消毒灭菌技术及效果监测

灭菌物品消毒效果监测注意事项
• 1 、无菌检验应在洁净度为 100 级单 向流空气区域内进行，最好把灭菌包带 回在百级实验室打开。应严格遵守无菌 操作，避免微生物污染。 • 2、应采有效期内的样品（高压灭菌： 一般是两周；还氧乙烷：两年）
6、灭菌器灭菌效果监测
• 1、监测方法： • 工艺监测 • 化学监测（化学指示卡、指示胶带） • 生物监测 • 2、常用灭菌器种类 • 压力蒸汽灭菌器 • 环氧乙烷灭菌器 • 3、生物指示物 • 嗜热脂肪杆菌芽胞（ATCC7953）,压力蒸汽灭菌器 • 枯草杆菌黑色变种芽胞（ATCC9372）环氧乙烷灭菌器
注意事项
1、灭菌器：要注明灭菌器型号、产地等 2、在进行环氧乙烷灭菌器灭菌效果监测时，灭菌 器一定要满载。 3、出现阳性结果要进行工艺监测，分析原因 4、监测所用菌片须经卫生部认可，并在有效期内 使用。
9、紫外线消毒效果监测
• • 紫外线灯管辐照度值的测定，一般采用紫外线 辐照计测定法。开启紫外线灯5分钟后，将测定波 长为253.7nm的紫外线辐照计探头置于被检紫外线 灯下垂直距离1m的中央处，待仪表稳定后，所示数 据即为该紫外线灯的辐照度值。 • 结果判定：普通30W直管型紫外线灯，新灯辐 照强度≥90μ W/cm2为合格；使用中紫外线灯辐照 强度≥70μ W/cm2为合格；30W高强度紫外线灯辐 照强度≥180μ W/cm2为合格；
一消毒与灭菌技术
基本概念
• 灭菌－杀灭或除去所有微生物的繁殖体和芽胞。
• 消毒－杀灭或除去病原微生物。
• 防腐－抑制微生物的生长与繁殖。抑菌剂或防 腐剂。 • 无菌—不含有任何的活菌
1
二消毒与灭菌方法
1物理灭菌法
• 热力灭菌法（干热灭菌、湿热灭菌）
• 辐射灭菌法（紫外线、电离幅射、微波）
• 滤过除菌法（除菌滤器、适用物品）
空气采样时的注意事项
1、（消毒前）前提将放置平皿的采样台准备好。 2、开门方式：自动门,推拉式弹簧门,有把手的门。 3、行走路线（尽可能少 5 4 在室内走动） 动作要 3 轻。先布皿 后开盖。 2 1 4、动态环境 5、同一房间空气、物表 采样，先采空气，后 采物表；最好由同一 人操作 。
2、物体表面消毒效果监测
间歇蒸汽灭菌法
反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌(杀芽胞）
巴氏消毒法
5
较低的温度 61 ℃ 30mim/71 ℃ 30s（杀致病菌）
消毒与灭菌方法
2化学消毒法
利用化学药物（消毒防腐剂）破 坏微生物的化学组成、物理结构和生 理活动，达到防腐灭菌目的。
6
三、医院消毒效果监测范围
日常监测重点科室（手术室、层流洁 净病房、ICU、产房、新生儿科、母婴同 室病房、透析室、血液病房、烧伤病房、 供应室、内镜室、治疗室、换药室 发生医院内感染时应在发生感染的科 室及相关科室采样监测
如接种环、试管口、三角瓶口
干烤----加热160-170℃ 2h
玻璃器皿、陶瓷
灭菌效果：可杀死营养体和芽胞
4
效果比干热好
高压蒸பைடு நூலகம்灭菌法（热压灭菌法）
最有效的湿热灭菌法 121 ℃ 15-20mim（杀芽胞)
煮沸消毒法
水煮100 ℃ 5mim(杀繁殖体)-2h(杀芽胞)
流通蒸汽消毒法
水蒸汽100 ℃ 15-30mim(杀繁殖体)
4、消毒液细菌菌落总数标准值≤100cfu/ml ，无 菌器械保存液细菌菌落总数标准值是不得检出。
5 、致病菌检测包括金黄色葡萄球菌、铜绿假单 胞菌、沙门氏菌、溶血性链球菌。
5、灭菌物品消毒效果监测
•
1、采样时间：在灭菌处理后，存放有效期内 采样。 • 2 、采样方法：按《消毒技术规范》3.17.5.2 原则执行 • 3 、结果判定：阳性对照在 24 小时内应有菌生 长，阴性对照在培养期间应无菌生长 , 如需 - 厌氧 菌及霉菌培养管内均为澄清或虽显浑浊但经证明 并非有菌生长，判为灭菌合格；如需-厌氧菌及霉 菌培养管中任何1管显浑浊并证实有菌生长，应重 新取样，分别同法复试2次，除阳性对照外，其他 各管均不得有菌生长，否则判为灭菌不合格。
