百度文库-TO1048A 总谷胱甘肽(T-GSH)检测试剂盒(DTNB速率微板法)

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碧云天谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒说明书

碧云天谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒说明书

碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线:400-1683301或800-8283301 订货e-mail :******************技术咨询:*****************网址:碧云天网站 微信公众号谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)产品编号 产品名称包装 S0056谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)100次产品简介:谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)(Cellular Glutathione Peroxidase Assay Kit with NADPH)是一种简单易行的通过紫外比色来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase, GPx)活性的试剂盒。

绝大部分细胞内的谷胱甘肽过氧化物酶都是含硒的,且硒为该酶的活性中心组成部分。

细胞内也有很少量的不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶存在。

本试剂盒检测的是最常见的含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。

本试剂盒的使用灵活方便,样品用量和检测时间的范围宽,样品用量可以根据样品中GPx 的活力在0.1-50微升之间调整,检测时间可以根据样品中GPx 的活力在5-30分钟内进行调整。

本试剂盒和总谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(S0058)配合使用,可以定量检测出样品中不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。

谷胱甘肽过氧化物酶可以清除活细胞内的过氧化物,在保护细胞免受自由基损伤过程中起着关键作用。

细胞内的脂类容易和自由基发生反应,产生脂类过氧化物。

谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)还原脂类过氧化物,从而消除自由基的毒害作用。

谷胱甘肽过氧化物酶几乎在所有组织中都有分布。

在一些病理状况下谷胱甘肽过氧化物酶的活力会发生明显上调或下调。

谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)催化过氧化氢以及许多有机过氧化物,产生水或有机醇。

但以过氧化氢为底物进行检测会受同样可以分解过氧化氢的过氧化氢酶(Catalase)的影响,因为过氧化氢酶的酶活性会干扰谷胱甘肽过氧化物酶的测定。

人谷胱甘肽(GSH)ELISA试剂盒说明书

人谷胱甘肽(GSH)ELISA试剂盒说明书

人谷胱甘肽(GSH)酶联免疫分析试剂盒使用说明书厦门慧嘉生物科技有限公司本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中谷胱甘肽(GSH)的含量。

实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人谷胱甘肽(GSH)水平。

用纯化的人谷胱甘肽(GSH)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中加入谷胱甘肽(GSH),再与HRP标记的谷胱甘肽(GSH)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的谷胱甘肽(GSH)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人谷胱甘肽(GSH)的含量。

样本处理及要求:1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。

离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

仔细收集上清。

检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。

通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。

离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5. 组织标本:切割标本后,称取重量。

加入一定量的PBS,PH7.4。

用液氮迅速冷冻保存备用。

标本融化后仍然保持2-8℃的温度。

加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。

谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB法)说明书

谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB法)说明书

谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)产品简介:谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法) (Glutathione Reductase Assay Kit with DTNB)是一种简单易行的通过比色法来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase, GR)活性的试剂盒。

谷胱甘肽还原酶在许多组织中都有分布,可以维持细胞内充足的还原型谷胱甘肽(GSH)水平。

GSH 可以清除自由基和一些有机过氧化物,或作为谷胱甘肽氧化酶(Glutathione peroxidase)的底物来清除一些过氧化物。

谷胱甘肽还原酶可以还原氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成还原型谷胱甘肽(GSH),而GSH 可以和生色底物DTNB 反应产生黄色的TNB 和GSSG ,并可以通过测定A 412来检测TNB 的生成量。

适当设置应体系,前后两个反应合并起来后,GSSG/GSH 过量而GR 相对不足时,该反应体系中谷胱甘肽还原酶就成为整个反应体系的限速因素,此时黄色的TNB 生成量和谷胱甘肽还原酶的活性呈线性正相关。

从而通过测定A 412就可以计算出谷胱甘肽还原酶的活性水平。

本试剂盒的具体反应原理如下:两个反应相合并:本试剂盒检测肝脏样品的检测效果如图1所示。

图中可见,对于肝脏样品可以检测到比较强的谷胱甘肽还原酶的活性并且有很好的剂量效应。

图1. 谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)用于肝脏裂解样品的实测效果图。

本试剂盒可以检测组织匀浆液上清、细胞裂解液上清等生物样品中的谷胱甘肽还原酶的活性。

一个试剂盒共可以进行100次检测。

碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线: 400-1683301或800-8283301 订货e-mail :****************** 技术咨询: ***************** 网址: 碧云天网站 微信公众号保存条件:-20ºC保存,一年有效。

谷胱甘肽含量测定

谷胱甘肽含量测定

植物生理学模块实验指导玲主编科学还原型谷胱甘肽含量的测定方法(分光光度计法)【实验目的】了解植物组中中抗坏血酸-谷胱甘肽循环代过程,学习还原型谷胱甘肽含量的测定原理和方法。

【实验原理】谷胱甘肽是有谷氨酸(Glu)、半胱氨酸(Gly)组成的天然三肽,是一种含巯基(—SH)的化合物,广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。

谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-双-(2-硝基苯甲酸)(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物(GSSG)。

2-硝基-5-巯基苯甲酸为一黄色产物,在波长412nm处具有最大光吸收。

因此,利用分光光度计法可测定样品中谷胱甘肽的含量。

【器材与试剂】1.实验仪器与用具研钵、高速冷冻离心机、微量移液枪、离心管、试管、水浴锅、容量瓶(100ml、200ml、1000ml)、分光光度计2.实验试剂50g/L三氯乙酸(TCA)溶液(含5mmol/L Na2-EDTA):称取5g三氯乙酸,用蒸馏水溶解稀释至100ml。

