氯霉素含量的测定
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O O2 N H HN
H
Cl
Cl OH
HO
H
氯霉素的介绍
合霉素（Syntomycin）
• 是Chloramphenicol的外消旋体， • 疗效为Chloramphenicol的一半。
NO2 NO2
HO H
C1 C2
H NHCOCHCl2 Cl2 CHCOHN
H
C1 C2
OH H
CH2 OH
CH2 OH
• 将电极浸入氯霉素溶液 中，轻轻摇匀，待读数 稳定后计数。 • 如此取氯霉素注射液的 样测5组数据，取平均 值，既为此氯霉素注射 液的PH值
氯霉素注射液PH值和含量检测
注意事项 •由于试样的PH值常伴随着 空气中的CO2等因素的改变 而改变，所以要分析及时。 •快速测样，快速清洗！ •测样时电极不能碰到容器壁
O
Cl
Cl
Cl
Fe
氯霉素注射液PH值和含量检测
临床应用
Chloramphenicol对革兰阴性及阳性细菌都有抑 制作用，但对前者的效力强于后者。 用以治疗伤寒、副伤寒、斑疹伤寒等。其他如对 百日咳、砂眼、细菌性痢疾及尿道感染等也有疗 效。 但若长期和多次应用可损害骨髓的造血功能，引 起再生障上直接读出样品中氯霉素的含量。 （多次测量，取平均值，氯霉素注 射液的氯霉素最终含量）对比国标 即可知此产品合不合格
氯霉素注射液PH值和含量检测
文献：1.谢明芳 何幼鸾-无机分析化学 武汉大学出版社[M]第七章159页
2.赵艳霞 段怡平-生物药物仪器分析[M]项目一4页 3.中国药典1985年版二部574页 4.中国药典1985年版二部附录33页
O O2 N H HN H Cl
Cl OH
HO
H
氯霉素的介绍
结构特点
• Chloramphenicol的化学结构中含有对硝 基苯基、丙二醇及二氯乙酰氨基，后者 与抗菌活性有关
O O2 N H HN
H
Cl
Cl OH
HO
H
氯霉素的介绍
结构特点
• Chloramphenicol的化学结构中含有对硝 基苯基、丙二醇及二氯乙酰氨基，后者 与抗菌活性有关
结束语：
注意抗生素的应用，健康将 与你伴随！
氯霉素注射液PH值和含量检测
氯霉素的介绍
性状
• 白色或微带黄绿色的针状、长片状结晶或结晶 性粉末，味苦；其mp.149~152℃。 • 本品在甲醇、乙醇、丙酮或丙二醇中易溶，水 中微溶。 • 本品在无水乙醇中呈右旋性，比旋度 +18.5~+21.5°；在醋酸乙酯中呈左旋性，比 旋度-25.5。
氯霉素的介绍
稳定性
• 本品性质稳定，能耐热，在干燥状态下 可保持抗菌活性5年以上， • 水溶液可冷藏几个月，煮沸5小时对抗菌 活性亦无影响。在中性、弱酸性 （pH4.5~7.5）较稳定，
氯霉素注射液PH值和含量检测
仪器分析报告
作者：袁伟涛 杨金玲 朱林 辉 涂金玲 邹瑶
氯霉素注射液PH值和含量检测
氯霉素的抗菌效果虽然很好，但它的副作用很大，1999年9月13日中华人 民共和国农业部发布了《动物性食品中兽药最高残留限量》的通知，规定 了氯霉素在所有食品动物的可食用组织中不得检出。2002年3月15日，被 我国农业部关于发布《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》列为禁止使 用的抗生素。2002年1月，美国食品与药品管理局（FDA）公布了禁止在进 口动物源性食品中使用11（氯霉素、克伦特罗、已烯雌酚、二甲硝咪唑、 其他硝基咪唑类、异烟酰咪唑、呋喃唑酮、呋喃西林、磺胺类药、弗乙酰 苯酮和糖肽）种药物，氯霉素列为首位。 