THP-1培养(总结)
THP-1和单核细胞诱导分化
THP-1和单核细胞诱导分化方法1.THP-1细胞的诱导分化（1）THP-1用185ng/ml佛波酯（PMA，用DMSO溶解）作用 6小时，诱导细胞分化为巨噬细胞（M0）。
（2）在PMA继续存在的情况下，通过分别：•与IFN-γ(20 ng/ml)和LPS(100 ng/ml)孵育48小时以上，使其向M1表型极化。
•与 IL-4(20 ng/ml)和IL-13(20 ng/ml)孵育48小时以上，使其向M2表型极化。
（3）极化完成后，细胞用不含刺激物和PMA的无血清RPMI1640重悬，可保持72小时。
2. 人单核细胞来源的巨噬细胞(MDM)的诱导分化（1）采血后，首先用 Ficoll密度梯度离心法分离PBMC（400g，25min），然后再用 Percoll （400g，15min）分离PBMC，最后将单核细胞以5×10E5/ml的浓度接种在含有 10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI1640培养基中，同时加入 20 nM的CSF-1。
（2）单个核细胞在37°C、5%CO2条件下培养7d，每3d更换一次培养液，获得MDM。
（3）MDM得到之后，去除培养基后：•若与新鲜的、无血清的RPMI1640继续培养，则维持M0状态。
•若与LPS(1μg/ml)和IFN-γ(10 ng/ml)孵育48小时，则向M1表型极化。
•若与IL-4(20 ng/ml)和IL-13(5 ng/ml)孵育48小时，则向M2表型极化。
（3）极化完成后，细胞用不含刺激物和PMA的无血清RPMI1640重悬，可保持72小时。
参考文献：Tedesco S, et al. (2018) Convenience versus Biological Significance: ArePMA-Differentiated THP-1 Cells a Reliable Substitute for Blood-Derived Macrophages When Studying in Vitro Polarization?. Front. Pharmacol. 9:71. doi: 10.3389/fphar.2018.00071。
thp1细胞成团解决方法
thp1细胞成团解决方法
THP-1细胞是一种常用的人类单核细胞系，通常用于研究炎症、免疫和癌症等领域。
在培养THP-1细胞时，有时候会出现细胞成团
的情况，这可能会影响实验结果和细胞的健康状况。
解决THP-1细
胞成团问题的方法可以从以下几个方面来考虑：
1. 培养基配方优化，THP-1细胞通常使用含有血清的培养基进
行培养，因此可以尝试调整培养基的配方，例如尝试不同浓度的血清、添加细胞因子或生长因子等，以优化细胞的生长环境，减少细
胞成团的情况。
2. 细胞密度控制，细胞密度过高容易导致细胞成团，因此在培
养THP-1细胞时，需要注意控制细胞的密度，定期进行细胞的传代
分装，避免细胞过于密集。
3. 细胞培养技术，在培养THP-1细胞时，需要注意培养技术的
操作，比如轻柔地振荡或者振动培养皿来分散细胞，避免细胞聚集
成团。
4. 检查细胞的健康状况，定期观察和检查细胞的形态和健康状
况，及时发现并处理细胞成团的情况，比如通过细胞离心、重新分装等方法来解决细胞成团问题。
总的来说，解决THP-1细胞成团问题需要综合考虑培养条件、细胞密度、培养技术等多个因素，通过优化培养条件和细胞处理技术来减少细胞成团的情况，从而保证细胞的健康和实验结果的准确性。
希望以上建议对你有所帮助。
thp1细胞电转方法
thp1细胞电转方法THP-1细胞是一种具有单核细胞功能的人类白血病单核细胞系，常用于炎症和免疫反应的研究。
THP-1细胞可以通过电转某些基因来进行功能研究，如炎症因子的表达和调控，信号通路的研究等。
下面将介绍THP-1细胞电转的方法。
一、细胞培养1.1 THP-1细胞维持：THP-1细胞应在37°C、5% CO2的恒温培养箱中维持。
培养基一般为RPMI-1640培养基，含有10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素。
1.2 细胞传代：THP-1细胞密度应在8×10^5至1×10^6个细胞/ml之间，每2-3天传代一次。
二、电转试剂2.1 质粒DNA：选择合适的质粒表达载体，含有目的基因的表达序列。
2.2 转染试剂：常用的转染试剂有聚乙烯亚胺（PEI）和脂质体转染试剂。
2.3 负载DNA：将质粒DNA与转染试剂混合，形成复合物。
三、电转过程3.1 THP-1细胞培养：在电转前需将THP-1细胞培养至对数生长期，细胞密度应在1×10^6个细胞/ml以上。
3.2 转染：将负载DNA的复合物滴加到THP-1细胞培养基中，轻轻摇动培养皿使复合物均匀分布。
3.3 电转：将培养皿放置于电转仪中进行电转；电转条件一般为电压1500-1800V、电容时间20-30ms。
3.4 处理：将电转后的THP-1细胞培养液转移至含有适当抗生素的培养基中，并培养至目的。
四、结果检测4.1 抗生素筛选：通过加入抗生素筛选培养THP-1细胞，检测是否成功转染。