再称取186mg Na2-EDTA·2H2O,加入到100ml 50g/L三氯乙酸溶液中溶解。

0.1mol/L磷酸钠溶液缓冲液(pH7.7):配制方法见附录。

0.1mol/L(pH6.8)磷酸钠缓冲液:配制方法见附录。

4mmol/L二硫代硝基苯甲酸(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)溶液:称取15.8mg DTNB,用0.1mol/L、pH6.8磷酸缓冲液溶解,定容至10ml,混匀,4℃保存。

现用现配。

100μmol/L还原型谷胱甘肽标准液:称取3.1mg 还原型谷胱甘肽,加入少量无水乙醇溶解,加蒸馏水定容至100ml。

3.实验材料同抗坏血酸。

【实验步骤】1.标准曲线制作取6支试管,编号,按照表1加入各种试剂,混匀,25℃保温反应10min。

谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性检测试剂盒说明书 微量法

谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性检测试剂盒说明书 微量法

谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px/GPX)活性检测试剂盒说明书微量法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号:BC1195规格:100T/48S 产品简介:谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px 或GPX)是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶。

GPX 能够催化还原型谷胱甘肽(GSH)生成氧化型谷胱甘肽(GSSG),使有毒的过氧化氢还原成无毒的羟基化合物。

GPX 催化H 2O 2氧化GSH,产生GSSG,GSH 能与DTNB 生成在412nm 处有特征吸收峰的化合物,412nm 下吸光度的下降即可反应GPX 的活性。

试验中所需的仪器和试剂:可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP 管。

产品内容:提取液:液体80mL×1瓶,4℃保存;试剂一:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入5.5mL 蒸馏水溶解;试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入3.3mL 蒸馏水溶解备用;试剂三:液体10μL×1支,临用前按1μL 试剂三:499μL 蒸馏水的比例稀释试剂三,4℃保存。

现用现配;试剂四:液体30mL×1瓶,4℃保存;瓶底若有结晶可50℃水浴溶解,此溶液为饱和溶液,若底部最终还有结晶,吸取上清使用即可;试剂五:液体5mL×1瓶,4℃保存;试剂六:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入5mL 蒸馏水溶解备用;标准品:粉剂×1支,10mg 还原型谷胱甘肽,4℃保存。

临用前加入1.62mL 蒸馏水溶解为20μmol/mL 的标准溶液备用。

操作步骤:一、粗酶液的提取:1、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取0.05g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆。

10000rpm,4℃离心10min,取上清置冰上待测(如上清不清澈,再离心3min)。

谷胱甘肽(GSH)含量测定

谷胱甘肽(GSH)含量测定

谷胱甘肽(GSH)含量测定一、实验目的1.了解植物组中中抗坏血酸-谷胱甘肽循环代谢过程;2.学习还原型谷胱甘肽含量的测定原理和方法。

二、实验原理谷胱甘肽是有谷氨酸(Glu)、半胱氨酸(Cys)、甘氨酸(Gly)组成的天然三肽,是一种含巯基(—SH)的化合物,广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。

它作为体内重要的抗氧化剂和自由基清除剂,如与自由基、重金属等结合,从而把机体内有害的毒物转化为无害的物质,排泄出体外。

谷胱甘肽能和2-硝基苯甲酸(DTNB)反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物(GSSG),2-硝基-5-巯基苯甲酸为一黄色产物,在波长412nm 处具有最大光吸收。

因此,利用分光光度计法可测定样品中谷胱甘肽的含量。

三、实验材料小麦幼嫩叶片四、实验方法及步骤1.制作标准曲线取7只干净的试管编号,按如下表格加入各试剂,反应20分钟后在412nm 下用分光光度计测其吸光度,制作标准曲线;2.样品测定a、称取小麦叶片0.2g,加入少量5%偏磷酸缓冲液研磨提取,并用5%偏磷酸缓冲液定容至6ml,8000rpm离心10min,取上清液;b、取上述上清液2ml显色,操作同标准曲线。

3.结果计算:GSH含量(ug/Gfw)= (Cx*Vt)/(Fw*Vs)注:Cx---2ml样品中GSH含量(ug),即每管中GSH的含量Vt---样品提取液总体积(ml);Vs----显色时所取样的体积(ml);FW---样品鲜重(g)。

五、实验结果1.标准曲线1.样品测定结果六、注意事项1.使用移液管吸取试剂时,视线要垂直于移液管且与液面凹面水平,不能斜视,以免量取试剂不准确。

2.在提取样品时,最好沉淀出去蛋白质,以防止蛋白质中所含巯基及相关酶对测定结果的影响。

3.在研磨叶片时,为方便研磨,刚开始时加入少量的提取液。

总谷胱甘肽(T-GSH)检测试剂盒(DTNB速率微板法)

总谷胱甘肽(T-GSH)检测试剂盒(DTNB速率微板法)

总谷胱甘肽(T-GSH)检测试剂盒(DTNB 速率微板法)简介:谷胱甘肽(glutathione ,GSH)存在于几乎身体的每一个细胞,参与细胞许多功能活动,是一种氧自由基消除剂。

还原型谷胱甘肽(GSH)是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽,由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成,能可逆的转变为氧化型谷胱甘肽(GSSG),其存在形式会随着细胞内代谢的情况而发生相互转变。

总谷胱甘肽(T-GSH)检测试剂盒(DTNB 速率微板法)(T otal Glutathione Assay Kit)是一种简单易行的检测总谷胱甘肽(T-GSH)的试剂盒,其检测原理是谷胱甘肽还原酶把氧化型谷胱甘肽(GSSG)还原成还原型谷胱甘肽(GSH),由GSSG 还原成的GSH 和样品本身含有的GSH 都与发色底物DTNB 反应,生成黄色的TNB 和GSSG 。