继美国之后，2002年3月中旬，日本对中国的动物源性食品批批检测11 种药物残留物质，其种类和最高限量分别是：氯霉素（0.05ppm）、磺胺 甲基嘧（0.02ppm）、磺胺二甲基嘧啶（0.01ppm）、磺胺-6-甲氧嘧啶 （0.03ppm）、碘胺二甲氧嘧啶（0.04ppm）、磺胺喹恶啉（0.05ppm）、 恶喹酸（喹菌酮0.05ppm）、乙胺嘧啶（0.05ppm）、基夫拉松（别拉松 0.1ppm）、尼卡巴嗪（0.02ppm）和其它抗生素。
H
Cl
Cl OH
HO
H
氯霉素的介绍
结构和化学名
• D-苏式-（-）-N-[a-（羟基甲基）-b-羟基对硝 基苯乙基-2，2-二氯乙酰胺 • （D-Threo-（-）-N-[a-（hydroxymethyl）-bhydroxy-p-nitrophenethyl-2，2-dichloro acetamine]）。
O2 N
H2NHN
H NH2 OH H OH HIO4
O2 N O
O2 N
NO2
O2N
NO2 N N H
NO2
p-nitrophenyl-2aminopropan-1,3-diol
p-nitrobenzaldchyde
氯霉素的介绍
鉴别反应
• 硝基经氯化钙和锌粉还原成羟胺衍生物，在醋酸钠存 在下与苯甲酰氯进行苯甲酰化，再在弱酸性溶液中与 高铁离子生成紫红色的络合物。
O O2 N H H HN Cl OH OH H H O Cl Zn, HCl HO H N H NH Cl OH OH 羟胺衍生物 Chloramphenicol Hydroxyamine O N O HO H H NH Cl OH OH FeCl3 O HO H H O Cl N H NH Cl OH OH 3 H H
•记下最大波长下，标准 溶液的吸光度。
•在278nm波长下测出注 射液样品的吸光度 •根据朗伯-比尔定律： A=KCL 即可以得出氯霉素注射中 氯霉素的含量
含 量
？ 已 知
标准液 注射 吸光度 液吸 已知 光度 已知
吸光度
氯霉素注射液PH值和含量检测
也可直接将754紫外分光光度仪转
换为含量测定模式。
氯霉素注射液PH值和含量检测
仪器选用754型分光光度仪
取氯霉标准溶液制定氯霉素溶液吸
收曲线，找出氯霉素的最大吸收波 长。（并在此波长下测氯霉素的含 量）
氯霉素注射液PH值和含量检测
取样品，标准溶液各约50ml ，加1 ％氯 化钙溶液150ml 与锌粉2.5g，置水浴上 加热 10分钟，倾取上清液，加苯甲酰氯 约5ml,立即强力振摇1 分钟，加三氯化 铁试液 25 ml与氯仿100ml ，振摇，水 层显紫红色。 40%乙二醇溶液50ml加如上等量的试剂 显色
氯霉素注射液PH值和含量检测
取少量的氯霉素注射液用PH试纸初步
判断其酸碱性若为酸性则用PH5.5的
缓冲溶液再进行定位，偏碱性则用PH 为7.2的缓冲溶液再进行定位
氯霉素注射液PH值和含量检测
再取适量的氯 霉素注射液于 洁净干燥的烧 杯中
氯霉素注射液PH值和含量检测
• 用无CO2的H2O淋洗电 极，并用滤纸吸干再用 待测液冲洗电极。
氯霉素注射液PH值和含量检测
氯霉素含量测定原理：〈1〉
〈2〉再用紫外分光光度法测其含 量
氯霉素注射液PH值和含量检测
氯霉素标准溶液的配制 •准确称取氯霉素标准品0.05g,用丙二 醇溶液40%溶解至100ml,配成浓度为 500微克/ml的标准储备液. •或找到已知氯霉素含量的氯霉素注射 液作为标准液