4.2 蛋白表达：通过Western blot或ELISA等方法检测目的基因的蛋白表达水平。
4.3 mRNA表达：通过RT-PCR或Real-time PCR等方法检测目的基因的mRNA表达水平。
4.4 细胞功能：通过细胞功能实验检测目的基因的功能变化，如细胞增殖、凋亡、炎症因子的表达等。
总结：THP-1细胞的电转是一种用于基因功能研究的有效方法，通过该技术可以实现外源基因的表达和功能研究。
THP-1培养(总结)
1、然后在 37 度水浴中快速摇动约 1-2min，水面要在冻存管盖以下，防止水进入冻存管。
2、在超净台中，取一平板，先加入 12ml 1640 培养液，铺满板底，然后把冻存管中的细胞全部吸到平板中， 8 字摇匀，显微观察状况，然后 37 度培养；3、复苏过夜后，观察培养液有变黄 (2-3 天)，此时换液，先把细胞液全部吸入 15ml 离心管中， 900-1000r/min 离心 5min ，(转速不能大于 1000 )，吸掉上层培养液，加入新的 1640 ，吹匀，全部吸到培养板中， 37 度培养。
4、1、直接传代法：①悬浮细胞自然沉淀瓶底；②用吸管吸去上清 1/2 ~2/3 ；③轻轻吹打成细胞悬液；④等分装入数个培养瓶(皿)2、离心传代法：①将细胞悬液转移到离心管内；②800~ 1000r/min 离心 5min，弃上清；③加新的培养液到离心管内；④吸管吹打成为细胞悬液；⑤分瓶(皿)悬浮细胞传代，如果需要做实验大量扩增细胞的话，可以传代前先将培养瓶直立静置，待大部分细胞都沉降的细胞瓶底，勿晃动，轻轻吸出培养基，再加入新鲜培养基即可。
这样细胞数目不会损失多少，而且上层吸去的也是死细胞。
但建议加入新鲜培养基后分瓶扩增，毕竟一个较小的空间和有限的培养基环境下细胞扩增有限。
如果暂时不要做实验，只是维持传代的话，只要将大部分培养基吸去，留一点儿在瓶底，再加入新鲜培养基即可。
至于悬浮细胞何时传代合适，个人经验 (我只养过 THP-1 和 U937 两种悬浮细胞) 是待培养基变黄有些过，这时显示培养基已明显偏酸，对细胞并不适宜。
一般待培养基开始变黄，这时将细胞瓶放平，细胞能密密麻麻铺满整个瓶底就要传代了，这表明细胞的生长空间要不够了，就需传代分瓶扩增。
5、冻存液： 20% 1640+70% 胎牛血清+10%DMSO ( ATC 里边有说明 )；(7:2:1)C梯度降温冻存， 4 度，30min；-20 度，1h；-80 度，过夜；然后转入液氮。
thp1细胞电转方法
thp1细胞电转方法THP-1细胞是一种来源于人类单核细胞系的模型细胞，广泛用于炎症、免疫和肿瘤等相关研究中。
在研究过程中，需要对THP-1细胞进行电转染，以实现外源基因的转染和表达。
下面将介绍一种常用的THP-1细胞电转方法。
1. 购买所需试剂和试验器材：首先需要购买所需的试剂和试验器材，包括电转剂、细胞培养基、完整培养基、含抗生素的培养基、细胞培养器具（离心管、移液器、离心机等）等。
2. 预处理THP-1细胞：将THP-1细胞解冻后在完整培养基中培养至细胞密度达到80%以上，然后用含抗生素的培养基将细胞转移至新的培养皿中。
3. 调整细胞密度：在进行电转染前，需要将细胞密度调整至适宜的水平。
一般来说，细胞密度应在1×10^6至5×10^6之间。
4. 准备电转剂和DNA：根据电转剂的说明书，合适地稀释电转剂，并将要转染的质粒DNA溶解在含有电转剂的缓冲液中。
5. 进行电转染：将细胞培养皿放入离心管中，加入预先混合好的电转剂和DNA 溶液，轻轻摇动培养皿使其均匀分布，并将离心管置于电转仪中进行电转染。
6. 培养和筛选转染细胞：将进行电转染的THP-1细胞移至含抗生素的培养基中培养，并在接下来的培养过程中定期检查细胞的外观和生长情况，筛选出具有稳定表达目的基因的细胞株。
7. 验证转染效率：通过检测外源基因的表达水平、蛋白质水平或功能性实验等方法，验证转染效率和稳定性。
总结：以上就是一种常用的THP-1细胞电转方法的步骤。
通过合理地进行电转染实验，可以实现对THP-1细胞的基因转染和表达，为相关研究提供有力支持。
当然，在进行电转染实验时，需要注意操作规范，遵守相关实验守则，以确保实验结果的可靠性和准确性。
thp-1诱导实验原理
thp-1诱导实验原理
THP-1细胞诱导实验原理如下：
THP-1细胞是单核细胞系，通常用于模拟研究人体单核细胞/巨噬细胞的生物学特性和功能。
这些细胞可以被诱导分化为不同类型的巨噬细胞，如M1型和M2型巨噬细胞。
在具体的诱导分化实验中，THP-1细胞首先被佛波酯（PMA）诱导分化为巨噬细胞。
这个过程中，细胞会发生形态变化和生长方式的改变，由悬浮式生长变成贴壁生长，由圆形变成不规则形态，体积进一步增大，细胞浆疏松，细胞核增大明显，可见大量明显细胞器，胞膜周围可见少量突起。
分化后的巨噬细胞可以被进一步诱导分化为M1型或M2型巨噬细胞。
M1型巨噬细胞主要通过脂多糖（LPS）和IFN-γ诱导，进一步发生M1型极化，释放出TNF-α、IL-6等细胞因子，这是经典的炎症模型。
而M2型巨噬细胞则通过IL-4、IL-13和巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）诱导，进一步发生M2型极化，分泌TGF-β、IL-10等抑制性细胞因子，模拟炎症后期的组织修复和重建的过程。
