高效液相色谱法测定固体食品中的安赛蜜

高效液相色谱法测定固体食品中的安赛蜜
刁玉华，张加稳，陈娴
（昆明市食品药品检验所，昆明 650032）
摘要：建立一种高效液相色谱法测定固体食品中安赛蜜的方法。

以水为提取溶剂超声波提取安赛蜜，然后在提取液中加入沉淀剂除杂，采用C18反相色谱柱，紫外检测器，以0.02mol/L乙酸铵溶液∶甲醇=90∶10（v/v）为流动相，检测波长225nm，流速1.0mL/min，柱温30℃，进样量10μL进行检测，外标法定量。

安赛蜜出峰时间为4.348min，样品的检出限为0.57mg/kg，定量限1.89mg/kg，线性范围为0.5～50.0μg/mL，相关系数0.9998，安赛蜜的加标回收率在91.3%～99.3%之间，重复性实验的相对标准偏差在2% 以下（n=6）。

建立的前处理方法具有简单、快速、准确、实用性强的特点，可用于固体食品中安赛蜜的检测。

关键词：安赛蜜；高效液相色谱；固体食品
中图分类号：TS207.3/TS202.1 文献标识码：A 文章编号：1006-2513（2021）03-0090-05 doi：10.19804/j.issn1006-2513.2021.03.015
Determination of acesulfame K in solid food by
high performance liquid chromatography
DIAO Yu-hua，ZHANG Jia-wen，CHEN Xian
（Kunming Institute for Food and Drag Control，Kunming 650032）
Abstract：A high performance liquid chromatography for determination of acesulfame K in solid food was developed. Acesulfame K was extracted using water，assisted by ultrasound，and purified by precipitation. Zinc acetate and potassium ferrocyanide was used for preparation. Acesulfame K was separated on a C18 column using 0.02mol/L ammonium acetate methanol（90∶10，v/v）as mobile phase at a flow rate of 1.0mL/min and detected by ultraviolet detector at 225 nm. The column temperature was 30℃ and injection volume was 10μL. The quantitative detection was carried out by external standard. The retention time of acesulfame K was 4.348 min. The limit of detection was 0.57mg/ kg and limit of quantification was 1.89mg/kg. The linear range was between 0.5 and 50.0μg/mL with correlation coefficient of 0.9998. The mean spike recoveries for acesulfame K in a blank sample was between 91.3%and 99.3%，with a relative standard deviation below 2%（n=6） . The method was simple，rapid，accurate and practical. It can be used for determination of acesulfame K in solid food.
Key words： acesulfame K；high performance liquid chromatography（HPLC）；solid food
安赛蜜，学名乙酰磺胺酸钾（Acesulfame-K）是一种健康新型高强度甜味剂。

由于安赛蜜的甜度是蔗糖的200倍，无热量、无不良后味感，在人和动物体内不代谢、不积累［1］，用于食品加工
收稿日期：2020-12-24
作者简介：刁玉华（1985-），男，硕士，工程师，研究方向：食品安全检测技术。

不会引起微生物发酵，与其他甜味剂混合使用能够产生非常好的协同作用，广泛应用于各类食品中［2］。

我国 GB 2760—2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中规定，安赛蜜可用于饮料冷冻饮品、果酱、蜜饯、酱腌菜、糖果、焙烤食品、调味品、饮料、果冻等食品中，并规定了相应的最大使用量［3］，但市场上个别不法厂商为降低成本赚取利润，不择手段滥用甜味剂的现象时有发生，严重违反国家食品添加剂使用标准的相关规定［4］。

