氯仿-甲醇提微生物油脂
氯仿-甲醇提取法
（7）注意：
①样品必须干燥，样品中含水分会影响溶剂提取 效果，造成非脂成分的溶出。 ②滤纸筒的高度不要超过回流弯管，否则超过弯 管中的样品的脂肪不能提尽，带来测定误差。 ③乙醚回收后，剩下的乙醚必须在水浴上彻底挥 净，否则放入烘箱中有爆炸的危险。乙醚在使 用过程中，室内应保持良好的通风状态，仪器 周围不能有明火，以防空气中有乙醚蒸气而引 起着火或爆炸。 ④抽提是否完全，可凭经验，也可用滤纸或毛玻 璃检查，由提脂管下口滴下的乙醚（或石油醚） 滴在滤纸或毛玻璃上，挥发后不留下痕迹即表 明已抽提完全。
(2) 原 理 ： 罗 紫 • 哥 特 里 法 的 原 理 是 利 用
氨-乙醇溶液破坏乳的胶体性状及脂肪球膜，使非脂成 分溶解于氨 - 乙醇溶液中而脂肪游离出来，再用乙醚 石油醚提取出脂肪，蒸馏去除溶剂后，残留物即为乳 脂肪。
(3) 仪器
(4) 操作步骤 氨-乙醇处理→ 乙醚-石油醚提取 → 回收溶剂 → 干燥→ 称重 （5） 注意： ① 氨水：使酪蛋白钙盐变成可溶解的盐。 ②乙醇：使溶解于氨水的蛋白质沉淀析出。 ③乙醚：提取脂肪。 ④石油醚：降低乙醚的极性，使乙醚与水不 混溶，只抽出脂肪，并使分层清晰。
(6) 结果计算
m2 m1 100 % m
式中 ——脂类质量分数，%； m------式样质量，g; m1------空锥形瓶质量，g; m2-------锥形瓶与样品脂类质量，g;
(7) 注意
①固体样品必须充分磨细，液体样品必须充分混匀， 以便充分水解。 ② 开始加入 8mL 水是为防止后面加盐酸时干试样固 化，水解后加入乙醇可使蛋白质沉淀，降低表面 张力，促进脂肪球聚合，同时溶解一些碳水化合 物如糖，有机酸等。后面用乙醚提取脂肪时因乙 醇可溶于乙醚故需加入石油醚降低乙醇在醚中的 溶解度，使乙醇溶解物残留在水层，使分层清晰。
两步培养法提高栅藻的生物量及油脂含量
两步培养法提高栅藻的生物量及油脂含量李小妹;廖兴辉;王明兹;陈必链【摘要】Scenedesmus sp. was cultured to stationary phase under the conditions of low illumination in-tensity with nitrogen,and then cultured in medium with high illumination intensity and nitrogen deficiency to accumulate oil. The results showed that in nitrogenous BG11 medium with low illumination intensity, the optimal illumination intensity for the growth of Scenedesmus sp. was 2 000-2 400 lx,culturing for 10 d; in nitrogen deficiency BG11 medium with high illumination intensity, the suitable illumination intensi-ty for oil accumulation of Scenedesmus sp. was 6 000-6 500 lx,culturing for 6 d. The biomass and oil con-tent of Scenedesmus sp. cultured by two-step method were (0. 957±0. 126) g/L and (23. 35±0. 2)% re-spectively, increasing by 35. 74% and 100% than that cultured by common one-step method.%采用两步法培养栅藻,即在低光强-含氮条件下,培养栅藻至稳定期积累生物量,然后将栅藻转移至高光强-缺氮培养基中积累油脂。
食品分析(鲁东大学)智慧树知到课后章节答案2023年下鲁东大学
食品分析（鲁东大学）智慧树知到课后章节答案2023年下鲁东大学鲁东大学第一章测试1.食品分析能检测出的微观营养物质有（）。
答案:维生素和矿物质2.食品分析过程概括起来就是五步，第一步是( )。
答案:样品采集、制备和保存3.世界上最早的农产品、食品行业性国际标准化组织是( )。
答案:官方分析化学家协会（AOAC）4.对没有国家标准而又需要在全国某个行业范围内统一的技术要求，应当制定( )。
答案:省委标准5.食品分析中最基本、最重要的分析方法是( )。
答案:化学分析法6.同一个物质的测定可能有不同的方法，采取不同的方法得出的都是相同的结果。
( )答案:错7.食品分析的方法中感官检验法是成本最低、最简单的检测方法。
( )答案:对8.强制性标准必须执行，推荐性标准国家鼓励企业自愿采用。
( )答案:对9.电子鼻、电子舌等智能仿生技术可以降低食品感官评价的主观因素。
( )答案:对10.农药残留、兽药残留、重金属等是影响食品安全的主要因素。
( )答案:对第二章测试1.为了检验样品掺假、投毒或怀疑中毒的食物等，应注意采样的（）。
答案:典型性原则2.保存容易腐败变质的样品时，我们可以将其在（）摄氏度条件下贮藏。
答案:0~53.测定农药残留的样品的制备，对于肉类，要去除皮和骨，将肥肉与瘦肉混匀，之后还要进行（）的测定答案:脂肪4.浸提法是利用（）原理，将固体样品中某种待测成分浸提出来，因此又称“液—固萃取法”。
答案:相似相溶5.磺化法用（）处理样品。
答案:浓硫酸6.样品的制备方法不包括以下哪个（）？答案:灰化法7.制样过程中，应防止挥发性成分的逸散及避免样品组成和理化性质的变化。
