XpertMTB_RIF技术在结核分枝杆菌利福平耐药性检测中的应用杨俊勇

Xpert MTB/RIF技术在结核分枝杆菌利福平耐药性检测中的应用杨俊勇
发布时间：2023-06-07T08:36:43.698Z 来源：《中国医学人文》2023年5期作者：杨俊勇[导读] 探讨Xpert MTB/RIF技术在结核分枝杆菌（MTB）快速检测及利福平耐药检测在黔东南州16县（市）的应用价值，旨在为后续肺结核的诊断与治疗提供指导。

方法：收集我中心结核病实验室2022年1月至10月共1367份检测样本进行Xpert MTB/RIF检测，分析Xpert MTB/RIF法检测的敏感性和特异性。

将1367份培养阳性样本进行分枝杆菌菌群鉴定和药物敏感性试验，评价Xpert MTB/RIF法检测MTB及其对利福平耐药的敏感性和特异性。

结果：MTB检出1323份，MTB未检出44份，RFP耐药基因检出87份；XpertMTB/RIF耐药位点以Probe E为主。

结论：Xpert MTB/RIF技术可快速检测MTB及其对利福平的耐药性，敏感性和特异性较好，具有较高的临床应用价值。

黔东南州疾病预防控制中心贵州黔东南 556000
摘要：目的：探讨Xpert MTB/RIF技术在结核分枝杆菌（MTB）快速检测及利福平耐药检测在黔东南州16县（市）的应用价值，旨在为后续肺结核的诊断与治疗提供指导。

方法：收集我中心结核病实验室2022年1月至10月共1367份检测样本进行Xpert MTB/RIF检测，分析Xpert MTB/RIF法检测的敏感性和特异性。

将1367份培养阳性样本进行分枝杆菌菌群鉴定和药物敏感性试验，评价Xpert MTB/RIF法检测MTB及其对利福平耐药的敏感性和特异性。

结果：MTB检出1323份，MTB未检出44份，RFP耐药基因检出87份；XpertMTB/RIF耐药位点以Probe E为主。

结论：Xpert MTB/RIF技术可快速检测MTB及其对利福平的耐药性，敏感性和特异性较好，具有较高的临床应用价值。

关键词：结核分枝杆菌；利福平；耐药性；Xpert MTB/RIF技术
结核病是由结核分枝杆菌引起的传染性疾病，是人类第九大死因，死亡率在传染性疾病中排名第一，目前没有任何疫苗能有效预防成人结核病。

我国是全球30个结核病高负担国家之一，每年新发结核病病例90万例，居全球第3位。

我国结核病防治的主要挑战是耐多药结核病发现率低、病原学确诊率低、筛查率低、耐药率高。

临床研究结果显示，传统结核诊断技术不敏感、容易漏诊，导致延误诊疗，亟需新诊断技术来弥补传统诊断措施的不足[1-2]。

近年来，在临床医学发展的背景下，Xpert MTB/RIF技术实施价值高，且得到广泛应用。

本文主要是对1367份样本进行分析，研究上述技术实施价值。

具体为：
1资料与方法
1.1一般资料
收集我中心结核实验室2022年罗氏培养阳性菌株1367份进行统计分析，本放2 ～ 8 ℃冰箱保存，患者年龄12～86 岁，男性902例，女性465 例。

根据WS 288—2017《肺结核诊断》，肺结核的诊断以病原学（包括细菌学、分子生物学）检查为主，结合流行病史、临床表现、胸部影像、辅助检查及鉴别诊断结果，综合分析后做出临床诊断，以病原学和病理学检查结果为确诊依据。

1.2方法
GeneXpert™ DX System 全自动医用PCR分析系统 4通道，由美国 Cepheid 公司提供，MTB-PCR试剂为瑞典赛沛公司Cepheid AB结核分枝杆菌rpoB基因和突变检测试剂盒（实时荧光PCR法）MTB/RIF；改良罗氏培养基、对硝基苯甲酸( PNB)、RIF、INH ，RIF含药培养基药物终浓度为40mg /L、INH为0.2mg/L、PNB为0.5mg/L。

