生物SBA

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SBA-40D型葡萄糖生物传感分析仪说明书

SBA-40D型葡萄糖生物传感分析仪操作使用手册
（1）按下键，屏幕显示如右图，
（2）仪器自动清洗二次，清洗完毕后进入定标状态。

（3）洗针——吸取多于25ul标准液后迅速排空，连续洗针3次；
（4）旋转芯杆，精确吸取标准液至25ul。

（5）擦去针尖外液体——用滤纸条夹住针尖，向针头方向迅速擦针；
（6）仪器自动清洗完毕，屏幕显示如右图时，
（如提示声设定为“开”状态，仪器同时可发出“嘀”进样提示声），将进样针自然迅速地竖直插入进样孔，然后迅速将样品完全推入反应池中；
（7）立即拔出进样针后，擦去针尖外液体。

此时，仪器进行测定，屏幕显示如右图；
（8）在仪器测定期间可做下一次进样准备。

反应结束后，仪器进行自动清洗，屏幕显示如右图，
重复（4）~（7）操作，直到定标通过，此时屏幕显示如右图；
（9）定标通过后，用样品对进样针连续洗涤3次；
（10）旋转针杆，精确吸取25ul待测样品，擦去针尖外液体——用滤纸条夹住针杆，向针头方向迅速擦针；
（11）当屏幕显示如右图时（如提示声设定为“开”状态，仪器同时可发出“嘀”
进样提示声），迅速将样品注入反应池；
（12）反应结束后，读取测定结果，此时屏幕显示测定结果，如右图；
（13）仪器自动清洗，等待进入下一次样品测定状态，屏幕显示如右图，
继续测定样品可重复（9）~（12）操作；
（14）测定完毕后，按键，停止运行，停止后，屏幕显示如右图。

临床生物化学与检验-自考重点(1)

蛋白质与非蛋白含氮化合物的代谢紊乱清蛋白：运输游离脂肪酸、某些激素、胆红素、多种药物等。

急性时相反应（APR）：（名词解释）血浆前清蛋白、清蛋白、转铁蛋白浓度出现相应下降的炎症反应过程称之为急性时相反应前清蛋白（PA）：（名词解释）在SPE（正常血清蛋白电泳）中显示在清蛋白前方故而得名，主要包括视黄醇结合蛋白（RBP）和甲状腺素转运蛋白（TTR），两者均由肝脏合成。

前清蛋白（PA）的临床意义：属负性APP，作为肝功能不全的指标触珠蛋白（Hp）：（名词解释）又称结合珠蛋白，在SPE（正常血清蛋白电泳）中位于α2区带，为а2в2四聚体。

触珠蛋白（Hp）临床意义中溶血性疾病，连续观察可用于监测溶血是否处于进行状态。

所有的缩写：急性时相反应（APR）、正常血清蛋白电泳（SPE）、前清蛋白（PA）黄醇结合蛋白（RBP）、甲状腺素转运蛋白（TTR）、清蛋白（Alb）、а1-抗胰蛋白酶（а1-AT或AAT）、蛋白酶抑制物（Pi）、а1-酸性糖蛋白（AAG）、触珠蛋白（Hp）、α2-巨球蛋白（α2-M或AMG）、铜蓝蛋白（Cp）、转铁蛋白（Tf）、C-反应蛋白（CRP）、血清淀粉样蛋白A（SAA）转铁蛋白（Tf）用于贫血的鉴别诊断，缺铁性低血素贫血，转铁蛋白（Tf）代偿性合成增加CRP是第一个被认识的APPCRP主要用于结合临床监测疾病：①筛查微生物感染；②评估炎性疾病的活动度；③监测系统性红斑狼疮、白血病和外科手术后并发的感染；④新生儿败血症和脑膜炎的监测；⑤监测肾移植后的排斥反应蛋白质特有的结构或性质：①重复的肽链结构；②酪氨酸和色氨酸残基对酚试剂反应或紫外光吸收；③与色素结合的能力；④沉淀后借浊度或光折射测定。