（）答案:对8.对于罐头食品，应该每一箱都抽出一瓶作为试样进行分析。
（）答案:错9.在制备样品过程中，如果分析样品的体积或质量太大，应选择用粉碎法进行分析。
（）答案:错10.超临界流体萃取技术的操作环境有毒，使用时应小心。
（）答案:错第三章测试1.滴定分析时由于指示剂选择不当而引起的误差是随机误差。
微生物油脂及其开发利用研究进展
微生物油脂及其开发利用研究进展谢小萍（武汉工业学院食品科学与工程食工082班080107305）摘要：微生物油脂(亦称单细胞油脂，sco)是一种前景广阔的新型油脂资源，正越来越受到人们的重视，尤其在生产富含多不饱和脂肪酸的功能性油脂方面已成为研究热点。
该文对微生物油脂制备、影响因素及开发利用等方面作一综述，并展望其应用前景。
关键词：微生物油脂；制备；开发利用0 引言微生物油脂又称单细胞油脂(sco)，是由酵母、霉菌、细菌和藻类等微生物在一定条件下，利用碳水化合物、碳氢化合物和普通油脂作为碳源，在菌体内产生的大量油脂。
对微生物油脂的研究最早始于第一次世界大战期间，德国曾准备利用内孢霉属Endomyces vernalis和单细胞藻类镰刀菌属Fusarium 的某些菌种作为油脂生产菌，以解决当时食用油的不足。
之后，美国也开始研究微生物油脂的生产，但由于不能进行深层培养，故结果不终于筛选出适合深层培养的菌株，于是开始工业化生产微生物油脂。
利用微生物生产油脂有许多优点：(1)微生物繁殖速度快，生产周期短；(2)可利用农副产品下脚料、工业废弃物作为微生物生长原料，既降低处理废物的成本，又保护环境；(3)所需劳动力少，同时不受场地、季节、气候变化的影响；(4)利用生物技术改良菌种或选择不同培养基，可使微生物生产经济价值高的功能性油脂和有特殊用途的油脂，如富含Y一亚麻酸、花生四烯酸、EPA、DHA 等油脂及代可可脂。
而且，由于人口增长使得日益增加的油脂需求量与自然资源严重短缺的矛盾愈发尖锐开辟微生物油脂这一新的油脂资源更具有重要的现实意义。
1 微生物油脂制备微生物油脂的生产工艺流程一般为：原料灭菌茵体培养茵体收集干燥菌种筛选油脂提取微生物毛油精炼1．1 菌种选择用于工业化生产的菌株必须具备以下条件：(1)油脂积累量大，含油量应达50％以上，且油脂转化率不低于l5％：(2)生长繁殖速度快，杂菌污染困难；(3)能适应工业化深层培养，装置简单；(4)风味良好，安全无毒，易消化吸收。
花生中粗脂肪的提取方法的比较及油脂性质的鉴定
花生中粗脂肪的提取方法的比较及油脂的性质鉴定食品科学与工程学院粮食工程三班叶孔平 08092305 摘要：通过对粗脂肪的提取方法的比较来对比各种提取方法的优劣点，以不同的方法的提取实验来研究并选出最佳的提取方法，从而获得最好的提取效果，获得高产量的脂肪。
试验中采用了碱提取的方法，分别采用95%乙醇和石油醚作为提取剂来提取粉碎后的花生粒，并对提取出的粗脂肪进行称量，来对比出采用何种提取剂可以得到更高产量的粗脂肪。
结果表明，采用石油醚作为提取剂可以得到比用乙醇做提取剂提取得到的粗脂肪多出约5%的量，对花生中的粗脂肪提取的最佳条件为;样品与提取剂的质量体积比1:24（g/ml），提取时间约为1h,提取温度105℃。
另外还做了油脂的化学性质检测的实验，分别做了油脂的皂化以及肥皂性质的实验和甘油的检查的实验。
关键词：花生；粗脂肪；提取方法；油脂；性质的鉴定Peanuts in crude fat the extraction methods of comparison And grease properties of identificationAbstract: Based on crude fat the extraction methods of comparative comparison of various extraction method the superiority of point, With different methods of extraction experiments to research and select the best extraction method, so as to achieve the best extraction effect, get high yield of fat. Used in the test alkaliextraction method, we adopt 95%C2H5OH ethanol ether as extractionagents to extract after smashing the peanut kernels, and extracted crude fat for weighing, come out with what comparison extraction agents can get higher yield of crude fat. The results show that the petroleum ether as extraction agents can be achieved than with ethanol extraction agents do get more extracted crude fat produces about 5% of the quantity of peanut the crude fat extract optimum condition for, Sample and extraction agent quality volume ratio host1:24 (g/ml), extracting time about 1h, extraction temperature 105℃. In addition also do grease chemical testing experiment, respectively of oil saponification and do experiments and glycerin soap properties of check of experiments.油脂普遍存在于动植物体内，是动植物的三大营养物质之一。