Xpor MTB/RIF 检测：在生物安全柜内挑取罗氏管斜面菌落，加入带有螺旋盖的4%NaOH前处理管，扭紧前处理管，在涡旋振荡器上振荡15～30 s，室温静置15min，使菌株充分液化。

打开反应盒，取2mL处理后样品从加样孔缓慢加入反应盒，然后将反应盒置于检测模块进行自动化检测，直接在检测系统窗口下观察结果。

Xpert可同时检测MTB对RIF耐药性: A、B、C、D、E 5 条独特的分子探针是针对 MTB rpoB基因 81 bp的RIF耐药核心区间(RRDR) 序列，可以检测 rpoB 基因是否发生突变，从而判断受检菌株是否对 RIF 耐药。

Xpor MTB/RIF检测结果通过测量荧光信号和内设的计算方法判定，较低的Ct值代表了较高的DNA模板起始浓度，较高的Ct值代表了较低的DNA 模板浓度。

结核分枝杆菌检测-基于样品中结核分枝杆菌的Ct值，结核分枝杆菌结果将以高（Ct值<16）、中（Ct值16-22）、低（Ct值122-28）或非常低（Ct值>28）来显示。

只有在检测到结核分枝杆菌的情况下，才显示利福平耐药的检测结果：检测到利福平耐药，末检测到利福平耐药，或利福平耐药不确定。

利福平耐药的检测结果与结核分枝杆菌的检测结果以两条不同的曲线表示。

未检测到结核分支杆菌模板DNA时，未检测到分枝杆菌。

1.3观察指标
分析Xpor MTB/RIF检测情况；Xpor MTB/RIF检测RIF耐药性分析。

1.4统计学分析
相关资料均采用SPSS22.0进行分析处理（P<0.05，表示统计学研究结果有意义）。

其中，计数资料（%）采用X2检验，计量资料（±S）采用T检验。

2结果
2.1 Xpor MTB/RIF检测情况分析
2022年共计检测1367份，MTB检出1323份，MTB未检出44份，RFP耐药基因检出87份。

具体见表一：表一 Xpor MTB/RIF检测情况分析
Xpor MTB/RIF检测结
果
合计
检测到MTB未
检测到
MTB
1367
耐
药
敏感44
871236
1323
2.2 Xpor MTB/RIF检测RIF耐药性：XpertMTB/RIF耐药位点以Probe E为主。

具体见表二。

表二：检测耐利福平MTB的基因突变情况分析
方法耐
药
构成比
Xpor
MTB/RIF
ProbeA
（507～
511）
1517.24
ProbeB
（512～
518）
1517.24
ProbeC
（518～
523）
00.00
ProbeD
（523～
529）
78.05
ProbeE
（529～
533）
5057.47
合计87100.00
3讨论
结核病是一种由肺部结核分枝杆菌感染引起的疾病。

临床研究结果显示，大多数结核细菌生活在肺部病变的坏死组织中，然后通过痰从体内排出。

因此，结核病诊断的基础为痰中是否存在结核菌。

目前，传统固体培养方法的特异性差，阳性率仅为30%-40%，各类分枝杆菌生长，结核分枝杆菌的鉴定需要结合分枝杆菌种。

抗酸染色涂片中，阳性结果诊断标准为结核杆菌的数量超过5000/mL。

在痰标本中，Xpert MTB/RIF检测技术的灵敏度远高于涂片检测，检出限为131 CFU/mL。

此外，Xpert技术具有对检测过程干扰小、生物安全性高、操作简单等特点[3]。

近年来，临床上关于Xpert MTB/RIF检测技术评价的报告多为成人或儿童，在老年人群中的应用的报告较少。

老年人口具有其特殊性，结核病症状不典型，且往往并发多种基础疾病，存在痰液困难等问题，因此需要更敏感的检测方法进行早期诊断[4]。

相关研究表示，Xpert MTB/RIF在结核病诊断中的敏感性、特异性均较高，且利福平耐药检测的准确性较高[5]。

除此之外，相关研究表示Xpert MTB/RIF检测，的特异性在检测不同标本时具有不同的敏感性，以罗氏培养结果为金标准，Xpert MTB/RIF检测MTB的特异性、敏感性较低，其原因分析表示可能与痰液质量之间具有直接相关关系。