凯氏定氮法：是公认的参考方法，目前用于标准蛋白质的定值和校正其他方法等，并适用于一切形态（固体和液体）的样品。

双缩脲法是体液总蛋白测定的常规方法。

直接紫外吸收法常用于较纯的酶、免疫球蛋白等蛋白质测定。

大豆凝集素的纯化及其凝集不同肿瘤细胞的探讨

ISS N 100727626C N 1123870ΠQ中国生物化学与分子生物学报Chinese Journal of Biochemistry and M olecular Biology2003年6月19(3):401～405・研究简报・大豆凝集素的纯化及其凝集不同肿瘤细胞的探讨荆　剑,　赵　翔,　张　页3(北京大学医学部细胞生物学与遗传学系,北京　100083)Purification of Soybean Agglutinin and Its AgglutinationActivity Tow ard Different C ancer Cell LinesJ I NGJian ,ZH AO X iang ,ZH ANG Y e3(Department o f Cell Biology and G enetics ,Peking University H ealth Science Center ,Beijing 100083,China )Abstract A novel and efficient method for purification of s oybean agglutinin (S BA )from s oybean wasreported.The method was characterized by selective extraction of S BA from s oybean hom ogenate with barbiturate bu ffer (pH 612),rem oval of im purity by hydroxyapatite ,and the final purification of S BA by guaran affinity chromatography.The purified S BA showed a single band of 2715kD by S DS 2PAGE.The lowest concentration of S BA that caused agglutination of the rabbit red blood cells was 0131mg ΠL.Agglutination of different cancer cell lines by the purified S BA was examined.Strong agglutination of the human nas opharyngeal C NE cells ,m ouse Lewis lung carcinoma cells ,and rat mammary adenocarcinoma R3230AC cells was observed.H owever ,S BA could not agglutinate the human hepatocellular carcinoma BE L 27402cells ,suggesting that unlike the above 2mentioned three cell lines ,the BE L 27402cells may not express N 2acetylgalactosamine (G alNAc )or galactose (G al )residues in significant am ount at the non 2reducing terminals of their cell surface glycans.K ey w ords s oybean agglutinin ,affinity chromatography ,hydroxyapatite ,malignant cells 中图分类号　Q94611,Q279收稿日期:2002209203,接受日期:2002211206国家自然科学基金资助项目(N o.30070184)3联系人　T el :(010)62092469,E 2mail :pagezyzhang @荆　剑,男,1975年6月生,硕士Received :September 3,2002;Accepted :N ovember 6,2002Supported by National Natural Science F oundation of China (N o.30070184)3C orresponding author T el :(010)62092469E 2mail :pagezyzhang @ 大豆凝集素(S BA )能特异识别N 2乙酰氨基半乳糖(G alNAc )或半乳糖(G al ),引起兔红细胞凝集[1].正常人体细胞表面糖链上的G alNAc 或G al 通常被唾液酸分子覆盖,不能被S BA 识别.新近研究表明,能被S BA 特异识别的异常糖链可在多种恶性肿瘤细胞上表达,包括:大鼠乳腺癌细胞系R3230AC[2],小鼠乳腺肿瘤细胞系TPDMT 24[3],小鼠T 细胞肝转移淋巴瘤L5178Y 2F9、S L225[4],小鼠Lewis肺癌细胞[5],人类结肠癌细胞系HT29、SW1222[6],人类胰腺癌细胞系Hup 2T3、Hup 2T4[7],人类乳腺癌细胞系T 247D [8],附睾乳头状囊腺癌[9]等.其中,人类原发乳腺癌细胞和人类结肠癌细胞上S BA 所识别结合的糖链结构为αG alNAc 2O 2serine Πthreonine ,即著名的肿瘤相关糖抗原Tn 抗原[10].提示我们有可能利用S BA 研发新型、广谱的肿瘤诊断和靶向治疗用生物制品.另外也有学者利用辣根过氧化物酶标记的S BA 作为示踪物观察了神经损伤后传入神经纤维的生长分布情况[11];运用S BA 2Sepharose 亲和层析柱快速分离C D34阳性造血干细胞[12]等.因此,S BA 已成为一种有广泛应用前景的生物制剂.虽然S BA 的生物来源丰富,极具开发潜力,但目前的多种S BA 提取方法均存在操作步骤烦琐、效率低、成本高的弊病,无法满足大规模研发利用的需要.本文对纯化过程中各关键步骤,包括抽提、沉淀,以及随后的色谱柱分离等,进行了系统性的优化改进,提出了一种新的高效纯化方案.进而利用纯化的S BA 探讨了对几种不同癌细胞系的凝集反应.1　材料和方法111　材料与仪器东北黄豆购自市场.人鼻咽癌C NE细胞系、大鼠乳腺癌SHZ288细胞系购自上海细胞生物所.小鼠Lewis肺癌细胞、肝癌BE L27402细胞为本实验室保存.羟基磷灰石(hydroxyapatite,H A)由本实验室按文献[13]制备;瓜耳胶(guar gum)购自Fluka;S BA纯品(用作标准品)和分子量标准蛋白质购自Sigma公司.所用主要仪器有:垂直电泳仪EPS601 (Amersham Pharmacia Biotech AB),H D23紫外检测仪(上海沪西分析仪器厂),J F29902色谱工作站(北京佳分分析仪器有限公司).兔红细胞制备如下:自新西兰大白兔耳缘静脉取血,以含5000UΠml肝素的生理盐水抗凝,离心分离红细胞,以生理盐水洗涤3次后,用凝集反应液(20mm olΠL巴比妥钠,0185%NaCl,0102%NaN3,1 mm olΠL CaCl2和MnCl2,011%明胶,pH714)配成1%兔红细胞悬液待用.112　方法11211　S BA的粗提　称50g黄豆以蒸馏水浸泡过夜,共加500ml,4℃平衡的匀浆缓冲液(20mm olΠL巴比妥钠,0185%NaCl,0102%NaN3,1mm olΠL CaCl2和MnCl2,1mm olΠL P MSF,pH6120),用家用制豆浆机匀浆(12000rΠmin,2min),所得匀浆液于4℃下搅拌4 h,离心(8000g,20min),收集匀浆上清液共330ml,向上清液中加入磷酸盐颗粒(Na2HPO411136g, NaH2PO4・2H2O3112g),调节pH值至7左右,并确保磷酸盐浓度为100mm olΠL,即为S BA粗提液.11212　H A吸附过滤　将H A(100ml压积)填充于G3砂芯漏斗中,用150mm olΠL磷酸盐缓冲液(P B,含1 mm olΠL CaCl2和MnCl2,pH712)平衡,将粗提液缓慢加入到漏斗中,待粗提液全部滤过后,用250ml150 mm olΠL P B洗涤H A,收集滤过液(含S BA)550ml. 11213　亲合层析　按照文献[14]的方法制备交联瓜耳多糖凝胶,配1L20%异丙醇,加入7g NaOH (终浓度0117m olΠL),完全溶解后加入50g瓜耳胶粉末,剧烈搅拌防止瓜耳胶成团.15min后,加15g 32氯环氧丙烷(终浓度0116m olΠL)于粘稠的瓜耳胶溶解液中.在40℃的恒温水浴中持续搅拌3h后提高温度至70℃过夜.加入1m olΠL HCl溶液以中和碱,用过量的蒸馏水清洗数次,即得交联瓜耳多糖凝胶约600ml.取部分凝胶填充亲和层析柱(312cm×24cm),以20mm olΠL P B(pH712)作为平衡液洗柱.