷酸序列进行对比以确定其基因来源。
关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌：肺炎；杀白细胞素；危险因素；临床特点
Ｖ
中山大学
硕士擘位论文
英文摘要
ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＰａｎｔｏｎ－ＶａｌｅｎｔｉｎｅＬｅｕｋｏｃｉｄｉｎ（ＰＶＬ）ｇｅｎｅｉｎ
实验菌株：７６株经琼脂筛选试验筛选的ＭＲＳＡ菌株作为研究用菌，其中ＣＡ．
ＭＲＳＡ２０株和ＨＡ．ＭＲＳＡ５６株，均符合渗断标准。
ＭＲＳＡ—ＤＮＡ的提取：ＤＮＡ提取采用丙酮破壁和碱裂解法。ＰＶＬ基因引物
Ｌｕｋ—ＰＶｌＬｕＫ．ＰＶ２５’一ＡＴＣＡＴＴＡＧＧＴＡＡＡＡＴＧＴＣＴＧＧＡＣＡＴＧＡＴＣＣＡ一３’ ５’．ＧＣＡＴＣＡＡＳＴＧＴＡＴＴＧＧＡＴＡＧＣＡＡＡＡＧＣ．３’
不但在医院等场所流行，也逐渐成为社区感染的重要病原菌之一。金黄色葡萄球
菌能产生多种与化脓性感染相关的致病毒素，导致患者病情明显加重，其中杀白细胞素（Ｐａｎｔｏｎ．ＶａｌｅｎｔｉｎｅＬｅｕｋｏｃｉｄｉｎ，ＰＶＬ）是引起坏死的细胞毒素，可导致白细胞破坏和组织坏死，与严重肺炎和脓肿形成有关，死亡率极高。在我国，目前尚无检测ＭＲＳＡ携带ＰＶＬ基因情况及其与肺炎相关性的报道，为了解我院近２年来肺炎患者下呼吸道标本中分离的ＭＲＳＡ菌株中携带ＰＶＬ基因的检出情况，以及这些产ＰｖＬ毒素菌株对临床常用抗生素的耐药情况，同时分析产ＰＶＬ毒素的ＭＲＳＡ所致肺炎的危险因素和临床特点，以指导临床有效地防治产ＰＶＬ毒素的ＭＲＳＡ所致的肺部感染，因此进行了本课题的研究。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌杀白细胞素基因检测

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌杀白细胞素基因检测赖奋强; 郭庆昕; 杨滨; 郑韵芳【期刊名称】《《中国人兽共患病学报》》【年(卷),期】2019(035)008【总页数】6页(P726-731)【关键词】耐甲氧西林金黄色葡萄球菌; 杀白细胞毒素; 基因分型【作者】赖奋强; 郭庆昕; 杨滨; 郑韵芳【作者单位】福州大学医院福州 350002; 泉州市正骨医院泉州 362000; 福建医科大学附属第一医院检验科福州 350005; 福建卫生职业技术学院福州 350101【正文语种】中文【中图分类】R378.1耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)是全世界范围内的主要公共卫生问题，在美国每年因MRSA感染所致的死亡人数高于艾滋病[1]。

这是由于社区获得性MRSA(Community-acquired methicillin-resistant Staphylococcus aureus，CA-MRSA)的发展所致，也是急诊科中皮肤和软组织感染的主要原因[2]。

然而，分子特征决定CA-MRSA菌株在医院外传播和感染健康人群的能力仍然很差[3]。

细胞溶解肽，α-型苯酚可溶蛋白(Phenol-soluble modulinsα，PSMα)和α-毒素(α-toxin，hla)对CA-MRSA疾病的进展起决定性作用[4-5]，这两种毒力因子并非专门出现在CA-MRSA中，基因表达的差异可部分解释CA-MRSA菌株增强毒力的原因[4]。

值得注意的是许多CA-MRSA菌株携带有编码杀白细胞素(Panton-Valentine leukocidin，PVL)的lukSF-PVL基因，而其他菌株中lukSF-PVL较少[3]，因此，PVL已被认为是导致CA-MRSA毒力增加的主要因素之一[6]。

1 材料与方法1.1 菌株来源 83株分离菌来自于某综合三甲医院临床各科室送检的痰、血液、伤口分泌物、耳道分泌物、尿液、脓液、无菌体液等标本，经临床微生物室分离鉴定的非重复MRSA菌株；按美国疾病预防控制中心(CDC)的CA-MRSA 定义为：患者在门诊或入院48 h之内分离到MRSA菌株；1年内无住院或与医疗机构接触史；没有留置各种导管及其他穿透皮肤的医用装置[3]，将临床分离的MRSA菌株分成医院获得性MRSA(HA-MRSA)组与CA-MRSA组。

耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌MRSA

四环素
万古霉素
0/285（0.00%）
0/77（0.00%）
青霉素
氨苄青霉素
主要内容
生物学特性耐药机理
一，MRSA
分型及检测流行状况治疗和预防流行病学致病性耐药机制抗生素选择
二，CA-MRSA/HA-MRSA 三，讨论

青霉素（1940s）
金黄色葡萄球菌引起的感染性
产青霉素酶，能水解β-内酰耐青霉素酶的半合成时隔两年，英国
MRSA的治疗和预防
MRSA预防
首先是合理使用抗生素；早期检出带菌者；加强消毒制度；
美国
NNIS报道1975年182所医院MRSA占金黄色葡萄球菌感染总数的2.4% 1991年上升至24.8%，其中尤以500张床以上的教学医院和中心医院为多；
MRSA的检测

6 自动化药敏检测目前有Vitek系统、ATB系统、MicroScan系统、 Sensiter ARIS等; 将菌液稀释后注入药敏板或孔内，然后通过检测菌液浊度，荧光指示剂的荧光强度或荧光底物的水解反应来判读结果; 其优点是快速，但有时对生长缓慢或延迟表达耐药性的MRSA，在3～4 h内难以达到检测水平，容易漏检或误报MRSA;
优点是快速、简便、价格便宜;

纸片扩散法法
(K-B )
MRSA的检测

2 肉汤稀释(MIC)法 MH肉汤培养基加NaCl至20 g/L浓度，同时加入 Ca,Mg离子，将苯唑西林进行倍比稀释，从0.125 ～16 μg/ml，菌浓度为104/ml，35°C孵育24 h; MIC＜2 μg/ml为敏感，＞4 μg/ml为耐药，该法检出率可达95%; 操作较繁琐;

MRSA耐药性特征及分型研究的开题报告

MRSA耐药性特征及分型研究的开题报告一、研究背景随着抗生素的广泛应用，耐药性细菌在临床上越来越常见。

其中，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）是耐药性最普遍的细菌之一，已成为全球公共卫生问题。

MRSA主要通过手术切口和插管等途径感染，严重威胁了患者的生命和健康。

在临床上，MRSA感染的病例不断增加，并且常常出现治疗失败的情况，因此加强对MRSA的研究非常必要。

二、研究目的与意义本研究旨在探讨MRSA的耐药性特征及分型，主要从以下两个方面展开：1. 基于药敏试验探讨MRSA的耐药性特征，观察不同抗生素对MRSA的敏感性及耐药性，为临床治疗提供参考依据。