在检测中，大部分老年患者不能正确地咳痰，部分标本为唾液，严重影响了检测结果[6]。

因此，单一的阴性结果不能排除结核病的可能性，多次检测可以提高阳性率。

利福平对耐药金黄色葡萄球菌、结核分枝杆菌、革兰氏阳性球菌具有广泛的抑菌作用，结核分枝杆菌的最低抑菌浓度平均为
0.018mg/L，可发挥杀菌作用，口服治疗后的血药浓度为该浓度的100倍。

结核杆菌对利法托有耐药性，因此不应单独使用。

与异烟肼、乙胺丁醇联合使用，可延缓耐药性的发展，具有协同作用。

利福平的抗菌机制是阻断mRNA的合成，具有严重的耐药性，是一种重要的抗结核药物，90%的利福平耐药菌株也对异烟肼耐药[7]。

因此，利福平耐药性的检测可作为多药耐药结核杆菌的筛查标志物。

相关学者表示，与比例法药敏试验结果相比，Xpert MTB/RIF可正确识别利福平敏感菌株、耐利福平耐药菌株。

在本研究中，2022年共计检测1367份，MTB 检出1382份，MTB未检出44份，RFP耐药基因检出87份。

以可用于比例法检测的100例痰标本统计，Xpert检测RIF耐药33例，耐药率
33.00%。

其原因分析为：两种方法联合检测结核分枝杆菌对结核病的早期诊断至关重要，提高了单一方法的灵敏度。

当然，Xpert MTB/RIF 也有其自身的问题和局限性，如无法区分死细菌和活细菌。

然而，Xpert结核/利福平作为一种快速、直接、可靠地检测结核病患者和利福平耐药的新诊断技术，具有较高的灵敏度和特异性，可帮助临床更快地从病因学上检测出结核病患者，提高诊断率。

综上所述，Xpert Mtb/RIF技术的实施价值高，可进行积极推广。

参考文献
[1]朱育连,陈丹丹,欧阳小娟,等. 不同类型标本中Xpert Mtb/RIF法检测结核分枝杆菌的效能比较[J]. 川北医学院学报,2022,37(10):1284-1287.
[2]王翠,王芬,刘家瑞. Gene Xpert MTB/RIF在川东某医院结核病早期诊断中的应用价值分析[J]. 当代医药论丛,2022,20(18):155-158.
[3]吴玉姣,秦科宇,朱珊梅,等. 应用Xpert MTB/RIF和基因芯片法快速检测结核分枝杆菌及其对利福平的耐药性分析[J]. 抗感染药
学,2021,18(2):249-251.
[4]聂静,王晓川,武汉良. Xpert MTB/RIF技术检测对痰标本中结核分枝杆菌的准确度及其对利福平药敏结果的影响[J]. 抗感染药
学,2020,17(8):1112-1115.
[5]刘静,王晓林,田旭升,等. Xpert MTB/RIF在结核分枝杆菌及利福平耐药性检测中的应用分析[J]. 实验与检验医学,2021,39(6):1424-1427.
[6]贾秀杰,胡小芳,程亮,等. 结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术对肺外结核性脓肿的诊断价值分析[J]. 现代生物医学进展,2022,22(22):4385-4389.
[7]谢平,陈彩萍,白茹,等. GeneXpert MTB/RIF在快速诊断肺结核和检测利福平耐药中的临床应用价值[J]. 国际呼吸杂志,2020,40(24):1856-1861.。