将前述S BA滤过液上样,待平衡液洗涤至A280< 0102时,换用含1%乳糖的平衡液洗脱,紫外检测仪监测并用色谱工作站记录图谱,收集洗脱峰,检测凝集活性.所得S BA洗脱液对5mm olΠL P B(pH712)透析除去乳糖,冷冻干燥后即得S BA纯品.11214　纯度鉴定　以S DS2PAGE鉴定S BA纯度,样品缓冲液含巯基乙醇,凝胶浓度为15%,电泳后用考马斯亮蓝染色,分析各提取阶段S BA的纯度. 11215　蛋白质含量测定　精确称量购自Sigma的S BA纯品,配成标准浓度的溶液,测A280nm吸光值,求得S BA的消光系数ε,并据此用紫外吸光法测定纯化后S BA的含量.对于匀浆粗提液和H A柱滤过液,采用Brad ford法测定其总蛋白质含量.11216　S BA凝集活性及比活性的测定　凝集活性测定参照文献[15],即:向试管(1cm×10cm)中加入待测样品100μl,用凝集反应液作倍比稀释,加入100μl1%兔红细胞悬液,振荡混匀,室温静置3h后观察管底凝集图象,判断凝集程度的强弱.比活性的测定:将纯化S BA与标准S BA(起始蛋白质浓度均为0125mgΠml)分别进行倍比稀释,比较二者的兔红细胞凝集活性.匀浆粗提液和H A柱滤过液亦依次倍比稀释测定凝集活性,以标准S BA的最低凝集浓度为参考,计算样品的S BA含量与比活性.11217　S BA与几种癌细胞的凝集反应　癌细胞用1640培养液加10%小牛血清培养,实验前用0125%胰酶消化使细胞游离,用含血清的培养液终止胰酶后,用含1mm olΠL CaCl2和MnCl2的生理盐水溶液清洗,配制成2×105Πml的细胞悬液,实验组中加入S BA(终浓度40mgΠL),对照组中不含S BA,室温静置10min后于显微镜下观察结果并作记录.2　结果211　SBA的纯化及纯度鉴定S BA纯化过程如下:大豆以巴比妥钠2乙酸缓冲液(pH612)一步匀浆抽提后,经H A过滤和交联瓜耳多糖凝胶柱亲和层析,即可得到S BA纯品.S DS2 PAGE检测S BA纯化过程如Fig11所示:①粗提液(泳道1)、H A色谱柱流出液(泳道2)均有很多杂蛋白区带.②经亲和层析提纯的S BA(泳道3)只有一条蛋白带,位置与Sigma公司S BA纯品(泳道4)相同,分子量为2715kD.用Sigma公司的S BA标准品测算出1mgΠml S BA溶液ε280nm=01936(光程=1cm),根据此值测算204中国生物化学与分子生物学报19卷出从50g 黄豆中可获得6816mg 电泳纯的SBA.Fig.1　Analysis of the sam ples from different purification steps by S DS 2PAGE1:Crude s oybean extract (10μg );2:Filtrate from H A (10μg );3:S BA after affinity chromatography (10μg );4:S BA from S igma212　纯化SBA 的比活性测定S BA 能特异凝集兔红细胞,凝集强度随S BA 的倍比稀释逐渐减弱,直到凝集临界状态(critical agglutination ),即肉眼观察不到明显红细胞凝集,而在显微镜下观察有明显的红细胞凝集块.经测定,纯化S BA 与标准S BA 临界凝集浓度均为0131mg ΠL ,二者的比活性相同,均为312×104U Πmg.各步骤的纯化系数和产率见T able 1.213　SBA 与几种癌细胞的凝集反应S BA 对人鼻咽癌C NE 细胞有明显的凝集作用(Fig 12B ),未加S BA 的对照组(Fig 12A )则无凝集现象.小鼠Lewis 肺癌细胞、大鼠乳腺癌SHZ 288细胞的凝集实验结果与人鼻咽癌C NE 细胞凝集实验结果相似.而在同样条件下S BA 对肝癌BE L 27402细胞无凝集作用.　T able 1　Purification of S BAT otal protein ΠmgT otal activity ΠU 3S pecific activity ΠU ・mg -1Purification factorY ield (%)Crude s oybean (50g )extract 4252.08.5×106 2.0×1031100H A filtrate3227.08.2×106 2.5×103 1.396.5G uaran affinity chromatography68.62.2×1063.2×10416.025.93The agglutination unit (U )is defined as the am ount of S BA that can cause critical agglutination of 200μl rabbit erythrocytes in a concentration of 0.5%(packing v olume )Fig.2　Agglutination of human nas opharyngeal CNE cells by S BA (A )W ithout S BA (×252);(B )W ith 40mg ΠL S BA (×252)3　讨论S BA 的现有纯化方法多采用硫酸铵沉淀法进行第一步初级分离,但我们的预实验表明,当样品体积较大(超过300ml )时,沉淀物的透析脱盐操作很不便,而且透析后的溶液很粘稠,常导致随后的亲和层析柱堵塞.我们曾尝试通过冷乙醇沉淀法和S BA 等电点(pI 5115)沉淀法进行初级分离,但实验发现二者均无明显的分离效果,且当匀浆缓冲液的pH 值为612时,凝集活性集中在离心后的上清液中,而沉淀物用50mm ol ΠL 的磷酸盐缓冲液(pH 716)溶解后,只有极低的凝集活性,表明大量杂蛋白在pH 612时处于沉淀状态.因此,我们设计了在pH 612条件下匀浆抽提S BA 的方案,避免了过多杂蛋白的溶解,有效降低了粗提液的粘度.H A 分子表面有带正电荷的位点,能吸附带有磷酸根或羧基等基团的分子[16].S BA 等电点为5115,在pH 值大于等电点时带负电荷,可被H A 吸304第3期荆　剑等:大豆凝集素的纯化及其凝集不同肿瘤细胞的探讨　附.我们曾探索了多种H A柱层析条件,发现均不能获得电泳纯S BA.因而采用了相反的策略,即在150 mm olΠL磷酸缓冲液条件下,使H A对杂质吸附,但对S BA不吸附.从而使通过H A柱滤过液澄清透亮、粘稠度降低并保留了绝大部分S BA的凝集活性(T able 1),适合下一步的亲和层析分离.瓜耳胶价廉易得,文献曾报道用瓜耳胶制备交联瓜耳多糖凝胶作为过滤介质[14].我们根据瓜耳胶糖含G al残基的特点,在此利用12氯环氧丙烷交联瓜耳多糖凝胶作为亲和层析介质,成功纯化了S BA.国内关于凝集素的研究近年来有较多报道,包括孔石莼凝集素[17]、油麻藤种子凝集素[18]、格拉姆柱花草凝集素[19]、红桂木凝集素[20]、杨树菇凝集素[21]、藏红花凝集素[22]的纯化和活性研究等.传统纯化方法的共同特点是,原材料经匀浆,硫酸铵沉淀法初级分离后,用分子筛色谱柱或离子交换柱进一步分离,最终通过亲和层析柱,得到目的凝集素.以上方法在进行凝集素的大批量制备时不免会遇到诸如操作过程复杂,成本高,效率低等问题.关于大豆凝集素纯化,国内曾有采用疏水作用色谱法[23]的文献,但所得S BA未经S DS2PAGE鉴定纯度.我们提出了一套完整的S BA提纯方案,该方案避免了脱脂处理、硫酸铵分级沉淀和脱盐等繁琐步骤,大大简化了提纯过程.值得注意的是,不同品系大豆的S BA含量也不尽相同.我们曾经比较了黄豆和青豆两种大豆,结果显示黄豆中S BA的含量要明显高于青豆.另外,曾有文献[24]报道,S BA占大豆粗提液的216%,高于我们所使用的黄豆(116%),提示寻找高S BA含量的大豆可进一步提高S BA产率.S BA与几种癌细胞的凝集反应结果说明人鼻咽癌C NE细胞、小鼠Lewis肺癌细胞、大鼠乳腺癌SHZ2 88细胞表面的糖链末端均含有大量的G al或G alNAc残基.而肝癌BE L27402细胞表面的糖链末端不含或低水平含有G alΠG alNAc残基,或处于隐蔽状态,在所测条件下不足以引起凝集反应.人鼻咽癌C NE细胞能被S BA凝集的现象在国内外的文献中还未见报道,为人鼻咽癌C NE细胞表面糖结构的研究提供了新的信息.目前,国内从基因[25,26]、cDNA微阵列[27]和蛋白质[28]的角度研究肿瘤已经取得了显著进展,而从多糖[29]、糖脂[30]和细胞糖链[31,32]的角度探讨糖类与分化和癌变的关系也日益受到重视.发挥我国凝集素资源丰富的优势,对于多方位地开展抗肿瘤研究是十分有益的.参考文献(R eferences)1　G ordon J A,Blumberg S,Lis H,Sharon N.Purification of s oybean agglutinin by affinity chromatography on Sepharose2N2ε2aminocaproyl2β2 D2galactopyranosylamine,FE BS 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葡萄糖生物传感器研究概况