2. 通过分子生物学技术研究MRSA的分型，探讨MRSA不同基因型与耐药性之间的关系，为临床预防和治疗提供新的思路和方法。

三、研究内容和方法1. 研究内容（1）通过细菌培养和药敏试验探讨MRSA的耐药性特征，观察不同抗生素对MRSA的敏感性及耐药性差异。

（2）应用分子生物学技术研究MRSA的分型，包括spa基因和SCCmec基因的检测分析，以及多基因测序技术的应用与分析。

2. 研究方法（1）样本采集及处理：收集常见感染部位的临床样本，进行细菌培养和分离。

选择MRSA阳性菌株进行药敏试验。

（2）药敏试验：采用Kirby-Bauer法对常见抗生素的敏感性进行测试。

（3）分子生物学检测和分型：使用PCR技术检测spa基因和SCCmec基因，结合多基因测序技术深入研究MRSA的分型和耐药性特征。

四、预期结果与解决问题本研究预期结果如下：（1）通过药敏试验探究MRSA的耐药性特征，给出不同抗生素的敏感性及耐药情况，为临床治疗提供参考依据和指导。

（2）分子生物学技术研究MRSA的分型，探讨MRSA不同基因型与耐药性之间的关系，为临床预防和治疗提供新的思路和方法。

通过本研究可以加深对MRSA的认识和理解，提高对MRSA感染的诊断准确性和治疗效果，有助于减少MRSA感染的发生和传播，对于维护全民健康和公共卫生具有重要意义。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的基因多态性分型研究.

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的基因多态性分型研究【摘要】目的探索一种准确、快速、可靠的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的分子生物学分型方法，了解医院内MRSA的多态性，为临床合理、有效地使用抗生素和控制耐药基因在种群间的传播提供帮助。

方法用MecA基因相关高变区PCR扩增(HVR-PCR)和随机扩增多态性DNA(RAPD)两种方法，对MRSA 菌株进行多态性分析。

HVR-PCR检测MecA基因相关高变区正相重复序列元件(DRUs)的长度，根据DRUs数目的不同对MRSA分型;RAPD根据电泳图谱中条带的数目及位置，经NTSYS统计软件进行聚类分析，得到遗传树状图，按MRSA菌株之间的相关性进行分型。

结果应用HVR-PCR方法可将31株MRSA标本分为7型，分别含有7、8、9、10、11、12和16个DRUs，其中10DRUs型最多\[11/31(35.48%)\]，16DRUs型最少\[1/31(3.23%)\];应用RAPD分型，31株MRSA共分10型，其中以Ⅳ型为主\[10/31(32.26%)\]，其他型分布比较接近。

在11株HVR-PCR分型的10DRUs型中RAPD Ⅳ型4株\[4/11(36.36%)\]，RAPD Ⅲ型和RAPD Ⅳ型各2株\[2/11(18.18%)\];10株RAPD Ⅳ型中9DRUs型、10DRUs型各4株\[4/10(40.00%)\]。

结论RAPD方法和HVR-PCR方法对MRSA的分型率都比较高，而且这两种方法都比较简单、稳定、可靠、快速，实用性强，具有广阔的应用前景。

【关键词】耐甲氧西林金黄色葡萄球菌;MecA基因;随机扩增多态性DNA;MecA基因相关高变区PCR扩增ABSTRACT: ObjectiveTo investigate the polymorphisms of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in local hospitals in order to provide evidence for clinical doctors to use the antibiotics rationally and effectively.MethodsWe analyzed the polymorphisms of MRSA with themethods of PCR for mec-associated hypervariable region (HVR-PCR) and random amplifiedpolymorphic DNA (RAPD). MRSA strains typed by HVR-PCR according to the length polymorphisms which decided by the number of direct repeat unit elements (DRUs) of HVR-PCR products; Grouping of MRSA by RAPD was based on the dependability among different MRSA isolates.ResultsTotally 31 MRSA strains typed by HVR-PCR were divided into 7 types which contained 7, 8, 9, 10, 11, 12 and 16 DRUs. MRSA strains with 10 DRUs were most predominant, present in 11/31 cases (35.48%). Among the 31 MRSA strains typed by HVR-PCR, only 1 showed 16 DRUs. There were 10 types classed by RAPD of all MRSA strains.The dominant type was RAPD Ⅳ, present in 10/31 cases (32.26%). The others showed similar distribution.ConclusionRAPD and HVR-PCR methods not also possess a good ability to obtain interpretable results, but also are simple, stable, reliable and rapid. They both have perfect practicality and prospect of extensive application.KEY WORDS: methicillin-resistant Staphylococcus aureus; mecA gene; random amplified polymorphic DNA; PCR for the mec-associated hypervariable region 葡萄球菌的分型方法很多，传统的分型方法包括血清学分型、抗生素分型等，但均无法满足精确辨别的要求。

MRSA的随机扩增多态DNA分型研究

１２方法．
株（菌株３１～２、５２３３～３）Ｃ型１株（株６，、９２２～７、４、７９，菌）Ｄ
型４株（菌株４１、３４）Ｅ型２（株１、５，、Ｏ１、０，株菌１１）Ｆ型１株
（株ｌ）菌２。
广
医
科
大
学
学
报
ＪＯＵＲＮＡＩＪＯＦＧＵＡＮＧＸＩＭＥＣＤＩＡＬＵＮＩＲＳＩＶＥＩＲＳＴＹ
２０ｔ２（）０９Ｏｃ；６５
ＭＲＳ的随机扩增多态ＤＮＡ分型研究Ａ
吴晓宁覃锦耀周元圆韦惠如
１１１菌株来源：集２０．．收０７年３～７月本院微生物实验室自临床标本培养分离出的金黄色葡萄球菌，头孢西丁纸片法经
汁、列腺液各１株。主要分布在烧伤科（４例，５ｏ，Ｃ前１３Ｙ）ＩＵ
电泳可得到１１条片段，为６个基因型。结论：ＡＰ分型技术简便、速，医院感染流行病学调查中具有较大应用价～１分ＲＤ快在
值。
关键词
ＭＲＡ；ＡＰ基因分型ＳＲＤ；
文献标志码：Ａ文章编号：０５９０２０）５０３ — ２１０ — ３Ｘ（０９０ — ７１０
１２３Ｄ．．ＮＡ的扩增：物： ’ ＣＣＡＣＧＡ３。反应体引５。ＧＴＣ一’ Ｃ系：总体积５Ｌ，１ ×ＰＲ扩增缓冲液５５０ｍｍｏ／Ｏ肛含０ＣＩ０（ｌＩ

