[知识]Roche_LightCycler_480_中文操作说明

[知识]Roche_LightCycler_480_中文操作说明?
LightCycler 480 中文操作说明
罗氏医学仪器公司 / 应用科学部门
February 2008
目录
一. 启动机器与软件 3 二. 软件设定 --- 开启新实验 5 三. 样品编辑 9 四. 结果分析 12 五. 报告 18 六. 数据转移至其它计算机(数据输出与输
19 入)
七. 使用者管理 19
一( 启动机器与软件
, 启动机器
1. 机器主开关位于机器右后方。

2. 机器正面两个警示灯代表机器状态。

待警示灯 (右) 由闪烁橘色灯转
变成稳定橘色灯，警示灯 (左) 由橘色转变成绿色 (约三分半钟)，表
示机器已经启动完成。

左警示灯右警示灯机器状态
橘 *闪烁* 橘 *闪烁* 正在初始化
机器启动完成绿橘 96/384孔盘还未放入
绿橘 *闪烁* 96/384 孔盘正在放入中
机器启动完成绿绿 96/384 孔盘已经放入
绿 *闪烁* 绿 *闪烁* 实验进行中
3. 按压机器正面上唯一的按钮，放入已经封膜完成之 96 或 384 孔盘。

放置完成后，左右两警示灯都呈现绿色。

, 启动软件
1. 开启计算机，并以正确的使用者名称与密码登入 Windows。

User name: OPERATOR
Password: LC480
2. 开启 LightCycler 480 软件，并输入正确的使用者与密码。

二(软件设定-- 开启新实验
, 设定新实验
1. 软件开启后，会进入主画面。

点选“New Experiment”。

2. 出现实验设定窗口。

任何时候需要回主画面的话，点选画面右边的按钮。

, 设定实验
, 若要套用设定好的实验步骤 (Template)，请跳至 6.。

1. 在实验设定画面上方，先选择适当的 Detection Format。

选项包含:
另外可再点选“Customize” 勾选所需的滤片组合。

2. 输入反应体积: 96 well plate 范围为 10-100 ul，而 384 well plate 范围
为 5-20 ul。

3. 设定实验步骤 (Program)
, 设定 program，包含有 Pre-incubation, Amplification (PCR),
Melting curve (optional) 与 Cooling。

利用『+』与『,』增加或
删除步骤。

, 设定循环数目 (Cycle) 与分析模式。

通常 Amplification (PCR)
program设定成『Quantification』，而 Melting Curve program 设定成『Melting Curve』。

4. 设定详细温度变化 (依照不同实验方法与设计而有所不同)
, 点选各个 program 即可设定详细温度变化步骤，请根据产品说明
书来设定，利用『+』与『,』增加或删除步骤。

需要设定的参
数包含 Target (?) 目标温度，Acquisition Mode (荧光侦测模
式)，Hold (hh:mm:ss) 停留时间。

Ramp Rate (?/s) 为升降温速
度，范围如下:
Ramp Rate (?/s) Heating up Cooling down
96-well Block 1.0 – 4.4 ?/s 1.0 – 2.2 ?/s
384-well Block 1.0 – 4.8 ?/s 1.0 – 2.5 ?/s
, 若设定温度低于 50?，请把 Ramp Rate 调整成 1.5?/s (96 well) 或2.0?/s (384 well)。

5. 将实验步骤储存成『Template』以便下次进行套用。

点选左下角
“Save As Template” 即可把此步骤储存起来。

6. 若要进行套用时，请直接点选窗口左下角
“Apply Template” ，选择欲套用之实验步骤
即可。

7. 设定完成后点选“Start Run” 开始进行实验。

8. 跳出档案储存窗口，请输入欲储存之文件名称。

, 实验进行中会进入另一个 Data窗口，窗口下方按键功能如下:
, End Program : 结束此 Program, 进入下一个 Program。

, + 10 Cycles : 实时增加循环数目。

, Abort Run: 马上结束此实验，请注意，若按此键，则此次实验的结
果将不储存。

三(样品编辑
, 将样品分群
1. 点选窗口左边的“Subset Editor”。

2. 点选“New” 新增新的群组，并将其命名。

3. 利用鼠标选取此群组之样品位置，点选窗口右下角“Apply” ，此时
被选取的样品位置会呈现实心的蓝色，如下图。

4. 以此方式依序将所有样品群组编辑完毕。

, 样品必须分群才能够独立分析，但是样品是否分群并不影响样品的 Cp 值。

, 编辑样品名称
1. 点选窗口左边的“Sample Editor”。

2. 输入每个位置之样品名称 (Name)与重复
(Repl. Of)。

3. 若要更快速输入，可直接在左边的图上点选欲编辑之样品:
, 若 A1, A2 与 A3 为三重复，在A2 与 A3 Repl. Of 字段上都填上A1 即为三重复。

, 在编辑过程中，可利用『Ctrl』+『C』复制文字，『Ctrl』+『V』
贴上文字。

4. 根据实验分析模式，编辑 Abs Quant (绝对定量)，Rel Quant (相对定量)，或 Genotyping 分页，设定 Sample Type。

绝对定量 (Abs Quant): 相对定量 (Rel Quant):
『Unknown』:未知浓度样品
『Standard』: 已知浓度标准品
『Target』: 目标基因
『Reference』: 参考基因
『Calibrator』: Control 样品
『Standard』: 已知浓度的样品
『Unknown』:未知浓度样品
, 其它分析模式之分页在此不赘述，请自行参考 LightCycler 480 Instrument Operator’s Manual。

5. 若设定成『Standard』之样品请输入浓度。

6. 若想要将此样品编辑储存成 Template，可点选窗口左下角“Save As Template” 即可，下次实验时可点选“Apply Template” 进行套用。

四(结果分析
, 点选左边的“Analysis”，选取分析模式，并选择所需分析之
群组，如下图:
2.
1.
3.
分析模式说明
ndAbs Quant / 2 Derivative Max 绝对定量 (自动法) Abs Quant / Fit Points 绝对定量 (手动法) Color Compensation 色差校正 (多色实验校正用) 基因扫描 (适用于High Resolution Gene Scanning Melting Curve, HRM 分析)
基因分型 (适用于 HybProbe 之基Genotyping 因分型实验)
Relative Quantification 相对定量
Tm Calling Tm 分析
, 绝对定量 (Absolute Quantification)
1. 点选下方的“Calculate” 即可得到样品之 Cp 与标准曲线。

各個樣品之 Cp 值與濃度
重複樣品平均後之Cp值與濃度, 並自動計算標準差 2. 数值之数据输出: 在数值分析表上按鼠标右键，点选“Export” 即可
输出成 .txt 档案格式。

可直接以 Microsoft Excel 软件开启。

3. 图形输出: 在图形上按鼠标右键，点选“Export” 即可输出成各种图
形档案格式。

4. 标准曲线储存: 点选窗口下方 Std Curve之“Save
as external” ，输入适合档名后即可储存在数据
库中。

, 相对定量 (Relative Quantification)
1. 在选择相对定量分析后，出现下面窗口:
, Reference Sample Location: 若 Reference (Housekeeping gene) 之样品在同一盘上请选择“In-Run”，否则请选择“External” 可输入另一次实验的数据一起分析。

, 建议将 Auto Pair 打勾让计算机自动将样品配对。

2. 进入『Target』与『Reference』分页，右下角显示“Eff = 2” 表示将
目标基因与参考基因的 PCR 效率以 2.0 来计算。

3. 若需要校正目标基因与参考基因之 PCR 效率，则需要输入标准曲
线。

在『Target』与『Reference』分页之右下角，输入 (import) 标
准曲线。

, Use in run:输入 (import) 同一盘上之标准曲线。

, Use external:输入(import) 之前已储存于数据库中之标准曲线。

4. 点选『Pairing』分页，检查计算机自动配对结果是否正确。

其中，
红色表示 Unknown样品，绿色表示 Calibrator 样品。

若欲外加配
对，则可直接以鼠标点选样品后按“Add” 即可增加配对。

5. 点选『Results』分页，点选“Calculate” 即可得到计算结果。

6. 数值和图形输出与绝对定量相同。

(请参考绝对定量) , 基因分型 (Genotyping)
1. 进入基因分型的窗口中。

2. 窗口右下角可设定分类方式
, Auto Group:自动分组
, In-run:标准品包含在本次实验中
, External:标准品在之前已储存之实验中
3. 点选“Calculate” 即可得到分型结果。

, Tm 分析 (Tm Calling)
1. 进入 Tm 分析窗口
2. 确认波峰数目
3. 选择检测模式
4. 点选“Calculate:即可得到每个样品之 Tm 值。

五(报告 (Report)
1. 将分析后结果储存后即可点选报告键。

数据储存报告
2. 勾选想要呈现的报告内容。

3. 点选“Generate” 即可产生报告。

4. 点选“PDF” 即可将此报告储存成 .pdf 档案格式。

六(数据转移至其它计算机 (数据输出与输入)
, 数据输出
1. 点选 (navigator)
2. 点选所要输出的实验档案，点选即可将档案输出成 .ixo 档案
3. 将此 ixo 档案以光盘或随身碟存到另一计算机
, 数据输入
1. 分析计算机上开启 LightCycler 480 软件，登入后点选
2. 点选，选取所要输入的 .ixo 档案并开启，即可开始
进行实验数据分析
3. 点选将此实验档案储存至数据库中七(使用者管理
1. 点选右方工具键。

2. 点选“User and Groups”。