葡萄糖生物传感器研究概况葡萄糖是动物和植物体内碳水化合物的主要组成部分，因此葡萄糖的定量测定在生物化学、临床化学和食品分析中都占有很重要的位置。

1954年Clark的氧电极分析方法使活体组织氧分压的无损测量成为可能，由此打开了生物传感器这一研究领域。

50多年来各国科研人员对生物传感器的研究和发展使得葡萄糖传感器在食品分析、发酵控制、临床检验等诸多方面得到应用并发挥了重要的作用。

本文对葡萄糖生物传感器的分类、原理及发展概况等作一简要概述。

1.概念生物传感器是用来侦测生体内或生体外的环境化学物质或与之起特异性交互作用后产生响应的一种装置，Gronow将其定义为“使用固定化的生物分子结合换能器”[1]。

它利用生物化学和电化学反映原理，将生化反应信号转换为电信号，通过对电信号进行放大和转换，进而测量被测物质及其浓度[2]，是一种集现代生物技术与先进的电子技术于一体的高科技产品。

生物传感器可用于探索揭示生命系统中信息的产生、存储、传输、加工、转换和控制等基本规律，探讨应用于人类经济活动的基本方法。

葡萄糖传感器是生物传感器领域研究最多、商品化最早的生物传感器[3]，为葡萄糖氧化酶，GOD）经固化后于氧电极组成成。

这一生物传感器可在非常短的响应时间（glucose oxidase内完成对葡萄糖的测定，其线性范围为0～30mg?dL-1，能稳定使用22d，测定的相对标准偏差小于1.2。

2.分类关于葡萄糖生物传感器的分类，不同的研究方向，有不同的分类方法，主要有以下三种分类。

一是根据生物传感器中分子识别元件即敏感元件划分为：酶传感器（enzyme sensor），微生）），组织传感器（tis-suesensor物传感器（microbial sensor），细胞传感器（original sensor和免疫传感器（immunolsensor）。

二是根据生物传感器的换能器即信号转换器分类，如：生物电极（bioelectrode）传感器，半），热生物传），光生物传感器（optical biosensor导体生物传感器（semi conduct biosensor）等。

SBA-40E生物传感分析仪使用说明

小包缓冲剂成分相同每包可配制500ml。
表4：缓冲剂成分及其作用
试剂名称
作用
磷酸氢二钠
维持恒定的pH，提供一定的离子强度
磷酸二氢钠
维持恒定的pH，提供一定的离子强度
EDTA二钠盐
络合使酶失活的二价阳离子
苯甲酸钠盐
抗霉剂
硫酸庆大霉素
抗菌剂
氯化钠
与电极电解质平衡
第四节标准液
SBA血糖、血乳酸专用：200mg/100ml葡萄糖、100mg/100mlL-乳酸混合标准液、100mg/100ml葡萄糖、50mg/100mlL-乳酸混合标准液。
标准液除用于仪器读数校正，还兼作线性检查。
第
第一节分析仪的安装
仪器开箱后，先取出试剂盒和备件，按包装清单进行清点，把暂时不用的试剂和备件放好，将分析仪整机取出，去除用于固定的胶带或泡沫包装材料。从试剂盒取出一包缓冲液，按包装上的标准容量用蒸馏水溶解，倒入缓冲液瓶内，把仪器左侧后方的缓冲液硅胶管插入缓冲液瓶内，把左侧前方的废液硅胶管插入废液瓶内。
二、反应池系统
反应池系统由有机玻璃反应池、进样开关、电极、搅拌电机等组成，右图上部黑色圆柱体为进样开关，中间为进样孔。下部为搅拌系统，搅拌电机安装于黑色支架下面。反应池二侧是2个酶电极，白色螺母是电极的固定螺丝。更换酶膜时只要拧下这个螺母即可卸下电极。
进样开关是一个红外光控开关，进样时，将进样针从进样孔插入，当进样针插到底部时，进样开关的光路断开，仪器即探测到进样动作。
第一节工作原理
SBA-40E型生物传感分析仪利用酶促反应来进行定量分析，测定的关键传感器是固定化酶和H2O2电极复合传感器，分析过程基于以下生化反应：
底物＋O2＋H2O
固定化酶膜
产物＋H2O2