氯霉素注射液PH值和含量检测
选用0.1mol/L的乙酸和乙酸钠
可由上式得出V乙酸钠：V乙酸=1.77827 从而可以得出PH为5.5的标准缓冲溶液
同理可得
PH为6.8和7.2的缓冲溶液
氯霉素注射液PH值和含量检测
PH计的校正 1. 预热：开电源，预热30分 钟，连接电极有读数开关 开放的情况下调0。 2. 定位：由产品说明书知注 射液的PH为5.0-7.5，将电 极浸入PH为6.8的缓冲溶 液中，轻轻摇匀，待读数 稳定后，调定位旋扭使其 读数为6.8，重复2~3次
氯霉素注射液PH值和含量检测
氯霉素注射液PH值和含量检测
两点校正法 两种缓冲溶液的配制 •PH=5.5的HAc-NaAc •PH=6.8的HAc-NaAc •PH=7.2的HAc-NaAc
氯霉素注射液PH值和含量检测
缓冲溶液配制原理 •对于弱酸共轭碱的PH值可由下试可知 •PH=pKa+lgc（碱）/c（酸） 5.5=4.75+lgc（Ac）/c（HAc） c（Ac）/c（HAc）=1.77827
氯 霉 素 注 射 液 PH 值 的 测 定
pH值 应为5.0～7.5 （中国药典1985年版二部附录33页）
氯霉素注射液PH值测定方案
•用PH计测定PH值
•Ph计的原理：是将一支电极与被测物质活度有 关的电极（称指示电极）和另一支电位已知且保 持恒定的电极（称参比电极）插入待测溶液中组 成一个化学电池，在零电流的条件下，通过测量 电池电动势，进而根据能斯特求出待测液ph值。
氯霉素注射液PH值和含量检测
氯霉素含量测定步骤
•找出氯霉素的最大吸收波 长：：取上述40%的乙二醇 溶液作空白对照，上述 500 微克/ml的标准储备液适量于 吸收池中，不断的改变光的 波长，记下吸光度和波长， 得出曲线图 •氯霉素的最大吸收波长为 278nm
氯霉素注射液PH值和含量检测
配制不同含量的标准溶液求下 图以减小误差
氯霉素的介绍
氯霉素注射液
PH值的检测
氯霉素含量检测
氯霉素的介绍
简介
• 氯霉素是1947年由委内瑞拉链霉菌 Streptomyces venezuelae培养滤液中得 到。 • 确立分子结构后次年即用化学方法合成， 并应用于临床。
氯霉素的介绍
氯霉素
• Chloramphenicol
O O2N H HN
氯霉素的介绍
水解性
• 在强碱性（pH9以上）或强酸性（pH2以下） 溶液中，都可引起水解。
O O2 N O O2 N H H HN Cl OH OH H
+
H
OH
H H
HN OH OH
H
OH Cl
-
OH
O2 N
H NH2 OH H OH
氯霉素的介绍
鉴别反应
• 酸水解后产物与过碘酸作用，氧化生成对硝基 苯甲醛；再与2，4-硝基苯肼缩合，生成苯腙。
氯霉素注射液PH值和含量检测
临床应用
Chloramphenicol对革兰阴性及阳性细菌都有抑 制作用，但对前者的效力强于后者。 用以治疗伤寒、副伤寒、斑疹伤寒等。其他如对 百日咳、砂眼、细菌性痢疾及尿道感染等也有疗 效。 但若长期和多次应用可损害骨髓的造血功能，引 起再生障碍性贫血。
氯霉素注射液PH值和含量检测
氯霉素注射液PH值和含量检测
氯霉素：氯霉素可抑制骨髓造血细胞的功 能，引起宝宝红细胞、白细胞、血小板减 少，贫血。另外，由于乳儿的肝、肾功能 发育不完全，从乳汁中摄入的氯霉素不能 很好地经肝脏代谢、肾脏排泄而导致中毒， 可引起婴儿拒食、呕吐、呼吸不规则、皮 肤青紫（灰婴综合征）等。
