Cilostamide-LCMS-32053-MedChemExpress
碧云天细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)说明书
细胞自噬染色检测试剂盒(MDC 法)产品简介：碧云天生产的细胞自噬染色检测试剂盒(MDC 法)，即Autophagy Staining Assay Kit with MDC ，是一种使用丹酰尸胺，也称单丹磺酰尸胺、丹酰尸胺或丹酰戊二胺(monodansylcadaverine, MDC)作为荧光探针快速便捷地检测细胞自噬的试剂盒。
自噬(autophagy)是一种在进化上高度保守的通过溶酶体吞噬并降解部分自身组分的细胞内分解代谢途径。
自噬与多种生理功能有关，在饥饿等环境条件下，细胞通过自噬降解多余或异常的细胞内组分，为细胞的生存提供能量及原材料，促进生物体的生长发育、细胞分化及对环境变化产生应答。
自噬异常与多种病理过程如肿瘤、神经退行性疾病、代谢疾病、病原体感染等都有密切关系。
由于细胞自噬在生理和病理过程中都有重要作用，自噬已经成为细胞生物学领域的一个研究热点。
MDC 是细胞自噬检测最常用的荧光探针之一。
MDC 可以通过离子捕获(ion trapping)和与膜脂的特异性结合，从而特异性标记自噬体(autophagosome)，也称autophagic vacuole ，因而常用于细胞自噬的检测。
MDC 是一种嗜酸性荧光探针，很多酸性膜性结构也会被MDC 染色，因此MDC 染色时正常的细胞也会有一定的染色背景。
本产品的染色原理决定了本产品只能用于培养的细胞或者组织的细胞自噬荧光染色检测，不能用于冻存的或固定的细胞、组织或者组织切片的染色检测。
使用本产品染色后可以通过荧光显微镜拍照观察，也可以通过荧光酶标仪或流式细胞仪进行荧光检测。
荧光显微镜观察时可以使用紫外区激发光激发，发出绿色荧光。
荧光酶标仪或流式细胞仪推荐的激发波长为335nm (330-360nm 均可)，发射波长为512nm (510-540nm 均可)。
本产品用于细胞自噬染色的效果参考图1。
图1. 细胞自噬染色检测试剂盒(MDC 法)的染色效果图。
大肠埃希氏菌生化鉴定结果
大肠埃希氏菌生化鉴定结果大肠埃希氏菌（Escherichia coli）是一种常见的细菌，可以引起多种感染性疾病，包括腹泻、尿路感染和食物中毒等。
鉴定大肠埃希氏菌的生化特征可以帮助确定病原菌的身份以及其潜在的耐药性和毒力因子。
本次实验目的是对一株致病性大肠埃希氏菌样本进行生化鉴定，以确认其菌株的性质和特征。
首先，我们进行了气体产生实验。
在Triple Sugar Iron Agar（TSI）培养基中，观察到菌落周围发生了气体产生，此结果表明该菌株具有产气性。
产气性通常意味着大肠杆菌等需要葡萄糖产生酸，进而分解产生气体的细菌。
其次，我们进行了甲烷发酵试验。
在Methyl Red（MR）试剂中，当菌液发酵产酸时，溶液颜色由黄色变成红色。
然而，该菌株在MR试剂中没有产生红色反应，这表明它无法通过甲烷发酵产酸。
这一结果与典型的大肠杆菌不同，因为大肠杆菌通常可以通过此途径产酸。
进一步，我们进行了亮氨酸脱氨酶试验。
使用亮氨酸脱氨酶（LDC）培养基，如果菌株具有亮氨酸脱氨酶活性，菌液会变色。
然而，我们观察到该菌株在培养基中没有出现任何颜色变化，这表明它不具备亮氨酸脱氨酶活性。
亮氨酸脱氨酶活性通常是大肠杆菌的典型特征之一。
此外，我们还进行了尿素酶试验。
使用尿素平板培养基，如果菌株具有尿素酶活性，培养基颜色将由黄色变为粉红色。
然而，我们观察到该菌株在培养基上未显示出任何颜色变化。
这暗示着该菌株可能缺乏尿素酶活性，与大肠杆菌的典型特征不同。
最后，我们进行了青霉素酶试验。
使用青霉素酶试纸进行反应检测，在试纸上出现蓝色点状斑点表示菌株具有青霉素酶活性。
而对于这个菌株，我们观察到在试纸上没有出现蓝色斑点。
这意味着该菌株可能对青霉素类药物敏感，这对于抗生素选择治疗提供了重要信息。
综上所述，通过对致病性大肠埃希氏菌样本进行生化鉴定，我们发现该菌株具有产气性，但与典型的大肠杆菌不同，它不表现出甲烷发酵、亮氨酸脱氨酶和尿素酶活性。
自噬研究方法
MDC:取12 mg粉末溶于720 nl DMSO使其浓度为50 mmol/L,分装后-20冰箱保存。
临用前用MEM稀释到终浓度50 umol/L;Rapamycin:用MEM培养基配成终浓度为1 umol/L,现用现配;400ng/ml喹乙醇:称取4 mg喹乙醇,DMSO预溶(体积<0.1%)后加入10 ml MEM培养液至完全溶解,现用现配,避光保存;3-MA:首先用PBS溶解粉末,临用前加热至完全溶解后再加入MEM培养基至终浓度10mmol/L; PI3K抑制剂（3-MA，Wortmannin）可干扰或阻断自噬体的形成用RAPAMYCIN诱导自噬我也查过一部分文献，有用无血清的，也有用，一般培养基的，浓度从25nM到100nM都有，用的是50nM的雷帕霉素，加入一般的培养基中，目的是排除无血清所诱导出来的自噬。
文献说饥饿初期激活的是大分子自噬，在4-6小时活力达到最大，24h后以CMA途径为主Earle's balanced salts solution (EBSS) for 48 hsigma的EBSS，货号E2888，有碳酸氢钠，有酚红的，酚红到不是很必须，只是一个PH指示作用，好看些无血清诱导自噬：EBSS 诱导6个小时就可以了。
EBSS一定可以诱导出来，只是需要说明的是时间点的设置，因为从饥饿诱导开始半个小时就可能开始自噬了，一直到24小时都持续，所以应该设置不同的时间点观察这个作用。
另外一个很大的问题是，饥饿诱导的一个很大的弊端是细胞死亡，这也是我面临的问题，就是在细胞收养的时候蛋白浓度太小了。
24小时就很少了，更不要说48小时和72小时了Hank's诱导，也就是通常所说的饥饿诱导，细胞培养到对数生长期后以Hank's替代常规完全培养基，3h后就可诱导出自噬。
我用Hank's诱导了3h后电镜观察有30%细胞都有自噬这种现象，但不如国外报道的高。
溴吡斯的明引起重症肌无力患者心肌梗死的1例报告并文献复习
J Apoplexy and Nervous Diseases, Nov. 2023, Vol 40，No. 11溴吡斯的明引起重症肌无力患者心肌梗死的1例报告并文献复习周丽枝， 胡云， 周礼鑫， 童理， 杨剑文摘要： 重症肌无力是一种自身免疫性疾病，通常由针对神经肌肉接头处的乙酰胆碱受体的抗体介导，其常见的治疗有胆碱酯酶抑制剂，例如溴吡斯的明。
该药物在治疗过程中出现心血管事件较少见，但在临床中早期识别病情变化并警惕重症肌无力患者可能出现的心血管事件非常重要。
因此，我们报道重症肌无力老年女性患者继发于抗胆碱酯酶治疗导致急性心肌梗死并发心源性猝死的病例，并基于此病例对发生心血管不良事件的可能原因进行讨论。
关键词： 重症肌无力； 急性心肌梗死； 溴吡斯的明； 胆碱酯酶抑制剂中图分类号：R741 文献标识码：APyridostigmine bromide causes myocardial infarction in myasthenia gravis ： a case report and literature reviewZHOU Lizhi ，HU Yun ，ZHOU Lixin ， et al.（The First Affiliated Hospital of Hunan Normal University ， Changsha 410005， China ）Abstract ： Myasthenia gravis is an autoimmune disease ，which is usually mediated by antibodies to acetylcholine re⁃ceptors at the neuromuscular junction. It is commonly treated with cholinesterase inhibitors such as pyridostigmine bro⁃mide. Although cardiovascular events with the drug are rare ，it is very important to early recognize disease changes and be alert to potential cardiovascular events in patients with myasthenia gravis. Therefore ， we report a case of an elderly female patient with myasthenia gravis developing acute myocardial infarction and then sudden cardiac death following anticholines⁃terase therapy ， and discuss the possible causes of adverse cardiovascular events based on this case.Key words ： Myasthenia gravis ； Myocardial infarction ； Pyridostigmine bromide ； Cholinesterase inhibitor重症肌无力（myasthenia ，MG ）是一种自身免疫性疾病，通常由针对神经肌肉接头处的乙酰胆碱受体的抗体介导，其特征临床表现为骨骼肌无力和易疲劳［1］。
中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白_早期诊断急性肾损伤的生物标志物
中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白———早期诊断急性肾损伤的生物标志物梁冰红△(综述),何敏华3(审校)(大理学院附属医院儿科,云南大理671000)中图分类号:R692 文献标识码:A 文章编号:100622084(2009)2323540203 摘要:急性肾损伤即以往的急性肾衰竭,具有高发病率及病死率,干预时机的掌握对其转归及预后起着重要影响;但目前缺少有效的早期诊断方法。
本文对早期诊断急性肾损伤最有前景的生物标志物之一,中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白进行综述,主要介绍它的生物学性质、对早期诊断的作用及其存在的局限性,旨在为临床早期预测提供帮助。
关键词:急性肾损伤;中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白;生物标志物Neutroph il Gel a ti n a se2a ssoc i a ted L i poca li n:an Early D i a gnosis B i omarker of Acute K i dney I n jury L I ANG B ing2hong,HE M in2hua.(D epart m ent of Pediatrics,the Affiliated Hospital of D ali U niversity,D ali 671000,China)Abstract:Acute kidney injury,als o named acute kidney failure in the past,has high morbidity and mor2 tality,Opportune intervene of the disease is i m portant f or its p r ognosis,however,effective method for early di2 agnostic is lacking.This paper p r ovides a brief revie w of the research p r ogress in the r oles of neutr ophil gelati2 nase2ass ociated li pocalin,one of the most p r om ising bi omarkers,for the early diagnosis of acute kidney inju2 ry.This p r ovides assistance for the early p redicti on of the disease in clinic.Key words:Acute kidney injury;Neutr ophil gelatinase2ass ociated li pocalin;B i omarker 急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)以往被称为急性肾衰竭,是住院患者的常见并发症,其发病率逐年上升。