该试剂盒可用于检测血浆、血清、组织、细胞等样品中总谷胱甘肽(T-GSH)含量。

该试剂盒仅用于科研,不用于临床诊断或其他用途。

组成:操作步骤(仅供参考):1、 配制GSH 标准储存液:取10mg 还原型谷胱甘肽(GSH)标准加入3.25ml ddH 2O ,溶解并混匀,即为还原型GSH 标准储存液(10mM)。

一部分立即使用,其余适当分装后-20℃保存。

2、 配制50×GSH 还原酶:按GSH 还原酶原液:GSH assay buffer =1:49的比例混合,即为50×GSH 还原酶。

-20℃保存,3个月有效。

3、 配制T-GSH 检测工作液:按下表配制T-GSH 检测工作液。

1个样品 10个样品 50个样品 GSH assay buffer 0.2ml 2ml 10ml DTNB 储存液2.5μl25μl125μl编号 名称TO1048 100T Storage试剂(A): 还原型谷胱甘肽(GSH)标准 10mg 4℃ 避光 试剂(B): GSH assay buffer 100ml RT 试剂(D): 蛋白沉淀剂 0.5g RT 避光 试剂(E): NADPH 10mg -20℃ 避光 试剂(F): DMSO 1.5ml RT 避光 试剂(G): ddH 2O 30mlRT 避光 使用说明书1份50×GSH还原酶 5.4μl 54μl 270μl4、配制蛋白沉淀工作液:在本试剂盒提供的0.5g蛋白沉淀剂中加入10ml ddH2O,配制成10ml 5%的水溶液,即为蛋白沉淀工作液,4℃保存。

谷胱甘肽标准测定方法

谷胱甘肽标准测定方法

谷胱甘肽标准测定方法
谷胱甘肽的测定方法主要有以下几种:
1. 埃尔曼(Ellman)法:这是最常用的谷胱甘肽测定方法,其原理是谷胱甘肽在DTNB(二硝基苯磺酸)的作用下,生成具有黄色的DTNB-SH,通过测定其吸光度来定量谷胱甘肽的含量。

2. 弗斯特(Foster)法:这种方法是通过测定谷胱甘肽在酸性环境下的还原能力,即测定其对2-硝基-5-苯甲酸的还原能力,通过测定其产物2-氨基-5-苯甲酸的吸光度来定量谷胱甘肽的含量。

3. 比色法:这种方法是通过测定谷胱甘肽在酸性环境下的还原能力,即测定其对2,4-二硝基苯酚的还原能力,通过测定其产物2,4-二氨基苯酚的吸光度来定量谷胱甘肽的含量。

4. 高效液相色谱法(HPLC):这种方法是通过分离、定量样品中的谷胱甘肽,通过比较其峰面积与已知浓度的谷胱甘肽峰面积来定量谷胱甘肽的含量。

5. 荧光光谱法:这种方法是通过测量谷胱甘肽的荧光光谱,通过比较其荧光强度与已知浓度的谷胱甘肽荧光强度来定量谷胱甘肽的含量。

以上方法都有其优点和缺点,选择哪种方法主要取决
于实验的目的和条件。

还原型谷胱甘肽 (reduced glutathione,GSH)含量测定试剂盒使用说明

还原型谷胱甘肽 (reduced glutathione,GSH)含量测定试剂盒使用说明

还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)含量测定试剂盒使用说明产品简介:GSH/GSSG是细胞内最重要的氧化还原对之一。

因此,测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。

DTNB与GSH反应生成复合物,在412nm处有特征吸收峰;其吸光度变化与GSH含量成正比。

试验中所需的仪器和试剂:可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1ml比色皿、双蒸水产品内容:试剂一×1支,充分溶解于100ml双蒸水,4℃保存试剂二×1支,充分溶解于50ml试剂一中,4℃保存试剂三×1支,充分溶解于10ml双蒸水中,4℃避光保存操作步骤:一、样品前处理:取组织约0.1g,加1ml试剂二,冰上充分研磨,8000rpm4℃离心10min,取上清。

(如上清不清澈,再离心3min)GSH测定操作:测定前将试剂一于25℃水浴20min按每100mg组织加入1000µL生理盐水的比例进行匀浆。

8000g4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。

对于非哺乳动物组织:按每100mg组织加入1000µL提取液的比例进行匀浆。

8000g 4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。

(2)血清(浆)样品:直接检测。

二、测定操作表:测定管空白管样本0.1ml/试剂一0.7ml0.7ml蒸馏水/0.1ml试剂三0.2ml0.2ml 迅速混匀,于412nm测吸光值,并记录第60s的OD值GSH含量计算:GSH标准曲线公式:y=0.0015x+0.0818(x为GSH浓度,y为吸光值)液体中GSH(µmol/L)=[(OD测定管-OD空白管)-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数组织中GSH计算:①GSH(µmol/mg prot)=[(OD测定管-OD空白管)-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数÷样品蛋白浓度(Cpr)②GSH(µmol/g mass)=[(OD测定管-OD空白管)-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数÷样品质量(g)注意事项:(1)样品处理等过程均需要在冰上进行,且须在当日测定酶活力,以免影响其活力测定时,除试剂一外,其它试剂均需放置在冰上;(2)样本测定前先取1-2个样做预实验,如吸光值太高(超过标准曲线范围,即y >0.2时),应先用试剂二稀释到适当倍数,使得吸光值在标准曲线范围内。