食品中安赛蜜的检测方法主要有高效液相色谱法［5-7］、液相色谱-质谱联用法［8］、紫外光度法［9］、薄层色谱法［10］等。

其中高效液相色谱法是目前最常用的测定安赛蜜的方法，文献［11-15］分别对蜜饯、膨化食品、酱腌菜、糕点、果冻等采用高效液相色谱法测定其中安赛蜜进行研究。

由于固体食品成分复杂，需要去除样品中的蛋白质、脂肪、有机酸等杂质才能取得较好的分离效果［16］，以保证回收率及重现性达到要求。

本研究拟对检测波长选择、流动相比例选择、提取净化条件等进行优化，建立一种高效液相色谱法检测固体食品中安赛蜜的方法。

本文建立的方法快速、简便、准确，具有较高的精密度和准确度，值得普遍推广。

1 材料与方法
1.1 材料与试剂
安赛蜜标准品：Staford Chemicals；甲醇（色谱纯）：美国默克公司；乙酸铵：国药集团化学试剂有限公司；乙酸锌、亚铁氰化钾：北京益利精细化学品有限公司；除特别说明，其余试剂均为分析纯；超纯水：英国ELGA CHORUS超纯水机制备。

1.2 仪器与设备
高效液相色谱仪（型号：Agilent 1260）：美国安捷伦公司；电子天平：美国梅特勒托利多公司；数控超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司；旋涡混合器：海门其林贝尔公司；大容量冷冻离心机：美国贝克曼公司；超纯水器：英国ELGA CHORUS公司；紫外可见分光光度计：美国安捷伦公司。

1.3 方法
1.3.1 样品前处理
将样品粉碎，称取2.5g试样于50mL具塞塑料离心管中，加入15mL水，超声30min，以确保样品中的安赛蜜全部溶出，超声提取后加入2mL乙酸锌、2mL亚铁氰化钾振荡以沉淀蛋白，加水定容至25mL，于旋涡混合器上混匀后，5000r/min离心10min，收集上清液。

上清液经0.22μm 微孔滤膜过滤，弃去几滴初滤液后，收集滤液供液相色谱分析。

1.3.2 色谱条件
色谱柱：SunFirea®C18（4.6mm×150mm，5μm）；
流动相：0.02mol/L乙酸铵溶液：甲醇（90+ 10，体积比），混匀；
流速：1.0mL/min；
柱温：30℃；
波长：225nm；
进样量：10µL。

1.3.3 标准曲线
安赛蜜标准储备液：准确吸取5mL（1000μg/ mL）安赛蜜标准溶液于50mL容量瓶中，用水定容至刻度线，配制成100μg/mL的标准储备液，于4℃避光保存。

安赛蜜标准系列溶液配制：用水将安赛蜜标准储备液逐级稀释得到浓度为0.5μg/mL、1.0μg/ mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、25.0μg/mL、50.0μg/ mL的标准系列溶液，在1.3.2色谱条件下上机分析，然后以峰面积为纵坐标，以安赛蜜质量浓度为横坐标，绘制标准工作曲线。

2 结果与分析
2.1 波长的选择
利用紫外分光光度法检测，超纯水对紫外可见分光光度计调零，用25μg/mL的标准溶液于200nm至800nm之间扫描，结果如图1所示，在225nm时安赛蜜标准溶液有最大吸收，故本文选择检测波长为225nm。

210A b s
200300
225.0
400
500600700
800
波长（nm ）
图1 安赛蜜紫外吸收光谱图
Figure 1 UV absorption spectrum of acesulfame K
2.2 流动相的选择
分别采用甲醇-乙酸铵、甲醇-水不同比例
作为流动相对安赛蜜进行分离，发现甲醇-乙酸铵10∶90的比例时效果最好，获得的峰形尖锐且对称。

安赛蜜的出峰时间在4.348min ，色谱图见图2。

mAU
200
150
100
50
2
4
4.348
6
8
10
12
14
min
图2 安赛蜜标准品色谱图
Figure 2 HPLC chromatograms of acesulfame K standard
2.3 校准曲线
将不同质量浓度的安赛蜜标准溶液分别进样10μL ，依照本文条件进行测定，测定结果见表1。

