实时荧光定量PCR检测HBV-DNA与化学发光磁微粒法检测乙肝五项的关系

实时荧光定量PCR 检测HBV-DNA 与化学发光
磁微粒法检测乙肝五项的关系
马晶晶
孟
雨
（遵义市第一人民医院，遵义医科大学第三附属医院，贵州遵义563000）
为主占56.4%，与有关报道基本一致[1，2]。

排名前三位依次为大
肠埃希菌、粪肠球菌、肺炎克雷伯菌，其中大肠埃希菌检出率远高于其他细菌占24.1%，与卜黎红等人的研究报道基本一致[3]。

分离的革兰阳性菌中以粪肠球菌和凝固酶阴性的表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌最为多见，由于肠球菌对氨基糖苷类和头孢菌素等药物天然耐药，没有出现对万古霉素、利奈唑胺耐药的菌株。

轻症患者可以选择环丙沙星、左氧氟沙星来治疗，重症时选用万古霉素、利奈唑胺。

表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌等凝固酶阴性葡萄球菌虽然毒力和致病力较弱，但由于泌尿系统侵袭性操作、患者抵抗力等原因，可导致感染性疾病[4]。

凝固酶阴性葡萄球菌对抗生素的耐药性高，经验用药可选择万古霉素、利奈唑胺。

分离的革兰阳性菌中大肠埃希菌对哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南、阿米卡星和呋喃妥因耐药率在10%以下。

肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、环丙沙星耐药率达55%以上。

该院大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌的ESBLs 发生率分别为58.1%，53.8%，45%，产生原因有：①三代头孢类抗生素药物在临床的广泛应用；②对于临床上产生的多重耐药菌株未做好隔离消毒措施。

药敏结果显示肠杆菌科对厄他培南、亚胺培南耐药率低，碳青霉烯类抗菌药物依然是治疗大肠埃希菌等肠杆菌细菌引起泌尿系统感染最有效的
药物[5]。

真菌中的白色念珠菌是该院真菌尿路感染最常见的病原体，占6%，与相关研究报告大致相同[6]。

药敏结果显示对白色念珠菌耐药率最高的是伊曲康唑，对两性霉素和5-氟胞嘧啶、伏立康唑、氟康唑有很高的敏感性。

综上所述，泌尿外科医师应了解尿路感染病原菌的分布和耐药情况变化，合理使用抗生素，减少耐药菌株的产生，提高诊疗效果。

参考文献
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医院感染学杂志2012，22（9）：1960-1961.
（收稿日期：2020-12-08）
【摘要】目的探讨实时荧光定量PCR 技术检测
HBV-DNA 与化学发光微粒子免疫分析技术检测乙肝五项的
关系。

方法
对2020年4月—7月在遵义市第一人民医院检
测HBV-DNA 结果阳性且同时检测乙肝五项的455例患者进行回顾性研究，观察乙肝五项不同阳性指标组合所占比例，分析HBeAg +组和HBeAb +组患者的HBV-DNA 病毒载量分布情况，并进一步比较HBeAg +组与HBeAg -组HBV-DNA 病毒载量。

结果
HBsAg +HBeAg +HBcAb +和HBsAg +HBeAb +HBcAb +
患者所占比例分别为36.92%，55.38%，显著高于其他阳性组患者（P <0.05）。

HBeAg +组和HBeAb +组HBV-DNA 在不同载量组比较差异有统计学意义（P <0.05），HBeAg +组与HBeAg -组HBV-DNA 病毒载量差异有统计学意义（P <0.05）。

结论
实时
荧光定量PCR 检测HBV-DNA 含量联合化学发光微粒子免疫分析技术检测乙肝五项，对乙肝患者的诊断治疗以及判断传染性有重要的临床意义。

【关键词】乙肝五项实时荧光定量PCR
化学发光微
粒子免疫分析技术
乙肝病毒载量中图分类号：R4
文献标识码：A
文章编号：1672-1721（2021）07-0970-03
DOI ：10.19435/j.1672-1721.2021.07.039
乙型病毒性肝炎是临床上常见传染性疾病，人类常因含有乙型肝炎病毒（HBV ）的体液或血液经破损皮肤和黏膜进入机体而获得感染。