Calcipotriol_SDS_MedChemExpress
Inhibitors, Agonists, Screening LibrariesSafety Data Sheet Revision Date:Sep.-13-2017Print Date:Sep.-13-20171. PRODUCT AND COMPANY IDENTIFICATION1.1 Product identifierProduct name :CalcipotriolCatalog No. :HY-10001CAS No. :112965-21-61.2 Relevant identified uses of the substance or mixture and uses advised againstIdentified uses :Laboratory chemicals, manufacture of substances.1.3 Details of the supplier of the safety data sheetCompany:MedChemExpress USATel:609-228-6898Fax:609-228-5909E-mail:sales@1.4 Emergency telephone numberEmergency Phone #:609-228-68982. HAZARDS IDENTIFICATION2.1 Classification of the substance or mixtureNot a hazardous substance or mixture.2.2 GHS Label elements, including precautionary statementsNot a hazardous substance or mixture.2.3 Other hazardsNone.3. COMPOSITION/INFORMATION ON INGREDIENTS3.1 SubstancesSynonyms:MC 903; CalcipotrieneFormula:C27H40O3Molecular Weight:412.60CAS No. :112965-21-64. FIRST AID MEASURES4.1 Description of first aid measuresEye contactRemove any contact lenses, locate eye-wash station, and flush eyes immediately with large amounts of water. Separate eyelids with fingers to ensure adequate flushing. Promptly call a physician.Skin contactRinse skin thoroughly with large amounts of water. Remove contaminated clothing and shoes and call a physician.InhalationImmediately relocate self or casualty to fresh air. If breathing is difficult, give cardiopulmonary resuscitation (CPR). Avoid mouth-to-mouth resuscitation.IngestionWash out mouth with water; Do NOT induce vomiting; call a physician.4.2 Most important symptoms and effects, both acute and delayedThe most important known symptoms and effects are described in the labelling (see section 2.2).4.3 Indication of any immediate medical attention and special treatment neededTreat symptomatically.5. FIRE FIGHTING MEASURES5.1 Extinguishing mediaSuitable extinguishing mediaUse water spray, dry chemical, foam, and carbon dioxide fire extinguisher.5.2 Special hazards arising from the substance or mixtureDuring combustion, may emit irritant fumes.5.3 Advice for firefightersWear self-contained breathing apparatus and protective clothing.6. ACCIDENTAL RELEASE MEASURES6.1 Personal precautions, protective equipment and emergency proceduresUse full personal protective equipment. Avoid breathing vapors, mist, dust or gas. Ensure adequate ventilation. Evacuate personnel to safe areas.Refer to protective measures listed in sections 8.6.2 Environmental precautionsTry to prevent further leakage or spillage. Keep the product away from drains or water courses.6.3 Methods and materials for containment and cleaning upAbsorb solutions with finely-powdered liquid-binding material (diatomite, universal binders); Decontaminate surfaces and equipment by scrubbing with alcohol; Dispose of contaminated material according to Section 13.7. HANDLING AND STORAGE7.1 Precautions for safe handlingAvoid inhalation, contact with eyes and skin. Avoid dust and aerosol formation. Use only in areas with appropriate exhaust ventilation.7.2 Conditions for safe storage, including any incompatibilitiesKeep container tightly sealed in cool, well-ventilated area. Keep away from direct sunlight and sources of ignition.Recommended storage temperature: 4°C, protect from light, stored under nitrogenShipping at room temperature if less than 2 weeks.7.3 Specific end use(s)No data available.8. EXPOSURE CONTROLS/PERSONAL PROTECTION8.1 Control parametersComponents with workplace control parametersThis product contains no substances with occupational exposure limit values.8.2 Exposure controlsEngineering controlsEnsure adequate ventilation. Provide accessible safety shower and eye wash station.Personal protective equipmentEye protection Safety goggles with side-shields.Hand protection Protective gloves.Skin and body protection Impervious clothing.Respiratory protection Suitable respirator.Environmental exposure controls Keep the product away from drains, water courses or the soil. Cleanspillages in a safe way as soon as possible.9. PHYSICAL AND CHEMICAL PROPERTIES9.1 Information on basic physical and chemical propertiesAppearance White to off-white (Solid)Odor No data availableOdor threshold No data availablepH No data availableMelting/freezing point No data availableBoiling point/range No data availableFlash point No data availableEvaporation rate No data availableFlammability (solid, gas)No data availableUpper/lower flammability or explosive limits No data availableVapor pressure No data availableVapor density No data availableRelative density No data availableWater Solubility No data availablePartition coefficient No data availableAuto-ignition temperature No data availableDecomposition temperature No data availableViscosity No data availableExplosive properties No data availableOxidizing properties No data available9.2 Other safety informationNo data available.10. STABILITY AND REACTIVITY10.1 ReactivityNo data available.10.2 Chemical stabilityStable under recommended storage conditions.10.3 Possibility of hazardous reactionsNo data available.10.4 Conditions to avoidNo data available.10.5 Incompatible materialsStrong acids/alkalis, strong