SBA-40D型生物传感分析仪简介

SBA-40D型生物传感分析仪
SBA-40D型分析仪是40C型的升级版。

采用蓝色液晶屏显示，中文菜单操作系统，具有人机对话功能。

增加了废液排空泵，改进了反应池的清洗方式。

增加了缓冲液监测传感器。

更换新型蠕动泵，使缓冲液用量减少，延长蠕动泵使用寿命。

仪器内部可保存3200多个最近测定结果。

通过电脑可对仪器操作参数设置和数据导出，显示并打印数据变化曲线图。

其特点：1液晶显示，中文菜单操作系统，可查阅近期测定结果。

2人机对话功能。

3进样提示音功能。

4系统的报警信息。

5测定速度快，20秒可得到测定结果。

6结果准确，专一性强，测定误差小于2%。

7不受颜色，混浊度影响。

测量范围：葡萄糖：0-100mg/100ml，L-乳酸：0-50mg/100ml，L-谷氨酸：0-100mg/100ml，甲醇/乙醇：0-100mg/100ml，赖氨酸：0-100mg/100ml
该仪器市场报价为：39800元人民币/台(标准配置)。

山东省科学院生物研究所山东省生物传感器重点实验室。

(整理)SBA-40D生物传感分析仪使用说明

SBA-40D型生物传感自动分析仪操作说明书目录第一章仪器的工作原理和性能特点--------------------------1 第一节工作原理--------------------------------------1第二节生物传感分析仪的特点-----------------------1第三节S B A-40D型分析仪的特点及性能指标-----------2 第二章仪器的结构和功能-------------------------------2 第一节仪器的一次仪表---------------------------3第二节仪器的二次仪表----------------------------5 第三章分析仪配套的试剂盒---------------------------------6 第一节酶膜的贮运说明----------------------------------6第二节酶膜的参数-----------------------------6第三节缓冲剂-----------------------------------8第四节标准液-----------------------------------8 第四章仪器的键盘操作和系统参数-------------------------9 第一节仪器的键盘与显示----------------------------9第二节仪器的按键功能----------------------------9第三节仪器的菜单组成----------------------------10第四节仪器的系统参数----------------------------12 第五章分析仪的操作指南----------------------------------13 第一节分析仪的安装--------------------------------13第二节酶膜的更换-----------------------------------14第三节打印纸的安装------------------------------14第四节更换蠕动泵管--------------------------------15第五节更换液体管路------------------------------------15第六节测定前的准备-------------------------------------15第七节测定操作------------------------------------------16第八节故障与报警信息----------------------------------16第九节常见问题处理----------------------------------17 第六章分析仪的P C联机软件--------------------------------17 第一节软件的安装------------------------------------18第二节分析仪的操作-----------------------------18第三节分析仪的记录数据操作---------------------------22第四节主机软件升级---------------------------26 附录:分析仪电原理图------------------------------------28 -------------第一章仪器的工作原理和性能特点SBA-40D型生物传感分析仪是以固定化酶为关键元件，由微电脑控制分析过程的智能化仪表。

SBA—40型生物传感器操作规程

SBA—40型生物传感器操作规程
1.专用进样针进样，每次进样25ul，进样前要用样品清洗进样针两
次，保证针内没有气泡，然后用纸擦去针外的液体，插入进样口进样，进样要快。

2.每次测样前要定标，点“开关”会自动清洗，然后“进样”绿灯
会闪烁，这时进标样，每次绿灯闪，进标样，直到绿灯不闪，进样品。

3.待测样要根据上次结果稀释合适的倍数，读数不能超过150（即浓
度不超过1.5g/l）。

4.进样针用完后要用纯水洗2次，放入针盒内。

5.样品一定要离心。

6.要注意缓冲液是否足够，缓冲液在常温可放2周，定时更换。

2006.6.12。

SBA蛋白酶重点讲义资料

實驗活動：在鮮鳳梨/或奇異果中的蛋白酶目錄1.封面2.目的 A部份3.引言 B部份4.每組可使用的物料和儀器5.步驟 C部份6.結果 D部份6.圖表分析 E部份7. 討論與反思 F部份8. 結論 G部份情境：瑪莉於上星期為媽媽的生日製備了一些啫喱。

除了普通的啫喱外，她更在部分啫喱中加入鮮水果粒。

她發現普通啫喱如常地凝固，但含有鮮鳳梨和鮮奇異果的啫喱卻不能凝固。

她對此感到十分疑惑，於是向生物科陳老師請教。

陳老師並沒有直接回答瑪莉的提問，反而告訴瑪莉一些資料—啫喱中含有一種叫明膠的蛋白質，能令啫喱溶液於冷卻後凝固起來。

生物科校本評核探究實驗IA 目的：探究鮮鳳梨、奇異果在三種不同的溫度下加入到啫喱溶液中令啫喱凝固的情況，以此證明鮮鳳梨和奇異果中含有的蛋白酶在適當的溫度下會令啫喱溶液不能夠很好地凝固。

B引言:1.問題：啫喱含有一種叫明膠的蛋白質，而這種物質能夠令啫喱溶液於冷卻後凝固起來，明膠是否會因為受到鮮鳳梨和鮮奇異果中的蛋白酶影響而不能令啫喱凝固？2.原理：鮮鳳梨和鮮奇異果這兩種水果中含有的蛋白酶在合適的溫度和PH值下會將蛋白質水解分解成多肽,肽或氨基酸,蛋白酶在不同的溫度或PH值中會有不同程度的反應3.預測：鮮鳳梨和鮮奇異果中的蛋白酶在合適的溫度令啫喱不能如常凝固,並且蛋白酶在溫度遠高於最適溫度或遠低於最適溫度將失去作用令啫喱可以冷卻後如常凝固。

所以加入不同溫度的鮮鳳梨和鮮奇異果中的蛋白酶會令啫喱的凝固程度有所不同。

4.自變項：加入啫喱中的水果汁分量。

5.應變項：啫喱凝固程度。

6.控制變項：讓啫喱凝固的時間、啫喱粉的分量、水的容積、水果的分量、杯的大小和形狀、冷卻的時間、啫喱凝固的時間。

7.假設：加入了35度和50度鳳梨汁的啫喱不能正常凝固。

加入65度鳳梨汁的啫喱能夠凝固。

加入35度、50度和65度奇異果汁的啫喱不能完全凝固。

每組可使用的物料和儀器每組所需物料和儀器會因應其探究的設計而有所不同。

SBA-40E生物传感分析仪

第一章仪器特点和工作原理SBA-40C型生物传感分析仪是以固定化酶为关键元件，由微电脑控制双指标智能化仪表。

如果按功能命名，也可以称为：SBA-40C型谷氨酸－葡萄糖分析仪，SBA-40C 型乳酸-葡萄糖分析仪，SBA-40C型赖氨酸-乳酸分析仪等，用户可以通过更换酶膜和试剂盒得到任二种成分分析化验结果。