一株高产油脂微生物菌种的筛选与鉴定_陈士华_孙强_孙莉云_吴兴泉
一株高产油脂微生物菌种的筛选与鉴定陈士华1，孙强2，孙莉云1，吴兴泉1*（1.河南工业大学生物工程学院，河南郑州450001；2.黑龙江北大荒农业股份有限公司八五四分公司，黑龙江虎林158403）摘要：为筛选获得高产油脂微生物新菌株，从6份土壤样品中分离纯化得到11株霉菌，利用苏丹黑B 染色法证明7株为产油脂霉菌，采用酸热法测定各菌株的油脂含量，获得一株油脂含量高达48.77%的菌株，经分子生物学鉴定为深黄伞形霉（Umbelopsis isabellina ）.关键词：高产油脂；微生物；筛选；鉴定中图分类号：TS201.3文献标志码：B收稿日期：2013-06-15作者简介：陈士华（1972-），女，黑龙江克东人，副教授，研究方向为分子生物学与生物信息学.*通信作者文章编号：1673-2383(2013)06-0065-04网络出版网址：/kcms/doi/CNKI:41-1378/N.20131231.0904.013.html 网络出版时间：2013-12-319:57:25AM河南工业大学学报（自然科学版）Journal of Henan University of Technology （Natural Science Edition ）第34卷第6期2013年12月Vol.34，No.6D ec.20130引言产油微生物可利用碳源及其他必需营养物质在细胞内合成并大量储存油脂，其油脂积累量可超过细胞总量的20％[1].研究表明，细菌、酵母、霉菌、藻类等多种微生物均可生产油脂，产生的油脂多为C16和C18的不饱和脂肪酸，其中一些还能生产功能性多不饱和脂肪酸，而且证明微生物油脂含有更多的功能性不饱和脂肪酸，比动、植物油脂更符合人们需要.在筛选高产油脂微生物菌种的同时，利用微生物发酵法生产某些功能性油脂的相关研究也随之展开.现已获得了一系列的油脂含量高并富含亚麻酸的菌株，并建立了高密度发酵法生产亚麻酸的技术体系[2].微生物油脂的发酵生产过程具有可人工操作、便于控制、生产周期短、不受季节限制、便于大规模连续生产等优点.微生物油脂在医药、食品、饲料、化工、能源等多个行业具有非常广阔的应用前景[3].近年来，人们致力于高产油脂微生物菌种的选育研究，已经获得多种高产油脂的微生物菌种[4].在众多产油微生物中，霉菌受到的关注最为广泛，研究也较为深入，因为霉菌油脂含量高，富含γ-亚麻酸（GLA ）和花生四烯酸（ARA ）等功能性多不饱和脂肪酸[5].目前研究较多的有高山被孢霉、深黄被孢霉、长被孢霉、小克银汉霉、樟疫霉、水霉、轮枝霉、鲁氏毛霉、卷枝毛霉、畸雌腐霉、终极腐霉、破囊壶菌、头孢霉等[6].霉菌的油脂含量多在20％～25％之间，超过25%的霉菌种类较少.本研究分离、鉴定了一株可高产油脂的深黄伞形霉，其油脂含量可达48.77%，为微生物油脂的开发和利用奠定了基础.1材料与方法1.1带菌土样的采集在河南工业大学及周边地区采集富含油脂的土壤样本6份.取富含油脂及糖类的土壤，用取样铲除去表层5cm 左右的浮土，取5～15cm 处的土样50～100g ，装进准备好的塑料袋内扎好，编号并记录采样地点、土壤质地、时间和其他的环境条件，取回样品后马上进行霉菌分离[7].1.2培养基配方PDA 培养基：马铃薯200g ，水1000mL ，琼脂20g.种子培养基：酵母粉10g ，蛋白胨10g ，葡萄糖20g ，水1000mL.发酵培养基：葡萄糖40g ，（NH 4）2SO 42g ，KH 2PO 47g ，NaH 2PO 42g ，酵母粉1g ，MgSO 4·7H 2O 1.5g ，水1000mL.1.3菌株筛选1.3.1平板初筛取10g 土样放入装有玻璃珠和90mL 无菌生理盐水的三角瓶中，在振荡器上振荡20min 左右，静置，制成稀释10倍的土壤悬液；在无菌条件下，连续稀释，制成10-2、10-3、10-4、10-5、10-6的稀释土壤悬液.无菌条件下，取上述各梯度的稀释液0.1mL 涂布PDA 平板培养基，每个稀释度涂布3个平第34卷河南工业大学学报（自然科学版）板，28℃恒温倒置培养4～6d，然后分离纯化霉菌.1.3.2油脂粒的染色观察苏丹黑B染色液的配制：称取0.3g苏丹黑B （厦门绿茵试剂公司），溶于100mL70％（V/V，下同）乙醇中，室温放置5d，期间经常摇动使其充分溶解，过滤后于4℃下保存备用.Giemsa染液的配制：称取吉姆萨粉（Giemsa stain）l.0g，甘油66 mL，甲醇66mL，将吉姆萨粉放入研钵中，先加入少量甘油，研磨至无颗粒为止，然后再将全部甘油倒入，置于56℃温箱中2h后，加入甲醇，将配制好的染液密封在棕色瓶内4℃保存.油脂粒的染色观察：从平板培养基上选取单菌落，挑取少许菌丝涂片，热固定，加入一滴苏丹黑B 染色液染色l5min，倾去染料，用二甲苯冲洗至洗脱液无色，再用Giemsa染液复染2min，水洗、吸干后镜检.根据油滴颗粒大小及密集程度作出产油脂量的评价，并做好观察记录.