oxidising/reducing agents.10.6 Hazardous decomposition productsUnder fire conditions, may decompose and emit toxic fumes.Other decomposition products - no data available.11.TOXICOLOGICAL INFORMATION11.1 Information on toxicological effectsAcute toxicityClassified based on available data. For more details, see section 2Skin corrosion/irritationClassified based on available data. For more details, see section 2Serious eye damage/irritationClassified based on available data. For more details, see section 2Respiratory or skin sensitizationClassified based on available data. For more details, see section 2Germ cell mutagenicityClassified based on available data. For more details, see section 2CarcinogenicityIARC: No component of this product present at a level equal to or greater than 0.1% is identified as probable, possible or confirmed human carcinogen by IARC.ACGIH: No component of this product present at a level equal to or greater than 0.1% is identified as a potential or confirmed carcinogen by ACGIH.NTP: No component of this product present at a level equal to or greater than 0.1% is identified as a anticipated or confirmed carcinogen by NTP.OSHA: No component of this product present at a level equal to or greater than 0.1% is identified as a potential or confirmed carcinogen by OSHA.Reproductive toxicityClassified based on available data. For more details, see section 2Specific target organ toxicity - single exposureClassified based on available data. For more details, see section 2Specific target organ toxicity - repeated exposureClassified based on available data. For more details, see section 2Aspiration hazardClassified based on available data. For more details, see section 212. ECOLOGICAL INFORMATION12.1 ToxicityNo data available.12.2 Persistence and degradabilityNo data available.12.3 Bioaccumlative potentialNo data available.12.4 Mobility in soilNo data available.12.5 Results of PBT and vPvB assessmentPBT/vPvB assessment unavailable as chemical safety assessment not required or not conducted.12.6 Other adverse effectsNo data available.13. DISPOSAL CONSIDERATIONS13.1 Waste treatment methodsProductDispose substance in accordance with prevailing country, federal, state and local regulations.Contaminated packagingConduct recycling or disposal in accordance with prevailing country, federal, state and local regulations.14. TRANSPORT INFORMATIONDOT (US)This substance is considered to be non-hazardous for transport.IMDGThis substance is considered to be non-hazardous for transport.IATAThis substance is considered to be non-hazardous for transport.15. REGULATORY INFORMATIONSARA 302 Components:No chemicals in this material are subject to the reporting requirements of SARA Title III, Section 302.SARA 313 Components:This material does not contain any chemical components with known CAS numbers that exceed the threshold (De Minimis) reporting levels established by SARA Title III, Section 313.SARA 311/312 Hazards:No SARA Hazards.Massachusetts Right To Know Components:No components are subject to the Massachusetts Right to Know Act.Pennsylvania Right To Know Components:No components are subject to the Pennsylvania Right to Know Act.New Jersey Right To Know Components:No components are subject to the New Jersey Right to Know Act.California Prop. 65 Components:This product does not contain any chemicals known to State of California to cause cancer, birth defects, or anyother reproductive harm.16. OTHER INFORMATIONCopyright 2017 MedChemExpress. The above information is correct to the best of our present knowledge but does not purport to be all inclusive and should be used only as a guide. The product is for research use only and for experienced personnel. It must only be handled by suitably qualified experienced scientists in appropriately equipped and authorized facilities. The burden of safe use of this material rests entirely with the user. MedChemExpress disclaims all liability for any damage resulting from handling or from contact with this product.Caution: Product has not been fully validated for medical applications. For research use only.Tel: 609-228-6898 Fax: 609-228-5909 E-mail: tech@Address: 1 Deer Park Dr, Suite Q, Monmouth Junction, NJ 08852, USA。
载5-氟尿嘧啶细胞囊泡对结直肠癌细胞株HCT116_的杀伤作用
胞内功能,包括自噬㊁线粒体功能障碍和细胞凋亡[11]㊂Xu 等[5]发现上调Sirt1/FoxO1信号轴可以缓解DM 大鼠肾损伤㊂本研究结果显示,与NR 组相比,HG 组p -Sirt1/Sirt1㊁p -FoxO1/FoxO1蛋白水平显著降低,而CT 使p -Sirt1/Sirt1㊁p -FoxO1/FoxO1蛋白水平显著上调,暗示CT 可以通过激活Sirt1/FoxO1信号轴激活细胞自噬以及细胞凋亡,进而缓解高糖诱导的GEC 炎性损伤以及氧化应激损伤㊂本研究用Sirt1/FoxO1信号轴抑制剂和CT 共同处理GEC ,结果发现SIRT1-IN -1逆转了CT 对GEC 的有利作用㊂综上所述,CT 可以通过上调Sirt1/FoxO1信号轴激活自噬,减轻高糖诱导的炎性损伤㊁氧化应激损伤㊂本文不足是研究机制较浅,我们将在下步实验深入研究㊂ʌ参考文献ɔ[1]㊀Orr P ,Shank BC ,Hickson S ,et al.Clinical management ofglomerular diseases [J ].Nurs Clin North Am ,2018,53(4):551-567.[2]㊀Daehn IS ,Duffield JS.The glomerular filtration barrier :astructural target for novel kidney therapies [J ].Nat RevDrug Discov ,2021,20(10):770-788.[3]㊀Sun L ,Sun C ,Zhou S ,Zhang L ,et al.Tamsulosin attenuateshigh glucose -induced injury in glomerular endothelial cells[J ].Bioengineered ,2021,12(1):5184-5194.[4]㊀Song M ,Chen L ,Zhang L ,et al.Cryptotanshinone enhanceswound healing in type 2diabetes with modulatory effects on inflammation ,angiogenesis and extracellular matrix remodel-ling [J ].Pharm Biol ,2020,58(1):845-853.