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MRSA共识解读

汪复等。中国感染与化疗杂志。2011(5):321-329。
检出率(%)
MRSA普遍存在于多个科室
• 研究结果显示：MRSA普遍存在于所有相关科室，其中在ICU检出率最高，达29.8%
从华西医院2003-2007年住院患者中分离1478株MRSA，分析其临床分布及耐药情况
郭靓等.中华医院感染学杂志.2009;19(9):1151-4
MRSA感染危害严重，患者病死率更高
归因总增加费用: $27,083
更高的死亡率更多的治疗费用更需要初始合理
经验性治疗
Blot SI et al, Arch Int Med 2002;162:2229-35.
万古霉素的大量应用导致金黄色葡萄球菌耐药现象日益严重
• 世界每年万古霉素的需求量总计约20-25吨；美国每百万张病床万古霉素使用量为8.0吨1
CA-MRSA在全球广泛传播
• 近十年，新的MRSA菌株出现——CA-MRSA
• 特异性克隆，不同于在医院通常所见 • SCCmec 类型IV• • 对许多抗生素易感 • 产毒(Panton-Valentine•杀白细胞素)
• 无患MRSA风险的健康人群中暴发 • 通常会引起化脓性皮肤感染 • 通过亲密的身体接触传输
早期有效的抗生素治疗(6h黄金时间)有效提高患者生存率
• 低血压发生后第1h(H1)内接受有效抗生素治疗者：存活率 79.9% • 低血压发生后接受有效抗生素每延误1h：存活率平均降低7.6%
生存率
死亡风险
Crit Care Med 2006; 34:1589–1596
时间(小时)
常用于治疗MRSA的抗菌药物特点(1)
• 近年一些欧洲国家、美国先后制订有关MRSA专题的指南，但目前国内尚缺少基于充分临床实践(循证医学)证据的治疗MRSA感染的指南或专家共识可供参考

苯唑西林敏感耐甲氧西林金黄色葡萄球菌研究进展

苯唑西林敏感耐甲氧西林金黄色葡萄球菌研究进展赵吴静;徐进强;武中庸;蒲万霞【摘要】金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)是革兰氏阳性菌,是目前临床感染常见的一种病原菌,能引起局部化脓性感染、关节炎、心内膜炎、蜂窝织炎、败血症、脓毒血症等全身感染.近些年来,由于抗生素不合理的使用,金黄色葡萄球菌的耐药性日益严重,特别是苯唑西林敏感耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(oxacillin-susceptible methicillin-resistant Staphylococcus aureus,OS-MRSA)的出现给临床治疗增加了巨大的难度.了解OS-MRSA的流行病学特点和耐药机制可帮助临床医师更好地选择治疗药物,鉴于此,作者针对OS-MRSA的流行病学及耐药机制研究进展进行综述.%Staphylococcus aureus(S.aureus)is a gram-positive bacteria which could cause many kinds of infections,such asarthritis,endocarditis cellulitis,septicemia,pyemia and other systemic infections.In recent years,due to the unreasonable use ofantibiotics,resistant Staphylococcus aureus increasedrapidly.Particularly,the oxacillin-susceptible methicillin-resistant Staphylococcus aureus(OS-MRSA),it is a great challenge for clinical treatment.Understand the epidemiological characteristics and the mechanism of drug resistance of OS-MRSA can help clinicians to choose therapeutic drugs much better.This review summarized the research progress of epidemiology and resistant mechanism of OS-MRSA.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2017(044)008【总页数】7页(P2458-2464)【关键词】苯唑西林敏感耐甲氧西林金黄色葡萄球菌;流行病学;耐药机制【作者】赵吴静;徐进强;武中庸;蒲万霞【作者单位】中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,农业部兽用药物创制重点实验室,甘肃省新兽药工程重点实验室,兰州730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,农业部兽用药物创制重点实验室,甘肃省新兽药工程重点实验室,兰州730050;甘肃农业大学动物医学院,兰州 730070;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,农业部兽用药物创制重点实验室,甘肃省新兽药工程重点实验室,兰州730050;西北民族大学生命科学与工程学院,兰州 730124;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,农业部兽用药物创制重点实验室,甘肃省新兽药工程重点实验室,兰州730050【正文语种】中文【中图分类】R446.5近年来，细菌耐药性已成为全球热议的话题，尤以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，SA)耐药菌株的出现，引起了全世界研究者的关注，它的出现使得人和动物的临床治疗愈来愈难，且造成了巨大的经济损失。

金黄色葡萄球菌致病毒素基因分布特性及与致病性的相关性

金黄色葡萄球菌致病毒素基因分布特性及与致病性的相关性王凤玲;张金艳;刘玉枝;刘国华;刘静【摘要】目的研究金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)致病毒素基因的分布特性及与致病性的关系.方法对临床收集的80株金葡菌,采用头孢西丁纸片法检测耐甲氧西林金葡菌(MRSA),多重聚合酶链反应法检测致病毒素基因中毒休克综合征毒素-1(TSST-1)、杀白细胞毒素(PVL),分析TSST-1、PVL基因阳性金葡菌的临床分布特性及与致病性的相关性.结果 80株金葡菌中MRSA总检出率为58.8%,PVL基因阳性金葡菌在医院的分布范围较广,主要引起呼吸系统感染、化脓性感染,也可引起其他感染性疾病,严重的可导致败血症;TSST-1基因阳性的MRSA均PVL基因阳性,均取自重症监护室肺部感染和化脓性感染的患者.结论 MRSA已成为医院感染的重要致病菌,携带致病毒素基因TSST-1、PVL的金葡菌也占有一定的比例,在医院的分布范围较广,致病毒素基因TSST-1、PVL可增强MRSA的致病力,这增加了临床治疗难度.【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2011(008)016【总页数】2页(P1967-1968)【关键词】金黄色葡萄球菌;致病毒素基因;分布特性;致病性【作者】王凤玲;张金艳;刘玉枝;刘国华;刘静【作者单位】河北省沧州医学高等专科学校,061001;河北医科大学第四医院,石家庄,050011;河北省沧州医学高等专科学校,061001;河北省沧州中西医结合医院,061001;河北省沧州中西医结合医院,061001【正文语种】中文金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)为临床感染常见的病原菌,可致人体所有组织和器官感染,尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)具有传播途径广、致病性强、多重耐药性等特点,已成为临床治疗难点[1]。

本研究对80株金葡菌进行致病毒素基因杀白细胞毒素(PVL)基因和中毒休克综合征毒素-1(TSST-1)基因检测,综合分析携带致病毒素基因金葡菌的临床分布特性及与致病性的关系,结果报道如下。