总谷胱甘肽检测试剂盒

总谷胱甘肽检测试剂盒

50 μl
50 μl
50 μl
b. 加入50微升0.16mg/ml NADPH溶液,混匀。
c. 立即用酶标仪测定A412,每5分钟测定一次或实时测定,共测定25分钟,测得5个数据。(说明:为了简化实验步骤,可 以在加入NADPH溶液混匀后25分钟,仅测定一次A412)。如果仪器可以设置温度,把温度设置在25℃,否则就在室温
2. Xiao-Long W, Chuan-Ping Y, Kai X, Ou-Jv Q. Selenoprotein W depletion in vitro might indicate that its main function is not as an antioxidative enzyme. Biochemistry (Mosc). 2010;75(2):201-7.
NADPH。每检测一个样品需50微升0.16mg/ml NADPH。
2. 标准品的准备:
把10mM GSH储备液用蛋白去除试剂S溶液稀释成50μM GSH溶液。然后依次稀释成25、15、10、5、2μM GSH溶液。取
50、25、15、10、5、2μM GSH溶液六个点做标准曲线。注意:由于GSH在蛋白去除试剂S溶液中不太稳定,用蛋白去除
b. 细胞样品的准备。请尽量使用新鲜的细胞进行测定,而不要使用冻存的细胞进行测定。PBS洗涤细胞一次,离心收集
细胞,吸尽上清。加入细胞沉淀体积3倍量的蛋白去除试剂S溶液,即如果细胞沉淀为10微升,则加入30微升蛋白去除
试剂S溶液,充分Vortex。(细胞沉淀的体积可以根据细胞沉淀的重量进行估算。收集细胞前后分别对离心管进行称
等处理,而直接加入适量蛋白去除试剂S溶液进行匀浆)。4℃放置10分钟后,10,000g 4℃离心10分钟,取上清用于总

谷胱甘肽含量测定

谷胱甘肽含量测定

谷胱甘肽含量测定谷胱甘肽含量测定植物生理学模块实验指导李玲主编科学出版社还原型谷胱甘肽含量的测定方法(分光光度计法)【实验目的】了解植物组中中抗坏血酸-谷胱甘肽循环代谢过程,学习还原型谷胱甘肽含量的测定原理和方法。

【实验原理】谷胱甘肽是有谷氨酸(Glu)、半胱氨酸(Gly)组成的天然三肽,是一种含巯基(—SH)的化合物,广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。

谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-双-(2-硝基苯甲酸)(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物(GSSG)。

2-硝基-5-巯基苯甲酸为一黄色产物,在波长412nm处具有最大光吸收。

因此,利用分光光度计法可测定样品中谷胱甘肽的含量。

【器材与试剂】1.实验仪器与用具研钵、高速冷冻离心机、微量移液枪、离心管、试管、水浴锅、容量瓶(100ml、200ml、1000ml)、分光光度计2.实验试剂50g/L三氯乙酸(TCA)溶液(含5mmol/L Na2-EDTA):称取5g三氯乙酸,用蒸馏水溶解稀释至100ml。

再称取186mg Na2-EDTA·2H2O,加入到100ml 50g/L三氯乙酸溶液中溶解。

0.1mol/L磷酸钠溶液缓冲液(pH7.7):配制方法见附录。

0.1mol/L(pH6.8)磷酸钠缓冲液:配制方法见附录。

4mmol/L二硫代硝基苯甲酸(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)溶液:称取15.8mg DTNB,用0.1mol/L、pH6.8磷酸缓冲液溶解,定容至10ml,混匀,4℃保存。

现用现配。

100μmol/L还原型谷胱甘肽标准液:称取3.1mg 还原型谷胱甘肽,加入少量无水乙醇溶解,加蒸馏水定容至100ml。

3.实验材料同抗坏血酸。

【实验步骤】1.标准曲线制作取6支试管,编号,按照表1加入各种试剂,混匀,25℃保温反应10min。

还原型谷胱甘肽(GSH)含量检测试剂盒说明书 微量法

还原型谷胱甘肽(GSH)含量检测试剂盒说明书 微量法

还原型谷胱甘肽(GSH)含量检测试剂盒说明书微量法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号:BC1175规格:100T/96S产品内容:试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体20mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体8mL×1瓶,4℃避光保存。

标准品:粉剂10mg×1支,4℃避光保存。

产品说明:谷胱甘肽是由谷氨酸(Glu)、半胱氨酸(Cys)和甘氨酸(Gly)组成的天然三肽,是一种含巯基(-SH)的化合物,广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。

谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-双-(2-硝基苯甲酸)(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物(GSSG)。

2-硝基-5-巯基苯甲酸为黄色产物,在波长412nm处具有最大光吸收。

自备仪器和用品:分析天平、微量匀浆器(规格2mL)、低温离心机、水浴锅、移液器、可见分光光度计或酶标仪、超微量比色皿或96孔板。

操作步骤:一、样品的处理1、组织处理:新鲜组织首先用PBS冲洗2次,然后称取动物组织或者植物组织0.1g。

加入用试剂一润洗过的匀浆器中(匀浆器提前放冰上预冷);然后加入1mL试剂一(组织/试剂一比例保持不变即可),迅速冰上充分研磨(使用液氮研磨效果更好);8000rpm4℃离心10min;取上清液放置于4℃待测,若暂时不能完成测试可放于-80℃保存(可保存10天)。

2、血液处理血浆:将收集的抗凝血于4℃,600g离心10分钟,吸取上层血浆到另一支试管中,加入等体积的试剂一,4℃,8000g离心10分钟,将上清移入新的试管中放置于4℃待测,若暂时不能完成测试可放于-80℃保存(可保存10天)。

血细胞:将收集的抗凝血于4℃,600g离心10分钟,弃去上层血浆用3倍体积的PBS清洗3次(用PBS 重悬血细胞,600g离心10分钟),加入等体积试剂一,混匀后4℃放置10分钟,8000g离心10分钟,吸取上清放于4℃待测,若暂时不能完成测试可放于-80℃保存(可保存10天)。