[5]㊀Xu J ,Liu LQ ,Xu LL ,et al.Metformin alleviates renal injuryin diabetic rats by inducing Sirt1/FoxO1autophagic signalaxis [J ].Clin Exp Pharmacol Physiol ,2020,47(4):599-608.[6]㊀Shan MY ,Dai Y ,Ren XD ,et al.Berberine mitigates nonalco-holic hepatic steatosis by downregulating SIRT1-FoxO1-SREBP2pathway for cholesterol synthesis [J ].Integr Med ,2021,19(6):545-554.[7]㊀Lo SH ,Hsu CT ,Niu HS ,et al.Cryptotanshinone inhibitsSTAT3signaling to alleviate cardiac fibrosis in type 1-like diabetic rats [J ].Phytother Res ,2017,31(4):638-646.[8]㊀Mukohara S ,Mifune Y ,Inui A ,et al.In vitro and in vivotenocyte -protective effectiveness of dehydroepiandrosteroneagainst high glucose -induced oxidative stress [J ].BMCMusculoskelet Disord ,2021,22(1):519-529.[9]㊀Tang PM ,Nikolic -Paterson DJ ,Lan HY.Macrophages :ver-satile players in renal inflammation and fibrosis [J ].Nat Rev Nephrol ,2019,15(3):144-158.[10]㊀Koch EAT ,Nakhoul R ,Nakhoul F ,et al.Autophagy in dia-betic nephropathy :a review [J ].Int Urol Nephrol ,2020,52(9):1705-1712.[11]㊀He W ,Zhang A ,Qi ,et al.FoxO1,a potential therapeutictarget ,regulates autophagic flux oxidative stress mitochon-drial dysfunction and apoptosis in human cholangiocarcino-ma QBC939cells [J ].Cell Physiol Biochem ,2018,45(4):1506-1514.ʌ文章编号ɔ1006-6233(2023)06-0893-07载5-氟尿嘧啶细胞囊泡对结直肠癌细胞株HCT116的杀伤作用孙建海,㊀晏㊀菲,㊀魏武杰,㊀邓㊀洁,㊀李㊀黎,㊀刘㊀莉,㊀马燕凌(江汉大学附属湖北省第三人民医院肿瘤科,㊀湖北㊀武汉㊀430000)ʌ摘㊀要ɔ目的:探讨载5-氟尿嘧啶细胞囊泡对结直肠癌细胞株HCT116的杀伤作用㊂方法:设HCT116组㊁细胞囊泡组(EVs 混悬液5mL ㊁106个/mL )㊁5-氟尿嘧啶组(5-氟尿嘧啶5mL ㊁30μg /mL )㊁5-氟尿嘧啶载药囊泡组(EVs 混悬液5mL ㊁106个/mL +5-氟尿嘧啶5mL ㊁30μg /mL ),以上各组细胞每孔设6个平行样,培养72h ㊂培养结束后,测定细胞增殖侵袭㊁凋亡水平,RT -PCR 法及蛋白印迹法测定各组细胞miR -128㊁PIK3水平㊂结果:细胞囊泡组OD 值㊁存活率㊁单克隆形成数目㊁穿膜数㊁迁移距离㊁凋亡率㊁miR -128水平㊁PI3K mRNA 和蛋白水平与HCT116组比较无统计学差异(P >0.05);5-氟尿嘧啶组㊁5-氟尿嘧啶载药囊泡组OD 值㊁存活率㊁单克隆形成数目㊁穿膜数㊁迁移距离㊁PI3KmRNA 和蛋白水平明显低于HCT116组㊁细胞囊泡组(P <0.05),凋亡率㊁miR -128水平明显高于HCT116组㊁细胞囊泡组(P <0.05);5-氟尿嘧啶载药囊泡组OD 值㊁存活率㊁单克隆形成数目㊁穿膜数㊁迁移距离㊁PI3K mRNA 和蛋白水平明显低于5-氟尿嘧啶组,凋亡率㊁miR -128水平明显高于5-氟尿嘧啶组(P <0.05)㊂结论:细胞外㊃398㊃ʌ基金项目ɔ湖北省卫健委2019年科研项目,(编号:WJ2019F184)ʌ通讯作者ɔ马燕凌囊泡装载5-氟尿嘧啶能明显抑制结直肠癌细胞株HCT116增殖㊁侵袭水平,增强其凋亡水平,其机制可能与细胞外囊泡装载5-氟尿嘧啶能促进结直肠癌细胞株HCT116高表达miR-128,低表达PI3K有关㊂ʌ关键词ɔ㊀载5-氟尿嘧啶细胞囊泡;㊀结直肠癌;㊀细胞增殖ʌ文献标识码ɔ㊀A㊀㊀㊀㊀㊀ʌdoiɔ10.3969/j.issn.1006-6233.2023.06.03Killing Effect of5-Fluorouracil Cell Vesicles onColorectal Cancer Cell Line HCT116SUN Jianhai,YAN Fei,WEI Wujie,et al(Hubei Third People's Hospital Affiliated to Jianghan University,Hubei Wuhan430000,China)ʌAbstractɔObjective:To explore the killing effect of5-fluorouracil cell vesicles on colorectal cancer cell line HCT116.Methods:The HCT116group,cell vesicles group(EVs suspension5mL,106cells/mL), 5-fluorouracil group(5-fluorouracil5mL,30μg/mL),and5-fluorouracil drug-loaded vesicles group(EVs suspension5mL,106cells/mL+5-fluorouracil5mL,30μg/mL)were set up,and6parallel samples of each well of the above groups were incubated for72h.After incubation,the levels of cell proliferation,invasion and apoptosis were determined,and the levels of miR-128and PIK3were determined by RT-PCR and western blotting.Results:The OD value,survival rate,number of monoclonal formation,number of membrane pene-tration,migration distance,apoptosis rate,miR-128level,PI3K mRNA and protein levels in cell vesicles group were not significantly different from those in HCT116group(P>0.05).OD value,survival rate,num-ber of monoclonal formation,number of membrane penetration,migration distance,PI3KmRNA and protein levels in5-fluorouracil group and5-fluorouracil drug-loaded vesicles group were significantly lower than those in HCT116group and cell vesicles group(P<0.05),and the apoptosis rate and the level of miR-128were significantly higher than those in HCT116group and cell vesicle group(P<0.05).OD value,survival rate, number of monoclonal formation,number of membrane penetration,migration distance,PI3K mRNA and pro-tein levels in5-fluorouracil drug-loaded vesicles group were significantly lower than those in5-fluorouracil group,and the apoptosis rate and miR-128level were significantly higher than those in5-fluorouracil group (P<0.05).Conclusion:Extracellular vesicles loaded with5-fluorouracil can significantly inhibit the prolif-eration and invasion level of colorectal cancer cell line HCT116,and enhance its apoptosis level,which may be related to the mechanism that extracellular vesicles loaded with5-fluorouracil can promote the high expres-sion of miR-128and low expression of PI3K in colorectal cancer cell line HCT116.ʌKey wordsɔ㊀5-fluorouracil;㊀Colorectal cancer;㊀Proliferation of cells㊀㊀结直肠癌(CRC)可导致正常结肠黏膜恶化为浸润性肠黏膜[1],遗传和环境因素等许多风险因素都会导致CRC的发生[2]㊂手术是早期CRC病例的金标准治疗方法,但绝大多数CRC患者术后生存率较低㊂细胞外囊泡(EV)是一种球形脂质双层,EV可以将蛋白质㊁糖蛋白㊁脂质㊁核酸和细胞因子从母体细胞转移到受体细胞,以促进受体细胞的表型变化,并在细胞间通讯中发挥重要作用㊂EV可以携带母体细胞成分以影响各种生物过程,包括:DNA转移㊁细胞代谢物输出㊁细胞间通讯等㊂细胞外囊泡由于其可修饰性㊁有效的装载能力和天然的肿瘤靶向特性而被广泛用作抗肿瘤药物的递送工具[3,4]㊂研究发现,5-氟尿嘧啶与结直肠癌患者来源的EV有机结合就形成了载5-氟尿嘧啶细胞囊泡,其具有高效靶向性㊁特异性高以及副作用小等特点㊂微小RNA(miRNA)是19-24个核苷酸的小型非编码RNA,已被确定为多种癌症类型的潜在标志物,包括CRC[5]㊂大量的miRNA与CRC的发展或总体存活率低有关㊂例如,在转移性CRC患者中,miR-30d-5p血浆水平有所提高㊂基于miRNA的微阵列显示miR-128是CRC细胞中最显著上调的miRNA之一,miR-128过表达有助于促进细胞迁移和侵袭[6]㊂本研究拟探讨载5-氟尿嘧啶细胞囊泡对结直肠癌细胞株HCT116的杀伤作用,为结直肠癌的治疗提供依据㊂1㊀材料与方法1.1㊀试剂及仪器:DMEM-F12(Sigma-Aldrich Chemi-㊃498㊃cal Company),FBS(System Biosciences),1ˑ抗生素和抗真菌剂(Life technologies),10%胎牛血清(FBS;Hy-clone;GE Healthcare Life Sciences),Dulbecco改良Ea-gle培养基(DMEM)完全培养基(Sigma),链霉素㊁青霉素(Gibco;Thermo Fisher Scientific),CCK-8溶液(Ye-asen),FITC-膜联蛋白㊁碘化丙锭(PI)(BioLegend), Transwell室(BD Biosciences)㊁Matrigel(Corning),TR-Izol试剂盒(Invitrogen),miScript逆转录试剂盒(Qia-gen),SYBR