氯霉素注射液PH值和含量检测
H
Cl
Cl OH
HO
H
氯霉素的介绍
合霉素（Syntomycin）
• 是Chloramphenicol的外消旋体， • 疗效为Chloramphenicol的一半。
NO2 NO2
HO H
C1 C2
H NHCOCHCl2 Cl2 CHCOHN
H
C1 C2
OH H
CH2 OH
CH2 OH
• 将电极浸入氯霉素溶液 中，轻轻摇匀，待读数 稳定后计数。 • 如此取氯霉素注射液的 样测5组数据，取平均 值，既为此氯霉素注射 液的PH值
氯霉素注射液PH值和含量检测
注意事项 •由于试样的PH值常伴随着 空气中的CO2等因素的改变 而改变，所以要分析及时。 •快速测样，快速清洗！ •测样时电极不能碰到容器壁
O
Cl
Cl
Cl
Fe
氯霉素注射液PH值和含量检测
临床应用
Chloramphenicol对革兰阴性及阳性细菌都有抑 制作用，但对前者的效力强于后者。 用以治疗伤寒、副伤寒、斑疹伤寒等。其他如对 百日咳、砂眼、细菌性痢疾及尿道感染等也有疗 效。 但若长期和多次应用可损害骨髓的造血功能，引 起再生障上直接读出样品中氯霉素的含量。 （多次测量，取平均值，氯霉素注 射液的氯霉素最终含量）对比国标 即可知此产品合不合格
氯霉素注射液PH值和含量检测
文献：1.谢明芳 何幼鸾-无机分析化学 武汉大学出版社[M]第七章159页
2.赵艳霞 段怡平-生物药物仪器分析[M]项目一4页 3.中国药典1985年版二部574页 4.中国药典1985年版二部附录33页
O O2 N H HN H Cl
Cl OH
HO
H
氯霉素的介绍
结构特点
• Chloramphenicol的化学结构中含有对硝 基苯基、丙二醇及二氯乙酰氨基，后者 与抗菌活性有关
O O2 N H HN
H
Cl
Cl OH
HO
H
氯霉素的介绍
结构特点
• Chloramphenicol的化学结构中含有对硝 基苯基、丙二醇及二氯乙酰氨基，后者 与抗菌活性有关
结束语：
注意抗生素的应用，健康将 与你伴随！
氯霉素注射液PH值和含量检测
氯霉素的介绍
性状
• 白色或微带黄绿色的针状、长片状结晶或结晶 性粉末，味苦；其mp.149~152℃。 • 本品在甲醇、乙醇、丙酮或丙二醇中易溶，水 中微溶。 • 本品在无水乙醇中呈右旋性，比旋度 +18.5~+21.5°；在醋酸乙酯中呈左旋性，比 旋度-25.5。
氯霉素的介绍
稳定性
• 本品性质稳定，能耐热，在干燥状态下 可保持抗菌活性5年以上， • 水溶液可冷藏几个月，煮沸5小时对抗菌 活性亦无影响。在中性、弱酸性 （pH4.5~7.5）较稳定，
氯霉素注射液PH值和含量检测
仪器分析报告
作者：袁伟涛 杨金玲 朱林 辉 涂金玲 邹瑶
氯霉素注射液PH值和含量检测
氯霉素的抗菌效果虽然很好，但它的副作用很大，1999年9月13日中华人 民共和国农业部发布了《动物性食品中兽药最高残留限量》的通知，规定 了氯霉素在所有食品动物的可食用组织中不得检出。2002年3月15日，被 我国农业部关于发布《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》列为禁止使 用的抗生素。2002年1月，美国食品与药品管理局（FDA）公布了禁止在进 口动物源性食品中使用11（氯霉素、克伦特罗、已烯雌酚、二甲硝咪唑、 其他硝基咪唑类、异烟酰咪唑、呋喃唑酮、呋喃西林、磺胺类药、弗乙酰 苯酮和糖肽）种药物，氯霉素列为首位。 