根据油滴颗粒大小和密集程度作出产油脂量的评价，以“＋”来评价产油脂量，如果染色后胞内蓝黑色颗粒非常少，有很少油滴记为“＋”；蓝黑色颗粒稍多，有小油滴记为“＋＋”；蓝黑色颗粒稍多，小油滴较多记为“＋＋＋”；孢子分散，染色很深，油脂很多记为“＋＋＋＋”；镜检脂肪粒大且多的霉菌接种于PDA斜面培养基培养和后续的摇瓶复筛.1.3.3摇瓶复筛挑取保存于斜面培养基上的少量菌丝或孢子，接种于另一PDA斜面培养基上，于28℃培养3～5 d，直至长出大量孢子.用无菌水冲洗斜面上的孢子并用移液器分别吸取50μL接入50mL的液体种子培养基中，于28℃，180r/min振荡培养24h.然后将种子液按10%的比例接入装有发酵培养基的三角瓶中（250mL三角瓶的装液量为40mL），放在28℃，180r/min的恒温振荡培养箱中振荡培养5～7d[9].用布氏漏斗过滤发酵液并将所得到的菌体收集起来，干燥后称质量，然后计算干菌体得率.再称取一定量的干菌体，用酸热法将干菌体中所含油脂抽提出来，并测定其质量，从而计算出油脂含量和油脂得率.从中选出油脂含量高且稳定的菌株，并对该菌株进行分子鉴定，以确定其种属.1.4生物量测定摇瓶发酵6d后，测定发酵液的总体积，并用布氏漏斗抽滤得到菌丝体.称取菌丝体的质量，并置于鼓风干燥箱中50℃烘干至质量不再变化，准确称菌体的质量.干菌体得率的计算：干菌体得率（g/L）=（带干菌体培养皿质量-培养皿净质量）/发酵液总体积.（1）1.5油脂提取酸热法提取微生物油脂[10-11]：用研钵将干菌体研磨碎，精确称取一定量干菌体放入100mL的三角瓶中，每克干菌体添加40mL盐酸（4mol/L），室温下放置30min，沸水浴10min，然后置于-20℃下速冷，沸水浴和速冷可重复操作3～4次.然后加入2倍体积的氯仿-甲醇，充分振荡后在4000r/min 下离心12min，用已知质量的离心管收集氯仿层，在60℃水浴中蒸干氯仿，80℃烘干1.5h，冷却称质量即得油脂质量.油脂含量=（油脂质量/干菌体质量）×100%.（2）油脂得率（g/L）=油脂质量/发酵液总体积=油脂含量×干菌体得率.（3）1.6高产油脂微生物菌种的鉴定1.6.1菌种的形态学观察观察菌株在平板培养基上的颜色、厚薄、质地、形状等菌落形态特征，并记录.在显微镜下观察菌株的分生孢子、分生孢子梗及产孢器等各种性状，并记录.1.6.2菌种的分子鉴定从保存的斜面上挑取菌丝体接种到40mL的PDA液体培养基中，28℃，150r/min振荡培养24 h.采用EE101-0150型的DNA提取试剂盒（北京全式金生物技术有限公司）进行DNA的提取.采用真菌ITS序列通用引物ITS1（5'-TCCGTAGGT－GAACCTGCGG-3'）和ITS4（5'-TCCTCCGCT－TATTGATATGC-3'），PCR扩增出包括ITS1、5.8S rDNA和ITS2的全长DNA片段.PCR反应程序为：94℃预变性3min；94℃变性30s，60℃退火30 s，72℃延伸1min，32个循环；72℃延伸10min. PCR扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳检测后，在上海生工生物工程有限公司进行序列测定.采用BLAST工具进行序列比对分析，确定待测菌株的属种.2结果与分析2.1霉菌分离纯化与平板初筛从6份土壤样品中共分离、纯化出11种霉菌.用接种针分别从平板上挑取一定量的孢子，用苏丹黑B染液染色，镜检观察，部分镜检结果见图1.根据油滴颗粒大小和密集程度作出产油脂量的评价，最终分离出7株产生油脂的霉菌（见表1）.将评价为“＋＋”及以上的霉菌作为实验目标菌株，共得到7株，进行摇瓶复筛试验.66第6期2.2摇瓶复筛结果对以上7株菌株经摇瓶培养后，酸热法抽提油脂，测定生物量、油脂含量和油脂得率，结果见表2.图1苏丹黑B 染色结果表1苏丹黑B 染色法观察菌株的结果菌株镜检评价郑1303-1蓝黑色颗粒稍多，小油滴＋＋郑1303-2胞内蓝黑色颗粒稍多，有油滴＋＋郑1303-3胞内蓝黑色颗粒非常少，少油滴＋郑1303-4胞内蓝黑色颗粒很少，少油滴＋郑1303-5有蓝黑色颗粒，有油滴＋＋郑1303-6蓝黑色颗粒稍多，小油滴＋＋＋郑1303-7胞内蓝黑色颗粒很少，少油滴＋郑1303-8菌丝缠在一起，整体染色较深，油滴较多＋＋＋郑1303-9孢子分散，染色很深，油脂很多＋＋＋＋郑1303-10染色较浅，油脂较少＋郑1303-11较多细小油滴＋＋表2摇瓶复筛结果编号发酵液体积/mL干菌得率/（g ·L -1）供试干菌量/g油脂质量/g 油脂含量/%油脂得率/（g ·L -1）郑1303-13710.810.4430.10824.38 2.64郑1303-23915.380.6010.15225.29 3.89郑1303-54117.070.6530.13620.83 3.56郑1303-63710.810.3670.09225.07 2.71郑1303-83613.890.4890.14128.83 4.00郑1303-93811.110.1620.07948.77 5.42郑1303-113713.510.3720.09124.463.30以油脂含量（%）和油脂得率（g/L ）为指标，油脂含量高于25%的霉菌为郑1303-2、郑1303-6、郑1303-8、郑1303-9，其中菌株郑1303-9油脂含量最高（48.77%），油脂得率最高（5.42g/L ），郑1303-8油脂含量其次（28.83%），油脂得率为4.00g/L ，选择油脂含量最高的菌株郑1303-9进行分子鉴定.研究表明，进行产油脂微生物菌种筛选时，采用苏丹黑B 染色法进行初筛具有可批量处理、操作简单等优点.