MRSA感染的流行现状和治疗进展

环的ＭＲＳＡ菌株。这些感染出现在医院或医疗护理机构（医院发病）或出院后的社区内（社区发病）。由于病人和病原菌在医院与社区之间的流动，以及ＣＡ－ＭＲＳＡ定植或感染病人入院后出现的医院内暴发，ＨＡ－ＭＲＳＡ与ＣＡ－ＭＲＳＡ之间的界限变得模糊。现在美国ＣＡ－ＭＲＳＡ相当常见，从临床和流行病学背景上区分ＨＡ－ＭＲＳＡ和ＣＡ－ＭＲＳＡ的难度正在增加，只有微生物学的遗传类型和表型检测可以有助于二者的鉴别。但是最近有报道健康护理相关感染的２８％、医院血流感染的２０％均属ＵＳＡ３００型（此型多见于社区感染）。这种ＨＡ－ＭＲＳＡ与ＣＡ－ＭＲＳＡ混合存在亦见于ＩｃＵ感染。
＝、冁融流行现状
在美国每年有近４００，０００例金葡菌感染住院病人：职ｓＡ导致一年大约１９，０００名住院病人死亡，相当于ＡＩＤＳ、结核病和病毒性肝炎死亡的总数。在带有医疗装置的住院病人中，长期留置导管者１２周病死率为１７％，而心脏装置则高达３５％；内置医疗装置病人的金葡菌菌血症其医疗费用是通常医院获得性金葡菌血症病人的２倍。（一）ＣＡ－ＭＲＳＡ：１９９３年在一例从未接触医疗护理系统的西澳大利亚原著民感染患者分离到带有特殊遗传成分的脓ＳＡ菌株。１９９７一－１９９９年美国ＣＤＣ报道４例迅速致死的腿ＳＡ感染患几，染色体基因盒（Ｓｃｃ）ｍｅｃ分型属于Ⅳ型。Ｇｉｌｌｅｔ等报道１９８６Ａ－１９９８年法国１６例ＰｖＬ阳性的儿童金葡菌肺炎，其中７５％（１２例）表现为流感样疾病，３７．５％在入院４８ｈ内死亡。有作者收集２００３一－２００４年流感季节美国９个州１７例年轻人的ＣＡＰ，８８％（１５例）为涨Ｓ矗感染。７ｌ％（１２例）合并流感，２４％（４例）存在ＭＩＲＳＡ感染危险因素，２９％（５例）死亡；全部ＭＲＳＡ菌株含毒素基因，８５％（１１株）ＰｖＬ阳性，分型均属ＳＣＣｍｅｃＩＶａ。２００３－－。２００４年冬季４例成人坏死性肺炎，均无ＨＡ－ＭＲＳＡ危险因素，ＰＶＬ阳性，为ＳＣＣｍｅｃＩＶ型，而ＰＦＧＥ分型属于ＵＳＡ３００。ＣＡ－ＭＲＳＡ的流行率存在地理差别。美国最高，２００１～２００２年在亚特兰大、明尼苏达、巴尔的摩以人口为基础的３个社区监测研究共有１６４７例ＣＡ－ＭＲＳＡ感染，占全部敞ＳＡ分离株的８％－－２０％；亚特兰大年疾病发生率为２５。７／１０００００，而巴尔的摩为１８／１０００００，２岁以下幼儿发病率较高；另有报道亚特兰大全部金葡菌皮肤感染中近三分之二为ＣＡ－ＭＲＳＡ。在英国携带产ＰＶＬ基因的金葡菌＜２％，而绝大部分为ＭＳＳＡ。但ＣＡ－ＭＲＳＡ已在全球越来越多的国家和地区出现。迄今斯堪的那维亚国家极少或几乎没有ＨＡ－ＭＲＳＡ，现在却出现了ｃＡ—搬ＳＡ。（二）ＨＡ－ＭＲＳＡ：虽然脓ｓＡ在１９６１年就被检测到。但是直至８０年代中期才成为医院感

PVL基因阳性与阴性MRSA对坏死性肺炎的致病性比较及机制

P VL基因阳性与阴性MRS A对坏死性肺炎的致病性比较及机制吕小艳1,马筱玲23,戴媛媛2,张义永2,荚恒敏2,高玉录2,付广林1(1蚌埠医学院,安徽蚌埠233000;2安徽医科大学附属省立医院) 摘要:目的　研究Pant on2Valentine杀白细胞素(P VL)基因对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRS A)在坏死性肺炎中致病能力的影响及机制。

方法　取18只小鼠随机分为模型1组、模型2组及对照组各6只,分别通过气管灌注MRS A标准菌株ATCC43300、铜223菌悬液及生理盐水,实验后24h及48h分别检测三组外周血白细胞计数。

实验后48h光镜观察肺组织病理结构,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)脱落细胞以电镜观察形态变化、流式细胞术检测凋亡率和坏死率。

结果　与对照组比较,实验后24h和48h外周血白细胞计数模型2组下降、模型1组升高;模型2组肺组织炎细胞浸润及支气管上皮细胞破坏情况重于模型1组、BALF中脱落细胞坏死率高于模型1组。

结论　P VL基因阳性C A2MRS A对坏死性肺炎的致病性强于P VL基因阴性MRS A,可能机制为前者能够分泌P VL 基因并可编码P VL毒素。

关键词:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌;Pant on2Valentine杀白细胞素;坏死性肺炎;社区获得性感染中图分类号:R563.1 文献标志码:A 文章编号:10022266X(2010)0320010203Com p a riso n o f the p a tho gen i c ity be t w ee n PVL gene(+)MR SA and PVL ge ne(-)o ne si n nec r o ti z i ng p neum o n iaLV X iao2yan1,MA X iao2ling,DA I Yuan2yuan,ZHAN G Yi2yong,J I A Heng2m in,G AO Yu2lu,FU Guang2lin(1B engbu M edical College,B engbu233000,P.R.China) Abstract:O bjecti ve　To investigate the effect of Pant on2Valentine leukocidin(P VL)exp ressi on on the pathogenicity of methicillin2resistant staphyl ococcus aureus(MRS A)in necr otizing pneu monia.M ethods　Eighteen m ice were random ly distributed int o model1,model2and nor mal gr oup,then were intratracheally instilled by Staphyl ococcus aureus ATCC43300,Cu223bacterial sus pensi on and physi ol ogical saline res pectively.The WBC in peri pheral bl ood of the three gr oup s were counted res pectively24and48hours after instilling,pathol ogic exam inati ons of the lung hist ol ogy were per2f or med by op tical m icr oscope.The br onchoalveolar lavage fluid(BALF)were collected and the mor phol ogical changes ofexf oliated cells were observed by electr on m icr oscopy(TE M),the apop t osis and necr osis rateswere analyzed by fl ow cyt om2 etry.Results　Compared with the contr ol gr oup,the WBC count of model2gr oup decreased24and48hours after instil2 ling,but which in model1gr oup increased.The infla mmat ory infiltrati on in lung parenchy ma and br onchial ep ithelial da m2 age in model2gr oup were more seri ous than which in model1gr oup.Necr osis rates of exf oliated cells in BALF were higher in model2gr oup than which in model1gr oup.Conclusi on s　The pathogenicity of P VL gene(+)MRS A is greater than that of the P VL gene(-)MRS A,the mechanis m may be that the f or mer can encode P VL.Key words:methicillin2resistant staphyl ococcus aureus;Pant on2Valentine leukocidin;necr otizing pneu monia;commu2 nity2ass ociated infecti on 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRS A)是医院感染的重要病原菌之一。

MRSA的检测及耐药性分析

MRSA的检测及耐药性分析
宁莉萍
【期刊名称】《临床输血与检验》
【年(卷),期】2000(002)002
【摘要】由于抗菌药物的广泛使用，细菌耐药性已成为世界性问题，据国内外文献报道，临床致病菌对各种抗生素的耐药率和耐药程度因不同国家、地区而异。

而耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是全球性引起医院内感染的重要致病菌之一，其耐药特点是耐受甲氧西林的同时，还对临床上广泛应用的多种抗生素呈现多重耐药。

因此了解本地区MRSA感染状况及耐药情况，对指导临床合理选用抗生素是非常必要的。

本文对分离自临床的80株金黄色葡萄球菌(SA)进行10种抗生素的检测，并对它们的耐药性进行分析。

【总页数】2页(P36-37)
【作者】宁莉萍
【作者单位】安徽省阜阳市颍州区医院检验科，阜阳236000
【正文语种】中文
【中图分类】R378
【相关文献】
1.MRSA和MSSA氨基糖苷类药物耐药性和耐药基因检测 [J], 茆海丰;徐兆云
2.MRSA耐药性检测及SCCmec基因分型分析 [J], 屠雷钧;叶永志;林娅;边保华
3.纸片扩散法检测MRSA耐药性的临床意义 [J], 康玲燕;梁艳芝;康俊芳
4.2015-2019年重症监护病房医院获得性肺炎患者中MRSA菌株的临床分布及耐药性分析 [J], 纪风兵;王丹;许颖;胡章勇
5.儿童标本中分离MRSA的SCCmec基因分型及耐药性分析 [J], 张秀芳;柴杰;谭雪峰;郭普
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PVL基因阳性与阴性MRSA对坏死性肺炎的致病性比较及机制