注意事项：
1、必须是使用中消毒液或无菌器械保存液。 2 、要求采样后 1h 内检测，实际工作中由于各种 原因做不到，采 5ml 样品放在灭菌试管中（试管中不 放中和剂）带回实验室。 3 、样品名称一定要标识清楚，不仅要注明采样 地点，而且要注明消毒液的名称、有效浓度等，例： 劲康消毒剂、 0.1% 健之素消毒液、 80% 漂白粉溶液、 0.5%洗必泰等标识都是不正确的。
注意事项
1 、分清普通卫生洗手和外科洗手卫生手 消毒。 外科洗手标准值 ? Ⅱ类环境：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、 铜绿假单胞菌 ( 产房、母婴同室、新生儿科加 测沙门氏菌、溶血性链球菌) Ⅲ类环境：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌
4、使用中消毒液或无菌器械保存液监测
1、使用中消毒液有效成分的测定 2、使用中消毒液或无菌器械保存液染菌量的测定 （1）涂抹法： （ 2 ）倾注法：用无菌吸管吸取消毒液 1.0 ml ，加入 到9ml含相应中和剂的无菌生理盐水采样管中混匀，分别 取 0.5ml 放入 2 只灭菌平皿内，加入已溶化的 45℃～ 48℃ 的营养琼脂15ml～18 ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固， 一平板置20℃培养7天，观察霉菌生长情况；另一个平板 置36℃±1℃温箱培养72h，计数菌落数。同时按3.17.15 检测致病菌。 使用中消毒液或无菌器械保存液染菌量（cfu/ml）= 每个平板上的菌落数×20 结果判定：消毒液染菌量≤100cfu/ml，并未检出致 病菌为合格。
采样注意事项
• 1、空气、物表采样由同一人操作。
2、物表采样应由近及远，兼顾上下中左右 3、母婴同室、血透室属Ⅱ类环境 4、样品标识一定要清楚，能朔源、追踪，以便整
改。
5、致病菌包括金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、
溶血性链球菌（产房、新生儿科、母婴同室加
测沙门氏菌） 6、采样棉签在现场要做空白对照。
Ⅰ类环境采样方法
• 将普通营养琼脂平皿（直径为9cm）放在 室内手术区和周边区各采样点处，采样高度离 地面≤0.8米，采样时将平皿盖打开，扣放于 平皿旁，暴露30 分钟，盖好，于37℃培养24 小时，分别计数手术区和周边区的平均菌落数。
Ⅱ、Ⅲ类环境布点、采样方法
依 据 《 消 毒 技 术 规 范 》( 卫 生 部 2002 年 版 ) 3.17.8 。室内面积≤ 30M2 ，设内、中、外对角线 3 点， 内、外点布点部位距墙壁1M处；室内面积>30 M2，设 4角及中央5点（双对角线），4角的布点部位距墙壁 1M处。 将普通营养琼脂平皿( 直径为9cm)放在室内各采 样点 处 ，采 样 高度 距 地面 1.5 米（ GB15982-1995 ： 0.8 ～ 1.5 米），采样时将平皿盖打开，扣放于平皿 旁，暴露5分钟，盖好立即送检，于37℃培养48小时， 计数平板菌落数，并计算出空气细菌菌落总数。
1、采样时间：消毒处理后进行采样。 2、采样方法： 用5cm×5cm的标准灭菌规 格板，放在被检物体表面，用浸有含相应中和 剂的无菌洗脱液的棉拭子 1 支，在规格板内横 竖往返均匀涂擦各 5 次，并随之转棉拭子，连 续采样 4 个，剪去手接触部位后，投入 10ml 含 相应中和剂的无菌洗脱液试管内，进行细菌菌 落总数和致病菌检测。 门把手等不规则物体表面用棉拭子直接涂 擦采样
手术区：需要特别保护的手术台及其周围区域。 Ⅰ级手术室的手术区是指手术台两侧边至少各外推 0.9m 、两 端至少各外推0.4m后（包括手术台）的区域； Ⅱ级手术室的手术区是指手术台两侧边至少各外推 0.6m 、两 端至少各外推0.4m后(包括手术台)的区域； Ⅲ级手术室的手术区是指手术台四边至少各外推 0.4m 后（包 括手术台）的区域。 Ⅳ级手术室不分手术区和周边区。 周边区：洁净手术室内除去手术区以外的其他区域。