继美国之后，2002年3月中旬，日本对中国的动物源性食品批批检测11 种药物残留物质，其种类和最高限量分别是：氯霉素（0.05ppm）、磺胺 甲基嘧（0.02ppm）、磺胺二甲基嘧啶（0.01ppm）、磺胺-6-甲氧嘧啶 （0.03ppm）、碘胺二甲氧嘧啶（0.04ppm）、磺胺喹恶啉（0.05ppm）、 恶喹酸（喹菌酮0.05ppm）、乙胺嘧啶（0.05ppm）、基夫拉松（别拉松 0.1ppm）、尼卡巴嗪（0.02ppm）和其它抗生素。
H
Cl
Cl OH
HO
H
氯霉素的介绍
结构和化学名
• D-苏式-（-）-N-[a-（羟基甲基）-b-羟基对硝 基苯乙基-2，2-二氯乙酰胺 • （D-Threo-（-）-N-[a-（hydroxymethyl）-bhydroxy-p-nitrophenethyl-2，2-dichloro acetamine]）。
O2 N
H2NHN
H NH2 OH H OH HIO4
O2 N O
O2 N
NO2
O2N
NO2 N N H
NO2
p-nitrophenyl-2aminopropan-1,3-diol
p-nitrobenzaldchyde
氯霉素的介绍
鉴别反应
• 硝基经氯化钙和锌粉还原成羟胺衍生物，在醋酸钠存 在下与苯甲酰氯进行苯甲酰化，再在弱酸性溶液中与 高铁离子生成紫红色的络合物。
O O2 N H H HN Cl OH OH H H O Cl Zn, HCl HO H N H NH Cl OH OH 羟胺衍生物 Chloramphenicol Hydroxyamine O N O HO H H NH Cl OH OH FeCl3 O HO H H O Cl N H NH Cl OH OH 3 H H
•记下最大波长下，标准 溶液的吸光度。
•在278nm波长下测出注 射液样品的吸光度 •根据朗伯-比尔定律： A=KCL 即可以得出氯霉素注射中 氯霉素的含量
含 量
？ 已 知
标准液 注射 吸光度 液吸 已知 光度 已知
吸光度
氯霉素注射液PH值和含量检测
也可直接将754紫外分光光度仪转
换为含量测定模式。
氯霉素注射液PH值和含量检测
仪器选用754型分光光度仪
取氯霉标准溶液制定氯霉素溶液吸
收曲线，找出氯霉素的最大吸收波 长。（并在此波长下测氯霉素的含 量）
氯霉素注射液PH值和含量检测
取样品，标准溶液各约50ml ，加1 ％氯 化钙溶液150ml 与锌粉2.5g，置水浴上 加热 10分钟，倾取上清液，加苯甲酰氯 约5ml,立即强力振摇1 分钟，加三氯化 铁试液 25 ml与氯仿100ml ，振摇，水 层显紫红色。 40%乙二醇溶液50ml加如上等量的试剂 显色
氯霉素注射液PH值和含量检测
取少量的氯霉素注射液用PH试纸初步
判断其酸碱性若为酸性则用PH5.5的
缓冲溶液再进行定位，偏碱性则用PH 为7.2的缓冲溶液再进行定位
氯霉素注射液PH值和含量检测
再取适量的氯 霉素注射液于 洁净干燥的烧 杯中
氯霉素注射液PH值和含量检测
• 用无CO2的H2O淋洗电 极，并用滤纸吸干再用 待测液冲洗电极。
氯霉素注射液PH值和含量检测
氯霉素含量测定原理：〈1〉
〈2〉再用紫外分光光度法测其含 量
氯霉素注射液PH值和含量检测
氯霉素标准溶液的配制 •准确称取氯霉素标准品0.05g,用丙二 醇溶液40%溶解至100ml,配成浓度为 500微克/ml的标准储备液. •或找到已知氯霉素含量的氯霉素注射 液作为标准液