谷胱甘肽的测定实验报告

谷胱甘肽的测定实验报告

一、实验目的1. 了解谷胱甘肽在生物体内的作用和重要性。

2. 掌握谷胱甘肽含量的测定原理和方法。

3. 通过实验,提高实验室操作技能和数据分析能力。

二、实验原理谷胱甘肽(GSH)是一种由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成的天然三肽,具有强大的抗氧化作用。

在生物体内,谷胱甘肽参与多种生物化学反应,包括抗氧化、解毒、细胞信号传导等。

本实验采用比色法测定植物组织中谷胱甘肽的含量。

比色法测定谷胱甘肽含量的原理如下:1. 在一定条件下,还原型谷胱甘肽(GSH)与5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)反应,生成黄色的2-硝基5-巯基苯甲酸(TNB)。

2. 通过测定TNB在特定波长下的吸光度,可以计算出样品中谷胱甘肽的含量。

三、实验材料与仪器1. 材料:植物组织(如芦笋、花椰菜等)、DTNB溶液、EDTA-Na2溶液、Na2HPO4溶液、NaH2PO4溶液、蒸馏水等。

2. 仪器:可见光分光光度计、低温高速离心机、匀浆器、恒温水浴锅、微量加样器等。

四、实验步骤1. 样品制备:取一定量的植物组织,加入适量的蒸馏水,用匀浆器充分匀浆,制成匀浆液。

在低温高速离心机中以3000 r/min离心10分钟,取上清液作为待测样品。

2. 标准曲线绘制:分别配制不同浓度的GSH标准溶液,按照实验方法测定其吸光度。

以GSH浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。

3. 样品测定:取一定量的待测样品,按照实验方法测定其吸光度。

根据标准曲线,计算出样品中谷胱甘肽的含量。

4. 数据处理:将实验数据输入计算机,进行统计分析,得出实验结果。

五、实验结果与分析1. 标准曲线:根据实验数据绘制标准曲线,得到线性方程:y = 0.046x + 0.0058,相关系数R2 = 0.9986。

2. 样品测定:取一定量的芦笋匀浆液,按照实验方法测定其吸光度,计算得到谷胱甘肽含量为0.023 mg/g。

3. 数据分析:通过实验结果可以看出,植物组织中谷胱甘肽含量较高,说明植物具有较好的抗氧化能力。

氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量检测试剂盒说明书 微量法

氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量检测试剂盒说明书 微量法

氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量检测试剂盒说明书微量法注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号:BC1185规格:100T/96S产品内容:试剂一:液体100ml×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体130μl×1支,4℃保存。

试剂三:液体20ml×1瓶,4℃保存。

试剂四:液体2.5ml×1瓶,4℃保存。

试剂五:粉剂1瓶,4℃保存,用前2.5ml蒸馏水溶解。

溶解后-20℃分装保存。

试剂六:液体12.5μl×1支,用前0.25ml蒸馏水稀释,4℃保存。

标准品:粉剂10mg×1支,4℃避光保存。

产品说明:氧化型谷胱甘肽(GSSG)是谷胱甘肽(GSH)的氧化形式,又称为二硫代谷胱甘肽,是两分子的谷胱甘肽氧化而成。

GSSG会被谷胱甘肽还原酶还原成GSH,因此机体中大多数是以还原型形式存在。

测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。

本试剂盒利用谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-双-(2-硝基苯甲酸)(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸,2-硝基-5-巯基苯甲酸在波长412nm处具有最大光吸收的特点,通过2-乙烯吡啶抑制样品中原有的还原型谷胱甘肽,然后利用谷胱甘肽还原酶将GSSG还原为GSH,借此测定氧化型谷胱甘肽的含量。

自备仪器和用品:分析天平、微量匀浆器(规格2ml)、低温离心机、水浴锅、移液器、可见分光光度计或酶标仪、微量玻璃比色皿或96孔板。

操作步骤:一、样品的处理(1)组织处理新鲜组织首先用PBS冲洗2次,然后称取动物组织或者植物组织0.1g。

加入用试剂一润洗过的匀浆器中(匀浆器提前放冰上预冷);然后加入1ml试剂一(组织/试剂一比例保持不变即可),迅速冰上充分研磨(使用液氮研磨效果更好);8000g4℃离心10min;取上清液放置于4℃待测,若暂时不能完成测试可放于-80℃保存(可保存10天)。

谷胱甘肽还原酶测定试剂盒(谷胱甘肽底物法)产品技术要求jiuqiang

谷胱甘肽还原酶测定试剂盒(谷胱甘肽底物法)产品技术要求jiuqiang

谷胱甘肽还原酶测定试剂盒(谷胱甘肽底物法)适用范围:本试剂盒用于体外定量测定人血清谷胱甘肽还原酶的含量。

1.1 包装规格包装规格见表1。

表1 包装规格1.2 主要组成成分主要组成成分见表2。

表2 主要组成成分2.1 外观试剂1a为无色澄清液体,目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物;试剂1b为无色或浅黄色粉末状物质,复溶后为无色或浅黄色液体,目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物;试剂2为无色或浅黄色粉末状物质,复溶后为无色或浅黄色液体,目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物;质控品为无色或浅黄色粉末状物质,复溶后为无色或浅黄色液体,目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物。

试剂盒标签标识清晰,外包装完整无损。

2.2 净含量液体试剂的净含量应不少于标称量。

2.3 试剂空白吸光度2.3.1 试剂空白吸光度A340nm下测定空白吸光度应≤1.5000。

2.3.2 试剂空白吸光度变化率A340nm下测定试剂空白吸光度变化率(ΔA/min)应≤ 0.0100。

2.4 准确度与已上市产品进行比对试验:在[12,184] U/L区间内,相关系数r≥0.975,在[12,50] U/L区间内测定的绝对偏差应不超过±7.5 U/L,在(50,184]U/L区间内测定的相对偏差应不超过±15%。