SBA-40C型系列生物传感分析仪具有两支生物探测电极，可以用一份样品在20秒钟同时得到两种物质的定量分析结果，屏幕显示并自动记录打印结果，自动完成冲洗循环，然后进行下一次测定，SBA-40C型可以由电脑设定各种操作程序，自动定标，以达到最精确的定量测定结果。

在工业发酵、食品分析、环境检测、临床化验和科学研究等方面有广泛的用途。

SBA-40C型生物传感分析仪产品性能如表一所列：该分析仪的特点是：（1）反应靠固定化酶催化，昂贵的生化试剂可以多次重复使用。

一张酶膜可测定数千次，因此总的测定成本比较低。

（表二）*（按赖氨酸酶膜105元/个，葡萄糖酶膜60元/个，大包缓冲液40元/5000ml, 标准液35元/100ml，酶膜工作寿命1个月计。

）（2）操作简便：操作只消耗缓冲液和定标药品，测定时只需进样一个动作，其后的操作就可自动完成，样品用量只有25微升。

（3）速度快：20秒可得到测定结果，再经25秒自动冲洗进行下一次测定，一小时能测定几十个样品。

（4）结果准确，一般误差可达到小于1％，不受颜色，混浊度等影响。

（5）因为是一种特殊的生化仪器，操作维护需要一定的生化知识(如不能直接与强酸、强碱性的液体接触，以免造成酶膜失活)，仪器的性能随酶膜使用寿命而有所变化。

SBA－40C型系列生物传感双功能分析仪利用酶促反应来定量，样品分析工作原理如下：固定化酶底物＋O2＋H2O ————————→产物＋H2O2其中，固定化酶：赖氨酸氧化酶、葡萄糖氧化酶或乳酸氧化酶等。

底物：赖氨酸、葡萄糖或乳酸等。

产物：(α-酮戊二酸＋NH4)、(丙酮酸＋H2O2) 或(葡萄糖酸＋H2O2)。

脑膜炎SBA方法总结

SBA方法简介
原理：血清杀菌活性(SBA)测定评估血清中针对细菌分离物的补体依赖性抗体的杀菌活性。

该试验是评估感染和疫苗诱导抗体补体介导的功能活性的首选方法。

实验材料：Neisseria meningitidis serogroup A、Neisseria meningitidis serogroupW等脑膜炎相关细菌亚型。

baby rabbit serum (BRS) as external source of complement。

操作步骤：将细菌进行系列稀释，与血清抗体及补体在96孔微量滴定板中孵育，放置于37℃，5%CO2培养箱中3h，然后接种于琼脂板上过夜16h，对菌落进行计数，根据与试验中获得的最大细菌生长相关的50%减少所需的血清稀释倒数来计算滴度值。

参考文献：1，Development of a high-throughput method to evaluate serum bactericidal activity using bacterial A TP measurement as survival readout；
2，Efficacy and Effectiveness of the Meningococcal Conjugate Group A Vaccine MenAfriVac® in Preventing Recurrent Meningitis Epidemics in Sub-Saharan Africa。

牛血清白蛋白的相对原子质量

牛血清白蛋白的相对原子质量1. 什么是牛血清白蛋白？大家好，今天咱们聊聊一个可能听起来有点复杂但其实非常有趣的话题——牛血清白蛋白，咱们常简称为“BSA”。

说到这个东西，很多人可能会觉得很陌生，但如果我告诉你它在科学研究和医学领域的“明星”地位，你是不是会惊讶呢？没错，BSA就像是实验室里的“万能钥匙”，能打开很多科学大门。