乙肝五项因成本低廉且检测方便，为诊断乙肝的常用实验室指标，但其缺点是不能反映HBV 在人体内的表达及复制情况。

通过实时荧光定量PCR 方法检测HBV-DNA 载量是反映病毒复制和传染性的直接标志，对判断病毒复制程度、传染性大小、抗病毒药物疗效检测等具有重要意义。

乙肝病毒感染后患者不同乙肝五项标志物与HBV-DNA 表达之间存在一定差异性，本研究回顾性分析了455例实时荧光定量PCR 检测HBV-DNA 阳性的患者及其乙肝五项的表达情况，以对其进一步分析，汇报如下。

1
资料与方法
1.1一般资料
回顾性分析2020年4月—7月在遵义市
第一人民医院门诊及住院治疗的患者中检测HBV-DNA 结果阳性，且同时检测乙肝五项的患者共计455例，其中男250例，女205例；年龄1~85岁，平均年龄（44.45±16.30）岁。

1.2
方法
乙肝五项检测：采用化学发光微粒子免疫分
析技术，仪器为ARCHITECT i2000SR 型化学发光免疫分析仪
作者简介：马晶晶，女，硕士，主管技师。

（美国雅培公司），配套原装检测试剂，严格按照实验室SOP进行检测，采用4参数对数拟合曲线数据缩减法产生校准曲线自动计算检测结果。

HBV-DNA含量检测：采用实时荧光定量PCR法，仪器为AFD9600型核酸扩增实时荧光检测系统（杭州安杰思医学科技有限公司），核酸提取及扩增试剂采购自中山大学达安基因有限公司，严格按照实验室SOP进行检测，每批次检测均设置阴性及低中高值外部质控对试验过程进行监测。

PCR仪实时记录每个循环的荧光值，自动绘制出实时扩增曲线，检测结束后调用标准曲线对未知样本的HBV-DNA含量进行计算。

病毒载量>1.00×103IU/mL时，判定HBV-DNA阳性。

1.3观察指标
1.3.1HBV-DNA结果阳性时乙肝五项不同阳性组合所占比例，乙肝五项包括：乙肝表面抗原（HBsAg），乙肝表面抗体（HBsAb），e抗原（HBeAg），e抗体（HBeAb），核心抗体（HBcAb）。

1.3.2HBeAg+组和HBeAb+组HBV-DNA低、中、高载量分布情况，低载量（1.00×103IU/mL～1.00×105IU/mL）、中载量（1.00×105IU/mL～1.00×107IU/mL）、高载量（>1.00×107IU/mL）。

1.4统计学方法采用SPSS23.0统计学软件对数据进行分析，计量资料以x±s表示，采用t检验，等级资料采用秩和检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果
2.1乙肝五项阳性表达组合的分布情况55例HBV-DNA阳性的患者中，乙肝五项不同阳性组别分布，HBsAg+HBeAg+HBcAb+和HBsAg+HBeAb+HBcAb+患者比例分别为36.92%，55.38%，显著高于其余组的患者。

见表1。

2.2HBeAg+组和HBeAb+组HBV-DNA载量分布情况HBeAg+组低、中、高HBV-DNA载量患者分别为31例、37例和108例，HBeAb+组为201例、53例和8例，2组患者病毒载量分布差异有统计学意义（P<0.05），HBeAg+组HBV-DNA高载量患者较多，而HBeAb+组HBV-DNA低载量患者较多。

见表2。

2.3HBeAg+组与HBeAg-组HBV-DNA载量比较
HBeAg+组和HBeAg-组患者HBV-DNA载量的对数值分别为（15.39±3.70）和Log copies/mL（9.85±2.60）Log copies/mL，差异有统计学意义（P<0.05）。

见表3。

3讨论
乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒感染导致的一种传染性肝脏疾病，主要通过血液、体液、母婴传播及性传播[1]。