ｆｍｅｙｏｔａｍｃｏｃｐ．ｈｒｎｈａｅｌｒａａｅｆｉＢＬ）ｗｒｃｌｃｅｎｅｍｒｈｌｉａｃａｇｓｏｏｄｂｐｉｒｓｏＴｅｂｏｅｏｖｏｖｇｕｄ（ＡＦｅｏｅｔａｄｔｏｐｏｏｃｈｅｆｒｃｉｌｅｌａｌｌｅｄｈｇｌｎｅｆｌｔｅｓｗｒｓｒｅｙｌｔｎｍｃｓｏｙ（Ｅ，ｅａｏｔｉａｄｎｃｏｉｒｔｅｅａａｚｄｂｏｍ－ｘｉｅｃｌｅｅｏｅｖｄｂｅｒｉｒｃｐＴＭ）ｔｐｐｓｅｒｓｅｗｒｌｅｙｆｗｃｏａｄｌｂｅｏｃｏｈｏｓｎｓａｓｎｙｌＦｏ
ｄｓｒｕｅｎｏｍｏｅ１ｉｔｉｔｄｉｔｄｌ，ｍｏｅａｄｏｍａｇｏｐ，ｈｎｅｉｔｔａｈａｌｉｓｉｅｂＳａｈｌｏｃｓ￣ｅｂｄｌ２ｎｎｒｌｒｕｔｅｗｒｎｒｒｃｅｌｅａｙｎｔｌｄｙｔｐｙｏｃｕａｕｌｃｓ
ＡＴＣ３０Ｃ－３ｂｃｅａｓｓｅｓｏｎｈｓｏｏｉａａｉｅｒｓｅｔｅｙＴｈＣ４３０，ｕ２ａｔｒｌｕｐｎｉｎａｄｐｙｉｌｇｃｌｓｎｅｐｃｉｌ．ｅＷＢＣｉｅｐｅａｌｏｆｔｅｔｒｅｉｌｖｎｐｒｈｒｌｂｏｄｏｈｈｅｉ
基因并可编码ＰＬ毒素。Ｖ
ＣｍｐｒｏｆｈａｈｇｎｉｅｗｅＶｅｅ（＋）ＳｎＶｅｅ（一）ｏｅｏａｉｎｏｅｐｔｏｅｉｔｂｔｅｎＰＬｇｎｓｔｃｙＭＲＡａｄＰＬｇｎｎｓ

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)

（2）家畜、宠物饲养者及养猪的农户；（3)已知有CA-MRSA寄植或近期有曾去流行区的历史，近
期与CA-MRSA感染或寄植者有接触； (4)属于CA-MRSA寄植率增加的相关人群； (5)流感并发或流感后肺炎； (6)以前有反复发生的疖或皮肤脓肿病史或家族史（在
过去6个月内发生≥2次）
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌肺炎诊治与预防专家共识
• 不均一耐药性 • 广谱耐药性 • 生长特殊性 • 固有耐药 • 获得性耐药
CHENLI
8
1 不均一耐药性
• MRSA菌落内细菌存在敏感和耐药两个亚群，即一株MRSA中只有一小部分对甲氧西林高度耐药，在50 μg/ml甲氧西林条件下尚能生存，而菌落中大多
数细菌对甲氧西林敏感，在使用抗生素
后的几小时内大量敏感菌被杀死，但少
• 医院获得性肺炎 (hospital-acquired pneunlonia，HAP)，指患者入院时不存在、也不处于感染潜伏期，而于入院≧48h在医院内发生的肺炎，包括在医院内获得感染而于出院后48h内发病的肺炎。
• 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌肺炎诊治与预防专家共识
CHENLI
13
• 社区相关性MRSA肺炎（CA-MRSA肺炎）：又称为社区获得性MRSA肺炎（CommunityAcquired MRSA Pneumon ia），是指肺炎患者在门诊或入院48 h内分离出MRSA菌株，并且在1年内无住院或与医疗机构接触史，无MRSA感染或定植史，无留置导管和其他经皮医用装置使用史
疗药物）及伤口处理者；（4）在医院或血液透析门诊接受透析治疗者
化疗或伤口护理者；（4）到医院或透析门诊定期接受血液透析者。
• 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌肺炎诊治与预防专家共识

金黄色葡萄球菌杀白细胞素基因敲除菌株的构建及生长特性分析

中国预防兽医学报Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine第42卷第11期2020年11月V ol.42No.11Nov.2020doi ：10.3969/j.issn.1008-0589.201910007金黄色葡萄球菌杀白细胞素基因敲除菌株的构建及生长特性分析刘文宇1†，祝瑶1†，王长珍1，杨亲1，栾天1，王凌利1，刘思国1，周学章2*，张万江1*（1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队，黑龙江哈尔滨150069；2.宁夏大学生命科学学院，宁夏银川750021）摘要：为构建金黄色葡萄球菌杀白细胞素（PVL ）基因敲除的菌株，本研究以pBT2温敏型质粒为载体，构建金黄色葡萄球菌PVL 基因敲除质粒pBT2-ΔPVL ，并经酶切鉴定。

将其转化至金黄色葡萄球菌RN4220中经其修饰后电转化至金黄色葡萄球菌ATCC 49775中，在30℃和42℃多次交替传代并经红霉素抗性筛选，构建PVL 基因敲除菌株，经PCR 和测序鉴定后命名为ΔPVL 。

以pLI50穿梭质粒为载体，构建金黄色葡萄球菌PVL 基因回补质粒pLI50-PVL ，按照同样方法将其转化至敲除菌株ΔPVL 中，构建PVL 基因回补菌株CΔPVL 。

将ΔPVL 在TSB 培养基中连续传代培养后，经PCR 检测敲除菌株体外的遗传稳定性；分别绘制敲除菌株ΔPVL 和回补菌株CΔPVL 的生长曲线，检测其体外生长特性。