以上就是THP-1细胞诱导实验的基本原理，希望对您有所帮助。
耻垢感染THP-1 方法
Macrophage Virulence Assays一、THP-1细胞的制备1、第一天，加5x106 THP-1 于50ml 完全培养基1640，于225cm2培养瓶中培养（根据实验需要，设置培养体积）。
2、于CO2培养箱中直立培养3d。
3、第四天，将培养瓶放倒，继续培养2d。
4、第六天，另外加入50ml新鲜完全培养基。
5、继续培养2d。
6、第八天，轻轻震荡培养瓶使贴壁细胞悬浮起来。
7、200g，10min，收集细胞。
8、弃上清。
9、加入25ml新鲜完全培养基，轻轻吸打重悬细胞，进行细胞计数（用0.4%的台盼蓝稀释细胞液4倍，计数=5个中格总细胞数/5x4（稀释倍数）x25x104）。
10、根据细胞计数，使用完全培养基调整细胞密度，12孔板的细胞浓度为1.0X 106/ml或24孔板5x105/ml。
11、加PMA到终浓度为5ng/ml（有待摸条件）。
12、向24孔板中加入1ml细胞液（带PMA），每孔5x105/ml。
13、培养3d（根据PMA浓度调整分化时间）。
14、加入1ml D-PBS，每孔严格上下吸打3次，吸去残留的没有附着的细胞。
重复洗涤一次。
15、加入1 ml 新鲜培养基。
16、此时的巨噬细胞可以用来感染。
二、分枝杆菌培养物的制备侵染巨噬细胞的分枝杆菌在7H10+ADC+Tween-80长到晚期对数生长期。
传代次数不超过5，OD550控制在0.6-0.8。
1)、挑取分枝杆菌单菌落接种于7H9液体培基（10% ADC for BCG，静置培养10-15d，OD600约0.5-1.0）中, 37℃、110rpm、培养24h，至OD600约为1；2)、1%接种量转接到新鲜7H9液体培基中继续培养15-17h, OD600约为0.5-0.8；3)、2000g, 20min或8000g，5min 离心收集对数生长晚期的分枝杆菌。
5)、弃上清。
6)、站立10min，使气溶胶沉淀。
7)、用PBS洗涤三次后，用不含抗生素的RPMI1640加血清的培养基重悬，再次以1600rpm 离心5min，此时上清液中基本为分散的分枝杆菌。
THP-1单核细胞培养-文档
这个是急性单核白血病细胞，悬浮的（如果养的时间很长了有的会贴壁），培养基用普通的1640就可以了，这里是这个细胞株的详细资料供参考。
THP-1：human acute monocytic leukemiaOrigin: established from the peripheral blood of a 1-year-old boy with acute monocytic leukemia (AML) at relapse in 1978; the cells can be used for induction of differentiation studies; the cells were described to produce lysozyme and to be phagocytic; carries t(9;11)(p21;q23) leading to MLL-AF9 fusion geneMorphology: round, single cells in suspension, partly in clustersMedium: 90% RPMI 1640 + 10% FBSSubculture: maintain at 0.1-1.0 x 106 cells/ml; split 1:2 to 1:3 every 3-4 days; seed out at ca. 0.5 x 106 cells/mlIncubation: at 37 °C with 5% CO2Doubling time: ca. 35-50 hoursHarvest: saturation density at about 1.0 x 106 cells/mlStorage: frozen with 70% medium, 20% FBS, 10% DMSO at about 5 x 106 cells/ml Mycoplasma: contamination was eliminated with Ciprobay (ciprofloxacin), then negative in DAPI, microbiological culture, PCR assaysImmunology: CD3 -, CD4 +, CD13 +, CD14 (+), CD15 +, CD19 -, CD33 (+), CD34 -, CD68 +, HLA-DR +Fingerprint: multiplex PCR of minisatellite markers revealed a unique DNA pro: confirmed as human with IEF of AST, MDH, NPCytogenetics: human near-tetraploid karyotype - 