Premix EX Taq(TaKaRa Otsu Shiga),逆转录试剂盒(Promega),IQTM SYBR Green Supermix试剂盒(Bio-Rad),Radio Immunoprecipitation Assay裂解缓冲液㊁二辛可宁酸蛋白质测定试剂盒(Thermo Fisher),一抗PIK3兔多克隆抗体㊁GAPDH兔铵多克隆抗体(Abcam,Cambridge),辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG(Abcam Cambridge)㊂SpectraMax M5酶标仪(Molecular Devices),流式细胞仪(BD Biosciences), Cell QuestPro软件(BD Biosciences),Applied Biosys-tems7500系统(Applied Biosystems)㊂1.2㊀细胞外囊泡分离:结直肠癌细胞株HCT116在DMEM-F12中生长,含有10%EV消耗的FBS和1ˑ抗生素和抗真菌剂培养48h后,通过不同的离心方法将EV从培养基中分离出来㊂将收集的培养基以300g离心10min,然后以2000g离心25min㊂通过0.22μm过滤器收集上清液㊂使用获得的培养基在100000g和4ħ下离心60min来制造EV㊂然后弃去上清液㊂在相同条件下,将培养基超速离心并用磷酸盐缓冲盐水(PBS)重悬用于后续分析㊂提取的EV由日立JEM-2100透射电子显微镜(日本电子有限公司)鉴定㊂1.3㊀细胞培养及分组:结直肠癌细胞株HCT116购自Be Na Culture Collection㊂细胞系均在含有10%胎牛血清的Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)完全培养基中培养,添加100U/mL链霉素和100U/mL青霉素㊂所有细胞系均置于37ħ㊁5%CO2恒温培养箱中培养备用㊂HCT116组㊁细胞囊泡组㊁5-氟尿嘧啶组㊁5-氟尿嘧啶载药囊泡组培养方法HCT116组的培养方法如前所述;细胞囊泡组加入EV混悬液5mL(106个/mL);5 -氟尿嘧啶组加入5-氟尿嘧啶5mL(30μg/mL);5-氟尿嘧啶载药囊泡组加入载药囊泡混悬液5mL,载药囊泡混悬液的制备方法如下:取5-氟尿嘧啶30μg,溶于1mL EVs混悬液中,在37ħ恒温培养箱中孵育1h, 9168r/min离心10min,经0.22μm过滤器过滤; 30900r/min离心70min,将沉淀溶于PBS,即得载药囊泡混悬液㊂各组设6个平行样,培养72h㊂1.4㊀HCT116细胞活力及单克隆形成数目检测:将细胞接种到96孔板中,每孔1ˑ103个细胞,在5%CO2, 37ħ环境下孵育72h,将10μL CCK-8溶液加入每个孔中㊂在37ħ下孵育1.5h后,使用SpectraMax M5检测450nm处的光密度值㊂细胞存活率=(实验组OD-空白组OD)/(HCT116组OD-空白组OD)㊂将各组结直肠癌细胞株HCT116用0.25%胰蛋白酶消化成单细胞,以4ˑ105细胞/孔的密度接种到6孔培养板中, 24h后,将50个细胞接种于6孔组织培养板中,继续培养2周,然后将细胞用结晶紫-福尔马林溶液染色10min并计数㊂1.5㊀HCT116细胞凋亡测定:使用FITC-膜联蛋白V 和碘化丙锭(PI)通过流式细胞术分析细胞凋亡㊂将2mL细胞(5ˑ104个细胞/mL)接种到6孔板中,48h 后,用PBS洗涤细胞两次,消化并重悬于100μL结合缓冲液中㊂细胞密度调整为0.5ˑ106个/mL细胞,使用5μL Annexin V/FITC在室温下黑暗染色细胞10min,加入100μL结合缓冲液,将细胞在室温下在黑暗中用5μL PI染色5min㊂用流式细胞术分析细胞凋亡率,用Cell Quest Pro软件计算凋亡细胞百分比㊂1.6㊀HCT116细胞侵袭㊁迁移测定:通过Transwell小室评估细胞的侵袭能力㊂Transwell室底部膜的孔径为8μm,底室充满600μL含有10%FBS的DMEM营养液,顶室的大小为200μL,接种5ˑ105个细胞,在37ħ㊁5%CO2的培养箱中培养24h,将Transwell小室取出并固定在由甲醇和冰醋酸(3:1)组成的液体中30min,用PBS洗涤腔室,用0.5%结晶紫染色并最后固定,在显微镜下随机取5个视野观察并计数染色细胞数㊂迁移水平测定,将约5ˑ104个细胞加入涂有500ng/mL Ma-trigel的24孔Transwell上室㊂下室充满10%FBS补充的DMEM培养基,将细胞在37ħ㊁5%CO2的培养箱中培养㊂24h后,取出Transwell插入物,使用无菌镊子移除插入物以产生均匀的500μm无细胞间隙,用4%多聚甲醛固定30min,在显微镜下计算迁移距离㊂1.7㊀HCT116细胞miR-128㊁PIK3mRNA水平测定: TRIzol试剂盒提取总RNA㊂为了量化miR-128的表达,采用miScript逆转录试剂盒(Qiagen)合成互补DNA,并使用SYBRPremixEXTaq以U6作为内标进行qRT-PCR参考miR-128㊂为了量化PIK3mRNA的表达,使用逆转录试剂盒(Promega)生成cDNA,并应用IQTM SYBR Green Supermix试剂盒以GAPDH作为内源对照进行扩增㊂结果用2-ΔΔCt值进行量化和归一化㊂qRT-PCR检测均在Applied Biosystems7500系统上进行㊂1.8㊀结直肠癌细胞株HCT116PIK3蛋白表达水平测㊃598㊃定:不同处理组的细胞转染72h后,用Radio Immuno-precipitation Assay裂解缓冲液在冰上裂解10min,二辛可宁酸蛋白质测定法定量蛋白质,将蛋白质在100V 电压下加载到十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳中,转移到聚偏二氟乙烯膜上,用5%BSA/TBST封闭60min,将膜与一抗PIK3兔多克隆抗体和GAPDH兔铵多克隆抗体在4ħ下孵育过夜,在室温下用1ˑTBST 溶液洗涤每次5min,重复3次㊂室温下,将膜与辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG孵育1h,并用TBST 洗涤3次㊂每20min应用电化学发光检测发光反应,并拍摄蛋白质印记以供观察㊂1.9㊀统计学分析:SPSS24.0软件进行统计分析,定量数据以均值ʃ标准差表示,多组均数比较采用单因素方差分析,两组间比较采用LSD-t检验,P<0.05表示差异有统计学意义㊂2㊀结㊀果2.1㊀各组结直肠癌细胞株HCT116OD值㊁存活率比较:细胞囊泡组OD值㊁存活率与HCT116组比较无统计学差异(P>0.05);5-氟尿嘧啶组㊁5-氟尿嘧啶载药囊泡组OD值㊁存活率明显低于HCT116组㊁细胞囊泡组(P<0.05),5-氟尿嘧啶载药囊泡组OD值㊁存活率明显低于5-氟尿嘧啶组(P<0.05)㊂见表1㊂表1㊀各组结直肠癌细胞株HCT116OD值存活率比较组别复孔数OD值存活率(%) HCT116组60.80ʃ0.0773.52ʃ5.73细胞囊泡组60.81ʃ0.0872.85ʃ5.37 5-氟尿嘧啶组60.54ʃ0.05b52.10ʃ3.27b 5-氟尿嘧啶载药囊泡组60.24ʃ0.05bc30.12ʃ4.04bc F19.65821.365 P0.0000.000㊀㊀注:b与HCT116组相比P<0.05;c与5-氟尿嘧啶组相比P<0.052.2㊀各组结直肠癌细胞株HCT116单克隆形成数目比较:细胞囊泡组单克隆形成数目与HCT116组比较无统计学差异(P>0.05);5-氟尿嘧啶组㊁5-氟尿嘧啶载药囊泡组单克隆形成数目明显低于HCT116组㊁细胞囊泡组(P<0.05),5-氟尿嘧啶载药囊泡组单克隆形成数目明显低于5-氟尿嘧啶组(P<0.05)㊂见表2㊁图1㊂表2㊀各组结直肠癌细胞株HCT116克隆形成数目比较组别复孔数单克隆形成数目HCT116组6647.77ʃ99.47细胞囊泡组6652.59ʃ95.35 5-氟尿嘧啶组6453.54ʃ55.87b 5-氟尿嘧啶载药囊泡组6124.29ʃ22.47bc F25.297 P0.000㊀㊀注:b与HCT116组相比P<0.05;c与5-氟尿嘧啶组相比P<0.05图1㊀各组结直肠癌细胞株HCT116克隆形成数目比较(结晶紫染色,ˑ400)(A:HCT116组B:细胞囊泡组C:5-氟尿嘧啶组C:5-氟尿嘧啶载药囊泡组)2.3㊀各组结直肠癌细胞株HCT116凋亡率比较:细胞囊泡组凋亡率与HCT116组比较无统计学意义(P>0.05);5-氟尿嘧啶组㊁5-氟尿嘧啶载药囊泡组凋亡率明显高于HCT116组㊁细胞囊泡组(P<0.05),5-氟尿嘧啶载药囊泡组凋亡率明显高于5-氟尿嘧啶组(P<0.05)㊂见表3㊁图2㊂表3㊀各组结直肠癌细胞株HCT116凋亡率比较组别复孔数凋亡率(%) HCT116组6 2.06ʃ0.32细胞囊泡组6 2.02ʃ0.33 5-氟尿嘧啶组6 3.04ʃ0.52b 5-氟尿嘧啶载药囊泡组614.75ʃ2.14bc F15.632 P0.000㊀㊀注:b与HCT116组相比P<0.05;c与5-氟尿嘧啶组相比㊃698㊃P<0.05图2㊀各组结直肠癌细胞株HCT116凋亡率比较流式细胞图(A:HCT116组B:细胞囊泡组C:5-氟尿嘧啶组C:5-氟尿嘧啶载药囊泡组)2.4㊀各组结直肠癌细胞株HCT116侵袭能力比较:细胞囊泡组穿膜数与HCT116组比较无统计学差异(P> 0.05);5-氟尿嘧啶组㊁5-氟尿嘧啶载药囊泡组穿膜数明显低于HCT116组㊁细胞囊泡组(P<0.05),5-氟尿嘧啶载药囊泡组穿膜数明显低于5-氟尿嘧啶组(P< 0.05)㊂见表4㊁图3㊂表4㊀各组结直肠癌细胞株HCT116穿膜数比较组别复孔数穿膜数(个) HCT116组62654.69ʃ484.30细胞囊泡组62701.74ʃ411.88 5-氟尿嘧啶组61247.02ʃ205.59b 5-氟尿嘧啶载药囊泡组6423.63ʃ85.89bc F29.667 P0.000㊀㊀注:b与HCT116组相比P<0.05;c与5-氟尿嘧啶组相比P<0.05图3㊀各组结直肠癌细胞株HCT116穿膜数数目比较(结晶紫染色,ˑ400)(A:HCT116组B:细胞囊泡组C:5-氟尿嘧啶组C:5-氟尿嘧啶载药囊泡组)2.5㊀各组结直肠癌细胞株HCT116迁移能力比较:细胞囊泡组迁移距离与HCT116组比较无统计学差异(P >0.05);5-氟尿嘧啶组㊁5-氟尿嘧啶载药囊泡组迁移距离明显低于HCT116组㊁细胞囊泡组(P<0.05),5-氟尿嘧啶载药囊泡组迁移距离明显低于5-氟尿嘧啶组(P<0.05)㊂见表5㊁图4㊂表5㊀各组结直肠癌细胞株HCT116迁移距离比较组别复孔数迁移距离(μm) HCT116组628.92ʃ5.02细胞囊泡组629.02ʃ5.03 5-氟尿嘧啶组615.80ʃ2.00b 5-氟尿嘧啶载药囊泡组6 6.41ʃ1.32bc F36.257 P0.000㊀㊀注:b与HCT116组相比P<0.05;c与5-氟尿嘧啶组相比P<0.05图4㊀各组结直肠癌细胞株HCT116迁移距离比较(ˑ400) (A:HCT116组B:细胞囊泡组C:5-氟尿嘧啶组C:5-氟尿嘧啶载药囊泡组)2.6㊀各组结直肠癌细胞株HCT116miR-128㊁PI3K mRNA和蛋白水平比较:细胞囊泡组miR-128水平与HCT116组比较无统计学差异(P>0.05);5-氟尿嘧啶组㊁5-氟尿嘧啶载药囊泡组miR-128高于HCT116组㊁细胞囊泡组(P<0.05),5-氟尿嘧啶载药囊泡组miR-128高于5-氟尿嘧啶组(P<0.05)㊂细胞囊泡组PI3K mRNA和蛋白与HCT116组比较无统计学差异(P>0.05);5-氟尿嘧啶组㊁5-氟尿嘧啶载药囊泡组PI3K mRNA和蛋白低于HCT116组㊁细胞囊泡组(P< 0.05),5-氟尿嘧啶载药囊泡组PI3KmRNA和蛋白低㊃798㊃于5-氟尿嘧啶组(P<0.05)㊂见表6㊂表6㊀各组结直肠癌细胞株HCT116miR -128PI3K mRNA 和蛋白表达水平比较组别复孔数miR -128PI3KmRNA PI3K 蛋白(/GAPDH )HCT116组6 1.17ʃ0.23 3.85ʃ0.65 3.95ʃ0.79细胞囊泡组6 1.15ʃ0.26 3.90ʃ0.63 3.89ʃ0.785-氟尿嘧啶组6 3.68ʃ0.57b 2.54ʃ0.44b 2.34ʃ0.47b 5-氟尿嘧啶载药囊泡组65.42ʃ0.98bc1.63ʃ0.28bc1.44ʃ0.21bcF 