结果显示，正确构建了两种质粒pBT2-ΔPVL 、pLI50-PVL 和两种菌株ΔPVL 、CΔPVL 。

敲除菌株ΔPVL 连续传代未发生回复突变，具有良好的遗传稳定性。

生长特性结果显示敲除菌株生长速率显著低于野生菌株，表明PVL 基因在金黄色葡萄球菌的生长调节中发挥着一定的作用。

本研究为进一步研究金黄色葡萄球菌PVL 的功能及致病机制奠定了基础。

MRSA全基因结构及SCCmec分型的意义

MRSA全基因结构及SCCmec分型的意义MRSA全基因结构及SCC//-tec分型的意义欧阳范献鲍时翔耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methieillin.resistantS.,MRSA)1961年首次在英国报导,因其耐药谱广,耐药性高,传播速度快而成为全世界关注的焦点,其鉴定,分型,基因结构,致病机理,耐药机制和耐药基因传递方式均成了研究的热门课题.为更有效利用国外最先进的研究成果,为我国相关研究提供一些借鉴资料,现将MRSA全基因研究现状以及葡萄球菌染色体m盒(staphylococcalc舾sechl'otllos(xq2e,SCCmec)的结构,分型及意义分述如下.一,MRsA的全基因结构目前已有7株葡萄球菌的全基因进行了测序分析(COL,MRSA252,MSSA476,MW2,Mu50,N3】5,NCIV~325),而N315,Mu50~"和MW2.是最早进行全基因序列分析的金黄色葡萄球菌菌株,三者的全基因结构及比较见图l.结果显示:三者的染色体为环形DNA,长度为2.81—2.88Mb,含有2595—2714个开放式阅读框(openreadingframes,ORF).三者的核苷酸具有高度同源性:N315与Mu为99.7%.N315与MW2为94.8%,MW2与Mu为舛.7%"..种系发生学研究和核酸序列对比分析显示:葡萄球菌和梭状芽孢杆菌的基因非常相似,其染色体均含有典型的,特异性看家基因——即与营养代谢,生长繁殖相关的基因;金黄色葡萄球菌N315编码的蛋白有52%与枯草芽孢杆菌(Bbacillu*n硼)和嗜碱耐热芽孢杆菌(Ba—cillushal~ttralla)编码的蛋白相同…,据此推测它们来自同一祖先——球杆菌.后进化成两个分枝.在葡萄球菌染色体中,除来自祖先菌的部分基因簇外,余下基因编码的蛋白与其他菌株,如链球菌,嗜热性古细菌,真细菌(TherrnophitkArchaeafebacteria),弧菌,埃希菌,甚至真核细胞,蓝藻(作者单位:570311中国热带农业科学院热带怍蜘生物技术研究所,热带作物生物技术国家重点实验室海南省农垦总局医院医院感染监控科通讯作者:饱时翔.En:@ytdmo.ohm脚,电话:0日98-668t~695.综述chocy$~)编码蛋白高度同源",推测这些基因是通过水平传递获得的外来组分.因同类基因常成簇地聚集于某特定的部位,因而称为基因岛(genomicis.1ands,GI).在金黄色葡萄球菌中,含有8个Gl(见图1),其命名依据是在染色体上的整合位置和表达物功能,主要可分为以下几类.2.5TaSfulb2.盛坩;.圈1MW2的功能性基因结构图殛其与N315,MI渤比较从外向内依次为金黄色葡萄球菌菌株t,it.50.N315.MW2的功能性基因结构分布图顶上箭头所指处示复制启始点.棱苷酸由此开始按顾时针方向编序,最内环示棱苷酸的位置(^m).靠近启始的插^于IS431脚c,转位子T~54mee是SCCc内的结构.1sII8I.18足N315和MuS0在相同部位的插^子.畦I1日I.m1.ISI181m2是Mu50上另外的两个插入子,To5801.'lX554b!.Tn554n.Tn554艟.Tr654c均为转位子;uSna,口基因岛是编码毒素的基因簇居地,uSal和usa2只在中存在.箭头指示~rSo2(*)和usal(**1帕整舍位置;usa3是MW2,MuSO上的致睛基因岛,u舢是N3I5和Mr,50上的致病基因岛;】呻是MaS0上的啦苗体.鹳nlw是MW2上的噬菌体,髓∞是MuS0,N315,MW2上的鞋茵体1.致病性GI:包括:①uSaa,u0基因岛家族(G1family),是编码毒素的基因簇居地.如:白细胞毒素(1eukccidine,tuk)D,E基因和葡萄球菌内毒素(Staphy/ococcusenterotoxin,se)和外毒素(Staphyk,coc.CUaexotoxin,set)基因,它们在所有菌株中均存在,特点是:基因数量在不同菌株间存在较大差异含有一不完整的转移酶基因和一限制性修饰酶系统基因,前者决定其不能从染色体上自发剔除,后者由宿主一箱雎j'r..O瑚6年12月第26卷第12QfinJMicmbiolbmm0l,December2006,V ol26,No.12 特异性决定子(hostalspecificitydeten~nant,hsd)S和M组成.②uSal～4基因岛,它们在某些菌株中可缺失或存在等位基因,且携带有完整的重组酶,大多都可以从整合位点剔除【2】.如:uSal和usa2只在MW2中存在,携带有整合酶基因(i.teg,-~gene,)vSa1和usa2(/m-usa1,/nt--usa2);MW2的usa3为Ⅱ型,带有内毒素基因se/2和sec4,与MuSO携带的I型usa3的整合位置完全相同;N315和MuS0的uSa4(uSa4n/uSa4mu)均带有葡萄球菌内毒素基因(2,黝4)和(toxic-shock-syndrometoxin)基因,而MW2的usa4的功能还不清楚uJ.2.耐药性G卜一sCc,嬲::它位于金黄色葡萄球菌染色体复制起始点附近(图1),整合部位是在嘌呤碱合成酶基因(purA)和葡萄球菌表面蛋白A()基因之间,位于purA下游约10l【b,上游66～89kb;因多数耐药基因均位于此处,故称为金黄色葡萄球菌的耐药岛(resistanceisland,m).3.其他结构:金黄色葡萄球菌染色体上除拥有上述GI外还携有多个转座子(transposon,Tn),插入子(insertionsequence,IS)和噬菌体拷贝,它们也是可移动的GI的组成成分,常常携带有某些抗性和毒素基因,在金黄色葡萄球菌的生存和致病性中起着重要作用….'nI554携带有壮观霉素(spectinomycln,sp)和大环内脂.林可霉素.链阳霉素B(~lide-lincomide-砷陀p屯0粤m.m,MLS)基因.在N315和MuS0上的相同部位,整合有8个(l181.1～8),在MuS0上还有两个ISll81.ml,ISll81-m2,与Tn554不同,除ISll81.m2外,均为非编码区域.嗜菌体稍n3mw(蜊315,蚋l50A)携带有2个内毒素基因seg2和2(础,印,础,sea),MW2特有的嗜菌体(~II211][W,携带有P-V杀白细胞毒素(Pon. ton-V alentineleukocidin)F和S基因(.F-PV,矗胳PV),其编码的杀白细菌毒素与多型溶血性肺炎有关引.二,耐药基因岛SCCm即的结构,分型及其作用SCCmec大小从21～67l【b不等,可以整个地从染色体中自发剔除,也可从一个菌细胞转移整合到另一个菌细胞染色体中,是一个可移动的复合体结构"?.SCCmec型合部位固定于染色体复制起始点附近,一个功能暂未阐明的开放式阅读框架x(o,fX) 处,有利于耐药基因的高量表达.因为起始点附近的基因,在细胞分裂时可在子细胞内获得2个甚至4个基因拷贝【6】.整合点除有位置特异性外还有方向性,其方向是由染色体盒重组酶基因(咄娉e№ch咖recombinase,.cr)决定的.1.SCCmec的结构及分型:SCCmec的结构复杂,因外来基因整合数量差异使其大小也不同,总体来说,它由两个部分组成:第1部分是特征性结构,存在于所有的MRSA中,包括:①保守的末端正序重复序列(directrepeat8equetlce,DR)和,或反序重复序列(invertedrepeat8equeilce,m),②m∞操纵子,③在mecA基因左右存在的保守的基因结构以及负责SCCmec移动的ocr【4.;第2部分是功能还未明或无功能区,有学者将其命名为](junkyard)区,即废弃,无意义基因堆积处.SCCmec分型依据主要是:①m∞操纵子类型和ocr型别;②J区的结构差异性.首次分型研究时,将NCTC10442结构定为I型,将N315的结构定为Ⅱ型,85/2082的结构定为Ⅲ型. (1)末端DB和m序列:SCCmec两端的DB和m,是耐甲氧西林葡萄球菌的特征性核苷酸序列,大小为10多个到20多碱基不等,DB的基本序列为5-1TA TGA TACGCI'TCT-3,IR的基本序列为5.GCGTATCAGTrAA TGA TGAGGTr-3;有的存在于邻近SCCmec的细菌染色体上,有的则存在于SCCmec的两端;不同菌株DB,IR的拷贝数和单一DB,IR的碱基数目存在一定差异,但DB与DB,IR与m之间的同源性很高;当SCCmec从菌细胞剔除时,两端的DR或m可以首尾相接,形成环状的染色体外DNA结构,即auSCC闭环结构,后者又可以在染色体上的DB片段末端整合到细菌染色体中,因此,DB或m可能有助于SCCmec在菌细胞中传递C2,3,5】.(2)oor基因组及其分型:多数oor基因组由两个位点特异性重组酶基因(ccrA和caB)与其相邻的ooS组成,位于SCCmec的近中部;ccrA,caB分别编码一长度约为449和542个氨基酸残基的多肽片段(CcrA,Ccm),在ccrA的上游有一个启动子和一个SD(Shine-dalgamo)序列——即富含G(guanosine)和A(adenosine),长度为5个核苷酸的序列,其功能是与核糖体16SrRNA的3端互补配对,使核糖体结合到mRNA上,为开始翻译做准备;而在caB的上游,虽也存在一个sD序列,但没有发现启动子,因而推测两个基因如同单个mRNA一样翻译.