94(88-96)<4n>XY/XXY, -Y, +1, +3, +6, +6, -8, -13, -19, -22, -22, +2mar, add(1)(p11), del(1)(q42.2), i(2q), del(p21)x2-4, i(7p), der(9)t(9;11)(p22;q23)i(9)(p10)x2, der(11)t(9;11)(p22;q23)x2, add(12)(q24)x1-2, der(13)t(8;13)(p11;p12), add(?18)(q21) - carries t(9;11) associated with AML M5Viruses: ELISA: reverse transcriptase negative; PCR: EBV -, HBV -, HCV -, HHV-8 -, HIV -, HTLV-I/II -THP-1单核细胞是悬浮生长的细胞，用1640＋10％FBS是很容易养的，但复苏的细胞可适当加量至20%FBS。
THP-1细胞
THP-1（人单核细胞白血病）1.背景知识THP-1细胞系是从一名患有急性单核细胞白血病的1岁小男孩的外周血中分离得到的，1980年Tsuchiya等人建立的人单核细胞白血病细胞系，THP-1细胞被广泛用于单核细胞和巨噬细胞相关的机制、信号通路以及营养和药物运输等研究中。
属于悬浮细胞，适合用于转染或感染实验，其表面抗原HLA型为：A2，A9，B5，DRw1，DRw2，对乳汁珠和激活的红细胞有吞噬作用，无表面和胞质免疫球蛋白。
THP-1细胞可以用佛波醇、TPA诱导单核细胞分化。
相对于U937、HL-60、ML-2等白血病细胞系，THP-1更有类似人原代单核细胞的形态和功能特征（包括细胞分化标记）。
相对于人外周血单核细胞（PBMC），THP-1更易在实验室中培养和扩增，且具有更稳定的基因背景，不存在PBMC的个体差异性问题，利于实验结果的重现。
因此，THP-1是各大实验室常用的急性单核细胞白血病细胞系，是研究免疫和炎症的理想工具。
2.THP-1细胞培养基本信息细胞照片注意要点(1)THP-1细胞为悬浮生长，部分细胞聚集成团，部分细胞分散。
(2)THP-1细胞更喜欢酸性环境，在偏酸性环境中，THP-1生长更快，所以当培养基稍微变黄（呈橘红色）时，是适合细胞生长的，此时补液或半换液即可。
(3)THP-1细胞有密度依赖性，THP-1细胞密度低时，生长较慢，培养密度维持在4~8×105 /mL为宜；超过2.0×106/mL则需要传代。
(4)THP-1细胞对机械力较敏感。
正常培养时，应尽量避免吹打力道过大。
暴力吹打会使细胞分化和死细胞增加。
(5)血清质量差异可能引起细胞状态变化，建议选用高质量的胎牛血清。
(6)THP-1细胞复苏后通常需要3-5天恢复状态，建议复苏后48小时内不要进行操作3.THP-1的应用——巨噬细胞分化与炎症模型THP-1与人原代单核细胞都可以被诱导分化为巨噬细胞M1和M2，并释放相应的细胞因子。
thp-1细胞的培养方法和注意事项
HP-1细胞是一种单核细胞白血病细胞系，广泛应用于免疫学、血液学和肿瘤学研究。
THP-1细胞的培养方法和注意事项：
一、培养方法：
1.培养基：使用含有10%胎牛血清（FBS）的RPMI 1640培养基，
确保无菌且不含抗生素。
2.细胞接种：以每孔1×10^5个细胞接种到96孔板，在37℃、
5%二氧化碳的细胞培养箱中培养。
3.培养时间：通常情况下，每2-3天更换一次培养基，根据细胞生
长情况决定传代时间。
4.细胞传代：当细胞达到80%-90%汇合时，使用0.25%胰蛋白酶
和0.02% EDTA溶液进行消化，并按照1：3-1：5的比例传代。
5.细胞冻存：当细胞达到80%-90%汇合时，使用细胞冻存液进行
冻存，并置于-80℃冰箱中保存。
二、注意事项：
1.无菌操作：确保所有操作过程在无菌条件下进行，以防止污染。
2.细胞密度：注意控制细胞密度，避免细胞过度堆积导致生长状态
恶化。
3.培养液更换：定期更换培养液，以保持营养充足，防止有害代谢
产物积累。
4.避免刺激：在操作过程中，尽量避免对细胞产生机械性或化学性
刺激。
5.观察记录：定期观察细胞生长情况，记录实验数据，以便分析和
总结。
THP-1单核细胞培养-文档
这个是急性单核白血病细胞，悬浮的（如果养的时间很长了有的会贴壁），培养基用普通的1640就可以了，这里是这个细胞株的详细资料供参考。
THP-1： human acute monocytic leukemiaOrigin: established from the peripheral blood of a 1-year-old boy with acute monocytic leukemia (AML) at relapse in 1978; the cells can be used for induction of differentiation studies; the cells were described to produce lysozyme and to be phagocytic; carries t(9;11)(p21;q23) leading to MLL-AF9 fusion gene Morphology: round, single cells in