2.5 分析灵敏度样本浓度为70U/L时,其吸光度变化率应不超过0.5000。

2.6 线性范围在[12,184] U/L区间内,线性相关系数r≥0.990,在[12,50]U/L区间内线性绝对偏差应不超过±7.5U/L,在(50,184] U/L区间内线性相对偏差应不超过±15%。

2.7 测量精密度2.7.1 重复性使用高、低不同浓度的血清样本或质控品重复测定10次,其测定值的变异系数(CV%)应不大于10%。

2.7.2 批间差随机抽取三批试剂盒的批间相对极差(R)应不大于10%。

2.8 瓶间差试剂1b、试剂2、质控品的瓶间差应≤10%。

谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)试剂盒说明书

谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)试剂盒说明书

谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)试剂盒说明书谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)试剂盒说明书微量法100T/96S注意:正式测定之前选择23个预期差别大的样本做猜测定。

测定意义:GSHPx是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽(GSH)氧化的重要酶之一、GSHPx不但能够特异地催化还原型谷胱甘肽与ROS反应,生成氧化型谷胱甘肽GSSG,从而保护生物膜免受ROS的损害,维持细胞的正常功能;而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的损害和加添机体抗辐射等本领。

测定原理:GSHPx催化有机过氧化物氧化GSH,产生GSSG;谷胱甘肽还原酶(GR)催化NADPH还原GSSG,再生GSH,同时NADPH氧化生成NADP+;NADPH在340nm有特征汲取峰,而NADP+没有;通过测定340nm光汲取减少速率来计算GSHPx活性。

自备仪器和用品:低温离心机、水浴锅、可调整移液器、酶标仪、96孔板和蒸馏水。

试剂构成和配置:试剂一:液体120mL×1瓶,室温保管。

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保管。

试剂三:液体10μL×1支,20℃保管。

试剂四:液体200μL×1瓶,4℃保管。

粗酶液提取:1.组织:依照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。

8000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。

2.细菌、真菌:依照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波碎裂细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

3.血清等液体:直接测定。

GSHPx测定操作:1.酶标仪预热30min,调整波长到340nm。

2.混合试剂在25℃或者37℃(哺乳动物)水浴中预热30min。

dtnb检测gsh原理

dtnb检测gsh原理

dtnb检测gsh原理我们来了解一下GSH的基本知识。

GSH是一种三肽,由谷氨酸(Glu)、半胱氨酸(Cys)和甘氨酸(Gly)组成。

它在细胞中广泛存在,并且在许多生物学过程中起着重要的作用。

GSH是一种强还原剂,可以与氧化剂反应,从而保护细胞免受氧化损伤。

DTNB是一种化学指示剂,可以与GSH发生反应。

当GSH与DTNB反应时,它们之间会发生一系列的化学变化。

具体来说,DTNB的硫醇基团(-SH)会与GSH中的硫醇基团反应,形成一种新的化合物,即二硫巴比妥酸(TNB)。

在这个反应过程中,TNB的产生会伴随着颜色的变化。

原本无色的DTNB会转变为黄色的TNB。

这种颜色变化是可见的,可以用肉眼观察到。

这就是DTNB检测GSH的基本原理。

DTNB检测GSH的方法相对简单,可以在实验室中进行。

首先,需要提取样品中的GSH。

这个步骤通常需要使用一些特殊的试剂和技术。

然后,将提取的样品与DTNB混合,使它们发生反应。

反应完成后,观察溶液的颜色变化,并使用光谱仪等设备测量吸光度。

根据吸光度的变化,可以推断出样品中GSH的含量。

DTNB检测GSH的原理简单明了,而且具有一定的灵敏度和准确性。

因此,它被广泛应用于生物医学研究和临床诊断中。

例如,科学家们可以利用DTNB检测GSH的含量来评估细胞的氧化应激水平。

在某些疾病的诊断中,GSH的含量也可以作为一个重要的指标。

需要注意的是,尽管DTNB检测GSH的方法简单易行,但它也存在一些局限性。

首先,DTNB只能检测还原型的GSH,而不能检测氧化型的GSH。

此外,DTNB的反应也可能受到其他物质的干扰,需要进行适当的控制和校正。

因此,在进行实际应用时,需要结合其他方法和技术,综合评估GSH的含量和活性。

以DTNB检测GSH原理为基础的方法是一种简单而有效的检测手段。

通过观察DTNB与GSH反应过程中的颜色变化,可以推断出样品中GSH的含量。

这种方法广泛应用于生物医学研究和临床诊断中,为我们更好地了解细胞氧化应激和疾病发生机制提供了重要的工具。

谷胱甘肽(GSH)含量测定

谷胱甘肽(GSH)含量测定

谷胱甘肽(GSH)含量测定一、实验目的1.了解植物组中中抗坏血酸-谷胱甘肽循环代谢过程;2.学习还原型谷胱甘肽含量的测定原理和方法。

二、实验原理谷胱甘肽是有谷氨酸(Glu)、半胱氨酸(Cys)、甘氨酸(Gly)组成的天然三肽,是一种含巯基(—SH)的化合物,广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。

它作为体内重要的抗氧化剂和自由基清除剂,如与自由基、重金属等结合,从而把机体内有害的毒物转化为无害的物质,排泄出体外。

谷胱甘肽能和2-硝基苯甲酸(DTNB)反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物(GSSG),2-硝基-5-巯基苯甲酸为一黄色产物,在波长412nm 处具有最大光吸收。

