葡萄糖淀粉酶的活力测定

葡萄糖淀粉酶的活力测定
一．原理：葡萄糖淀粉酶（糖化酶）在一定的条件下能水解生成葡萄糖，葡萄糖的醛基被弱氧化剂次碘酸钠氧化。

过量的碘用硫代硫酸钠滴定。

从碘的减少量计算葡萄糖的量，从而计算酶活力。

二．试剂与材料：
1.2%可溶性淀粉液：称取可溶性淀粉2g，以少许蒸馏水调匀，侵入80ml的沸水中，继续煮至透明状，冷却后，加水定容至100ml
2.PH4.6，0.1mol/L醋酸缓冲液：0.1mol/L苏酸溶液与0.1mol/L醋酸钠溶液等体积混合。

3.0.1mol/L碘液：称取36g碘化钾，溶于100ml蒸馏水中，加入14g碘，逐渐溶解，加3滴盐酸，定容至1000ml
4.0.1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g NAOH，用水溶解，定容至1000ml
5.1mol/L硫酸溶液。

量取56ml浓硫酸，倒入适量水中，用水稀释至1000ml
6.0.05mol/L硫代硫酸钠溶液：称取25g硫代硫酸钠，0.2g碳酸钠，溶于1000ml煮沸冷却后的水中，存于棕色瓶。

放置一周后，用0.1mol/L重络酸钾滴定。

7.0.5%淀粉指示剂：称取0.5g可溶性淀粉用少量水调匀。

倒入80ml沸水中，继续煮至透明，冷却后，定溶100ml
三．操作方法：
1.吸取2%可溶性淀粉液10ml，加入PH4.6醋酸缓冲液5ml，混匀后于40℃水浴中预热10min
2.加入酶液1ml，于40℃，反应10min。

反应结束时，沸水中煮10min，以终止酶反应。

3.吸取上述反应液5ml于碘量瓶中，加入0.1mol/L碘液5ml及0.1mol/L NAOH溶液5ml，混匀，于室温下暗处放置15min，加入2mol/L硫酸酸化。

4.以0.5%可溶性淀粉液作为指示剂，用0.05mol/L硫代硫酸钠滴定至蓝色消失为终点。

记录0.05mol/L硫代硫酸钠消耗的毫升数（A），以及空白试验消耗的硫代硫酸钠毫升数。

四．结果计算：
在上述条件下，每小时催化淀粉水解生成1mg葡萄糖的酶量定义为一个酶力单位。

酶活力=（B-A）×c×90.05×16/5×60/10
式中，B=空白试验消耗的硫代硫酸钠的毫升数
A=测定时消耗硫代硫酸钠的毫升数
c=硫代硫酸钠的摩尔数
90.05为葡萄糖的毫克当量
硫代硫酸钠溶液的标定。

准确称取0.1g重络酸钾，放入500ml碘量瓶中，加20ml水溶解，加1.8g 碘化钾，15ml2mol/L盐酸溶液，混匀，盖好，暗处反应10min，加约200ml水稀
释，立即用0.05mol/L 硫代硫酸钠溶液滴定至浅黄色，加约1ml 5%可溶性淀粉指示剂，继续滴定至蓝色消失，溶液呈绿色。

计算：
322o s Nna ={W/（M/6）×v} ×1000
式中：
W=称取的重络酸钾重量
V=消耗0.05mol/L 硫代硫酸钠体积
M/6=重络酸钾的摩尔量。