29.85732.25818.578P0.0000.0000.000㊀㊀注:b 与HCT116组相比P<0.05;c 与5-氟尿嘧啶组相比P<0.053㊀讨㊀论EV 作为一种纳米级的膜结构,主要负责携带各种内容物,通过质膜融合㊁内吞㊁与细胞表面受体结合等机制广泛参与肿瘤的生物学过程㊂EV 作为肿瘤侵袭转移的分子基础之一,对肺癌的早期诊断和靶向治疗具有重要意义㊂研究发现,来源于高转移肺癌细胞和晚期肺癌患者血清的EV 诱导波形蛋白表达,诱导HBECs 上皮-间质转化,诱导非转移癌细胞的迁移㊁侵袭和增殖[7];与来自早期非小细胞肺癌(NSCLC )细胞的EV 相比,来自转移性SCLC 细胞的EV 对肿瘤细胞迁移和侵袭的影响更大㊂特别是在缺氧条件下,转移性小细胞肺癌细胞EV 中与肿瘤细胞迁移和侵袭密切相关的转化生长因子-β和白细胞介素-10含量增加[8,9]㊂EV 作为细胞间信息交换的重要物质,通过自分泌或远距离传播的方式将相关信号分子传递给靶细胞,从而产生一系列生物学效应㊂因此,EV 靶向肿瘤治疗方法可能具有广阔的前景㊂已经确定了EV 中常见的三个蛋白质家族,分别是热休克蛋白70(HSP70)㊁S -腺苷同型半胱氨酸酶和甘油醛3-磷酸脱氢酶㊂在这项研究中,我们对EV 进行了蛋白质组学分析,发现了所有三种蛋白质,进一步证实了EV 的纯化㊂同时,我们在EV 中发现了MAP30㊁MAP30可以增加细胞内Ca 2+离子浓度,从而通过细胞凋亡触发ROS 介导的癌细胞凋亡㊂本研究发现5-氟尿嘧啶载药囊泡处理后细胞凋亡的产生,这可能是由EV 中的MAP30蛋白介导的㊂氟尿嘧啶可诱导线粒体ROS ,导致癌细胞增殖㊁侵袭能力下降,ROS 的产生增强了5-氟尿嘧啶对癌细胞的抗肿瘤作用㊂而抗氧化剂降低了5-氟尿嘧啶在结肠癌中的凋亡作用㊂本研究发现载5-氟尿嘧啶细胞囊泡能明显抑制结直肠癌细胞株HCT116增殖㊁侵袭水平,增强其凋亡水平㊂PI3K 蛋白家族是由调节亚基p85和催化亚基p110组成的二聚体,广泛参与调控细胞增殖㊁分化㊁凋亡和迁移等表型㊂有报道[10,11]称PI3K 信号的异常激活参与5-氟尿嘧啶耐药的发生发展,而EV 通过激活细胞凋亡信号通路和负向调节PI3K /Akt 信号通路,抑制5-氟尿嘧啶耐药NSCLC 细胞增殖并诱导细胞凋亡,延缓5-氟尿嘧啶耐药NSCLC 细胞的增殖和凋亡㊂此外,炎症是肿瘤进展的重要组成部分㊂化疗增强炎症可能导致治疗失败和转移㊂PI3K 是先天免疫系统的重要组成部分之一,在癌症中起着重要作用㊂许多因素可以激活PI3K ,包括K +流出㊁细胞内钙㊁内质网(ER )应激和ROS [12]㊂之前的研究结果表明,5-氟尿嘧啶治疗增加了口腔癌(OSCC )中PI3K 的表达,从而介导了5-氟尿嘧啶耐药耐药性,而5-氟尿嘧啶耐药可以促进OSCC 中的肿瘤生长和转移㊂Fer 样家族成员4(Ferrostatin -4)是PI3K 的下游调控因子,其在肺癌细胞系A549和95D 中的过表达抑制集落形成㊁细胞增殖和迁移,导致细胞中PI3K /Akt 表达降低,同时使用小分子抑制剂激活PI3K /Akt 信号磷酸酶和张力蛋白同系物逆转了Ferrostatin -4对细胞增殖和转移的抑制作用㊂同样,miR -128表达在肺癌组织或细胞中下调,miR -128的敲低通过激活PI3K /Akt 通路促进A549细胞活力㊁集落形成和侵袭,加速肿瘤转移和复发㊂本研究结果与上述研究结果一致,发现细胞外囊泡装载5-氟尿嘧啶能促进结直肠癌细胞株HCT116高表达miR -128,低表达PI3K ㊂本研究未探讨细胞外囊泡装载5-氟尿嘧啶对直肠癌细胞株HCT116Ferrostatin -4表达的影响,这将在后续研究中进行㊂㊃898㊃综上所述,细胞外囊泡装载5-氟尿嘧啶能明显抑制结直肠癌细胞株HCT116增殖㊁侵袭水平,增强其凋亡水平,其机制可能与细胞外囊泡装载5-氟尿嘧啶能促进结直肠癌细胞株HCT116高表达miR -128,低表达PI3K 有关㊂ʌ参考文献ɔ[1]㊀Xi Y ,Xu P.Global colorectal cancer burden in 2020and pro-jections to 2040[J ].Transl Oncol ,2021,14(10):101174.[2]㊀Biller LH ,Schrag D.Diagnosis and treatment of metastaticcolorectal cancer :a review [J ].JAMA ,2021,325(7):669-685.[3]㊀Herrmann IK ,Wood MJA ,Fuhrmann G.Extracellular vesiclesas a next -generation drug delivery platform [J ].Nat Nano-technol ,2021,16(7):748-759.[4]㊀Verweij F J ,Balaj L ,Boulanger CM ,et al.The power of ima-ging to understand extracellular vesicle biology in vivo [J ].Nat Methods ,2021,18(9):1013-1026.[5]㊀Guo Y ,Guo Y ,Chen C ,et al.Circ3823contributes to growth ,metastasis and angiogenesis of colorectal cancer :involvementof miR -30c -5p /TCF7axis [J ].Mol Cancer ,2021,20(1):93.[6]㊀He F ,Song Z ,Chen H ,et al.Long noncoding RNA PVT1-214promotes proliferation and invasion of colorectal cancerby stabilizing Lin28and interacting with miR -128[J ].On-cogene ,2019,38(2):164-179.[7]㊀Wang H ,Wang X ,Zhang H ,et al.The HSF1/miR -135b -5paxis induces protective autophagy to promote oxaliplatin re-sistance through the MUL1/ULK1pathway in colorectal cancer [J ].Oncogene ,2021,40(28):4695-4708.[8]㊀Zhang W ,Wang Z ,Cai G ,et al.Circ _DOCK1regulatesUSP11through miR -132-3p to control colorectal cancerprogression [J ].World Surg Oncol ,2021,19(1):67.[9]㊀Zhang X ,Li T ,Han Y N ,et al.miR -125b promotes colorec-tal cancer migration and invasion by dual -targeting CFTR and CGN [J ].Cancers ,2021,13(22):5710.[10]㊀Zheng J ,Yang T ,Gao S ,et al.miR -148a -3p silences theCANX /MHC -I pathway and impairs CD8+T cell -mediated immune attack in colorectal cancer [J ].FASEB ,2021,35(8):e21776.[11]㊀Zhou L ,Li J ,Tang Y ,et al.Exosomal LncRNA LINC00659transferred from cancer -associated fibroblasts promotescolorectal cancer cell progression via miR -342-3p /ANXA2axis [J ].Transl Med ,2021,19(1):8.[12]㊀Bai L ,Gao Z ,Jiang A ,et al.Circular noncoding RNA circ_0007334sequestrates miR -577to derepress KLF12and ac-celerate colorectal cancer progression [J ].Anticancer Drugs ,2022,33(1):409-422.ʌ文章编号ɔ1006-6233(2023)06-0899-08CircRNA YAP1对股骨头微血管内皮细胞血管生成的作用研究日夏提㊃帕尔哈提,㊀翟㊀生,㊀吕㊀青(新疆医科大学第五附属医院骨科中心,㊀新疆㊀乌鲁木齐㊀830000)ʌ摘㊀要ɔ目的:探讨环状RNA (circRNA )YAP1对激素性股骨头坏死(SONFH )大鼠股骨头微血管内皮细胞(MVECs )血管生成的作用与机制㊂方法:成年雄性SD 大鼠接受甲基强的松龙(MPS ,20mg ㊃kg -1㊃d -1肌肉注射3周,以诱导SONFH 模型(n =30只)㊂Ctrl 组(n =30只)注射等量生理盐水㊂用mi-cro -CT 扫描和HE 染色评估是否造模成功㊂分离大鼠的股骨头MVECs ㊂并用CD31蛋白作为标志物用免疫荧光化学法(IF )鉴定股骨头MVECs ㊂将MVECs 分为过表达circRNA YAP1组(pcDNA -YAP1组)㊁阴性对照组(pcDNA -NC 组)㊁以及pcDNA -YAP1联合Wnt1/β-catenin 通路拮抗剂dickkopf -1处理组(pcDNA -YAP1+dickkopf -1组)㊂用qPCR 检测circRNA YAP1表达,Western blot 法分别检测Wnt1㊁β-catenin ㊁VEGF -A 和vimentin 的表达㊂用CCK -8实验检测各组细胞的增殖活性㊂Transwell 小室检测细胞的迁移率㊂管形成实验检测细胞的血管生成能力㊂结果:HE 染色结果显示Ctrl 组表现为健康状态,无骨坏死,SONFH 组大鼠均重度股骨头坏死,股骨头恶化㊂micro -CT 扫描的结果显示Ctrl 组表现骨小梁致密规则,骨小梁数量和形态均正常,SONFH 组伴空骨陷窝,骨小梁减少,骨小梁缩短㊂与Ctrl 组(1.00ʃ0.08;1.00ʃ0.12;1.00ʃ0.15)比较,SONFH 组股骨组织中circRNA YAP1(0.27ʃ0.04)㊁Wnt1(0.49ʃ0.03)㊁β-catenin (0.33ʃ0.03)表达量均显著减少(t =12.158,P =0.009;t =10.596,P =0.012;t =10.080,P =0.014)㊂另外,成功分离Ctrl 组和SONFH 组的股骨头MVECs ㊂与Ctrl 组(1.00ʃ0.㊃998㊃ʌ基金项目ɔ新疆维吾尔自治区自然科学基金项目,(编号:2021D01C426)ʌ通讯作者ɔ吕㊀青。
Cas号50-65-7_Niclosamide_MedBio技术参数
氯硝柳胺（40mg / kg / d，ip）抑制携带HL-60异种移植肿瘤的裸鼠中异种移植的AML细胞的生长[4]。
激酶实验
所有蛋白激酶在Sf9昆虫细胞或大肠杆菌中表达为重组GST-融合蛋白或His-标记的蛋白。放射性蛋白激酶测定法用于测量22种蛋白激酶的激酶活性。简而言之，对于每种蛋白激酶，50μL反应混合物含有60mM HEPES-NaOH，3mM MgCl 2,3mM MnCl2,3μM原钒酸钠，1.2mM DTT，50μg/ mLPEG20000,1μM[γ-33P] - ATP，氯硝柳胺，足量的酶及其底物。 PKC-α测定另外含有1mM Ca 2,4mM EDTA，5μg/ mL磷脂酰丝氨酸和1μg/ mL 1,2-二油基甘油。将反应混合物在37℃下孵育60分钟并用50μL2％（v / v）H 3 PO 4终止。用微孔板闪烁计数器测定33Pi的掺入。使用Quattro Workflow V2.28计算活动和IC50值。
Cas号
1、产品物理参数：
常用名
氯硝柳胺
英文名
Niclosamide
CAS号
50-65-7
分子量
327.120
密度
1.6±0.1 g/cm3
沸点
424.5±45.0 °C at 760 mmHg
分子式
C13H8Cl2N2O4
熔点
225-230ºC
闪点