suspension, partly in clustersMedium: 90% RPMI 1640 + 10% FBSSubculture: maintain at 0.1-1.0 x 106 cells/ml; split 1:2 to 1:3 every 3-4 days; seed out at ca. 0.5 x 106 cells/mlIncubation: at 37 °C with 5% CO2Doubling time: ca. 35-50 hoursHarvest: saturation density at about 1.0 x 106 cells/mlStorage: frozen with 70% medium, 20% FBS, 10% DMSO at about 5 x 106 cells/ml Mycoplasma: contamination was eliminated with Ciprobay (ciprofloxacin), then negative in DAPI, microbiological culture, PCR assaysImmunology: CD3 -, CD4 +, CD13 +, CD14 (+), CD15 +, CD19 -, CD33 (+), CD34 -, CD68 +, HLA-DR +Fingerprint: multiplex PCR of minisatellite markers revealed a unique DNA profile Species: confirmed as human with IEF of AST, MDH, NPCytogenetics: human near-tetraploid karyotype - 94(88-96)<4n>XY/XXY, -Y, +1, +3, +6, +6, -8, -13, -19, -22, -22, +2mar, add(1)(p11), del(1)(q42.2), i(2q), del(p21)x2-4, i(7p), der(9)t(9;11)(p22;q23)i(9)(p10)x2, der(11)t(9;11)(p22;q23)x2, add(12)(q24)x1-2, der(13)t(8;13)(p11;p12), add(?18)(q21) - carries t(9;11) associated with AML M5Viruses: ELISA: reverse transcriptase negative; PCR: EBV -, HBV -, HCV -, HHV-8 -, HIV -, HTLV-I/II -THP-1单核细胞是悬浮生长的细胞，用1640＋10％FBS是很容易养的，但复的细胞可适当加量至20%FBS。
thp-1诱导向m1极化实验步骤
thp-1诱导向m1极化实验步骤通过实验可以有效诱导THP-1细胞向M1巨噬细胞极化。
本文将详细介绍THP-1细胞的培养、诱导向M1巨噬细胞极化的步骤，以及相关的实验控制。
该实验步骤包括培养条件的设定、细胞处理、细胞相关试验和数据分析。
1. THP-1细胞培养- THP-1细胞的培养基为RPMI 1640，加入10%胎牛血清(FBS)和1%青霉素/链霉素。
细胞在37°C下的5% CO2培养箱中培养。
- 每两天检查细胞的状态，当细胞密度达到70-80%时，进行细胞的传代。
- 将细胞用无菌的PBS洗涤，并加入培养基中，用细胞刮板轻轻离心，混匀细胞悬液。
- 取部分细胞悬液加入计数板中，用显微镜和血细胞计数室统计细胞数目。
- 根据需要的细胞数目，离心收集细胞，以2000 rpm离心5分钟。
- 用培养基重新悬浮细胞，调整细胞密度至所需浓度。
2. THP-1细胞诱导向M1巨噬细胞极化- 将THP-1细胞按照所需密度加入6孔板或96孔板中，每个孔中细胞数目相同。
- 对于M1极化，可以使用LPS（脂多糖）和IFN-γ（干扰素-γ）进行处理。
根据实验需要的浓度添加适量的LPS和IFN-γ到细胞培养基中。
- 将孔盖好，将细胞培养在37°C的CO2培养箱中。
- 根据实验设计的需要，选择适当的时间点进行处理。
- 在处理完毕后，可根据不同实验的需求收集细胞进行下一步的实验处理。
3. 细胞相关试验- 可以通过免疫荧光染色、Western blot、RT-PCR等手段来检测M1巨噬细胞的特征标记物，如iNOS（一氧化氮合酶）、TNF-α（肿瘤坏死因子-α）等。
- 对于免疫荧光染色实验，先用PBS洗涤细胞，然后用4% paraformaldehyde固定细胞，再用0.1% Triton X-100进行渗透处理。
随后，使用适当的抗体与细胞进行孵育，进行特定标记物的检测。
- 对于Western blot实验，收集细胞后，细胞裂解并进行蛋白质浓度测定。
人急性单核细胞白血病细胞;THP-1贴壁培养
北京索莱宝科技有限公司
人急性单核细胞白血病细胞；THP-1贴壁培养
细胞名称：人急性单核细胞白血病细胞；THP-1
形态特性：单核细胞
生长特性：悬浮生长
培养条件：RPMI1640(w/o Hepes)+10%FBS
传代方法：维持细胞浓度在2×105~1×106cells/ml；2~3天换液1次