因此,利用分光光度计法可测定样品中谷胱甘肽的含量。

三、实验材料小麦幼嫩叶片四、实验方法及步骤1.制作标准曲线取7只干净的试管编号,按如下表格加入各试剂,反应20分钟后在412nm 下用分光光度计测其吸光度,制作标准曲线;2.样品测定a、称取小麦叶片0.2g,加入少量5%偏磷酸缓冲液研磨提取,并用5%偏磷酸缓冲液定容至6ml,8000rpm离心10min,取上清液;b、取上述上清液2ml显色,操作同标准曲线。

3.结果计算:GSH含量(ug/Gfw)= (Cx*Vt)/(Fw*Vs)注:Cx---2ml样品中GSH含量(ug),即每管中GSH的含量Vt---样品提取液总体积(ml);Vs----显色时所取样的体积(ml);FW---样品鲜重(g)。

五、实验结果1.标准曲线1.样品测定结果六、注意事项1.使用移液管吸取试剂时,视线要垂直于移液管且与液面凹面水平,不能斜视,以免量取试剂不准确。

2.在提取样品时,最好沉淀出去蛋白质,以防止蛋白质中所含巯基及相关酶对测定结果的影响。

3.在研磨叶片时,为方便研磨,刚开始时加入少量的提取液。

谷胱甘肽S GST

谷胱甘肽S GST

谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)试剂盒
微量法100T/96S 测定意义:
GST是一种具有多种生理功能的蛋白质家族,主要存在于细胞质内。

GST是体内解毒酶系统的重要组成部分,主要催化各种化学物质及其代谢产物与GSH的巯基共价结合,使亲电化合物变为亲水物质,易于从胆汁或尿液中排泄,达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外的目的。

因此,GST在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。

此外,因为GST具有GSH-Px活性,亦称为non-Se GSH-Px,具有修复氧化破坏的大分子如DNA、蛋白质等的功能。

注意,GST催化的反应减少GSH含量,但是不增加GSSG含量。

测定原理:
GST催化GSH与CDNB结合,其结合产物的光吸收峰波长为340nm;通过测定340nm波长处吸光度上升速率,即可计算出GST活性。

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总谷胱甘肽(T-GSH)检测试剂盒(DTNB速率微板法)
简介:
谷胱甘肽(glutathione,GSH)存在于几乎身体的每一个细胞,参与细胞许多功能活动,是一种氧自由基消除剂。

谷胱甘肽能帮助保持正常的免疫系统的功能,保护组织细胞免受氧化损伤,并具有抗氧化作用和整合解毒作用,半胱氨酸上的巯基为其活性基团,故常简写为G-SH或GSH,易与某些药物(如扑热息痛)、毒素(如自由基、碘乙酸、铅、汞、砷等)等结合,具有整合解毒作用。

谷胱甘肽具有广谱解毒作用,在延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤等功能性食品广泛应用。

谷胱甘肽是研究活性氧和自由基的重要指标,亦是机体氧化物牵累的重要指标。

还原型谷胱甘肽(GSH)是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽,由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成,能可逆的转变为氧化型谷胱甘肽(GSSG),其存在形式会随着细胞内代谢的情况而发生相互转变。

总谷胱甘肽(T-GSH)检测试剂盒(DTNB速率微板法)(Total Glutathione Assay Kit)是一种简单易行的检测总谷胱甘肽(T-GSH)的试剂盒,其检测原理是谷胱甘肽还原酶把氧化型谷胱甘肽(GSSG)还原成还原型谷胱甘肽(GSH),由GSSG还原成的GSH和样品本身含有的GSH都与发色底物DTNB反应,生成黄色的TNB和GSSG。

前后两个反应合并起来,总谷胱甘肽(GSSG+GSH)就相当于一个呈色的限速反应,总谷胱甘肽(T-GSH)含量决定了黄色含量,通过分光光度法(酶标仪)检测吸光度,与相应处理的GSH标准比较,获得样品的总谷胱甘肽(T-GSH)即(GSSG+GSH)含量。

该试剂盒可用于检测血浆、血清、组织、细胞等样品中总谷胱甘肽(T-GSH)含量。

该试剂盒仅用于科研,不用于临床诊断或其他用途。

组成:
自备材料:编号
名称TO1048
100T
Storage
试剂(A): 还原型谷胱甘肽(GSH)标准10mg 4℃避光试剂(B): GSH assay buffer 100ml RT
试剂(C): DTNB 10mg RT 避光试剂(D): 蛋白沉淀剂0.5g RT 避光试剂(E): NADPH 10mg -20℃避光试剂(F): DMSO 1.5ml RT 避光使用说明书1份
1、离心管或小试管
2、蒸馏水
3、离心机
4、水浴锅
5、96孔板
6、酶标仪或生化分析仪
操作步骤(仅供参考):
1、配制GSH标准储存液:取还原型谷胱甘肽(GSH)标准加入ddH2O,溶解并混匀,即为
还原型GSH标准储存液(10mM)。

一部分立即使用,其余适当分装后-20℃保存。

2、配制DTNB储存液:在本试剂盒提供的DTNB中加入DMSO,溶解并混匀,即为DTNB
储存液(10mg/ml)。

一部分立即使用,其余适当分装后-20℃保存。

3、配制50×GSH还原酶:按GSH还原酶原液:GSH assay buffer =1:49的比例混合,
即为50×GSH还原酶。

-20℃保存,3个月有效。

4、配制T-GSH检测工作液:按下表配制T-GSH检测工作液。

1个样品10个样品50个样品
GSH assay buffer 0.2ml 2ml 10ml
DTNB储存液 2.5μl 25μl 125μl
50×GSH还原酶 5.4μl 54μl 270μl
5、配制蛋白沉淀工作液:在本试剂盒提供的蛋白沉淀剂中加入ddH2O,配制成l5%的水
溶液,即为蛋白沉淀工作液,4℃保存。