氯霉素注射液PH值和含量检测
选用0.1mol/L的乙酸和乙酸钠
可由上式得出V乙酸钠：V乙酸=1.77827 从而可以得出PH为5.5的标准缓冲溶液
同理可得
PH为6.8和7.2的缓冲溶液
氯霉素注射液PH值和含量检测
PH计的校正 1. 预热：开电源，预热30分 钟，连接电极有读数开关 开放的情况下调0。 2. 定位：由产品说明书知注 射液的PH为5.0-7.5，将电 极浸入PH为6.8的缓冲溶 液中，轻轻摇匀，待读数 稳定后，调定位旋扭使其 读数为6.8，重复2~3次
氯霉素注射液PH值和含量检测
氯霉素注射液PH值和含量检测
两点校正法 两种缓冲溶液的配制 •PH=5.5的HAc-NaAc •PH=6.8的HAc-NaAc •PH=7.2的HAc-NaAc
氯霉素注射液PH值和含量检测
缓冲溶液配制原理 •对于弱酸共轭碱的PH值可由下试可知 •PH=pKa+lgc（碱）/c（酸） 5.5=4.75+lgc（Ac）/c（HAc） c（Ac）/c（HAc）=1.77827
氯 霉 素 注 射 液 PH 值 的 测 定
pH值 应为5.0～7.5 （中国药典1985年版二部附录33页）
氯霉素注射液PH值测定方案
•用PH计测定PH值
•Ph计的原理：是将一支电极与被测物质活度有 关的电极（称指示电极）和另一支电位已知且保 持恒定的电极（称参比电极）插入待测溶液中组 成一个化学电池，在零电流的条件下，通过测量 电池电动势，进而根据能斯特求出待测液ph值。
氯霉素注射液PH值和含量检测
氯霉素含量测定步骤
•找出氯霉素的最大吸收波 长：：取上述40%的乙二醇 溶液作空白对照，上述 500 微克/ml的标准储备液适量于 吸收池中，不断的改变光的 波长，记下吸光度和波长， 得出曲线图 •氯霉素的最大吸收波长为 278nm
氯霉素注射液PH值和含量检测
配制不同含量的标准溶液求下 图以减小误差
氯霉素的介绍
氯霉素注射液
PH值的检测
氯霉素含量检测
氯霉素的介绍
简介
• 氯霉素是1947年由委内瑞拉链霉菌 Streptomyces venezuelae培养滤液中得 到。 • 确立分子结构后次年即用化学方法合成， 并应用于临床。
氯霉素的介绍
氯霉素
• Chloramphenicol
O O2N H HN
氯霉素的介绍
水解性
• 在强碱性（pH9以上）或强酸性（pH2以下） 溶液中，都可引起水解。
O O2 N O O2 N H H HN Cl OH OH H
+
H
OH
H H
HN OH OH
H
OH Cl
-
OH
O2 N
H NH2 OH H OH
氯霉素的介绍
鉴别反应
• 酸水解后产物与过碘酸作用，氧化生成对硝基 苯甲醛；再与2，4-硝基苯肼缩合，生成苯腙。
氯霉素注射液PH值和含量检测
临床应用
Chloramphenicol对革兰阴性及阳性细菌都有抑 制作用，但对前者的效力强于后者。 用以治疗伤寒、副伤寒、斑疹伤寒等。其他如对 百日咳、砂眼、细菌性痢疾及尿道感染等也有疗 效。 但若长期和多次应用可损害骨髓的造血功能，引 起再生障碍性贫血。
氯霉素注射液PH值和含量检测
氯霉素注射液PH值和含量检测
氯霉素：氯霉素可抑制骨髓造血细胞的功 能，引起宝宝红细胞、白细胞、血小板减 少，贫血。另外，由于乳儿的肝、肾功能 发育不完全，从乳汁中摄入的氯霉素不能 很好地经肝脏代谢、肾脏排泄而导致中毒， 可引起婴儿拒食、呕吐、呼吸不规则、皮 肤青紫（灰婴综合征）等。
氯霉素注射液PH值和含量检测