HBV-DNA阳性意味着患者具有传染性，乙肝表面抗体阴性的人群均为易感人群。

我国由于人口基数大，且乙肝病毒感染发病率高，罹患乙肝病毒性肝炎的患者众多，已然成为世界性的乙肝大国[2]。

如果慢性乙肝患者得不到恰当的治疗，或者治疗不及时、不彻底，极可能导致肝纤维化、肝硬化，甚至发展为肝癌[3]。

通过实验室技术手段实现对乙肝感染者的早发现、早诊断，对干预乙肝患者疾病的发展及改善预后非常关键。

化学发光免疫法检测乙肝五项，可以了解机体对乙肝病毒的免疫反应状态，而实时荧光定量PCR检测HBV-DNA，可以直接反映乙肝病毒在体内的复制情况，判断乙肝病毒的传染程度。

综合这两种实验室检验技术对患者遭受病毒感染后的病情精准判读和治疗过程中疗效的准确监测，对比该类患者疾病的积极控制和治疗方案的调整至关重要。

本文选取HBV-DNA检测阳性的患者作为研究对象，观察其相应乙肝五项标志物的表达情况。

结果发现在这些患者中HBsAg+HBeAg+HBcAb+（大三阳）和HBsAg+HBeAb+HBcAb+（小三阳）患者比例分别为36.92%，55.38%，显著高于其他阳性组合患者，提示这两类患者体内的乙肝病毒复制程度远高于其他患者，同时也印证了大小三阳患者为乙型肝炎疾病传播的主要传染源的共识[4]。

但值得注意的是，在HBV-DNA阳性患者中，HBsAb表达阳性患者占据一定的比例，这反映出即使存在保护性抗体，部分乙肝患者仍存在乙肝病毒传播的风险[5]。

在各组阳性组合中，存在乙肝五项全阳的情况，这可能与乙肝DNA的复杂感染有关，HBV基因组易发生突变[6]，自然界中存在不同的病毒亚型，有些患者机体可能先后感染两种不同亚型的乙肝病毒，两种不同亚型的乙肝病毒处于不同的感染阶段，导致乙肝五项结果表现为五项全阳。

HBeAg是一种可溶性抗原，由乙肝病毒基因前C区或C 区的mRNA表达，其大量产生可能导致免疫耐受，使患者处于高感染状态[7]。

而HBeAg消失HBeAb产生的过程意味着机体由免疫耐受转为免疫激活[8]。

本文分析结果显示，HBeAg+组低、高HBV-DNA载量患者有31例和108例，而HBeAb+组低、高HBV-DNA载量患者有201例和8例，2组患者的HBV-DNA 载量在不同层级的分布上有着明显差异（P<0.05）。

同时，通过表3HBeAg+组与HBeAg-组HBV-DNA表达量比较（x±s，Log copies/mL）
组别例数HBV-DNA对数值
HBeAg+组26615.39±3.70
HBeAg—组1899.85±2.60
t18.77
P<0.001
表1乙肝五项阳性组合分布情况
乙肝五项例数百分比（%）HBsAg+HBeAg+HBcAb+16836.92
HBsAg+HBeAb+HBcAb+25255.38 HBsAg+HBcAb+40.88
HBsAg+HBeAg+10.22 HBsAg+HBsAb+HBeAg+HBcAb+6 1.32
HBsAg+HBsAb+HBeAb+HBcAb+11 2.42
HBsAg+HBeAg+HBeAb+HBcAb+12 2.64 HBsAg+HBsAb+HBeAg+HBeAb+HBcAb+10.22
合计455100.00
表2HBeAg+组和HBeAb+组HBV-DNA病毒载量比较组别低载量中载量高载量HBeAg+组3137108 HBeAb+组201538 Z-13.859
P<0.001
尿常规检查和尿沉渣检查尿液白细胞红细胞及尿蛋白的结果分析
卢灿娣陈丽娟魏权
（龙岩人民医院，福建龙岩364000）
【摘要】目的探析尿常规检查和尿沉渣检查尿液白细胞（WBC）、红细胞（RBC）及尿蛋白（PRO）的结果，明确其作用。

方法以龙岩人民医院2020年1月—6月1080例行尿液检验患者为研究对象，均给予尿常规、尿沉渣检测法进行尿液检验，观察上述两种检测方式检查WBC、RBC、PRO结果，分析两者联合检查的准确率。