6、配制标准品:把还原型GSH标准储存液(10mM)用蛋白沉淀工作液稀释成50μM标准
溶液。

然后依次稀释成25、15、10、5、2μM GSH溶液。

取50、25、15、10、5、2μM GSH标准溶液6个点做标准曲线。

注意:由于GSH标准在蛋白沉淀工作液中不太稳定,用蛋白沉淀工作液配制的GSH溶液必须新鲜配制后使用,不可冻存后再使用。

7、配制NADPH工作液:在本试剂盒提供的10mg NADPH中加入1ml ddH2O,溶解并
混匀,即为NADPH储存液(10mg/ml)。

一部分立即使用,其余适当分装后-20℃保存。

取按0.1ml NADPH储存液(10mg/ml)加入8.23ml的比例加入GSH assay buffer,充分混匀,即为NADPH工作液(0.12mg/ml)。

8、准备样品:
①红细胞或血浆样品的制备:请尽量使用新鲜的血液进行测定。

离心,沉淀为红细胞,上
清为血浆。

对于红细胞,用PBS洗涤两次。

取约红细胞沉淀或血浆,加入蛋白沉淀工作液,充分Vortex振匀。

4℃或冰浴放置,离心,取上清用于总谷胱甘肽(T-GSH)测定,样品需暂时4℃保存备用,不立即测定的样品可以-70℃保存,但不宜超过10天。

对于处理好的红细胞样品最后需用蛋白沉淀工作液稀释10倍后再进行后续的测定,而对于
血浆样品,应直接取进行测定。

②组织样品的制备:取组织用液氮速冻,迅速研磨,加入蛋白沉淀工作液,充分Vortex
振匀。

再加入350μl蛋白沉淀工作液,用匀浆器充分匀浆。

4℃孵育,离心,取上清用于总谷胱甘肽(T-GSH)测定。

样品需暂时4℃保存备用,不立即测定的样品可以-70℃保存,但不宜超过10天。

对于处理好的组织样品通常需用蛋白沉淀工作液进行适当稀释后再进行测定,稀释倍数通常为5~20倍。

③细胞样品的制备:PBS洗涤细胞1次,离心收集细胞,吸尽上清。

加入蛋白沉淀工作
液,充分Vortex振匀。

(收集细胞前后分别对离心管进行称重,从而就可以计算出细胞沉淀的重量,细胞沉淀的体积可以粗略地看做10ml。

)对样品进行快速的冻融后,4℃或冰上孵育5min。

离心,取上清用于总谷胱甘肽(T-GSH)测定。

样品需暂时4℃保存备用,不立即测定的样品可以-70℃保存,但不宜超过10天。

对于处理好的组织样品通常需用蛋白沉淀工作液进行适当稀释后再进行测定,稀释倍数通常为5~20倍。

9、T-GSH加样操作:取96孔板,按照下表设置空白孔、标准孔、测定孔,溶液应按照顺
序依次加入,并注意避免产生气泡。

如果样品中的T-GSH浓度过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

加入物(μl) 空白孔标准孔测定孔蛋白沉淀工作液10 ——
系列标准品(2~50μM) —10 —
待测样品——10
T-GSH检测工作液200 200 200
室温或25℃孵育。

NADPH工作液(0.12mg/ml) 50 50 50
9、GSH检测:立即用酶标仪或自动生化分析仪于410nm处每隔2min检测一次,空白孔调零,共检测6min(亦可加入NADPH工作液反应6min后检测,只检测1次),以检测其反应速率ΔA/min。

如果酶标仪不能检测410nm,可测定405~420nm处吸光度。

计算:
①动力学测定法:根据不同时间点测定得到的吸光度值计算出ΔA410/min,以GSH标准
的浓度(50、25、15、10、5、2μM)为横坐标,以ΔA410/min为纵坐标,做出标准曲线。

根据待测的ΔA410/min,对照标准曲线就可以计算出测定时样品中总谷胱甘肽的含量。

动力学法测定结果比终点测定法的结果精确。

根据样品的稀释倍数、以及最初样品的使用量,通过测定蛋白浓度,从而计算出样品的蛋白量,最后计算出每mg蛋白中总谷胱甘肽的含量。

②终点测定法:即反应6min仅测定1次吸光度。

以GSH标准的浓度(50、25、15、10、
5、2μM)为横坐标,以ΔA410/min为纵坐标,做出标准曲线。

样品对照标准曲线即可
计算出总谷胱甘肽的含量。

终点测定法比动力学法快捷。

根据样品的稀释倍数、以及最初样品的使用量,通过测定蛋白浓度,从而计算出样品的蛋白量,最后计算出每mg蛋白中总谷胱甘肽的含量。

参考区间:
成年全血GSH 1.02±0.17mmol/L
注意事项:
1、GSH比较稳定,血液样品以ACD抗凝后冰箱4℃保存,3~4周内稳定。

2、请尽量使用新鲜的细胞进行测定,而不要使用冻存的细胞进行测定,避免使酶活性下
降。

3、全血GSH与吸烟和锻炼成正比。

4、测定各孔时,各孔温度均需达到室温或25℃,否则影响结果。

5、轻度溶血样本对GSH测定无影响。

6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期:6个月有效。

相关:
编号名称
DC0032 Masson三色染色液
DM0007 瑞氏-姬姆萨复合染色液
NR0001 DEPC处理水(0.1%)
PW0053 Western抗体洗脱液(碱性)
TC0711 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD微板法)。

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