地衣芽孢杆菌缓解蛋鸡热应激的效果及机理与研究
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ＤＧＧＥ ｂａｎｄ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｏｆ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｏｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｖ３ ｒｅｇｉｏｎ ｓｈｏｗｅｄ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ ｗｉｔｈｉｎ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｌｏｗ．Ｈｅａｔ ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｄｕｃｅｓ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ＤＧＧＥ ｂａｎｄｓ ａｎｄ Ｓｈａｎｎｏｎ ｉｎｄｅｘ ｆｏｒ ｉｌｅｕｍ ａｎｄ
ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏＢ，Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｐｕｌｌｏｒｕｍ，ａｎｄ Ｓｔａｐｈ）７ｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ｏｎ ａｇａｒ ｐｌａｔｅ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｔｏ ｍｕｃｉｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．
Ｅｘｐ．２ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｏｎ ｅｇｇ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ｅｇｇ ｑｕａｌｉｔｙ，ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ｈｏｒｍｏｎｅ
试验二地衣芽孢杆菌对热应激蛋鸡生产性能、蛋品质和血液指标的影响
热应激降低蛋鸡日产蛋率（２～９ ｄ）、平均产蛋率和采食量；降低鸡蛋蛋壳强度、蛋壳厚度、 蛋白高度和哈氏单位；提高蛋鸡血清ＩＬ．１、ＴＮＦ－ａ、内毒素、ＡＣＴＨ和ＣＯＲＴ水平；降低了ＦＳＨ、 ＬＨ和Ｐ水平（Ｐ＜０．０５）。日粮添加１０００ ｍｇ／ｋｇ地农芽孢杆菌能提高热应激蛋鸡的日产蛋率（２、 ５、６和９ ｄ）、平均产蛋率、采食最及鸡蛋蛋壳强度；降低血清ｌＬ．１、ＴＮＦ．Ｇｔ、内毒素、ＡＣＴＨ和 ＣＯＲＴ水平，提高ＦＳＨ和Ｐ水平（Ｐ＜０．０５）。
ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉＳ ｗｅｒｅ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ａｎｄ ｔｈｅｎ．ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｔＯ ａｓｓａｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｏｓｅｓ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｏｎ ｔｈｅ ｅｇｇ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ｅｇｇ ｑｕａｌｉｔｙ，ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ｉｎｄｉｃｅｓ
Ｔｈｅ ａｉｍ ｏｆ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｗａｓ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ ａｃｉｄ ａｎｄ ｂｉｌｅ ｓａｌｔ，
ａｎｄ ａｄｈｅｓｉｖｅ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｔｈｅ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｊ ｃａｍｅ ｉｎｔｏ ｌｏｇａｒｉｔｈｍｉｃ ｐｈａｓｅ ｆｒｏｍ １ ２ ｈ ａｎｄ ｉｔ ｌａｓｔｅｄ ｔｏ ａｂｏｕｔ ２２ ｈ．ｐＨ ｏｆ ｔｈｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ
ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｌｌｅｖｉａｔｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ｈｅａｔ ｓｔｒｅｓｓ ｓｕｆｆｅｒｅｄ ｂｙ ｈｅｎｓ．
Ｅｘｐ．１ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ
试验四地衣芽孢杆菌对热应激蛋鸡肠道微生物区系的影响
肠道微生物Ｖ３区ＰＣＲ产物的ＤＧＧＥ图谱显示各组条带组内相似度较低。热应激降低了回、 盲肠的ＤＧＧＥ条带数、香浓指数、盲肠乳杆菌和双歧杆菌浓度，增加回、盲肠大肠杆菌浓度（Ｐ＜ ０．０５）。日粮添加１０００ ｍｇ／ｋｇ地农芽孢杆菌增加热应激蛋鸡卣肠ＤＧＧＥ的条带数、香浓指数和乳 杆菌浓度（Ｐ＜０．０５）。５个共有和特异性条带分属于Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．、
ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｈｅａｔ－ｓｔｒｅｓｓｅｄ ｌａｙｉｎｇ ｈｅｎｓ
Ｈｅａｔ ｓｔｒｅｓｓ ｄｅｐｒｅｓｓｅｄ ｄａｉｌｙ ｅｇｇ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ（２～９ ｄ），ａｖｅｒａｇｅ ｅｇｇ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｅｅｄ ｉｎｔａｋｅ ｏｆ ｈｅｎｓ，ｌｏｗｅｒｅｄ ｅｇｇ ｓｈｅｌｌ ｓｔｒｅｎｇｔｈ，ｓｈｅｌｌ ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ，ａｌｂｕｍｅｎ ｈｅｉｇｈｔ，ａｎｄ Ｈａｕｇｈ ｕｎｉｔ，ｌｏｗｅｒｅｄ ｓｅｒｕｍ ＦＳＨ， ＬＨ，ａｎｄ Ｐ ｌｅｖｅｌｓ，ｂｏｏｓｔｅｄ ＡＣＴＨ ａｎｄ ＣＯＲＴ ｌｅｖｅｌｓ，ｅｌｅｖａｔｅｄ ｓｅｒｕｍ ＩＬ－ｉ，ＴＮＦ－ｃｔ，ａｎｄ ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｌａｙｉｎｇ ｈｅｎｓ．１ ０００ ｍｇ／ｋｇ ｄｉｅｔａｒｙ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏ丌，ｌ西ｅｎｈａｎｃｅｄ ｄａｉｌｙ ｅｇｇ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ（２，５，６，ａｎｄ ９ ｄ），ａｖｅｒａｇｅ ｅｇｇ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｅｅｄ ｉｎｔａｋｅ ｏｆ ｈｅａｔ－ｔｒｅａｔｅｄ ｈｅｎｓ，ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｅｇｇ ｓｈｅｌｌ ｓｔｒｅｎｇｔｈ， ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｓｅｒｕｍ ＩＬ一１，ＴＮＦ－ｃｔ，ａｎｄ ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ ｌｅｖｅｌｓ，ｂｒｉｎｇ ｄｏｗｎ ｓｅｒｕｍ ＡＣＴＨ ａｎｄ ＣＯＲＴ ｌｅｖｅｌｓ，ａｎｄ ｒａｉｓｅ ＦＳＨ ａｎｄ Ｐ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆｈｅａｔ．ｓｔｒｅｓｓｅｄ ｈｅｎｓ（Ｐ＜０．０５）．
试验三地衣芽孢杆菌对热应激蛋鸡肠道屏障功能的影响
热应激损伤蛋鸡肠道绒毛结构，降低回、盲肠绒毛高度和Ｖ：Ｃ值，增加盲肠隐窝深度；降低 回、盲肠上皮内淋巴细胞数量和ｓｌｇｇ阳性面积，增加肥大细胞数量；短期热应激使盲肠杯状细 胞数量增加；长期则使之减少；热应激降低蛋鸡回、盲肠ｏｃｃｌｕｄｉｎｇ、ｃｌａｕｄｉｎ一门｝Ⅱ盲肠ＥＧＦｍＲＮＡ 的表达量。（Ｐ＜Ｏ．０５）。日粮添加１０００ ｍｇ／ｋｇ地农芽孢杆菌改善了热应激蛋鸡肠道绒毛结构，提 高回、盲肠绒毛高度和盲肠Ｖ：Ｃ。降低盲肠隐窝深度；提高回、盲肠上皮内淋巴细胞数最和ｓｌｇＡ 阳性面积，减少肥大细胞数量，稳定了杯状细胞数量；提高回、盲肠ｃｌａｕｄｉｎ．Ｊ和旨肠ＥＧＦｍＲＮＡ 的表达量（Ｐ＜０．０５）。
ｍｇ／ｋｇ ｄｉｅｔａｒｙ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｃｏｕｌｄ ｅｎｈａｎｃｅ ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｏｆ ｃｌａｕｄｉｎ－ｌ ｉｎ ｉｌｅｕｍ ａｎｄ ｃｅｃｕｍ，ａｎｄ ＥＧＦ ｉｎ ｃｅｃｕｍ（Ｐ＜０．０５）． Ｅｘｐ．４ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｏｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ ｏｆ ｈｅａｔ－ｓｔｒｅｓｓｅｄ ｌａｙｉｎｇ ｈｅｎｓ
ｂｒｏｔｈ ｄｅｃｌｉｎｅｄ ａｔ ｅａｒｌｉｅｒ ｓｔａｇｅ，ｂｕｔ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｌａｔｅｒ．Ｔｈｅ ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ ｏｘｙｇｅｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ
ｇｒａｄｕａｌｌｙ．Ａｆｔｅｒ ｂｅｉｎｇ ｓｕｂｊｅｃｔｅｄ ｔｏ ｐＨ ２ ｆｏｒ ３ ｈ，ｌｏｓｓ ｏｆ ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｗａｓ ２４％．Ｆｏｒ ｐＨ ３ ａｎｄ ４ ｆｏｒ ３ ｈ，ｔｈｅ ｌｏｓｓ Ｗａｓ ｌｅｓｓ ｔｈａｎ １ ０％．０．３％ｂｉｌｅ ｓａｌｔ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｉ，ｒｍｉｓ ｔＯ ８９．１％ａｆｔｅｒ ｗｏｒｋｉｎｇ ｆｏｒ ３ ｈ．Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｃｏｕｌｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ和Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ。 关键词：地农芽孢杆菌，蛋鸡，热应激，肠道，微生物区系