210.5±28.7 °C
2、技术资料：
体外研究
氯硝柳胺是STAT3的抑制剂，抑制STAT3介导的荧光素酶报告基因活性，在HeLa细胞中IC50为0.25μM。氯硝柳胺（1μM）抑制EGF诱导的Du145细胞中STAT3的核转位。氯硝柳胺（<2μM）剂量依赖性地抑制Du145细胞中STAT3下游基因的转录。氯硝柳胺（<10μM）以剂量依赖的方式诱导Du145癌细胞的G0 / G1停滞和凋亡[1]。氯硝柳胺可以在感染SARS-CoV的Vero E6细胞中以微摩尔浓度阻断SARS-CoV复制[2]。氯硝柳胺（<7.5μM）促进Frizzled1内吞作用，下调Disheveled-2蛋白，并抑制Wnt3A刺激的U2OS细胞中β-catenin稳定和LEF / TCF报告基因活性[3]。氯硝柳胺在U2OS细胞中以剂量和时间依赖性方式抑制TNF诱导的NF-κB报告基因活性。氯硝柳胺（125nM）抑制U2OS细胞中p65，IKKα，IKKβ，IKKγ和TAK1诱导的NF-κB活化。氯硝柳胺（<500nM）完全阻断时间和剂量依赖性TNFα诱导的HL-60细胞中NF-κB-DNA复合物的改变。氯硝柳胺（<10nM）抑制U266细胞中的组成型NF-κB活化。氯硝柳胺在HL-60，Molm13或AML原代细胞中以剂量和时间依赖性方式抑制TNF诱导的IκBα降解和p65的重新定位。氯硝柳胺（500nM）引起TNF诱导的NF-κB依赖性基因产物的减少，所述基因产物参与HL-60细胞中的细胞存活。氯硝柳胺还抑制生长并诱导与Mcl-1和XIAP水平降低以及细胞内ROS水平升高相关的AML细胞的强烈凋亡[4]。
LCMS检测西他沙星原料中基因毒性杂质的含量
LC-MS检测西他沙星原料中基因毒性杂质的含量石莹1宋雪洁3李浩冬2路显锋2*1药物研究院分析所，扬子江药业集团，泰州2253212药物制剂新技术国家重点实验室，扬子江药业集团，泰州2253213质量管理部，扬子江药业集团，泰州225321摘要建立了LC-MS 法测定西他沙星中基因毒性杂质对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯含量的方法。
方法:采用Agilent Poroshell 120 EC-C18色谱柱；流动相为纯水（0.1%甲酸）:甲醇（V/V）=60:40；稀释剂为乙腈（0.1%甲酸）:纯水（V/V）=50:10；柱温为40℃；进样体积为5µl；流速为0.4ml/min；采用正离子模式进行扫描。
对甲苯磺酸甲酯测定浓度在0.76ng/ml~15.27ng/ml范围内，线性关系良好；对甲苯磺酸乙酯测定浓度在0.75ng/ml~15.01ng/ml范围内，线性关系良好。
对甲苯磺酸甲酯的定量限为0.0038ng；对甲苯磺酸乙酯的定量限为0.0038ng。
杂质回收率在限度浓度80%、100%和160%三个浓度水平均在90~110%之间，该方法准确度良好。
该方法适用于西他沙星原料中对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯的检测。
西他沙星(sitafloxacin)是日本第一制药有限公司继左氧氟沙星后开发出的一种强力广谱新氟喹诺酮类抗菌剂，该药对革兰氏阳性球菌，革兰氏阴性菌以及厌氧菌的抗菌活性是左氧氟沙星的4～32倍，同时对肺炎球菌DNA 促旋酶和拓扑同功酶有双重抑制作用。
临床表现有极广的抗菌谱，特别是对呼吸道的病菌有极强的抗菌活性。
因西他沙星的一个起始物料为对甲苯磺酸盐，在后续反应中对甲苯磺酸若有残留，可能会与溶剂甲醇、乙醇反应生成具有基因毒性的杂质—对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯，故采用LC-MS法对产品中的对甲苯磺酸甲酯/乙酯进行控制。
1、实验部分1.1仪器与试药Agilent 1200液相色谱仪(美国安捷伦公司)；Agilent 6460三重串联四极杆质谱仪(美国安捷伦公司)；XP205型电子天平(瑞士梅特勒托利多公司)。
儿童急性髓系白血病的遗传基因异常及其意义
中国小儿血液与肿瘤杂志 ２０２１年 ６月第 ２６卷第 ３期 ＪＣｈｉｎａＰｅｄｉａｔｒＢｌｏｏｄＣａｎｃｅｒ，Ｊｕｎｅ２０２１，Ｖｏｌ２６，Ｎｏ．３
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２ 异常基因在 ＭＲＤ监测中的作用 ２１ 融 合 基 因 ＲＵＮＸ１ＲＵＮＸ１Ｔ１／ｔ（８；２１）和 ＣＢＦＢＭＹＨ１１／ｉｎｖ（１６）／ｔ（１６；１６）均可用 于 治 疗 后 的 ＭＲＤ监测 。 ［１，８１１］ 诱导或巩固结束后，ＲＴｑＰＣＲ 检测其转录产物 ｍＲＮＡ拷贝数（ＡＢＬ做内参），较初 诊时降低 ＞３个 ｌｏｇ者预后良好。究竟在诱导后还 是巩固后降低 ＞３个 ｌｏｇ较有预后意义，视不同方案 而定。如果诱导结束后降低不足 ３个 ｌｏｇ，在巩固期 间继续降低，直到治疗完全结束后 ＜初诊时的 ４个 ｌｏｇ者预后仍好，提示连续监测的重要性。但如果将 ＲＵＮＸ１ＲＵＮＸ１Ｔ１和 ＣＢＦＢＭＹＨ１１分开统计，可 能 有不同 的 结 果，因 此 需 后 续 更 多 的 研 究［１０］。关 于 ＫＭＴ２Ａ（ＭＬＬ）基 因 重 排，在 ＡＭＬ 只 有 ＭＬＬＴ３ ＫＭＴ２Ａ／ｔ（９；１１）有详细研究［４］，结果显示诱导缓解 后 ＲＴｑＰＣＲ ＜１０－３和后续监测仍 ＜１０－３复发率低。 ＢＣＲＡＢＬ融合基因在 ＡＭＬ发生率低，用于 ＭＲＤ监 测的意义尚未有足够的临床验证 。 ［１１］ 以上研究结 果提示在用融合基因检测 ＭＲＤ方面，连续监测的 重要性，治疗结束后仍低度阳性不影响预后。 ２２ 突变基因 不是所有与 ＡＭＬ相关的突变基因 都适用于 ＭＲＤ监 测 。 ［１，４５，１０１１］ 造 血 干 细 胞 基 因 突 变后，获得竞争优势导致克隆造血，但仍有多系分化 和成熟的造血功能不属于白血病细胞，只有在继发 其他突变后才出现分化阻滞和无限增殖，发展为白 血病。随年龄增长干细胞的突变率增加，因此克隆 造血主要见于老年人，儿童少见。较常见的克隆造 血突变基因是编码表观遗传修饰因子的基因 ＤＮＭＴ３Ａ、ＴＥＴ２、ＩＤＨ、ＡＳＸＬ１，以 及 ＲＮＡ 剪 接 子 和 Ｃｏｈｅｓｉｎｓ蛋 白 的 基 因 等。胚 系 突 变 基 因 ＲＵＮＸ１、 ＧＡＴＡ２、ＣＥＢＰＡ、ＤＤＸ４１和 ＡＮＫＲＤ２６也 不 适 用 于 ＭＲＤ检测。与治疗前比较，缓解后突变基因的表达 水平仍没有明显下降，需考虑是克隆造血突变或胚 系突变基因。胚系突变基因可通过检测胚系组织 ／ 细胞（例如口腔黏膜等）ＤＮＡ发现。
基于人工智能的冠状动脉易损斑块腔内影像学研究进展
基于人工智能的冠状动脉易损斑块腔内影像学研究进展陈远兴综述韩韦钰，赵然尊审校遵义医科大学附属医院心血管内科，贵州遵义563000【摘要】斑块的不稳定导致冠状动脉的血栓性闭塞是大多数急性冠脉综合征(ACS)的原因。
尽管罪犯血管得以及时开通，但非罪犯血管的易损斑块对患者远期预后仍存在较大威胁。
因此，动态评估易损斑块的变化，对冠心病患者格外重要。
冠状动脉血管腔内成像技术，如血管内超声(IVUS)、光学相干断层扫描(OCT)、近红外光谱(NIRS)以及其多模态融合技术等，因其可视化、准确度高，可以揭示易损斑块的不同特征，常用于检测易损斑块。
而IVUS 、OCT 等图像解释需有经验的心血管临床医生逐帧判断，需要大量的时间成本，且图像的解读存在的观察者内及观察者间的差异，这推动了人工智能(AI)在冠状动脉血管腔内影像学应用的发展。
由于电子医疗系统的广泛应用、临床大数据的日益暴增，AI 已在医疗行业获得了极大的进展。
人工智能结合腔内影像学在斑块的识别、干预、预后等诸多方面广泛应用，未来将不断优化诊疗系统，提高精准医疗水平，实现对易损斑块的早期诊断及合理干预。
【关键词】动脉粥样硬化；急性冠脉综合征；腔内成像；易损斑块；人工智能【中图分类号】R541.4【文献标识码】A【文章编号】1003—6350（2023）03—0445—05Research progress of intravascular imaging of vulnerable coronary plaque based on artificial intelligence.CHEN Yuan-xing,HAN Wei-yu,ZHAO Ran-zun.Department of Cardiovascular Medicine,Affiliated Hospital of Zunyi Medical University,Zunyi 563000,Guizhou,CHINA【Abstract 】Plaque vulnerability leading to thrombotic occlusion of coronary arteries is the main cause of majori-ty of acute coronary syndrome (ACS).Despite the criminal vessels can be opened in time,the vulnerable plaques of non-criminal vessels still cause a great threat to the long-term prognosis of patients.Thus,dynamic assessment of vulner-able plaque changes is particularly important for patients with coronary heart disease.Intravascular imaging techniques in coronary arteries,such as intravascular ultrasound (IVUS),Optical Coherence Tomography (OCT),Near Infrared Spectrum Instrument (NIRS),and its multi-mode fusion technology,are often used to detect vulnerable plaques due to their high visualization and accuracy,which can reveal different characteristics of vulnerable plaques.However,IVUS,OCT and other image interpretation requires experienced cardiovascular clinicians to judge frame by frame,which re-quires a large amount of time cost,and there are intra-observer and inter-observer differences in image interpretation,which all promotes the development of AI in the application of intravascular coronary imaging.Artificial intelligence (AI)has made great progress in the medical field due to the wide application of electronic medical information system and the increasing explosion of clinical big data.Artificial intelligence combined with intravascular imaging has been widely ap- ·综述·doi:10.3969/j.issn.1003-6350.2023.03.035第一作者：陈远兴(1995—)，男，住院医师，主要研究方向为冠状动脉粥样硬化性心脏病腔内影像学图像分析。
基于miR-139
郭瑾,王梓仪,张倩,孟骊冲,胡志希*湖南中医药大学,湖南长沙410208〔收稿日期〕2023-07-12〔基金项目〕国家自然科学基金项目(82274412);广东省重点领域研发项目(2020B1111100001);湖南省教育厅项目(21A0230,21B0361)。
〔通信作者〕*胡志希,男,医学博士,教授,博士研究生导师,E-mail:****************。