牛血清白蛋白是一种从牛的血液中提取的蛋白质，听上去有点奇怪吧？其实它在许多生物实验和医学研究中都有广泛的应用。

就像你在家里常备的调味料一样，不同的实验需要不同的“调味品”，而BSA正是其中之一。

它的相对原子质量大约是66,500道尔顿，简直是实验室里的“巨无霸”。

2. BSA的用途2.1 作为实验室的“好帮手”说到用途，BSA简直是个万金油。

它在很多实验中用来稳定蛋白质，保护那些娇贵的小家伙们不被破坏。

就像你家里的宝宝，不能让他随便碰水、玩火，而BSA就是那层保护膜，让实验中的蛋白质能够安全度过“风风雨雨”。

而且，BSA还可以帮助提高实验的准确性，让结果更靠谱，真是实验室的“金牌助攻”啊！2.2 医疗领域的“小巨人”在医疗领域，BSA更是大显身手。

比如在血液检测中，它能够帮助医生们分析病人的健康状况，真是“细节决定成败”的好例子。

此外，BSA还被用作药物的载体，让药物更好地发挥效果。

可以说，BSA在医疗界的贡献不亚于“白衣天使”，默默地守护着我们的健康。

3. BSA的特性3.1 稳定性与溶解性BSA之所以这么受欢迎，一个重要原因就是它的稳定性和溶解性。

想象一下，如果你在做菜的时候，调料不溶解，那可真是要闹心了。

BSA就像是那种无论在什么情况下都能保持稳定的调味料，真是“任劳任怨”的好帮手。

它在水中的溶解性特别好，这样实验人员就能轻松地使用它，根本不用担心溶解不均匀的问题。

3.2 低毒性与高兼容性另外，BSA的低毒性和高兼容性也让它在科研中备受青睐。

你知道的，很多化学物质如果用得不当，可能会带来副作用，但BSA却是个“温柔”的存在，几乎没有毒性，让科研人员可以放心大胆地使用。

SBA-40C生物传感分析仪使用说明书

第二章仪器结构和功能-----------------6
一整机结构-----------------------6
二一次仪表的结构-----------------6
图1：SBA-40C型分析系统结构示意图--6
（1）反应池---------------------6
（2）电极系统-------------------6
尽管如此，我们仍努力改善SBA-系列仪器的工作性能，使它们更能尽善尽美地方便于用户的使用。希望用户们今后不断地对我们的工作提出宝贵的意见。
编者
1998年11月
SBA-40C型
生物传感分析仪操作指南
第一章仪器特点和工作原理-------------4
表一：SBA-40C型生物传感分析仪的性能指标1表二：双功能分析仪测定的试剂盒成本估算-5
SBA-40C型生物传感分析仪产品性能如表一所列：
表一：SBA-40C型生物传感分析仪的性能指标
仪器名称
谷氨酸-葡萄糖（或乳酸）分析仪
乳酸－葡萄糖分析仪
乙醇-葡萄糖分析仪
范围
L-谷氨酸：0-100mg/dl
β-D-葡萄糖：0－100mg/dl
L-乳酸：0-50mg/100ml
L-乳酸：0-5.0mM
3、换酶膜前怎样排空反应池内的液体？17
4、怎样检查当前设定的参数?----------17
5、怎样改动定标值？-----------------17
6、如何使仪器恢复到出厂时的参数设置-17
7、怎样关打印？---------------------17
8、怎样选择冲洗时间？---------------17
（三）表七:常见故障分析表---------20
第一章仪器特点和工作原理

SBA-40D生物传感分析仪使用说明-推荐下载

图1: SBA-40D分析仪外观为了更好地使用并维护本仪器，有必要对仪器的结构和工作过程有一个大概的了仪器的一次仪表仪器的一次仪表包括反应池系统和辅助的进排液蠕动泵，结构如下图所示：图2：一次仪表部分实物示意图图3：一次仪表系统示意图缓冲液瓶 2、废液瓶 3、排空泵 4、清洗泵 5、缓冲液检测器 6、搅拌电机 7、永磁搅拌头9、反应腔 10、左电极 11、右电极 12、锥形帽 13、溢流腔 14、进样开关 15、进样口一、仪器缓冲液系统仪器的测量过程在缓冲环境下进行，缓冲液经排空蠕动泵排出，由清洗蠕动泵补充，其中清洗蠕动泵为一泵双路经构，分别用于缓冲液补充和溢流腔缓冲液排放。

为提高清洗效率，清洗时，先将反应池的缓冲液通过排空泵3排出到废液瓶，然后开动清洗泵，把缓冲液注入到反应池中。

清洗时超出反应池体积的缓冲液则通过溢流腔，经清洗泵主动排出。

2344510131512345图4：反应池系统1、进样口2、进样开关3、电极固定螺母4、电极5、搅拌子图7: SBA-40D显示面板示意图仪器的点阵液晶显示屏最多可显示3行中文和1行状态，每行可显示12个汉字或个字母。

开关面板有9个按键，分别为：菜单（M）、运行（R）、定标（C）、清8: 蠕动泵及泵管装入后状态示意图更换液体管路仪器经长期使用液体管道上长有菌体时，需要清洗或更换连接管路，如对管道连接不很清楚，清洗或更换请分段进行，一次更换一段管道，以防接错。

测定前的准备分析仪使用标样为100ml包装。

每次用量为25和标样使用寿命，标样应在冰箱内冷藏保存。

一般使用前倒入塑料离心管保存，每天更新。

高浓度的样品，如发酵液等，需要在稀释后测定。

稀释倍数以稀释后浓度略低于标样浓度为佳，对于发酵液，稀释倍数应在确保菌体代谢产物不至于对测定产生显著影响。

对于强酸或强碱型样品，必须在稀释左右，否则可能使酶传感器产生不可逆的失活。

软件在运行时会自动打开最后一次运行时打开的数据文件，如软件是第一次运行，没有数据文件，或数据文件已被移走，则在运行时会弹出“打开/新建软件提供了完善的分析仪联机操作功能，可通过PC机对仪器进行参数设置、测定数据读取、仪器信息读取等操作，与仪器相关的操作，在操作前必需把分析仪与机通过串行口联机。

大豆凝集素

大豆凝集素
大豆凝集素
大豆及其加工副产品是畜禽饲料中最
主要的植物蛋白源，但大豆中含有多种抗营养因子(例如大豆抗原蛋白、胰蛋白酶抑制因子、单宁、植物凝集素、皂苷)，其中大豆凝集素(SBA)是大豆中的主要抗营养因子之一。
大豆凝集素(soybean Nhomakorabeaagglutinin，SBA) 是大豆籽实(种子)中的一种贮存蛋白质，因其能使某些动物的红细胞凝集(凝聚集合成团)而得名。SBA除凝集红细胞外，也能与含有这些寡糖的其他组织细胞特异性结合。
其产生抗营养作用的根源，所以有关这方面的研究尤为重要。动物采食大豆凝集素后，消化道内部分未被降解并具有完整生物活性的大豆凝集素会结合到肠道内细胞表面的特异性受体上，进而引发了一系列抗营养作用的产生。
大豆凝集素生物活性的测定：
采用兔红细胞凝集法进行生物活性鉴定。用96孔“V”型血凝板进行细胞凝集试验，观察红细胞的凝集程度。

今后应对豆类植物凝集素化学结构、活性特点、作用机理作进一步研究，以寻找更好灭活方法。大豆及其加工副产品是畜禽饲料中的最主要植物蛋白源，但大豆中含有多种抗营养因子，其中SBA是大豆中的主要抗营养因子之一，对肠道黏膜免疫系统、肠道菌群及内脏器官等有不同程度的影响，并可引起胰腺肿大、血细胞凝集等，在一定程度上限制了大豆蛋白的利用。

按红细胞的凝集强度，液体澄清透明，红细胞全部凝集于孔底成1块为超强凝集(++++)；轻摇可见大的凝块为高度凝集(+++)；液体稍混浊，有明显的凝集物，凝集块较小，为中度凝集(++)；液体混浊，仔细观察可看到很小的凝集块，为轻度凝集(+)；液体与对照组相似，血细胞分布较均匀，倾斜血凝板时孑L底沉淀的血细胞呈现泪滴状(不倾斜时红细胞沉于孔底，似水中沙粒沉入水底，边缘光滑)，为不凝集(一)；以出现“++”的大豆凝集素最高稀释倍数作为凝集效价。

bsa封闭浓度

bsa封闭浓度
摘要：
1.BSA 的定义和用途
2.BSA 封闭浓度的含义
3.BSA 封闭浓度的测量方法
4.BSA 封闭浓度对实验结果的影响
5.结论
正文：
1.BSA 的定义和用途
BSA，全称为Bovine Serum Albumin，即牛血清白蛋白，是一种在生物实验中常用的蛋白质。