8、环氧乙烷灭菌器灭菌效果监测
• 枯草杆菌黑色变种芽胞（ ATCC9372 ）菌片事 先放入一次性注射器中（每个注射器中放 1 个菌 片），然后封装在一剥离式包装袋内。菌片在灭 菌器内布放的数量应足够多，应放在那些在性能 鉴定时发现是最难灭菌的部位，并均匀分布于整 个灭菌物品中。 • 上、中、下层对角线前、中、后各布放一个 菌片，排气口上方放置一个菌片，共放置10个菌 片。
物体表面消毒效果监测
3、检测方法： （1）细菌总数检测：检测方法按《消毒技术规 范》3.17.6. 3（1）执行。小型物体表面的结果计 算，用cfu/件。 （2）致病菌检测：检测方法按《消毒技术规范》 3.17.15原则执行。 4、结果判定 Ⅰ、Ⅱ类区域：细菌总数≤ 5cfu/cm2 ，并未检 出致病菌为消毒合格。 Ⅲ类区域：细菌总数≤10cfu/cm2，并未检出致 病菌为消毒合格。 Ⅳ类区域：细菌总数≤15cfu/cm2，并未检出致 病菌为消毒合格。
手消毒效果监测检测方法
（1）细菌总数检测：将采样管在混匀器上振荡20秒 或用力振打80 次，用无菌吸管吸取1.0ml 待检样品接种 于灭菌平皿，每一样本接种 2个平皿，内加入已溶化的 45℃～48℃的营养琼脂 15ml ～ 18 ml，边倾注边摇匀， 待琼脂凝固，置36℃±1℃温箱培养48h，计数菌落数。 采样结果计算方法： 平板上菌落数×稀释倍数 细菌总数（cfu/cm2）= 采样面积（cm2） （2 ）致病菌检测：按《消毒技术规范》3.17.15 原 则执行。
3、手消毒效果监测
1、采样时间：消毒后立即采样。
2、采样方法：被检人五指并拢，用浸有含 相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子在双手指屈 面从指根到指端往返涂擦 2 次 ( 一只手涂擦面积 约 30cm2) ，并随之转动采样的棉拭子，剪去操 作者手接触部位，将棉拭子投入 10ml 含相应中 和剂的无菌洗脱液试管内，进行细菌菌落总数 和致病菌检测。
四、医院消毒效果监测分类
消毒灭菌效果监测： 使用中消毒液或无菌器械保存液 灭菌设备（压力蒸汽灭菌器、环氧乙烷灭菌器） 紫外线灯 灭菌物品 环境卫生学监测： 空气 物表 医务人员手
1、空气消毒效果监测
1、采样时间：消毒处理后、操作前进行采样。 2、布点及采样方法： （ 1 ）Ⅰ类环境布点、采样方法：依据《医院洁净手术部建筑 技术规范》(GB50333-2002)10.3.13、
7、压力蒸汽灭菌器灭菌效果监测 检测方法
生物指示菌片布放方法（《消毒技术规范》 ）
（1）将两个嗜热脂肪杆菌芽胞菌片分别装入灭菌 小纸袋内，置于标准试验包中心部位。 （2）下排气压力蒸汽灭菌器灭菌柜室内，排气口 上方放置一个标准试验包 预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌器灭菌柜室内， 排气口上方放置一个标准试验包 手提压力蒸汽灭菌器：通用贮物盒代替标准试验 包，贮物盒内盛满中试管，指示菌片放于中心部位的 两支灭菌试管内，贮物盒放于手提压力蒸汽灭菌器底 部。
结果判定
Ⅰ、Ⅱ类区域工作人员：细菌总数≤5cfu/cm2， 并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌 为消毒合格。 Ⅲ类区域：细菌总数≤ 10cfu/cm2 ，并未检出金 黄色葡萄球菌、大肠杆菌为消毒合格。 Ⅳ类区域：细菌总数≤ 15cfu/cm2 ，并未检出金 黄色葡萄球菌、大肠杆菌为消毒合格。 母婴同室、婴儿室、新生儿科及儿科病房的工作 人员手上，不得检出沙门氏菌、大肠杆菌、溶血性链 球菌、黄色葡萄球菌。
• 其他
– 超声波（机制：裂解细菌，主要用于粉碎 细胞、提取抗原）
2
– 干燥与低温抑菌
热力灭菌法
• 原理 – 使微生物蛋白质，酶变性凝固； – 膜结构破坏 – 微生物体内的DNA断裂，核蛋白解体。 • 方法
干热灭菌法 湿热灭菌法
3
热力灭菌法
焚烧----最彻底的灭菌方法 如尸体等
烧灼----直接用火焰灭菌方法