采用酸热法进行粗油脂含量的测定可以满足在菌种筛选阶段对油脂抽提的基本要求，而且较索氏抽提法操作简便、可批量处理，从而使产油脂真菌筛选的整个过程得以大大简化.2.3菌株郑1303-9的鉴定2.3.1菌株郑1303-9的形态学鉴定菌株郑1303-9生长速度比较慢，4d 后菌落直径为2.1cm ，正反面颜色相近，正面为灰黄色，反面为浅黄色，菌丝长的比较集中，相对致密，并且从菌落中心向菌落边缘出现很多像树的年轮一样的圈，一周后菌落直径也只有很小的变化.2.3.2菌株郑1303-9的分子生物学鉴定用北京全式金生物技术有限公司生产的EE101-0150型的DNA 提取试剂盒提取出霉菌的DNA ，以ITS1和ITS4为引物，利用PCR技术扩增出5.8S rDNA/ITS 区段，并将扩增片段用1.5%的琼脂糖凝胶进行电泳，电泳结果见图2.图2菌株郑1303-95.8S rDNA/ITS 区段的PCR 扩增陈士华，等：一株高产油脂微生物菌种的筛选与鉴定67第34卷河南工业大学学报（自然科学版）由图2可以看出，成功扩增出郑1303-9菌株的5.8S rDNA/ITS片段，纯化PCR产物在上海生工生物工程有限公司测序，获得郑1303-9菌株的5.8S rDNA/ITS区段序列为5′-ctttcactcgaaagatcttttc ctttgtgctggctttgaccgtatgtaattttgggacttaaacatggtaaagccttatgg tttggccggtcccaaaaacaatatatcatccttatgaaaaacttactgaacaacta aacaatgattttaataatctgtttaaaacaactttcaacaacggatctcgtggttctc gcatcgatgaaaaacgcagcgaaatgcgatacgtagtgtgaattgcaaaattcag tgaatcatcaaatctttgaacgcacattgcactccttggtattccgaggagtatgcc tgtttcaatatcatgagcactctcacacctaacctttgggttatgctgtggaattgag atgcgcctatttttactactcggcactcctaaaatgtagctcttggctgtttcctacta cagcattttggcctaatagttttgacttttgtcaaatctttggctacttttgcttctggaa atcactcttgataatacagaaaactcatttcaaactttgatctgaaatcaggtaggg ctacccgctgaacttacgcatatcaataagcggagga-3′.经BLAST 分析证明郑1303-95.8S rDNA/ITS区段序列与深黄伞形霉（Umbelopsis isabellina）相应序列（Genbank 序列号EU816388.1）相似度可达96%，确定郑C1303-9菌株为深黄伞形霉.这与前人的研究成果相同[12-13].3结论筛选得到1株产油脂含量高达48.77%的真菌菌株郑1303-9，综合菌株的菌落形态和分子鉴定结果，证明该菌株为深黄伞形霉.深黄伞形霉郑1303-9菌株具有油脂产量高、生物量较大等特点，具有极高的研究价值和应用潜力.参考文献：［1］何东平，陈涛．微生物油脂学［M］．北京：化学工业出版社，2006：2-24．［2］陆步诗，李新社，范平．二步发酵丢糟生产微生物油脂的研究［J］.生物技术，2012（5）：79-82．［3］薛飞燕，张栩，谭天伟．微生物油脂的研究进展及展望［J］．生物加工过程，2005，3（1）：23-27．［4］颜治，陈晶．微生物油脂及其开发利用研究进展［J］．粮食与油脂，2003（7）：13-15．［5］孙志芳，高荫榆，郑渊月．功能性油脂的研究进展［J］．中国食品添加剂，2005（3）：4-7．［6］Papanikolaous，M Komaitis，G Aggelis．Single cell oil（SCO）production by Mortierella isabe ningrown on high-sugar content media［J］．BioresourTechnol，2004，95:287-291．［7］史海粟，王际辉，叶淑红，等．产功能性油脂微生物的筛选及鉴定［J］．中国油脂，2010（4）：24-27．［8］刘吉华，袁生，戴传超．一种新的丝状真菌油脂含量快速鉴定方法［J］．生物技术，1998，8（1）：43-44．［9］叶思特，郭丽琼，刘晓蓉，等．产油微生物的筛选［J］．华南农业大学学报，2012，33（3）：384-387，397．［10］曹健，汪晨辉，曾实．卷枝毛霉Mucor circine-lloides3.2208油脂几种提取方法的比较［J］．中国油脂，2004，29（4）：38-40．［11］孔几敏，赵祥颖，田延军，等．酸热法提取酵母油脂条件的研究［J］．中国酿造，2010（5）：143-146．［12］郑红波，刘光华，李昕然，等．产油脂微生物菌种的筛选、鉴定及其油脂组成分析［J］．四川大学学报：自然科学版，2010，47（6）：1397-140．［13］何容，赵环，杨云喜，等．深黄伞形霉（Umbelopsis isabellina）华2-1产油发酵培养条件优化［J］．应用与环境生物学报，2012，18（1）：80-85．SCREENING AND IDENTIFICATION OFA FUNGAL STRAIN WITH HIGH LIPID YIELDCHEN Shi-hua1，SUN Qiang2，SUN Li-yun1，WU Xing-quan1（1.School of Biotechnology，Henan University of Technology，Zhengzhou450001，China;2.854Branch of Heilongjiang Great Northern Wilderness Agriculture Co.，Ltd.