它的主要用途是作为蛋白质浓度的参照标准，以及在实验过程中用于保护细胞、调节pH 值和提供营养等。

2.BSA 封闭浓度的含义
BSA 封闭浓度是指在实验过程中，为了防止外来蛋白质的干扰，需要用BSA 来封闭实验体系，使其处于一种封闭状态，这种状态下的BSA 浓度即为BSA 封闭浓度。

3.BSA 封闭浓度的测量方法
BSA 封闭浓度的测量方法通常采用比浊法。

具体操作步骤为：首先，将一定量的BSA 加入到实验体系中，使其达到封闭状态；然后，通过测量实验体系的浊度，从而推算出BSA 的浓度。

4.BSA 封闭浓度对实验结果的影响
BSA 封闭浓度对实验结果具有重要影响。

如果BSA 封闭浓度过高，可能
会导致实验体系中蛋白质浓度过高，从而影响实验结果的准确性；反之，如果BSA 封闭浓度过低，可能会导致实验体系对外来蛋白质的封闭不彻底，从而影响实验结果的可靠性。

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P1
情境：
“橙含有維生素C”是很多人的普遍想法。

米高從小便存有這種觀念，因此他每天都吃一個橙。

最近，他的朋友告訴他，很多水果所含的維生素C都較橙
多。

因此，他考慮是否應改變習慣，轉吃其他水果以攝取更多維生素C
P2
目錄
1.封面.........................................1頁
2.情境...........................................2頁
3.使用物料與儀器........................4頁
4目的............................................5頁
5.步驟..............................................6頁
6.結果....................................................7頁
7.圖表分析........................................8頁
8.討論與反思.......................................9頁8.結論....................................................10頁
P3
實驗儀器：數目白瓷磚 1 小刀 1 研缽和研杵 1 漏斗 1 濾布 4 量筒 1 大試管 5 試管 5 燒杯 2 移液管 1
蒸餾水少量
橙半個
蘋果1個
提子10粒
檸檬1個
標準維生素C 少量
DCPIP溶液100ml
P4
目的：比較同份量的提子、蘋果、橙和檸檬汁液內的維生素C濃度證實米高朋友的說法。

1.問題：米高應否改變習慣轉吃其他水果以吸收更多維生素C？這四種水果哪種維生素C含量最多？
2.原理：DCPIP本身能氧化為脫氫型。

在酸性溶液中，2,6-二氯酚靛酚呈紅色，還原後變為無色。

因此，維生素C是一種強力的還原劑，可使藍色的二氯酚靛酚(DCPIP)染劑褪色。

3.預測：將DCPIP加入果汁中時DCPIP藍色會褪去
標準維生素C預測1-2滴變紅4-5滴變透明
橙1-2滴變紅
檸檬1-2滴變紅
堤子1-2滴變紅
蘋果1-2滴變紅
4.自變項：水果種類。

5.應變項：果汁中的維生素C的濃度
6.控制變項：加入DCPIP中的果汁份量
7.假設：維生素C是唯一會令DCPIP褪色的物質，水
果中無其他會令DCPIP褪色的物質。

P5
步驟：1準備好四支大試管並分別標示果汁的名稱
2提取果汁步驟分別如下：a)使用刀具將蘋果、柳丁、奇異果、提子去皮。

b)再用刀將水果放在白瓷磚上都切成小塊。

（以便研磨）
c)將切好的水果塊放入研缽裏用研杵搗碎得到果汁
d)使用漏斗和濾布把果汁倒入已作標示的大試管。

e)用1mL移液管把1mL DCPIP溶液移入一支空試管備用
F)重複以上步驟提取四種果汁並分好四支PCPIP溶液試管。

3. 用量筒把10mL的DCPIP溶液(藍色) 加入到大試管。

4..使用滴管吸取維生素C溶液(標準溶液)，之後將維生素C
溶液逐滴加入DCPIP溶液中。

5.當DCPIP溶液在加入滴數時由藍變透明，則記錄下滴入的維生素C溶液的滴數。

6.分別使用滴管吸取四種水果汁逐滴滴入不同的DCPIP溶液中
7.在加入水果汁滴數時輕搖試管以便兩種溶液混合並記錄下四種水果令DCPIP溶液變為紅色和透明的滴數。

並以標準維生素C溶液為對照組。

P6
結果
圖片果汁名變紅（滴）透明（滴）
標準維生
2 4
素C
橙 1 5
檸檬 2 3
P7
4
,
圖片果汁名變紅（滴）透明（滴）
堤子 1 10
蘋果 1 無
P8
維生素C濃度標準:10mg/10ml ，
水果汁含有標準維生素C濃度的計算公式：
10x維生素C令DCPIP的變透明標準滴數
水果汁滴入DCPIP變透明的滴數
橙的維生素C濃度=（10*4）/5=8mg/10mL
檸檬的維生素C濃度=（10*4）/3=13.333mg/10mL 提子的維生素C濃度=（10*4）/10=4mg/10mL
蘋果的維生素C濃度因無法變透明而不能計算。

根據維生素C（標準濃度）計算公式得出水果汁的維生素C濃度比較：檸檬＞橙＞提子＞蘋果
P9
討論與反思
為了令米高有更多關於含有維生素C的水果選擇，實驗應該加入更多市面常見的水果如菠萝、桃子、草莓等。

與柳丁的維生素C濃度相比較，檸檬濃度更高。

其餘三種水果的濃度都比橙子低。

因此我認為米高應該轉吃檸檬以補充維生素C。

因為每種水果汁使用滴管滴入DCPIP溶液試管的力道不同、DCPIP溶液和維生素C在室溫和空氣中頗不穩定，將DCPIP溶液與維生素C溶液/果汁混合時，應盡量保持試管穩定，切勿將混合液搖動。

並儘量選擇同一個人使用滴管。

結論
四種水果的維生素C含量為檸檬＞橙＞提子＞蘋果。

因為檸檬的維生素C濃度比橙高，因此米高可以選擇吃檸檬來代替柳丁以攝取更多的維生素C。

P10。