氨基酸同源性分析显示:C凹重组冀系统的氨中华微生物学和免疫学杂志2006年l2月第26卷第—ChinJMicaubiolImrmmol,Deemi~2006,V ol26,No.12基末端,有三分之一与转化,分解酶家族的重组酶相同,它们均属于位点特异性整合酶家族的重组酶,均含有特征性丝氨酸残基(它被认为在DNA链交换反应中提供羟基);但尽管如此,Ccr与转化,分解酶家族的重组酶还是有明显的区别,即前者拥有更多的羧基端(CO0H-),且在现有蛋白中,还未见有同源者.ccrA和ccrB分型:依其结构和其所在的SCCraec型别分为:ccrA1,ccrA2,ccrA3,ccrA2.1,ccrA2.2,ccrA2.3和ccrB1,ccrB2,ccrB3,ccrB2.1,ccrB2.2,ccrB2.3;其中的阿拉数字1,2,3分别代表相应型别(I,Ⅱ,Ⅲ)的SCCraec所携带的ccrA和ccrB,而ccrA2.12.3和ccrB2.12.3分别是Ⅳ型sCC,,犹的3个亚型所携带的【7】.最近又从澳大利亚两株社区获得性hmsA(c(H砌IlIIity-∞liI|edMBSA,C.hmsA) WIS和8l艇中发现了一新的.cr基因:oc,它是V型SCCraec所携带,且其中只有arc基因,编码的CerC蛋白只含ccrA/ccrB编码蛋白质NH2端的约四分之一的氨基酸,但仍能对V型SCCmec进行整合和剔除】.(3),掀:操纵子及其分型:,掀:操纵子由插入子431,,犹,mecA基因和完整或部分删切的调节基因mecR1,抑制med组成.ram4为结构编码基因,mecl为抑制基因,在通常情况下,mecl编码产生的抑制因子——MecI,结合在mecA基因的启动子部位,使ram4基因不能被转录;mecRl为调节基因,它在诱导剂,如:内酰胺类抗生素的作用下编码产生诱导因子一MeeRI,能够去除MeeI对ram4的阻遏作用,使ram4得以转录而产生PBP2a.,掀:操纵子分型是依据,,操纵子中调节基因是否完整和是否含有插入子以及插入子的种类来区分的.到目前为止已发现了A—E5种主要的操纵子类型,还有4种亚型.裹1soC_埘主要型,亚型的结构特点及意义(4)J区域及与SCCmec分型的关系:在SCCmec结构中除上述特征性片段外,余下区域被定义为J区,人为地将SCCmec和细菌染色体结合点到ocr基因组之间的区段称为Jl,ocr基因组至ram4操纵子间的区段称为J2区,ram4操纵子到另一SCCmec和细菌染色体结合点间的区段称为J3;虽说其中堆积的不是细菌生长所必需的基因,但位于插入子,转座子或质粒上的抗性基因,如:转座子~rlTn554,有镉抗性(ca.啪resistanc.)基因,Ptl81质粒有四环素抗性,,孵转座子是银抗性基因,转座子rn554携带有编码红霉素,壮观霉素抗药性的基因等n五】,现在认为它们是细菌在进化过程中为适应环境,从外界获得的基因,因此对细菌的生存是有益的.且J区域大小是区分SCCmec亚型的依据之一,而其中携带的特异性基因是判别SCCmec类型的依据,如在I型SCCmec的Jl区含有特异性的基因,它编码胞浆素敏感性表面蛋白(pk吼liII.9咖§ive舢击田oepro. tein,),在Ⅱ型SCCmec的Jl区含有特异性的钾依赖性操纵子(potassiumdependentopenm,Kdp),它编码钾依赖性ATPase.在Ⅲ型SCCmec的J2区含有假转座子54,在J3区含有质粒Ptl81和转座子Tn554;在V型中,存在有和hsdM基因等.(5)SCCmec分型:到目前为止,至少发现了5种SCCraec型别和3种亚型【3J.】,新的型别或亚型还在不断的增加.各型的特点见表1.2.SCCraec的作用:Katayama等Ⅲ的研究结果证实,除在金黄色葡萄球菌菌株476中发现有不携带meeA的SCC组分(命名为SCC476),在多株血浆凝固酶阴性的葡萄球菌中也有发现,如人型葡萄球菌GIFU12263中的SCC结构,命名为SCC12263,它拥有SCCraec两端的特征性结构DR,IR,同源性的.结构同样存在于SCC上游,命名为o~t'Xh,它与金葡萄o,yX的同源性高达91%,SCC携带的ocr基l2月第26卷第l2期ChinJMicn~olIn'mind,December2006,V ol±N01 因与ccrA和ccrB高度相似,且编码的从结构完整,无缺失突变,在SCC12263的左端,存在多个限制性修饰系统的同源片段,但不携带任何耐药性基因.由此推测,SCC是一个基因交换的载体,SCCmec只是SCC家族中携带有mecA基因的一个特例,MILSA的产生,是对甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(methicillin-suseeptibleS.oA/.rt,y~,lV[SSA)通过SCC从其他菌株中获得mecA的结果,它同样可以使其他抗生素耐药基因在葡萄球菌间传递,这可能是MRSA容易获得多重耐药的根本原因.三,进行S0C删分型的意义MRSA已经成为医院及社区获得性感染的主要病原菌,因耐药率和耐药强度高,多重耐药谱广,由其引起的感染是目前临床最为棘手的难题,如果因为监测和控制不利,可以造成区域性或地区性暴发流行,其死亡率非常高,由此造成的经济损失和后果是不可想象的,这也是国外医疗机构对MRSA高度重视的主要原因,这点也必须引起我国卫生行政机构和医疗部门的高度重视.SCCmec分型,是区分医院感染和社区获得性感染的一个重要指标,医院获得性的MRSA(healthcam-associatedMRSA,H_)菌株,常常携带的是I,Ⅱ或Ⅲ型SCCmec中的一种,而社区获得性MR.SA(C.!IⅡ)或非多重耐药性耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(nonmultiresistantoxaciUin-resistantS.甜舢,Nc)菌株携带的是Ⅳ型SCCmec,同时也是衡量菌株耐药性的一个重要标志;携带I型的菌株为原型株,含耐药基因少,除对f}-内酰胺类抗生素耐药外对其他抗生素敏感,多重耐药率低;Ⅱ型菌株携带的耐药基因较I型多,耐药基因的数量和种类在不同的地区有区别;Ⅲ型菌株是携带耐药基因数量最多,多重耐药率最高的菌株,耐药谱在不同地区间区别很大;IV和V型菌株除携带mecA外不带其他耐药基因.对某地区的MRSA进行SCCmec分型分析,可以探明本地区流行株的SCCmec型别,分布情况及其耐药基因的携带现状,为预测耐药菌株的发展趋势,预防其暴发流行,治疗MILSA感染病例提供对策和科学依据;同时为探讨M1LSA的耐药机制,寻找新药开发的突破口奠定科学基础.参考文献1KamdaM,OhtaT,UchiymmI,da1.Whole8momesequmeingdam- dlli舶面妇m&呼籼棚嬲格.1.aua~,2001,35"/(9264):lZ一1240.2BabaT,TakeuchiF,KamdaM,da1.Genomeand,,innoedete口血Ⅲ. nts0fhish,,in眦~ty-acquimdMRSA.I卫no,2002,359(932O):1819-1827.3T,OhnK,MaXX,eta1.hl洳∞*mtihiotic舶画吐lm∞0f&叩^,而删棚嬲格fIomitsmIe㈣:州皿iSCC.gR∞i吱Updl吐,20O3,6(1):41-52.4l(|哪岫Y,hoT,IIi瑚m吐龇K.Acl田随0f啦licdement,&叩^,而删∞啊嘣e曲加m呻咖∞,'辫,encodesmethicillinred黜~吐蛳nce in&c叫脚删.AmlmiczcbA吐8Ⅲ叼tIH,200o,44(6):1549.1555.5IloT,l(|吐aY,A蚋daK,da1.S0mctaml伽q脚面∞0fthinetypes0f.uqahyloeoccal∞删ech∞m舢I'辫.珊lqinthech∞minmethidllin-r,,,,i~,,nt&叩.i0∞0叫棚.,I曩罅…Antlmieznb^8em8ae- mother,加Ol,45(5):1323-l336.6ⅨM.Unllnldm~0fcelldivisionflxlndec~deacidlqpIi∞一donin&temperamm-semitivedeox~ddeacidsynthesisn-n眦0f函dIcol/.JBacteriol,l9I69,99(3):842_850.7Ma】o【,hoT,T/~tomC,da1.Noveltype0fstaphylococcal*serechH_膏呲,,辫identifiedincn,,,m,lty-aequimdⅡllcmin-rant&呼Hm邮胡嬲格strains.AntlmlcxnbA(]aemod~,2OO2,46(4):ll47.1】52.8ItoT,MaXX,TakeuchiF,da1.NoveltypeVstaphylococcal翻∞瞰ecbH啊膏峨,,辫drivenby趣novdca曩圮necbH啊膏a嘶n,c0Ⅱ山n越..Anfi~ca'ab^Omamdmr,2OO4,48(7):2637-2651.9HanmenAM,EricsonSollidJU.SC.C/liecin&:@ruesollthe啪ve.F日Inm'amo]MedMicmbid,2lD06,46(1):8I20.10l(|吐aY,ItoT,IIi瑚删籼K.Q饵挚ni0fthe由伽日Ie如口∞ndiDg,,H.^inclinica1.taphyloeoomdm:mle0fIS431-mediatedMc,ddetionine~e88ioll0f皇面吐眦in∞ot-eerty-ing,low-levdmbidIIiⅡ-抛面捌&叩∞0邮|Il'啊瑚Iil础…Antlm/一c∞0bA啦(】bⅢH,2001,45(46):1955-1963.11LiraTr,Ck喈FN,O'Brimf.G,eta1.Arealloa口mni|y瞳吐Ⅱ}le面吐眦&呼H邮棚职格related?A伽皿p|IIi蛐0ftheirI'l∞I.Piholo~,2OO3,35(4):336-343.12Sh暖eA,la,m,,eyAS,Keenecr,eta1.Sevmnovel呻0fthe 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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测及其耐药性研究