由图3可知，安赛蜜的质量浓度为0.5µg/mL ～
50µg/mL 时，其峰面积与其质量浓度的线性关系良好，相关系数为0.9998，线性回归方程为：y=29.516x -20.529。

表1 安赛蜜标准溶液质量浓度和峰面积
Table 1 Acesulfame K concentration and HPLC peak area
质量浓度/（μg/mL ）0.5 1.0 5.010.025.050.0峰面积/（mAU ·s ）
7.79900
14.22632
114.92927
270.80939
708.15985
1461.60730
16001400120010008006004002000-200安赛蜜标准曲线图
安赛蜜浓度C （μg/mL ）
峰面积A U C
图3 标准曲线 Figure 3 Standard curve
2.4 回收率及精密度
称取18份奶粉空白样品分3组，分别加入100μg/mL 的安赛蜜标准使用液0.25mL 、1.25mL 、7.5mL （加入量0.01g/kg 、0.05g/kg 、0.30g/kg ）。

按照本文方法进行提取净化，最后定容到25mL 后进行测定。

计算结果，回收率范围为91.3%～ 99.3%，精密度小于2%，空白样品及样品加标见图4、图5。

由表2可以看出，本方法回收率高，重复性好。

mAU 6050403020100
2
4
6
8
10
12
14min
图4 样品空白色谱图
Figure 4 HPLC chromatograms of blank sample
mAU 250200
150100500
2
4
6
8
10
12
14min
4.503
图5 样品加标色谱图
Figure 5 HPLC chromatograms of acesulfame K standard solution in blank
表2 安赛蜜回收率和精密度实验结果
Table 2 Spike recoveries and relative standard deviation for acesulfame K in blank sample
添加量/（g/kg ）测定值/（g/kg ）
平均值/（g/kg ）平均回收率/
%
RSD/%1234560.010.00930.00900.00910.00920.00890.00930.009191.3 1.80.050.04820.04800.04730.04890.04910.04880.048496.8 1.40.30
0.2980
0.2991
0.2953
0.2948
0.3005
0.2999
0.2979
99.3
0.8
2.5 检出限与定量限
以信噪比S/N=3时对应的浓度作为方法的检出限，信噪比S/N=10时对应的浓度为定量限，得到安赛蜜的检出限为0.057μg/mL 即0.57mg/kg ；
定量限为1.89mg/kg 。

2.6 样品测定
应用本文方法对14批不同类型的固体样品进行测定，结果见表3。

从表中可以看出部分样
品中检出安赛蜜，但均符合国家标准的要求，其他样品均未有安赛蜜检出。

表3 样品测定
Table 3 Acesulfame K content in samples
序号样品名称取样量（g）浓度（μg/mL）含量（g/kg）
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
奶粉
橄榄
果酱
汉堡
面包
豆腐干
果珍
咖啡
巧克力
果冻
蛋糕
豆腐皮
腌菜
玛咖精片
2.5205
2.4999
2.5049
2.5554
2.5449
2.5041
2.5147
2.5184
2.5272
2.5612
2.5037
2.5381
2.5073
2.5652
—
—
0.1402
0.1533
—
—
—
0.1108
—
1.0654
—
—
—
0.4586
未检出
未检出
0.0014
0.0015
未检出
未检出
未检出
0.0011
未检出
0.0104
未检出
未检出
未检出
0.0045
3 结论
实验结果表明，本方法以水为提取溶剂，经超声提取和蛋白沉淀剂净化样品，乙酸铵和甲醇为流动相对固体食品中的安赛蜜进行检测，本方法相关系数为0.9998，检出限为0.57mg/kg，定量限为1.89mg/kg，线性范围为0.5～50.0μg/mL，安赛蜜的加标回收率在91.3%～99.3%之间，重复性实验的相对标准偏差在2%以下（n=6）。

结果显示该方法操作简便，能够准确快速得到检测结果。

建立的方法具有简单、快速、准确、实用性强的特点，能够满足在实际工作中对固体食品安赛蜜的检测需要，值得广泛推广。

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