HPLC法测定饲料中维生素A_维生素D_3和维生素E(精)

HP LC 法测定饲料中维生素A 、维生素D 3和维生素E
摘要:建立了以w (C 2H 5OH =95%乙醇直接提取,高效液相色谱仪在波长280n m 和254n m 处连续测定饲料中维生素A 、维生素D 3和维生素E 的方法。

色谱柱为大连依利特Hypersil ODS C 18(25c m ×416mm ×5μm ,流动相为甲醇水,流速为112mL /m in 。

维生素A 、维生素D 3、维生素E 的质量浓度分别在110mg/L ~2010mg/L 、015mg/L ~15.0mg/L 、
215mg/L ~5010mg/L 范围内与峰面积呈良好的线性关系,检测限分别为013×10
-6
μg 、0104×10-6
μg 、
510×10-6μg,相对标准偏差分别为116%、217%、214%,平均回收率分别为99%、102%、98%。

关键词:高效液相色谱法;维生素A;维生素D 3;维生素E;饲料
中图分类号:O65717+2文献标识码:B 文章编
号:10062009(200502003302
To D etect V itam i n A,V it am i n D 3and V it am i n E i n Feed w ith HPLC
(Changsha Environm ental P rotection Technology Institute,Changsha,Hunan 410004,China
Abstract:To detect V ita m in A,V ita m in D 3and V ita m in E in feed,which t o directly extract with
w (C 2H 5OH =95%glycollic,with HP LC in 280n m and 254n m.Chr o mat ographic colu mn was Hy persil ODS
C 18(25c m ×
4.6mm ×5μm ,mobile phase was methanol -water,vel ocity of fl ow was 1.2mL /m in .W hen the mass concentrati on of V ita m in A,V ita m in D 3and V ita m in E was 1.0mg/L ~20.0mg/L 、0.5mg/L ~1
5.0mg/L 、
2.5mg/L ~50.0mg/L,there had a well lineal relati onshi p.Detecti on li m it was
0.3×10-6
μg 、0.04×10-6μg 、5.0×10-6
μg
.Relative standard deviati on was 1.6%、2.7%、2.4%,recovery rate was 99%、102%、98%.Key words:HP LC;V ita m in A;V ita m in D 3;V ita m in E;Feed
收稿日期:20040323;修订日期:20050130
作者简介:王安群(1962—,女,江西吉安人,高级工程师,学士,从事环境监测教学工作。

维生素是维持机体正常活动必不可少的物质,适量的各种维生素作为饲料添加剂能促进禽畜生长,增强禽畜体质,产生显著的经济效益。

目前常采用分光光度法
[1]
或皂化后用乙醚、石油醚[2]
、丙酮、正己烷[3,4]
提取再用高效液相色谱法(HP LC
测定脂溶性维生素A 、维生素D 3、维生素E,手续较为繁琐。

今在多年的分
析检测基础上,参阅文献[5],建立了一种快速简便的测定方法。

1实验
111主要仪器和试剂
W aters 244高效液相色谱仪,美国W aters 公
司,配2487紫外检测器和江申色谱工作站;依利特Hypersil ODS C 18色谱柱,25c m ×416mm ×5μm ,大连中科院化物所;溶剂及试样过滤处理系统,M illi pore 产;维生素A 、维生素D 3、维生素E,E mer 2ck 产;实验用水为去离子水经0145μm 滤膜过滤。

112色谱条件
柱温室温;流动相V (甲醇∶V (水=98∶2,流量112mL /m in;紫外检测器,
波长维生素A 、维生素E 为280n m ,维生素D 3为254n m;灵敏度
015~0105AUFS 。

113样品预处理和测定
称取012g ~2g 样品(多维样品称012g,预混
料视含量为015g ~2g ,加入w (C 2H 5OH =90%乙醇5mL,浸泡10m in,再补加无水乙醇5mL,于超声波发生器中超声提取30m in,用
0145μm 滤膜过滤,在给定色谱条件下测定。