Ａｂｓｔｒａｃｔ
Ｔｈｉｓ ｔｈｅｓｉｓ ｉｎｃｌｕｄｅｄ ｆｏｕｒ ｐａｒｔｓ．Ｆｉｒｓｔｌｙ，ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｂａｃｉｌｌｕｓ
摘要
本论文共包括四个部分。首先通过体外试验研究了所选地农芽孢杆菌的生物学特性和Ｚｉ｛生特 性；然后通过生产试验研究了日粮添加不同剂量的该菌对热应激蛋鸡生产性能、蛋品质和血液指 标的影响，确定了最佳添加剂最；最后通过研究该茵对热应激蛋鸡肠道屏障功能和肠道微生物区 系的影响探讨了该菌缓解蛋鸡热应激作用的可能机制。
ｉｎ ｉｌｅｕｍ ａｎｄ ｃｅｃｕｍ，ａｎｄ ＥＧＦ ｉｎ ｃｅｃｕｍ（Ｐ＜０．０５）．１ ０００ ｍｇ／ｋｇ ｄｉｅｔａｒｙ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｃｏｕｌｄ
ｉｍｐｒｏｖｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｖｉｌｌｉ，ｅｎｈａｎｃｅ ｖｉｌｌｕｓ ｈｅｉｇｈｔ ｏｆ ｉｌｅｕｍ ａｎｄ ｃｅｃｕｍ ａｎｄ Ｖ：Ｃ ｏｆ ｃｅｃｕｍ， ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｃｒｙｐｔ ｄｅｐｔｈ ｏｆ ｃｅｃｕｍ，ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｌＥＬｓ ａｎｄ ａｒｅａ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｆｏｒ ｓｌｇＡ，ａｎｄ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｍａｓｔ ｃｅｌｌ ｎｕｍｂｅｒ ｉｎ ｉｌｅｕｍ ａｎｄ ｃｅｃｕｍ（Ｐ＜０．０５）．Ａｌｓｏ，ｉｔ ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ ｔｈｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｇｏｂｌｅｔ ｃｅｌｌｓ．１ ０００
Ｅｘｐ．３ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｏｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｂａｒｒｉｅｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅａｔ－ｓｔｒｅｓｓｅｄ ｌａｙｉｎｇ
ｈｅｎｓ
Ｈｅａｔ ｄａｍａｇｅｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｖｉｌｌｉ ｉｎ ｈｅｎｓ，ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｖｉｌｌｕｓ ｈｅｉｇｈｔ ａｎｄ Ｖ：Ｃ ｏｆ ｉｌｅｕｍ ａｎｄ ｃｅｃｕｍ，ｅｎｈａｎｃｅｄ ｃｒｙｐｔ ｄｅｐｔｈ ｏｆ ｃｅｃｕｍ，ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ＩＥＬｓ ａｎｄ ａｒｅａ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｆｏｒ ｓｌｇＡ，ａｎｄ
ｏｆ ｈｅａｔ－ｓｔｒｅｓｓｅｄ ｌａｙｉｎｇ ｈｅｎｓ．Ｓｏ，ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｄｏｓａｇｅ Ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ａｔ ｌａｓｔ，ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ
Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒＪ竹括ｏｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｂａｒｒｉｅｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ ｏｆ ｈｅａｔ·ｓｔｒｅｓｓｅｄ ｈｅｎｓ ｗａｓ ｅｖａｌｕａｔｅｄ
试验一地衣芽孢杆菌的生物学特性研究
本试验研究了所选地农芽孢杆菌的生长、耐酸和耐胆盐、抗菌及体外黏附特性。结果表明： 该菌从第１２ ｈ进入对数生长期，持续至２２ ｈ。发酵液ｐＨ值先卜降，后升高，溶氧浓度逐渐降低。 ｐＨ ２作用３ ｈ活性损失２４％，ｐＨ ３和４则小于１０％。０．３％胆盐作用３ ｈ后存活率为８９．１％。该菌 的发酵产物对大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的平板生长有明显抑制作用。该菌能 黏附到肠道枯蛋白并抑制上述■种病原菌的黏附。
