长期局部广谱抗生素应用对结膜囊菌种变化的影响及意义

长期局部广谱抗生素应用对结膜囊菌种变化的影响及意义王瑾;田英;王双勇;赵雅
【摘要】Objective To investigate the effects of long-term topical use of broad-spectrum antibiotics on conjunc-tival sac flora disequilibrium and its association with focal pathogens.Methods One hundred fifteen patients who suffered from non-infectious corneal ulcer and who were chronically (>4 weeks) administrated with quinolone eye drops were en-rolled.One hundred twenty normal subjects served as the control.Results There were 10 specimens and 102 strains cul-tured from conjunctival sac in normal population.Majority of the identified strains in normal subjects were Staphylococcus ( n=75 strains; 62.5%) .These strains can be further classified into Staphylococcus epidermidis ( n =23 strains;19.19%) and Staphylococcus aureus ( n =19 strains;15.83%).In contrast, positive rate of Staphylococcus significantly decreased in patients with history of long-term antibiotic usage ( only 16.67%) .However, the positive rate for Propi-onibacterium acnes (19.34%), Pseudomonas aeruginosaincreased (3.15%) and yeast (19.13%) significantly in-creased.Conclusion Long-term use of topical broad-spectrum antibiotics can lead to conjunctival sac flora disequilibrium and increased opportunistic pathogens, especially yeast.%目的：通过观察长期局部广谱抗生素使用后结膜囊菌种培养的变化，揭示结膜囊菌群失调对于局部病原学变化的影响。

方法选取连续使用喹诺酮类抗生素4周以上的非感染性角膜溃疡患者115例（115只眼），进行结膜囊病原学培养。

120例（120只眼）正常人作为对照组。

结果送检对照组标本中，共培养出10个菌种，
102个菌株。

葡萄球菌属最多共75株（62．5％％），其中表皮葡萄球菌23株（19．19％），金黄色葡萄球菌19株（15．83％）。

实验组结膜囊葡萄球菌属培养阳性率明显下降，仅为16．67％，而痤疮丙酸杆菌阳性率增高到19.43％，铜绿假单胞菌阳性率3．15，酵母菌阳性率19．13％。

结论长期局部广谱抗生素使用，可导致结膜囊菌群失调，条件致病菌特别是酵母菌增多。

【期刊名称】《临床眼科杂志》
【年(卷),期】2016(024)004
【总页数】3页(P348-350)
【关键词】结膜囊;细菌培养;菌群失调
【作者】王瑾;田英;王双勇;赵雅
【作者单位】710003 西安市第四医院眼科;西安市第一医院眼科;西安市第一医院眼科;西安市第一医院眼科
【正文语种】中文
正常成人结膜囊可分离出正常菌群或条件致病菌[1,2].正常菌群的动态平衡共同维系结膜囊局部生理状态。