〔摘要〕目的探讨参附注射液对盐酸异丙肾上腺素(isoprenaline hydrochloride ,ISO )诱导的慢性心力衰竭(chronic heart fail⁃ure ,CHF )大鼠心肌纤维化的作用与机制。
方法采用随机数字表法将45只SD 大鼠随机分为正常组9只,造模组36只,采用ISO 背部皮下多点注射14天制备CHF 大鼠模型,再正常饲养14d 通过模型验证和评价,期间死亡大鼠5只,未成模大鼠4只。
将造模成功的27只大鼠按随机数字表法分为3组:模型组(腹腔注射6mL ·kg -1氯化钠注射液+灌胃10mL ·kg -1蒸馏水)、参附注射液组(腹腔注射6mL ·kg -1参附注射液+灌胃10mL ·kg -1蒸馏水)、卡托普利组(腹腔注射6mL ·kg -1生理盐水+灌胃10mL ·kg -1蒸馏水,蒸馏水含8.8mg ·kg -1卡托普利,相当于临床等效量)。
药物干预15d 后,检测各组大鼠心功能及心肌纤维化的相关指标:超声心动图、体质量、心脏质量指数及左心室质量指数;ELISA 法检测氨基末端脑钠肽前体(N-terminal pro brain natriuretic peptide ,NT-proBNP );HE 染色、Masson 染色检测心肌组织病理形态及纤维化状态;RT-qPCR 检测心肌组织中miR-139、Wnt 家族成员3a (Wnt family member 3a ,Wnt3a )、β-连环蛋白(β-catenin )、糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)、Ⅰ型胶原蛋白(typeⅠcollagen ,Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(typeⅢcollagen ,Col-Ⅲ)及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin ,α-SMA)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)mRNA 的表达;Western blot 检测心肌组织中Wnt3a 、β-catenin 、GSK3β、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA 、MMP-2、MMP-9蛋白表达。
1_例复发性胸腺瘤患者信迪利单抗治疗过程中出现心肌损伤的原因及处理
1例复发性胸腺瘤患者信迪利单抗治疗过程中出现心肌损伤的原因及处理李泞甫1，2，李智可1，2，陈旭澜1，2，皈燕21 川北医学院临床医学系，四川南充637000；2 川北医学院附属医院肿瘤科摘要：目的 总结复发性胸腺瘤患者信迪利单抗治疗过程中出现心肌损伤的原因，探讨有效处理方法。
方法 对1例复发性胸腺瘤信迪利单抗治疗过程中出现心肌损伤的患者临床资料作回顾性分析。
结果 患者2年前因胸腺瘤接受手术切除（R2切除） + 术后放射治疗，2年后出现复发伴肺转移，4周期CAP方案（环磷酰胺890 mg + 盐酸表柔比星130 mg + 顺铂80 mg）化疗后疾病进展。
与患者家属沟通后，予以信迪利单抗200 mg静脉注射（每三周一次）联合CAP化疗。
联合治疗1周期后，出现心肌酶谱升高、完全性右束支传导阻滞、眼睑下垂等心肌损伤症状，考虑为免疫性心肌炎。
使用甲强龙500 mg冲击治疗及其他对症支持治疗后，症状无明显好转，加用抗心律失常药物（胺碘酮、艾司洛尔）、吗替麦考酚酯及免疫球蛋白，但患者病情恶化于次日凌晨2时突发呼吸心脏骤停，抢救无效死亡。
结论 复发性胸腺瘤患者应用信迪利单抗治疗过程中可能发生心肌损伤，发生原因可能与胸腺为免疫器官及免疫治疗联合化疗的不良反应有关。
对于使用免疫治疗联合化疗的胸腺瘤患者应高度警惕，需动态监测心肌损伤指标，早期识别，分级治疗。
关键词：心肌损伤；心肌炎；免疫性心肌炎；药物不良反应；免疫检查点抑制剂doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2023.33.018中图分类号：R730.51 文献标志码：A 文章编号：1002-266X（2023）33-0076-04恶性肿瘤和心血管疾病是全球范围内导致死亡的两大主要原因［1］。
免疫治疗、蒽环类药物及靶向药的应用明显改善患者预后，但其心血管不良反应已经成为影响肿瘤患者生存和预后的重要因素。
蒽环类药物引起心肌损伤的机制主要为加重氧化应激、干扰铁代谢，而免疫治疗主要是是通过激活全身免疫反应，抑制肿瘤细胞免疫逃逸［2-3］。
泽泻醇在小胶质细胞中对基质金属蛋白酶3与一氧化氮的抑制作用
泽泻醇在小胶质细胞中对基质金属蛋白酶3与一氧化氮的抑制作用刘瑜【摘要】This paper investigates the inhibitory effect and mechanism of alismol on neuroinflamination in the activated BV2 microglial cells which are stimulated by lipopolysaccharides(LPS). NO was measured by using Griess reagent. RT-PCR and Western blot are used to analyse ERK, JNK, Akt, and MMP3 . Alismol can significantly inhibit LPS-induced NO production and the MMP3 expression. The mechanism is involved to its inhibition of PI3K/Akt pathway.%利用脂多糖(LPS)刺激小鼠小胶质细胞BV2,研究泽泻醇对炎症相关分子的抑制及机制.Griess法测定一氧化氮(NO)浓度,RT-PCR和Western blot法检测细胞外调节蛋白激酶(ERK)、p38、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、蛋白激酶B(Akt)、基质金属蛋白酶3(MMP3)的变化.研究结果表明,泽泻醇不仅对LPS刺激小胶质细胞产生的NO有明显抑制作用,还能在mRNA与蛋白质水平抑制MMP3的表达,这种抑制与其对PI3K/Akt通路的干预相关.阐述了泽泻醇对小胶质细胞的抑制与PI3K/Akt通路的相关机制.【期刊名称】《实验技术与管理》【年(卷),期】2012(029)010【总页数】4页(P47-50)【关键词】小胶质细胞;泽泻醇;一氧化氮;基质金属蛋白酶3【作者】刘瑜【作者单位】南开大学医学院,天津 300071【正文语种】中文【中图分类】R914Abstract：This paper investigates the inhibitory effect and mechanism of alismol on neuroinflammation in the activated BV2microglial cells whichare stimulated by lipopolysaccharides（LPS）.NO was measured by using Griess reagent.RT-PCR and Western blot are used to analyse ERK，JNK，Akt，and MMP3 .Alismol can significantly inhibit LPS-induced NO production and the MMP3expression.The mechanism is involved to its inhibition of PI3K/Akt pathway.Key words：microglia；alismol；NO；MMP3小胶质细胞是中枢神经系统内的免疫细胞，长期激活而形成中枢神经系统的慢性炎症，其释放的大量氧自由基、炎症介质细胞因子以及基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMP）是神经元损伤的重要原因之一，也是阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）与帕金森病（Parkinson’s disease，PD）等许多中枢神经退行性疾病发生与发展的重要因素之一［1-2］。
乙酰胆碱酯酶抑制剂
上海应用技术学院研究生课程《高等天然产物化学》试卷2014 / 2015 学年第1 学期课程代码：NX0702013论文题目：乙酰胆碱酯酶抑制剂的研究进展姓名：芮银146061414康满满146061409专业：制药工程学院：化工学院乙酰胆碱酯酶抑制剂的研究进展芮银，陈祎桐，康满满摘要：本文阐述了乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChEI)的研究进展，介绍了用于药物治疗的乙酰胆碱酯酶抑制剂的各种来源如植物、微生物等，及其抑制乙酰胆碱的活性物质。
在此基础上，总结了几种现代分析技术，对AChEIs进行筛选，大大加快AD药物资源的开发利用进程。
这些方法主要有基于比色法的Ellman's法及相关的改进方法、薄层显色法、荧光显色法、电喷雾质谱法等。
但是，到目前为止，现代分析技术在AD药物资源中的应用还处在起步阶段。
关键词：乙酰胆碱酯酶抑制剂，筛选方法，薄层显色法，荧光显色法The progress of acetylcholinesteraseinhibitorsRui Yin, Chen Yitong, Kang ManmanAbstract：In this artical, the research elaborates progress of acetylcholinesterase inhibitors (AChEI), and introduces a variety of sources for drug treatment acetylcholinesterase inhibitors such as plants, microorganisms, and its active ingredients. On this basis, the review summarizes several modern analytic techniques such as Ellman's method which based on the colorimetric method, TLC chromogenic method, fluorescent color method, Electrospray ionization mass spectrometry and so on. However, at present, the application of modern analytic techniques in AD drug resources is still in infancy.Key word: Acetylcholinesterase inhibitors, Screening Methods, TLC chromogenic method, Fluorescent color method目录摘要.................................................................................................错误!未定义书签。
氨氯吡啶酸 代谢物
氨氯吡啶酸代谢物
氨氯吡啶酸，又称阿法酸或5-氯-2-羟基尿嘧啶酸，是一种用于治疗消化性溃疡和胃食管反流病的药物。
该药物经口服后被吸收，并在肝脏中代谢成为多个代谢物。
通过代谢作用，氨氯吡啶酸可以转化为其活性代谢物，如5-羟基-氨氯吡啶酸、5-氯-2,6-二羟基尿嘧啶酸等。
这些活性代谢物可以结合到贴壁受体上，从而发挥治疗作用。
而与此同时，一些代谢物则被肝脏进一步代谢，从而被排出体外。
然而，一些代谢物的代谢速率可能受到个体差异、肝脏受损等因素的影响，可能导致药物的代谢率发生变化。
这可能会导致药物在体内的浓度过高或过低，从而影响治疗效果或引发副作用。
因此，在使用氨氯吡啶酸的过程中，应该根据患者的具体情况和症状，合理调整药物使用剂量和频次，以达到最佳的治疗效果，并避免出现不必要的药物不良反应。
同时，应该密切关注患者的药物代谢情况，特别是肝功能不全的患者，应该特别注意药物的剂量和使用方式，以保证药物的安全性和有效性。