冻存条件：基础培养基+5%DMSO+20%FBS
特征特性：该细胞可以吞噬乳胶颗粒和激活的红细胞，细胞膜和胞浆内均没有免疫球蛋白，表达C3R和FcR；可受佛波酯TPA诱导向单核系方向分化；可作为转染宿主。
细胞处理方法：
1.细胞在培养瓶中培养至状态良好后灌满培养基运输，获得细胞后用酒精棉球擦拭瓶口消毒，然后在超
净台中操作。
2.将细胞转移至50mL的无菌离心管中，1000rpm离心5-10min，用完全培养基重悬细胞，适宜的密度分
瓶培养。
注意：
我们使用自产培养基及进口血清培养细胞，在您拿回细胞后，如想更换其它品牌培养基，请依照逐次替换的原则，先保留培养瓶中的培养基，多日多次代逐步更换，以减轻对细胞的刺激。
特别注意：（如使用公共实验室或初次接触细胞培养，建议添加双抗培养）
1.收到细胞后请尽快更换为含10%FBS的新鲜培养基。
2.如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时拍照并联系售后。
3.细胞任何售后问题，均需拍照存档并在2周之内及时联系客服。
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细胞攻略 - THP-1(人单核细胞白血病细胞)细胞培养教程
细胞攻略 | THP-1(人单核细胞白血病细胞)细胞培养教程细胞基本信息▲细胞正常生长形态照片细胞名称：THP-1(人单核细胞白血病细胞)细胞别称：THP1; THP 1; THPI; THP-1(ATCC); Tohoku Hospital Pediatrics-1细胞货号: SNL-044生长特性: 悬浮培养条件: 1640+10%FBS+0.05mM β-mercaptoethanol+1% P/S培养环境:空气，95%；二氧化碳 (CO2)，5%细胞简介：THP-1细胞从一名1岁的患有急性单核细胞性白血病的男孩的外周血中分离建立，细胞可以吞噬乳胶颗粒和激活的红细胞，细胞膜和胞浆内均没有免疫球蛋白，表达C3R和FcR。
THP-1细胞可受佛波酯、TPA诱导向单核系方向分化。
THP-1细胞可以用于3D细胞培养、免疫系统紊乱、免疫学和毒理学研究，也是一种合适的转染宿主。
THP-1细胞培养注意事项THP-1细胞悬浮圆形生长，偶有小聚团，属于正常现象，无需吹散；圆形透亮、细胞膜完整的细胞是活细胞，如果无法判断，可以取少量细胞用台盼蓝染色后计数确定细胞活率；少量细胞附着瓶底属于正常现象，可将悬浮细胞转移至新瓶，丢弃贴壁的细胞；THP-1喜欢偏酸环境，培养基呈橘色时可不用换液，补充适量新鲜培养基维持一天再进行换液或传代操作；THP-1有密度依赖性，密度低时生长较慢，培养密度维持在30万-100万细胞/mL之间为宜，超过80万细胞/mL即可传代；THP-1复苏后恢复较慢，如无特殊情况，复苏后48小时内不对细胞进行操作；THP-1生长需要稳定的环境，不频繁拿出培养箱，不频繁离心；培养时瓶子竖立放置（瓶盖朝上），可增加细胞局部密度，促进细胞增殖。
β-巯基乙醇可以消除活性氧自由基，维持细胞高密度生长。
若培养基中不添加β-巯基乙醇，长期培养细胞可能会出现大量贴壁，严重聚团等情况。
THP-1 细胞换液方法离心换液法：1. 准备所需的培养基、离心管以及无菌枪头等；（培养基提前预热）2. 将所有细胞悬液转移至离心管中；3. 900-1000rpm，3min离心；4. 弃上清，加5mL PBS轻轻重悬细胞进行润洗，再900-1000rpm，3min离心；Tips：此处PBS润洗是为了去除细胞碎片，平时培养若细胞碎片不多可以忽略此步骤，若碎片偏多，可以重复润洗2次。
人单核细胞白血病（THP-1）细胞培养方法
人单核细胞白血病（THP-1）细胞培养方法THP-1细胞系是1980年Tsuchiya等人建立的人单核细胞白血病细胞系。
它来自一位急性单核细胞白血病患者的血液，有分化为多种巨噬细胞的能力，是各领域研究常用的细胞系之一。
THP-1是人外周血的单核细胞系，最初来源于急性单核细胞性白血病患者。
属于悬浮细胞，适合用于转染或感染实验。
其表面抗原HLA型为：A2，A9，B5，DRw1，DRw2。
细胞复苏细胞复苏步骤1. 预热水浴锅至37℃2. 准备一个15mL离心管，加入2-3mL左右完全培养基待用3. 将细胞从-80℃冰箱或液氮中取出后，放进一次性PE手套中，立即投入水浴锅，迅速用力摇晃管子，使其1分钟内融化4. 酒精擦拭冻存管，进入生物安全柜，把融化的细胞悬液缓慢滴加到步骤2准备好的离心管中5. 1200rpm（约250g）离心3分钟6. 同时准备1个新的T25培养瓶，加入5mL完全培养基7. 去上清，新鲜培养基重悬细胞后滴加到步骤6的培养瓶里，放入培养箱小贴士：THP-1细胞复苏后通常需要3-5天恢复状态，建议复苏后48小时内不要进行操作。
细胞冻存细胞冻存步骤1. 预先配制好冻存液2. 细胞1200rpm（约250g）3分钟离心后3. 去上清，用配好的冻存液重悬细胞4. 转移入冻存管5. 冻存管放进程序冻存盒6. 冻存盒放进-80度冰箱过夜，再放液氮长期保存小贴士：由于THP-1是悬浮细胞，更易受到冻存影响，建议加大冻存密度，大约200万-300万/mL为宜，以提高复苏存活率。