，Hulin158403，China）Abstract:Seven strains of11fungi strains separated from6soil samples were confirmed as lipid-producing fungi by Sudan black B staining method；the lipid content of each strain was measured by acid-heating method；and one strain with high lipid yield（up to48.77%）was obtained.Molecular biological identification showed that the strain with high lipid yield was Umbelopsis isabellina.Key words:high lipid yield；fungus；screening；identification68。
提取脂质的几种方法
Folch法提取脂质
1.组织称重。
2.剪碎组织，按照1g组织加入20ml溶剂比例加入氯仿和甲醇（2:1）
混合溶液。
混匀15-20min后1500-2000r/min离心5min收集溶液。
3.溶液加入0.2体积的水（20ml溶液加4ml水）或0.9%NaCl溶液清
洗，涡旋几秒钟，以2000rpm离心10min得到两相液面。
吸取上清液，用于分析检测神经节苷脂类或小的极性分子。
如果有必要（为移除标记分子），用甲醇和水（1:1）清洗两相液交界面1至2次，注意不要冲洗到下层液体内。
4.收集的下层液即氯仿层含有脂质，用N2吹干氯仿即得脂质。
文献采用正相液相色谱法和大气压化学电离质谱分析测定神经酰胺时说按Folch法，以氯仿和甲醇（2:1,1:1,1:2）三个不同比例来提取脂质，每种混合溶液提取2小时。
Bligh和Dyer的方法（也是我们之前用的方法）
1.皮肤组织称重,胰酶37℃消化1h，用镊子分离表皮和真皮，弃去
真皮。
2.剪碎表皮组织，加入
3.75ml氯仿和甲醇（1:2）混合溶液。
匀浆
15min。
加氯仿1.25ml，混匀30s。
再加水1.25ml，混匀30s。
3.1500r/min离心15min，吸取下层氯仿层，收集在棕色小瓶中，N2
挥干溶剂，即得总脂质。
注：
本次试验Forch法取两只正常组的雌雄鼠制备两个样，B&D法也是取两只正常组的雌雄鼠制备两个样。
预先准备好需要的溶剂、移液管、棕色小瓶和离心管（离心管最好用玻璃的）。
氯仿-甲醇提微生物油脂
4. 测定方法: (1)提取:准确称取样品5克,放入200毫升具塞三角瓶中(高水分食品可加适量硅藻土使其分散)加入60毫升氯仿-甲醇混合液(对干燥食品可加入2~3毫升水).连接布氏漏斗,于60度水浴中,从微沸开始计时提取1小时.
氯仿-甲醇提取法
索氏抽提法只能提取游离态的脂肪,而对脂蛋白、磷脂等结合态的脂类则不能被完全提取出来,酸水解法又会使磷脂水解而损失.而在一定水分存在下,极性的甲醇与非极性的氯仿混合液(简称CM混合液)却能有效地提取结合态脂类.本法适合于含结合态脂类比较高,特别是磷脂含量高的样品,如鲜鱼\贝类\肉\禽\蛋等,对于含水量高的试样更为有效.
(2 )溶剂回收至残留物尚具有一定的流动性，不能完全干涸，否则脂类难以溶解于石油醚中，从而使测定结果偏低。所以，最好在残留有适量水分时停止蒸发。
（3）在进行萃取时，无水硫酸钠必须在石油醚之后加入以免影响石油醚对脂类的溶解，其加入量可根据残留物中的水分含量来确定，一般为5~15g.
5． 结果计算 w=(m2-m1)*2.5/m*100% 式中：w----脂类质量分数，%； m----试样质量,g m2----称量瓶与脂类质量，g m1----称量瓶质量，g 2.5---- 从25ml乙醇中取10ml进行干燥，故乘以系数2.5。
6． 说明
（1）提取结束后，用玻璃过滤器过滤再用溶剂一边搅拌试样残渣，一边用溶剂洗涤。
1. 测定原理 将试样分散于氯仿-甲醇混合液中,在水浴中轻微沸腾,氯仿-甲醇及样品中一定的水分形成提取脂类的溶剂,在使样品中组织中结合态脂类游离出来的同时与磷脂等极性脂类的亲和性增大,从而有效地提取出全部脂类,经过滤除出非脂成分,回收溶剂,对残留脂类用石油醚提取,蒸去石油醚后定量.
_发酵法生产DHA过程中油脂及DHA质量分数的快速定量测定
液 湿 菌 体 或 冻 干 菌 体 ， 加 入 4 moL/L 盐 酸 溶 液 4 mL，混匀后沸水浴 10 min，流水冷却至室温冰浴 15 min，加入正己烷 10 mL，充分震荡萃取 1 min，静置 分层后，取上层清液 1 mL 于用于甲酯化。 1.3.3 超声破壁和油脂抽提 将收集的 5 mL 发酵 液湿菌体或冻干菌体，加入蒸馏水 4 mL，混匀后超 声处理 20 min，加入 10 mL 正己烷转移至刻度试管 中，充分震荡萃取 1 min，静置分层后，取上层清液 1 mL 于用于甲酯化[10]。 1.4 油脂甲酯化方法 1.4.1 标准物质溶液配制 十九烷酸甲酯内标溶液： 称取十九烷酸甲酯标准品 0.04 g （精确至 0.000 1 g）， 于 10 mL 容量瓶中，加入适量正己烷使溶解，然后 稀释至刻度，摇匀备用。
收稿日期： 2015-05-29 基金项目： 山东省科技发展计划项目（2014GSF121038）。 作者简介： 赵祥颖（1968—），女，江苏沛县人，理学硕士，研究员，主要从事工业微生物研究。 E-mail：xyzhao68@ 引用本文： 赵祥颖，赵晨，张家祥，等. 发酵法生产 DHA 过程中油脂及 DHA 含量的快速定量测定[J]. 食品与生物技术学报，2017，36（04）：
405-409.