ｃｅｃｕｍ，ｒｅｄｕｃｅｄ ｔｈｅ ｃｅｃａｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｄ Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ，ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ Ｅ．ｃｏｌｉ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｉｌｅｕｍ ａｎｄ ｃｅｃｕｍ（Ｐ＜０．０５）．Ｄｉｅｔ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｗｉｔｈ １ ０００ ｍｇ／ｌ（ｇ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ＤＧＧＥ ｂａｎｄｓ ａｎｄ Ｓｈａｎｎｏｎ ｉｎｄｅｘ ｆｏｒ ｃｅｃｕｍ，ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｉｎ ｃｅｃｕｍ ｏｆ ｌａｙｅｒｓ ｕｎｄｅｒ ｈｅａｔ ｓｔｒｅｓｓ（Ｐ＜０．０５）．Ｆｉｖｅ ｃｏｍｍｏｎ ｏｒ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｂａｎｄｓ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ ｔｏ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ，Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．，Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｉｌ，Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ，ａｎｄ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ，Ｌａｙｉｎｇ ｈｅｎ，Ｈｅａｔ ｓｔｒｅｓｓ，Ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ，Ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ
ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｍａｓｔ ｃｅｌｌ ｎｕｍｂｅｒ ｉｎ ｉｌｅｕｍ ａｎｄ ｃｅｃｕｍ．Ｓｈｏｒｔｓ ｓｔｒｅｓｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆｇｏｂｌｅｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ
பைடு நூலகம்
ｃｅｃｕｍ，ｗｈｉｌｅ ｌｏｎｇ ｓｔｒｅｓｓ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｉｔ．Ｈｅａｔ ｄｅｐｒｅｓｓｅｄ ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｏｆ ｏｃｃｌｕｄｉｎｇ ａｎｄ ｃｌａｕｄｉｎ—Ｊ
ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏＢ，Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｐｕｌｌｏｒｕｍ，ａｎｄ Ｓｔａｐｈ）７ｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ｏｎ ａｇａｒ ｐｌａｔｅ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｔｏ ｍｕｃｉｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．
Ｅｘｐ．２ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｏｎ ｅｇｇ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ｅｇｇ ｑｕａｌｉｔｙ，ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ｈｏｒｍｏｎｅ
试验二地衣芽孢杆菌对热应激蛋鸡生产性能、蛋品质和血液指标的影响
热应激降低蛋鸡日产蛋率（２～９ ｄ）、平均产蛋率和采食量；降低鸡蛋蛋壳强度、蛋壳厚度、 蛋白高度和哈氏单位；提高蛋鸡血清ＩＬ．１、ＴＮＦ－ａ、内毒素、ＡＣＴＨ和ＣＯＲＴ水平；降低了ＦＳＨ、 ＬＨ和Ｐ水平（Ｐ＜０．０５）。日粮添加１０００ ｍｇ／ｋｇ地农芽孢杆菌能提高热应激蛋鸡的日产蛋率（２、 ５、６和９ ｄ）、平均产蛋率、采食最及鸡蛋蛋壳强度；降低血清ｌＬ．１、ＴＮＦ．Ｇｔ、内毒素、ＡＣＴＨ和 ＣＯＲＴ水平，提高ＦＳＨ和Ｐ水平（Ｐ＜０．０５）。
ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉＳ ｗｅｒｅ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ａｎｄ ｔｈｅｎ．ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｔＯ ａｓｓａｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｏｓｅｓ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｏｎ ｔｈｅ ｅｇｇ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ｅｇｇ ｑｕａｌｉｔｙ，ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ｉｎｄｉｃｅｓ
Ｔｈｅ ａｉｍ ｏｆ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｗａｓ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ ａｃｉｄ ａｎｄ ｂｉｌｅ ｓａｌｔ，
