免疫论文之抗ENA抗体检测

用条带印记法对抗ENA抗体的检测
（潘跃承09检验本科临床生化班）
摘要本次实验是利用条带印记法对抗可提取行抗原(ENA)抗体中各组分的检测。

实验操作主要是将具有多种抗原性的细胞核盐水可提取性抗原(ENA)经凝胶电泳分离后，转印于硝酸纤维素膜上，加入待测血清反应后，再加入酶标的二抗，最后加底物显色，观察结果。

实验最后检测到70KD（抗U1RNP）,53KD(抗DM),32KD （抗U1RNP）,29KD28KD(抗SM抗U1RNP),22KD（抗U1RNP）显色区带的抗体。

利用条带印记法简单，检出率高，可以较顺利的检测出抗ENA抗体中的各组分。

关键词条带免疫印迹法抗ENA抗体标准谱带图
前言条带印记法是通过将生化特性明确的纯化抗原或基因重组抗原平行印制在硝酸纤维膜上，加入待测血清反应后，再加入酶标二抗，最后加入底物显色，最后观察各条带区域的抗体。

其中的一些抗体对一些相关的疾病的阳性诊断率有重要的临床意义。

如抗Sm 三条区带同时出现时，诊断系统性红斑狼疮的阳性率为30%，抗U1RNP 其中70KD，32KD应出现任意一条区带时，诊断为MCTD 的概率为95%，SLE的概率为32%。

1材料与方法
⏹ 1.1试剂盒组成
⏹浓缩洗涤液：25ml×2
⏹酶标抗体：6ml×2
⏹显色液A：25ml×1
⏹显色液B：25ml×1
⏹终止液：25ml×1
⏹膜条：8条×5
1.2仪器：加样枪（移液器）：上海荣泰生化工程有限公司；恒温箱：上海-恒科学仪器有限公司
试剂：可提取抗原（ENA）自身抗体谱检测试剂盒（免疫印迹法），上海求精生化试剂仪器有限公司，标本：血清；规格：40人份/盒；2~8摄氏度避光保存，酶标抗体-20摄氏度保存，开封后4摄氏度保存，有效期一个月；产品批号：40E1120201；生产日期2012.02.13；有效期至2013.02.12。

1.3操作方法
⏹ 1.31将浓缩洗涤液用蒸馏水作1∶10稀释。

⏹ 1.32取出反应槽，每槽加入0.5ml洗涤液，然后加入待检血清10ul，充分
混匀，缓慢摇动于37℃孵育30min。

⏹ 1.33弃去槽内液体，在吸水纸上拍干，用洗涤液洗涤4次，每次每槽1ml，
洗涤1min。

⏹ 1.34每槽中放洗涤液0.5ml，酶标抗体20ul，混匀，缓慢摇动于37℃孵育
30min。

⏹ 1.35同3洗涤
⏹ 1.36加入显色液A 0.5ml，显色液B 0.5ml，室温反应10min
⏹ 1.37每槽加入0.5ml终止液，终止反应，1min后弃去液体，用自来水洗
涤数次，取出膜条，用吸水纸吸干后即可进行结果判断。

2结果
2.1对结果的判读
结果判断请参看标准谱带图，零位线(蓝色线)下。

约2mm处的第一条显色带为质控线，此显色带若不出现，说明试剂失效
判断结果时，要注意将谱带定位与带型结合起来。

带型指一种抗体有多条区带时，区带间相对不变的位置关系构成的图型。

谱带定位与标准带相差1mm 内属允许范围
标准谱带图如下
2.3，通过检测，在谱带上看见了70KD,53KD,32KD,29KD28KD,22KD条带区域。

即相对应的抗体是抗U1RNP,抗DM，抗U1RNP。

抗SM抗U1RNP，抗u1RNP。

3讨论
用条带印记检测亢ENA抗体的各组分实验主要将具有多种抗原性的细胞核盐水可提取性抗原(ENA)经凝胶电泳分离后，转印于硝酸纤维素膜上，加入待测血清反应后，再加入酶标的二抗，最后加底物显色，然后利用图谱或者借助平板式扫描仪扫描图像观察结果。

本次实验检测到的条带区域针对的相应抗体主要是抗U1RNP，相关的疾病主要是SLE.MCTD等。

本次实验虽然较简单，但是也存在诸多影响因素，如：实验前从冰箱中取出的试剂盒需要平衡到室温，取膜条时应该使用镊子夹取，膜条带数字标号的一边（禁止触摸膜条反应区避免损坏包被有抗原的膜条）。

膜条取出后将剩余的膜条放回膜条包装袋，封好封口，所有的温育反应都需要在摇摆床上室温18到25度的反应，温育的时间要求准确，尤其是底物温育时间，如果检测标本较多，建议根据标本量分段进行计时。

如果底物反应时间延长，反应灵明度有可能提高，底物温育结束后，用蒸馏书或离子水清洗膜条后务必用吸水纸将膜条上残留的液体轻轻吸净，空气中自然干燥15分钟以后再判读结果，只要观察到着色均匀，清洗可见的反应条带，方可判为阳性。

本实验采用的条带印记法与传统的免疫印记法相比具有以下优点：由于采用高度纯化的抗原，因此灵明度高，特异性好，结果判读简单，抗原位置固定，并且每一种抗体只对应一条条带，不需要与标准带比较，即可判读结果，另外每个反应区具有质控带可以显示操作是否准确及实验系统是否正常工作。

4，结论
利用此类检测试剂和配套仪器已经广泛应用鱼自身抗体病原体抗体以及过敏原Ige抗体的临床检测，对于诊断一些疾病具有十分重要的临床诊断价值。

参考文献
1胡旭刘红霞特发性血小板减少性紫癜患者ANA和抗ENA抗体的检测意义中国实用医药-2011年36期
2 何健伟李静新疆石河子地区汉族人群ANA与抗ENA抗体的检测结果分析
中国实验诊断学-2011年9期
3朱金成牟焕梅血清抗ENA抗体的检测及临床应用医学检验与临床-2008年5期
4柳永和周韵九结缔组织病患者抗ENA抗体的检测及其临床意义湖南医科大学学报-1996年5期。