细胞培养条件培养基：RPMI-1640+10%FBS+0.05 mM β-mercaptoethanol+1%P/S推荐传代比例：1:3-1:6，每2-3天换液一次培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳，温度：37℃传代操作当细胞密度达到约8x10^5cells/ml左右时，即可进行传代。
由于是悬浮细胞，可直接将细胞吸出，离心之后传代。
thp-1诱导向m1极化实验步骤
thp-1诱导向m1极化实验步骤为了更好地展示实验步骤，我将使用项目符号来呈现。
请注意，由于题目没有提供具体的实验内容和相关背景知识，以下是一个假设的实验步骤。
这仅是一个示例，并不代表实际实验中的详细步骤。
实验步骤如下：1. THP-1细胞培养- 使用无菌操作将THP-1细胞分散在含有适当培养基的细胞培养器中。
- 在37摄氏度、5% CO2的条件下孵育细胞。
- 每两天更换培养基，以保持细胞的生长和健康状态。
- 等待细胞达到所需的数量和状态（例如，对数生长期）。
2. THP-1细胞的活化- 将培养的THP-1细胞洗涤一次，以去除培养基中的杂质。
- 在细胞培养器中添加适当的活化剂（例如，细胞因子）来刺激THP-1细胞的极化。
- 按照实验要求和时间表，确定适当的活化剂浓度和培养时间。
3. M1极化- 收集活化的THP-1细胞。
- 在离心管中，以适当的转速和时间将细胞离心沉淀。
- 弃去上清液，用适当的缓冲液（例如，PBS）洗涤沉淀的细胞。
- 重复上述步骤，以确保细胞表面没有残留的活化剂。
4. THP-1向M1细胞的分化验证- 取一部分沉淀的THP-1细胞，制备细胞涂片。
- 使用适当的标记方法（例如，荧光染料或抗体标记）标记M1相关标记物（例如，IL-12，iNOS等）。
- 进行显微镜观察，并通过相应的检测器检测标记物的表达。
5. 数据分析和统计- 收集并记录细胞标记物表达的定量数据。
- 使用适当的统计学方法（例如，t检验，方差分析等）分析数据。
- 根据实验结果绘制图表或图形，并进行解释和讨论。
6. 结论- 根据实验结果，对THP-1细胞向M1极化的步骤进行总结。
- 讨论实验中可能存在的限制和改进的可能性。
- 提出进一步研究的建议，以深入了解THP-1细胞的极化机制。
请注意，上述步骤仅为一个假设的实验步骤，并不代表实际实验的详细过程。
在实际进行实验前，请根据具体实验要求和背景知识，调整和修改步骤。
另外，在撰写正式实验报告时，还需要包括引言、材料与方法、结果和讨论等部分。
急性单核细胞白血病细胞系_THP-1
急性单核细胞白血病细胞系_THP-1THP-1细胞系是从一名患有急性单核细胞白血病的1岁小男孩的外周血中分离得到的，自1980年建系以来，THP-1细胞被广泛用于单核细胞和巨噬细胞相关的机制、信号通路以及营养和药物运输等研究中。
相对于U937、HL-60、ML-2等白血病细胞系，THP-1更有类似人原代单核细胞的形态和功能特征（包括细胞分化标记）。
相对于人外周血单核细胞（PBMC），THP-1更易在实验室中培养和扩增，且具有更稳定的基因背景，不存在PBMC的个体差异性问题，利于实验结果的重现。
因此，THP-1是各大实验室常用的急性单核细胞白血病细胞系，是研究免疫和炎症的理想工具。
基因敲入：CRISPR-U™基因敲入THP-1细胞：通过核转染法将gRNA、Cas9和Donor共转入细胞中，gRNA和Cas9复合物造成靶位点DNA双链断裂后，细胞以携带敲入片段的Donor作为模板进行同源重组修复（HDR），将敲入片段重组到基因组靶位点。
CRISPR-U™可以通过核转染法高效地将CRISPR/Cas9以及Donor载体共转入THP-1细胞中，筛选后挑选单克隆培养。
选择不同的克隆分别进行靶位点扩增及测序，筛选出成功敲入的阳性克隆。
若敲入的是荧光蛋白等报告基因，也可以通过直接观察荧光进行初步筛选。
应用案例：通过建立基因敲除和敲入的THP-1细胞模型，明确胞内抗病毒反应的信号通路DNA通常定位于细胞核中，而异常定位在胞浆中的DNA与通常与病毒感染或肿瘤发生有关。
cGAS-cGAMP-STING信号通路可检测胞浆dsDNA的存在，并诱导强效的免疫反应，产生干扰素和激活其他免疫应答基因。
与之对应的，RIG1-MAVS 可以检测胞浆内的pppRNA（一类dsRNA，某些病毒的基因组），并诱导免疫应答。
有时候胞浆内会出现RNA和DNA的杂交复合物，这种分子通常在某些病毒感染的情况下出现。
为了研究这种RNA-DNA复合物是通过哪个通路激活免疫应答，研究者分别构建了MAVS、cGAS、STING敲除的THP-1细胞，分别将dsDNA、pppRNA、RNA-DNA复合物导入细胞，发现RNA-DNA复合物是通过cGAS-cGAMP-STING通路进行免疫激活。
thp-1细胞培养要点
thp-1细胞培养要点THP-1细胞培养要点引言：THP-1细胞是一种人类单核细胞系，常用于体外炎症和免疫研究中。
为了保证实验结果的准确性和可重复性，正确的培养方法是至关重要的。
本文将介绍THP-1细胞的培养要点，以帮助研究人员获得高质量的实验结果。
一、培养基选择：THP-1细胞可以在含有10%胎牛血清（FBS）的RPMI-1640培养基中维持生长。
此外，可以添加适量的抗生素（如青霉素和链霉素）来防止细菌污染。
二、细胞传代：当THP-1细胞达到80%~90%的密度时，需要进行细胞传代。
首先，将细胞培养液离心，以去除细胞沉淀。
然后，用无菌PBS洗涤细胞，以去除残留的培养基。
接下来，加入适量的消化酶（如胰蛋白酶）来解离细胞。
将细胞转移到新的培养瓶中，并加入新的培养基。
每3-4天进行一次传代，以保持细胞的健康生长。
三、细胞密度控制：THP-1细胞的密度对于实验结果的可靠性至关重要。
细胞过于稀疏会导致实验结果不准确，而细胞过于密集则会影响细胞生长和功能。
通常，将细胞密度控制在1×10^5~1×10^6个细胞/ml之间，以保证实验的稳定性和可重复性。
四、细胞分化：THP-1细胞可以通过添加诱导剂（如12-酰化平衡子）来诱导其分化成巨噬细胞。
分化后的THP-1细胞具有更接近体内巨噬细胞的特性，适用于更多类型的研究。
通常，在培养基中添加适量的诱导剂，并将细胞培养至48-72小时，即可实现细胞的分化。
五、细胞处理：在进行实验前，需要将THP-1细胞从培养瓶中转移到实验板或培养皿中。
在转移过程中，需要注意保持细胞的活力和完整性。
使用无菌的工具和培养基，并避免过度处理和长时间的离心，以减少细胞损伤和死亡。
六、细胞检测：为了确保培养的THP-1细胞的纯度和活性，需要进行细胞检测。
可以使用染色法（如朗格罗斯染色）来检测细胞的形态和数量。
此外，还可以使用流式细胞术或免疫荧光染色来检测细胞表面标记物的表达和细胞功能。
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THP-1培养
1、细胞复苏：从液氮罐中快速取出细胞，然后在37度水浴中快速摇动约1-2min，水面要
在冻存管盖以下，防止水进入冻存管。
2、转入平板：在超净台中，取一平板，先加入12ml 1640培养液，铺满板底，然后把冻存
管中的细胞全部吸到平板中，8字摇匀，显微观察状况，然后37度培养；
3、细胞换液：复苏过夜后，观察培养液有变黄(2-3天)，此时换液，先把细胞液全部吸入
15ml离心管中，900-1000r/min离心5min，（转速不能大于1000），吸掉上层培养液，加入新的1640，吹匀，全部吸到培养板中，37度培养。
4、传代：
悬浮生长细胞的传代：有以下两种方法：
1、直接传代法：①悬浮细胞自然沉淀瓶底；②用吸管吸去上清1/2～2/3；③轻轻吹打成细胞悬液；④等分装入数个培养瓶（皿）
2、离心传代法：①将细胞悬液转移到离心管内；②800～1000r/min离心5min，弃上清；③加新的培养液到离心管内；④吸管吹打成为细胞悬液；⑤分瓶（皿）
悬浮细胞传代，如果需要做实验大量扩增细胞的话，可以传代前先将培养瓶直立静置，待大部分细胞都沉降的细胞瓶底，勿晃动，轻轻吸出培养基，再加入新鲜培养基即可。
这样细胞数目不会损失多少，而且上层吸去的也是死细胞。
但建议加入新鲜培养基后分瓶扩增，毕竟一个较小的空间和有限的培养基环境下细胞扩增有限。
如果暂时不要做实验，只是维持传代的话，只要将大部分培养基吸去，留一点儿在瓶底，再加入新鲜培养基即可。
至于悬浮细胞何时传代合适，个人经验（我只养过THP-1和U937两种悬浮细胞）是待培养基变黄有些过，这时显示培养基已明显偏酸，对细胞并不适宜。
一般待培养基开始变黄，这时将细胞瓶放平，细胞能密密麻麻铺满整个瓶底就要传代了，这表明细胞的生长空间要不够了，就需传代分瓶扩增。
5、冻存液：20% 1640+70%胎牛血清+10%DMSO （ATCC里边有说明）；(7:2:1)
梯度降温冻存，4度，30min；-20度，1h；-80度，过夜；然后转入液氮。
6、THP-1 细胞是悬浮细胞，相对贴壁细胞要求高一点。
细胞养不好，可能的原因有，THP-1
细胞特别依赖细胞浓度，ATCC上10 5到106每ML，是一个很高的密度，细胞少了就不太容易养好。
1、细胞株的来源很重要，如直接来源于ATCC（American Type Culture Collection 美国
模式菌种保藏中心）生命力要强于国内细胞库的
2、注意细胞的密度一定要高，介于5×105——106/ML之间，增值的快。
细胞数量太少，
不适合THP-1生长，一般状态不好的THP-1在培养了3天后数量仍然不多，继续培养一天或者两天，培养基严重泛黄，细胞数量会巨增。
这一点不同于同是单核细胞系的U937细胞。
3、THP-1细胞适合在细胞ph环境偏酸环境生长，对培养基变化非常敏感，所以尽量使
用相同ph的1640，
4、还要注意，传代后切忌常移出培养箱观察，否则会影响细胞生长，状态变差，一般
首先表现为细胞内颗粒变多。
一般THP-1生长相当快，对于状态已经不好的情况，建议传代后3～4天再观察，一般4天时间培养基已明显泛黄，细胞数量巨增。
1)THP-1细胞喜欢酸性条件，你不要老是换培养基。
越酸的条件，细胞密度越大，细胞就长得越好。
2）不要频繁换液，一般2-3次换液离心一次（只是补充培养基）
3）使用1640（A TCC推荐），注意加碳酸氢钠2.5g就可以了，宁酸勿碱
4）注意冻存的时候密度大些，推荐用血清冻存
5）感觉Hyclone的血清比较好
6）复苏比较慢，建议开始用小瓶，不要用一次性的。