ａｎｄ ａｄｈｅｓｉｖｅ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｔｈｅ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｊ ｃａｍｅ ｉｎｔｏ ｌｏｇａｒｉｔｈｍｉｃ ｐｈａｓｅ ｆｒｏｍ １ ２ ｈ ａｎｄ ｉｔ ｌａｓｔｅｄ ｔｏ ａｂｏｕｔ ２２ ｈ．ｐＨ ｏｆ ｔｈｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ
ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｌｌｅｖｉａｔｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ｈｅａｔ ｓｔｒｅｓｓ ｓｕｆｆｅｒｅｄ ｂｙ ｈｅｎｓ．
Ｅｘｐ．１ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ
试验四地衣芽孢杆菌对热应激蛋鸡肠道微生物区系的影响
肠道微生物Ｖ３区ＰＣＲ产物的ＤＧＧＥ图谱显示各组条带组内相似度较低。热应激降低了回、 盲肠的ＤＧＧＥ条带数、香浓指数、盲肠乳杆菌和双歧杆菌浓度，增加回、盲肠大肠杆菌浓度（Ｐ＜ ０．０５）。日粮添加１０００ ｍｇ／ｋｇ地农芽孢杆菌增加热应激蛋鸡卣肠ＤＧＧＥ的条带数、香浓指数和乳 杆菌浓度（Ｐ＜０．０５）。５个共有和特异性条带分属于Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．、
ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｈｅａｔ－ｓｔｒｅｓｓｅｄ ｌａｙｉｎｇ ｈｅｎｓ
Ｈｅａｔ ｓｔｒｅｓｓ ｄｅｐｒｅｓｓｅｄ ｄａｉｌｙ ｅｇｇ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ（２～９ ｄ），ａｖｅｒａｇｅ ｅｇｇ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｅｅｄ ｉｎｔａｋｅ ｏｆ ｈｅｎｓ，ｌｏｗｅｒｅｄ ｅｇｇ ｓｈｅｌｌ ｓｔｒｅｎｇｔｈ，ｓｈｅｌｌ ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ，ａｌｂｕｍｅｎ ｈｅｉｇｈｔ，ａｎｄ Ｈａｕｇｈ ｕｎｉｔ，ｌｏｗｅｒｅｄ ｓｅｒｕｍ ＦＳＨ， ＬＨ，ａｎｄ Ｐ ｌｅｖｅｌｓ，ｂｏｏｓｔｅｄ ＡＣＴＨ ａｎｄ ＣＯＲＴ ｌｅｖｅｌｓ，ｅｌｅｖａｔｅｄ ｓｅｒｕｍ ＩＬ－ｉ，ＴＮＦ－ｃｔ，ａｎｄ ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｌａｙｉｎｇ ｈｅｎｓ．１ ０００ ｍｇ／ｋｇ ｄｉｅｔａｒｙ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏ丌，ｌ西ｅｎｈａｎｃｅｄ ｄａｉｌｙ ｅｇｇ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ（２，５，６，ａｎｄ ９ ｄ），ａｖｅｒａｇｅ ｅｇｇ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｅｅｄ ｉｎｔａｋｅ ｏｆ ｈｅａｔ－ｔｒｅａｔｅｄ ｈｅｎｓ，ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｅｇｇ ｓｈｅｌｌ ｓｔｒｅｎｇｔｈ， ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｓｅｒｕｍ ＩＬ一１，ＴＮＦ－ｃｔ，ａｎｄ ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ ｌｅｖｅｌｓ，ｂｒｉｎｇ ｄｏｗｎ ｓｅｒｕｍ ＡＣＴＨ ａｎｄ ＣＯＲＴ ｌｅｖｅｌｓ，ａｎｄ ｒａｉｓｅ ＦＳＨ ａｎｄ Ｐ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆｈｅａｔ．ｓｔｒｅｓｓｅｄ ｈｅｎｓ（Ｐ＜０．０５）．
试验三地衣芽孢杆菌对热应激蛋鸡肠道屏障功能的影响
热应激损伤蛋鸡肠道绒毛结构，降低回、盲肠绒毛高度和Ｖ：Ｃ值，增加盲肠隐窝深度；降低 回、盲肠上皮内淋巴细胞数量和ｓｌｇｇ阳性面积，增加肥大细胞数量；短期热应激使盲肠杯状细 胞数量增加；长期则使之减少；热应激降低蛋鸡回、盲肠ｏｃｃｌｕｄｉｎｇ、ｃｌａｕｄｉｎ一门｝Ⅱ盲肠ＥＧＦｍＲＮＡ 的表达量。（Ｐ＜Ｏ．０５）。日粮添加１０００ ｍｇ／ｋｇ地农芽孢杆菌改善了热应激蛋鸡肠道绒毛结构，提 高回、盲肠绒毛高度和盲肠Ｖ：Ｃ。降低盲肠隐窝深度；提高回、盲肠上皮内淋巴细胞数最和ｓｌｇＡ 阳性面积，减少肥大细胞数量，稳定了杯状细胞数量；提高回、盲肠ｃｌａｕｄｉｎ．Ｊ和旨肠ＥＧＦｍＲＮＡ 的表达量（Ｐ＜０．０５）。
ｍｇ／ｋｇ ｄｉｅｔａｒｙ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｃｏｕｌｄ ｅｎｈａｎｃｅ ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｏｆ ｃｌａｕｄｉｎ－ｌ ｉｎ ｉｌｅｕｍ ａｎｄ ｃｅｃｕｍ，ａｎｄ ＥＧＦ ｉｎ ｃｅｃｕｍ（Ｐ＜０．０５）． Ｅｘｐ．４ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｏｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ ｏｆ ