SDS-PAGE试剂配方

SDS—PAGE电泳所用溶液：
30 ％聚丙烯酰胺溶液（100 mL)
丙烯酰胺（Arc）29 g
N,N’—亚甲双丙烯酰胺(Bis） 1 g
用双蒸水定容至100mL，过滤备用,4℃存放
丙稀酰胺29。

2g,N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g，加入去离子水定容至100mL，pH值不能超过7.0,过滤于棕色玻璃瓶中4℃贮存。

5×Tris-甘氨酸缓冲液(1 L)
Tris碱15。

1 g
甘氨酸（电泳级) 94 g
10 %SDS 50 mL
使用时稀释5倍使用
2×SDS凝胶加样缓冲液（10mL）
0.5 mol/L Tris—Cl (pH 6。

8) 2 mL
10%（W/V）SDS 4 mL
甘油 2 mL
β—巯基乙醇 1.0 mL
（DTT（二硫苏糖醇）0。

31g）
溴酚兰0。

02g
双蒸水0。

5 mL
室温存放备用
考马斯亮蓝染色液
考马斯亮蓝R—250 （G—250）1。

0 g
甲醇450 mL
冰醋酸100 mL
ddH2O 450 mL
0.2g考马斯亮蓝R250+84mL 95%乙醇+20mL冰醋酸，定容至200mL，过滤备用
考马斯亮蓝脱色液（甲醇脱色液效果好,但有毒性）
甲醇100 mL
冰醋酸100 mL
ddH2O 800 mL
医用酒精：冰醋酸：水=4.5：0。

5：5（V：V：V）
SDS—PAGE所需溶液:
A液-—30％丙稀酰胺（W/V）：丙稀酰胺29.2g，N—N-甲叉双丙稀酰胺0。

8g，加入去离子水定容至100mL，pH值不能超过7。

0，过滤于棕色玻璃瓶中4℃贮存。

B液——1.5mol/L Tris·HCl，pH8。

8:18.17g（9。

09g)Tirs碱，溶于80mL（40mL）去离子水中，加入约3mL(1。

5mL)以上的浓盐酸调节pH值至8。

8,定容至100mL（50mL）。

C液-—1.5mol/L Tris·HCl，pH6.8:12。

1g（6.05g）Tirs碱，溶于80mL（40mL）去离子水中，加入约7mL （3。

5mL)以上的浓盐酸调节pH值至6.8，定容至100mL(50mL）。

D液—-10％SDS：10g （2g)SDS溶于去离子水中，定容至100mL(20mL)，加热至68℃助溶。

E液——10％过硫酸铵：5g(0.5g)过硫酸铵,溶于50mL(5mL)去离子水中；现配现用或分装至0.5mL离心管中冷冻备用。

F液——TEMED（N—N-N`—N`－四甲基乙二胺）原液,室温保存。

表1.配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液
10 ％胶
水 1.9 4.0 5.9 7.9 9。

9 11.9 15。

9 19.8 30 ％丙烯酰胺混合液1。

7 3。

3 5。

0 6.7 8。

3 10。

0 13。

3 16。

7 1.5 mol/L Tris（pH8。

1。

3 2.5 3。

8 5。

0 6。

3 7。

5 10。

0 12.5 10 ％SDS 0.05 0。

1 0.15 0。

2 0。

25 0。

3 0.4 0.5 10 ％过硫酸铵0。

05 0.1 0.15 0。

2 0.25 0。

3 0。

4 0.5 TEMED 0。

002 0.004 0.006 0.008 0。

01 0。

012 0。

016 0.02
表2。

配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩胶所用溶液
成分配制不同体积和浓度凝胶所需各成分的体积/ml。