长期局部使用广谱抗生素后，往往导致结膜囊局部菌群失调，引起条件致病菌的感染[3]。

本研究通过观察长期局部使用广谱抗生素后，结膜囊菌种培养的变化，揭示结膜囊菌群失调对于局部眼表的病原学变化的影响。

一、研究对象
选取2010年1月至2014年12月本院眼科门诊及住院就诊的患者共115例(115只眼)作为实验组。

其中男性73例,女性42例。

年龄18～69岁, 平均(43.5 ±14.3)岁。

纳入标准(满足以下所有条件)：(1)连续使用喹诺酮类抗生素4周以上。

(2)伴有各种原因引起的长期不愈的非感染性角膜溃疡。

如酸碱化学伤及物理因素引起的角膜溃疡、Steven-Johnson综合征等引起的角膜溃疡、Moren’s角膜溃疡等。

排除标准：排除原发性细菌性、真菌性角膜溃疡。

对照组：选取年龄与性别与实验组匹配的本院眼科门诊正常体检的的部分自愿接受研究的患者120例(120只眼)，并排除泪囊、结膜及角膜等眼前节炎症病损。

二、方法
取样均由专业眼科医生进行。

取材时嘱受试者平躺, 向上注视, 用无菌棉签轻压下睑, 将棉拭子放于下弯隆中内1/3 交界部, 下压并旋转1周, 避免接触睫毛或睑缘皮肤。

同样方法上穹隆取样，然后接种于肉汤增菌培养基, 放于35 ℃恒温细菌培养箱培养72 h。

三、统计学分析
在SPSS13.0 软件包进行统计学处理, 采用非参数检验, P<0.05为差异有统计学意义。

一、结膜囊细菌培养
送检120份对照组标本中, 共培养出10个菌种, 102个菌株。

葡萄球菌属最多共75株(62.5%%), 其中表皮葡萄球菌23株(19.19%), 金黄色葡萄球菌19株(15.83%)。

实验组结膜囊葡萄球菌属培养阳性率明显下降，仅为16.67%,而痤疮丙酸杆菌阳性率增高19.43%，铜绿假单胞菌阳性率3.15，酵母菌阳性升高(见表
1)。

二、药敏试验
实验组结膜囊菌种对左氧氟沙星、妥布霉素及四环素等耐药株较对照组明显升高，而对利福平耐药株下降。

两组培养菌株对青霉素类均耐药(见表2)。

三、角膜刮片
角膜涂片中革兰阴性杆菌及真菌孢子的存在，与结膜囊菌种培养相一致。

结膜囊正常菌群是指共生于结膜囊并与其保持动态平衡的多种需氧菌群和厌氧菌群[4]。

正常结膜囊细菌带菌率为20.6%～98.8%[5]。

结膜囊培养发现，正常人结膜囊存在多个菌种[4]。

Graham等使用PCR法更加灵敏检测到正常人群结膜囊更多正常菌群存在[6]。

正常结膜囊真菌的检出率约为16%～20%[7,8]。

尽管对于结膜囊正常菌群的功能及意义尚了解不多，但是，结膜囊正常菌群的动态平衡对于维持眼表的微环境和防治眼表的炎症及感染具有重要意义。

长期使用广谱抗生素，使得耐药菌过度生长，打破这动态平衡，引起菌群失调，造成条件致病菌的感染。

喹诺酮类滴眼液如氧氟沙星或左氧氟沙星等是目前眼科临床常用的一类广谱抗生素。

喹诺酮类对大部分菌种依然是敏感抗生素，所以被广泛应用于内眼手术的预防性用药[9]。

然而，患者术眼在常规用了左氧氟沙星滴眼液之后，细菌培养的阳性率接
近50%，这说明术前左氧氟沙星滴眼液只能清除部分的细菌[10,11]。

谢立信[12]
等对白内障患者术前结膜囊细菌研究发现：结膜囊菌种主要由革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌构成, 其中革兰阳性球菌比例呈现逐年升高趋势, 革兰阴性杆菌比例比较
稳定;这些细菌对常用药物(如环丙沙星、氧氟沙星、妥布霉素) 的耐药性逐年增高。

因此，长期局部使用喹诺酮类抗生素必将引起结膜囊菌群失调。

本研究实验组，结膜囊常见葡萄球菌培养阳性率明显降低，而耐药的痤疮丙酸杆菌、绿脓杆菌及酵母菌阳性升高。

并且局部角膜溃疡刮片显示：原本非感染性角膜溃疡的均可检出真菌孢子及少量革兰阴性杆菌，呈现与结膜菌群变化相一致的趋向。

这提示我们：(1)广谱抗生素的使用，病原菌多转变为耐药的革兰阴性杆菌及酵母菌类。

因此，及时病原学检测及药敏试验，对于正确选择合适药物具有重要意义。

(2)对于迁延不愈的角膜溃疡，尽管结膜囊寄生菌成为潜在的病原菌，但是否需要长期广谱抗生素应用预防感染值得商讨。

总之，长期局部使用广谱抗生素，导致结膜囊革兰阴性杆菌及酵母菌类培养阳性率
增高，葡萄球菌培养阳性率降低。

而这种动态平衡的异常对于其他耐药菌或酵母菌的生长繁殖的影响及机制尚需进一步观察研究。

【相关文献】
[1] 曾树森，吴晓梅．正常结膜囊细菌的研究．国际眼科杂志, 2006，6:854-856.
[2] 李霞.成人结膜囊细菌培养198例分析. 中国临床医生杂志, 2008,11:36-37.
[3] 王建英. 角膜真菌病的诊断与综合治疗. 眼科新进展, 1999,19:201-202.
[4] McNatt J, Allen SD, Wilson LA, et al. Anaerobic flora of the normal human conjunctival sac. Arch Ophthalmol，1978，96:1448-50.
[5] 张小平, 叶剑. 13年中国人结膜囊细菌培养结果文献回顾与相关调查因素的Meta 分析. 中国实用眼科杂志, 2005,23:428-431.
[6] Graham JE, Moore JE, Jiru X, et al. Ocular pathogen or commensal: a PCR-based study of surface bacterial flora in normal and dry eyes. Invest Ophthalmol Vis Sci，2007，48:5616-23.
[7] Segal E, Romano A, Eylan E, et al. Fungal flora of the normal conjunctival sac. Mykosen，1977，20:9-14.
[8] Sehgal SC, Dhawan S, Chhiber S, et al. Frequency and significance of fungal isolations from conjunctival sac and their role in ocular infections. Mycopathologia，1981，73:17-9.
[9] 中华医学会眼科学分会白内障和人工晶状体学组．关于白内障围手术期预防感染措施规范化的专家建议( 2013 年)．中华眼科杂志,2013,49:76-78．
[10] Park SH, Lim JA, Choi JS, et al. The resistance patterns of normal ocular bacterial flora to 4 fluoroquinolone antibiotics. Cornea，2009，28:68-72.
[11] 李燕, 杨俊, 麦丹,等. 不同冲洗液对结膜囊细菌清除率的研究. 中国医学创新, 2014,11:109-111.
[12] 孙士营，翟华蕾，谢立信. 白内障术前结膜囊细菌培养结果及药敏变化. 中国实用眼科杂志，2005,23:509-513。