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测及其耐药性研究曹鸿霞;熊自忠;王中新;徐元宏;李旭【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2006(041)005【摘要】目的分析耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)检测方法及其耐药性.方法采用头孢西丁、苯唑西林纸片法和PCR 3种方法检测2005年安徽地区12家医院临床分离133株金黄色葡萄球菌中MRSA菌株;琼脂稀释法测定金黄色葡萄球菌对17种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC).结果头孢西丁、苯唑西林纸片法及PCR法对MRSA检出率分别为52.63%、54.13%、51.87%,3种方法对MRSA检出率差异无显著性.以PCR法检出mec-A基因为判断MRSA的金标准,头孢西丁纸片法灵敏度为100%、特异度为98.44%、符合率为99.24%,r(正确诊断指数)=0.984 4.苯唑西林纸片法的灵敏度为98.55%、特异度为93.75%、符合率为96.24%,r=0.923.除了青霉素-G、氨苄西林、替考拉宁、万古霉素以外,其余抗生素的耐药率,MRSA组均明显高于MSSA组(P＜0.01).结论头孢西丁纸片法是筛选和确认MRSA菌株的一种可靠、简便的方法;MRSA为多重耐药菌株,临床应加强检测.【总页数】3页(P579-581)【作者】曹鸿霞;熊自忠;王中新;徐元宏;李旭【作者单位】安徽医科大学第一附属医院感染科,合肥,230022;安徽医科大学第一附属医院感染科,合肥,230022;安徽细菌耐药监控中心,合肥,230022;安徽医科大学第一附属医院检验科,合肥,230032;安徽医科大学第一附属医院检验科,合肥,230032;安徽医科大学第一附属医院感染科,合肥,230022;安徽细菌耐药监控中心,合肥,230022【正文语种】中文【中图分类】R378.11;R37【相关文献】1.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性分析及mecA和PVL基因检测 [J], 裴双;苏建荣2.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌目标性检测及耐药性分析 [J], 张轲3.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测与耐药性的研究进展 [J], 冯明4.ST9型动物源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分子分型、毒素基因检测及耐药性分析 [J], 张强;邢晓楠;王新;王晓;俞英;吴聪明;沈建忠5.牛源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性与外排泵相关基因的检测及相关性研究[J], 张行; 杨峰; 李新圃; 王旭荣; 罗金印; 李宏胜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。