食品与生物技术学报 2017 年第 36 卷第 4 期 405
RESEARCH ARTICLE
ZHAO Xiangying，et al： Fast Quantitative Analysis of Lipids and DHA Contents During Fermentation Process for DHA Production
十九烷酸标准液： 称取十九烷酸标准品 0.04 g （精确至 0.000 1 g），于 10 mL 容量瓶中，加入适量 正己烷使溶解，然后稀释至刻度，摇匀备用。
提取脂质的几种方法
Folch法提取脂质
1.组织称重。
2.剪碎组织，按照1g组织加入20ml溶剂比例加入氯仿和甲醇（2:1）
混合溶液。
混匀15-20min后1500-2000r/min离心5min收集溶液。
3.溶液加入0.2体积的水（20ml溶液加4ml水）或0.9%NaCl溶液清
洗，涡旋几秒钟，以2000rpm离心10min得到两相液面。
吸取上清液，用于分析检测神经节苷脂类或小的极性分子。
如果有必要（为移除标记分子），用甲醇和水（1:1）清洗两相液交界面1至2次，注意不要冲洗到下层液体内。
4.收集的下层液即氯仿层含有脂质，用N2吹干氯仿即得脂质。
文献采用正相液相色谱法和大气压化学电离质谱分析测定神经酰胺时说按Folch法，以氯仿和甲醇（2:1,1:1,1:2）三个不同比例来提取脂质，每种混合溶液提取2小时。
Bligh和Dyer的方法（也是我们之前用的方法）
1.皮肤组织称重,胰酶37℃消化1h，用镊子分离表皮和真皮，弃去真
皮。
2.剪碎表皮组织，加入
3.75ml氯仿和甲醇（1:2）混合溶液。
匀浆15min。
加氯仿1
.25ml，混匀30s。
再加水1.25ml，混匀30s。
3.1500r/min离心15min，吸取下层氯仿层，收集在棕色小瓶中，N2
挥干溶剂，即得总脂质。
注：
本次试验Forch法取两只正常组的雌雄鼠制备两个样，B&D法也是取两只正常组的雌雄鼠制备两个样。
预先准备好需要的溶剂、移液管、棕色小瓶和离心管（离心管最好用玻璃的）。
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微生物细胞脂肪酸的组成分析
微生物细胞脂肪酸的组成分析柳志杰;章辉;周利;花强【摘要】The composition of microorganism cellular fatty acid was analyzed by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). The results showed that the metabolism of the strain could be divided into cell growth stage and fatty acid accumulation stage. T. Cutaneum lipid was mainly comprised of oleic acid(C18 :1) ,palmitic acid(C16:0) ,palmitoleic acid(C16:l). The fatty acid composition was as follows: oleic acid(C18:1)64. 80%, palmitic acid(C16: 0)19. 90%, palmitoleic acid(C16 : 1) 10.94% , stearic acid (C18: 0) 3. 72% and linoleic acid (C18:2)0. 56% ,respectively. The fatty acid methyl esters could be well analyzed by GC-MS, which could also be generalized to many other applications.%应用气相色谱—质谱联用技术(GC-MS)对微生物细胞脂肪酸的组成进行了分析.结果表明,菌体的代谢状态分为两个时期:菌体生长期和油脂积累期；菌体细胞主要积累油酸(C18:1)、软脂酸(C16:0)和棕桐油酸(C16:1);通过发酵,最终得到的微生物油脂脂肪酸组成为:油酸(C18:1)64.80％、软脂酸(C16:0)19.90％、棕桐油酸(C16:1)10.94％、硬脂酸(C18:0)3.72％和亚油酸(C18:2)0.56％.GC-MS可以很好地用于脂肪酸甲酯的分析,具有普遍的应用意义.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2011(028)010【总页数】3页(P85-87)【关键词】微生物细胞;油脂含量;脂肪酸组成;气相色谱—质谱联用技术【作者】柳志杰;章辉;周利;花强【作者单位】华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海200237;华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海200237;华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海200237;华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海200237【正文语种】中文【中图分类】O657.7微生物油脂又称单细胞油脂，是微生物在一定条件下产生并储存于菌体内的甘油脂，其脂肪酸组成以C16、C18系脂肪酸(如硬脂酸、油酸和亚油酸)为主。
提取脂质的几种方法
Folch法提取脂质
1.组织称重。
2.剪碎组织，按照1g组织加入20ml溶剂比例加入氯仿和甲醇（2:1）
混合溶液。
混匀15-20min后1500-2000r/min离心5min收集溶液。
3.溶液加入0.2体积的水（20ml溶液加4ml水）或0.9%NaCl溶液清
洗，涡旋几秒钟，以2000rpm离心10min得到两相液面。
吸取上清液，用于分析检测神经节苷脂类或小的极性分子。