维生
素A 、维生素D 3、维生素E 色谱峰见图1。

维生素D 3、维生素E 的提取率均达到了96%以
上。

同时,还进行了w (C 2H 5OH =100%、w (C 2H 5OH =95%和w (C 2H 5OH =90%乙醇的提取实验,w (C 2H 5OH =100%乙醇超声提取30m in,维生素A 、维生素D 3提取率约为50%和70%;w (C 2H 5OH =90%乙醇提取,维生素D 3有明显降解,维生素E 峰有拖尾现象;w (C 2H 5OH =95%乙醇提取,维生素D 3稍有降解。

在提取过程
中,加入维生素C 011g,可防止维生素A 、维生素D 3的降解。

图1维生素A、维生素D
3
、维生素E色谱峰
2结果与讨论
211流动相的选择
测定多维样品时,流动相可选用纯甲醇,峰型
很好。

由于预混料类样品成分复杂,若用纯甲醇为流动相,分离效果不佳。

当V(甲醇∶V(水= 95∶5时,出现峰拖尾现象,选用V(甲醇∶V(水= 98∶2,达到了很好的分离效果。

212样品的预处理
样品预处理的方法对维生素A、维生素D
3
、维生素E的提取率影响较大。

参考文献[3]发现,采用乙醚、石油醚超声提取样品30m in,维生素A只
能提取25%,维生素D
3
提取20%,提取1h,维生
素A、维生素D
3
提取率变化不大。

这是由于维生
素A、维生素D
3
在生产过程中,外表包裹了一层明胶和糊精,它们在乙醚、石油醚中难以溶解。

今采
取先用w(C
2
H5OH=90%乙醇浸泡,使维生素A、维生素D3的外壳膨胀,再补加无水乙醇至w(C2H5OH=95%,超声提取30m in,维生素A、213标准曲线及检测限
配制110mg/L、215mg/L、510mg/L、1010mg/L、1510mg/L和2010mg/L维生素A, 015mg/L、112mg/L、215mg/L、510mg/L、715mg/L和1010mg/L维生素D3及015mg/L、612mg/L、1215mg/L、2510mg/L、3715mg/L和5010mg/L维生素E,在给定色谱条件下进行测定,以质量浓度x与峰面积y作线性回归,回归方程维生素A:y=2.89×108x-5127×103,r= 11000;维生素D3:y=1107×108x+1174×105,r= 019994;维生素E:y=2.14×105x+516×102,r= 019986。

灵敏度0105AUFS、信噪比(S/N=3时,检测限维生素A为013×10-6μg,维生素D
3为0104×10-6μg,维生素E为510×10-6μg。

214精密度与加标回收率
称取猪用预混合饲料110000g各10份,其中5份同时加入维生素A、维生素
D3、维生素E标准品,经预处理后用高效液相色谱测定,结果见表1。

表1维生素A、维生素D
3
、维生素E加标回收率与精密度试验
加标量m/μg回收量m/μg回收率/%相对标准差/%维生素
A:34123410331534183317331998~101116
维生素D
3
:21142115201821182116221096~103217
维生素E:1131011210911511011496~102214
从表1可见精密度和加标回收率均较好。

采用乙醇提取样品高效液相色谱仪紫外检测器,在不同波长可一次测定维生素A、维生素D
3
和维生素E,方法简便、快捷、可靠。

[参考文献]
[1]岳宁,杨振海1进口饲料添加剂分析手册[M]1北京:中国
对外经济贸易出版社,19931
[2]詹益兴,金至清1色谱应用实例(第2集[M]1长沙:湖南
科学技术出版社,19931
[3]曹冶1高效液相色谱仪快速测定复合维生素的方法研究
[J]1中国饲料,1997,(8:35371
[4]陈翠莲,袁东显,陈猛1预混合饲料中维生素A、D、E的微
波萃取法[J]1分析科学学报,1999,15(1:36381
[5]SHARP LESS K E,MARG OL I S S,THOMAS J B.Deter m inati on
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