结果尿常规检查WBC、RBC、PRO 的阳性率（23.52%、23.06%、15.00%）与尿沉渣检查阳性率（25.74%、20.09%、13.43%）相比，差异均无统计学意义（P>0.05）。

尿常规、尿沉渣联合检查WBC、RBC、PRO总准确率为94.44%，95.37%，96.30%。

结论在尿液WBC、RBC、PRO检测中，尿常规、尿沉渣两种检查方法均可发挥良好作用，必要时，可将两种检查方法联用，以提高临床诊断准确性。

【关键词】尿沉渣检查尿常规检查尿蛋白红细胞白细胞
中图分类号：R4文献标识码：A
文章编号：1672-1721（2021）07-0972-02
DOI：10.19435/j.1672-1721.2021.07.040
尿液检验是临床上常用、重要的检查手段之一，在诸多疾病诊断方面具有重要作用，尤其是泌尿系统疾病[1]。

目前，临床上主要采用尿常规与尿沉渣检查方法开展尿液检验，尿常规内的干化学分析主要通过多联试纸条对尿液样本实施快速分析、筛查，是一种快捷、简便的尿液检测方法[2]；尿沉渣分析是通过对离心后的沉淀（即尿沉渣）进行检测，以判断尿液中的非定形与定形成分、寄生虫与微生物[3]。

相关研究报道[4]，尿常规检查、尿沉渣检查各具有自身独特优势，但两者也存在一些不足之处，如：尿常规检查易受到试纸条质量影响、漏诊风险高等，尿沉渣检查操作繁琐等。

为了解以上两种检查方法在尿液中白细胞（WBC）、红细胞（RBC）及尿蛋白（PRO）检测分析中的应用价值，本研究探讨了1080例患者尿液检验的结果，汇报如下。

1资料与方法
1.1临床资料选择2020年1月—6月龙岩人民医院的1080例行尿液检验患者，其中男582例，女498例；年龄18~79岁，平均年龄（4
2.75±
3.62）岁。

排除标准：无法配合检查操作者；研究前服用影响尿液检验结果的药物者。

1.2方法尿常规检查：收集受检者空腹状态下中段尿液10mL，放于专用试管内送检。

利用H-800全自动尿液分析仪和配套尿液分析试纸条实施尿液干化学分析，严格按照说明书进行。

在1300转/min速度下离心约5min，去除上层清液，留取沉渣0.2mL，选择1滴置于尿沉渣定量计数板上，利用显微镜实施镜检。

以上操作均由同一人开展。

尿沉渣检查：干化学分析应用仪器、方法均与尿常规检查相同。

应用Sysmex UF—1000i全自动尿沉渣分析仪，检测尿沉渣内WBC、RBC、PRO等成分。

若干化学与沉渣分析检查结果不理想，可开展镜检复查。

镜检操作参照尿常规中的操作流程。

1.3观察指标观察尿常规、尿沉渣检查尿液内WBC、RBC、PRO结果，分析以上两种检测方式联合检查WBC、RBC、PRO的准确率。

1.4统计学方法利用统计学软件SPSS24.0对数据进行
比较分析HBeAg+组与HBeAg-组患者HBV-DNA载量发现，HBeAg的表达与否与患者体内HBV-DNA表达量之间存在明显的相关性（P<0.05）。

表明HBeAg是HBV复制活跃的重要指标，是HBV活动期的指标之一，其血清阳性提示HBV复制且具有较强的传染性。

而当HBeAb出现时，HBV复制有减弱趋势，其传染性同样亦相对HBeAg阳性时弱[9]。

综上所述，实时荧光定量PCR检测HBV-DNA表达联合化学发光磁微粒法检测乙肝五项结果具有密切的相关性，联合检测对于评估乙肝患者的病情情况、判别其传染性以及指导诊断治疗均具有重要意义；同时，联合检测的方法对患者疾病转归和预后判断亦具有重要的价值。

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（收稿日期：2020-12-14）
作者简介：卢灿娣，女，本科，主管技师。