如果有必要（为移除标记分子），用甲醇和水（1:1）清洗两相液交界面1至2次，注意不要冲洗到下层液体内。
4.收集的下层液即氯仿层含有脂质，用N2吹干氯仿即得脂质。
文献采用正相液相色谱法和大气压化学电离质谱分析测定神经酰胺时说按Folch法，以氯仿和甲醇（2:1,1:1,1:2）三个不同比例来提取脂质，每种混合溶液提取2小时。
Bligh和Dyer的方法（也是我们之前用的方法）
1.皮肤组织称重,胰酶37℃消化1h，用镊子分离表皮和真皮，弃去
真皮。
2.剪碎表皮组织，加入
3.75ml氯仿和甲醇（1:2）混合溶液。
匀浆
15min。
加氯仿1.25ml，混匀30s。
再加水1.25ml，混匀30s。
3.1500r/min离心15min，吸取下层氯仿层，收集在棕色小瓶中，N2
挥干溶剂，即得总脂质。
注：
本次试验Forch法取两只正常组的雌雄鼠制备两个样，B&D法也是取两只正常组的雌雄鼠制备两个样。
预先准备好需要的溶剂、移液管、棕色小瓶和离心管（离心管最好用玻璃的）。
食品分析与检测试题及答案
食品分析与检测试题及答案一、填空题(计 30 分，每小题 2 分)1、采样遵循的原则是( ) 。
2、肉制品新鲜度常用检验方法有( ) 、( ) 、( ) 、( ) 。
3、采样一般分三个步骤进行，分别得到的样品为( ) 。
4、分析柑橘类果实及其制品时，用( ) 酸表示， K=0.064， K 是换算为主要酸的系数，即指( ) 。
5、用工业酒精配制白酒的鉴别主要检测对象是( ) 。
6、已知测定蔗糖溶液的糖锤度为 35.8oBx，则该糖液的重量百分浓度为( ) 。
7、食品分析的方法有哪些( )？8、对于颜色深的食品，测定其酸度的方法有( ) 。
9、对于含磷脂较多的鱼、贝、肉、蛋等，测定其脂肪含量可采用的方法是( ) 。
10 、测定痕量水分的食品中的水分含量的方法是( ) 。
11、在测定磷酸盐含量比较高的食品的灰分时，为了使灰化完全，可采取的措施有( ) 。
12、食品中的总酸度是指( ) 。
13、食品感官分析按照应用目的可分为( )按照方法的性质可分为( ) 。
14、食品分析的一般程序为( ) 。
15、快速测定蛋白质的方法名称有( ) 。
二、是非题(计 10 分，每小题 1 分)1 、测定所有食品中的脂肪含量时都可以用索氏抽提法。
( )2、在测定冰淇淋膨胀率时，加入乙醚的体积为 2.0ml，滴加蒸馏水的体积为 22.0ml，则冰淇淋膨胀率为 92.3% 。
( )3 、测定脂溶性维生素一般在酸性条件下进行前处理。
( ) 4、测定食品中的钾、钠含量时，可用原子发射光谱法测定。
( ) 5 、有效酸度是指食品中所有酸性成分的总量。
( )6 、测定含磷脂的结合态脂类的样品中的脂肪含量用巴布科克法。
( )7 、用高效液相色谱法测定食品中的糖精时，根据色谱图以保留时间定性，以峰高、峰面积定量。
( )8 、用原子吸收分光光度法可以测定矿物元素的含量。
( )9、VB2 在一定条件下，产生荧光，在 525nm 波长下可以测定其荧光值，从而可以在 525nm 波长下测定食品中 VB2 的含量。
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氯仿-甲醇提取法
索氏抽提法只能提取游离态的脂肪,而对脂蛋白、磷脂等结合态的脂类则不能被完全提取出来,酸水解法又会使磷脂水解而损失.而在一定水分存在下,极性的甲醇与非极性的氯仿混合液(简称CM混合液)却能有效地提取结合态脂类.本法适合于含结合态脂类比较高,特别是磷脂含量高的样品,如鲜鱼\贝类\肉\禽\蛋等,对于含水量高的试样更为有效.
1. 测定原理将试样分散于氯仿-甲醇混合液中,在水浴中轻微沸腾,氯仿-甲醇及样品中一定的水分形成提取脂类的溶剂,在使样品中组织中结合态脂类游离出来的同时与磷脂等极性脂类的亲和性增大,从而有效地提取出全部脂类,经过滤除出非脂成分,回收溶剂,对残留脂类用石油醚提取,蒸去石油醚后定量.
2. 仪器(1) 具塞离心管. (2) 离心机:3000转/分. (3) 布氏漏斗:11G-3,过滤板直径40毫米,容量60~100毫升. (4) 具塞三角瓶.
3. 试剂(1) 氯仿:97%(体积分数)以上. (2) 甲醇:96%(体积分数)以上. (3) 氯仿-甲醇混合液:按2:1体积比混合. (4) 石油醚. (5) 无水硫酸钠:特级,在120~135摄氏度,干燥1~2小时.
4. 测定方法: (1)提取:准确称取样品5克,放入200毫升具塞三角瓶中(高水分食品可加适量硅藻土使其分散)加入60毫升氯仿-甲醇混合液(对干燥食品可加入2~3毫升水).连接布氏漏斗,于60度水浴中,从微沸开始计时提取1小时.
(2)回收溶剂:提取结束后,取下三角瓶,用布氏漏斗过滤,滤液用另一具塞三角瓶收集,用氯仿-甲醇混合液洗涤烧瓶\滤器及滤器中的试样残渣,洗涤液并入滤液中,置于65~70度水浴中回收溶剂,至三角瓶内物料显浓稠态,但不能使其干涸,冷却。
(3)萃取、定量：用移液管加入25ml乙醚，再加入15克无水硫酸钠，立刻加塞振荡10分钟，将醚层移入具塞离心管中，以3000r/min离心5 min进行分离。
用移液管迅速吸取离心管中澄清的醚层10ml，于以衡重的称量瓶内，蒸发去除石油醚后，于100~105摄氏度烘箱中烘至衡重（约30分钟）。
5．结果计算w=(m2-m1)*2.5/m*100% 式中：w----脂类质量分数，%；m----试样质量,g m2----称量瓶与脂类质量，g m1----称量瓶质量，g 2.5---- 从25ml乙醇中取10ml进行干燥，故乘以系数2.5。
6．说明
（1）提取结束后，用玻璃过滤器过滤再用溶剂洗涤烧瓶，每次5ml洗3次，然后用30ml 洗涤残渣及滤器，洗涤残渣时可用玻璃棒一边搅拌试样残渣，一边用溶剂洗涤。
(2 )溶剂回收至残留物尚具有一定的流动性，不能完全干涸，否则脂类难以溶解于石油醚中，从而使测定结果偏低。
所以，最好在残留有适量水分时停止蒸发。
（3）在进行萃取时，无水硫酸钠必须在石油醚之后加入以免影响石油醚对脂类的溶解，其加入量可根据残留物中的水分含量来确定，一般为5~15g.。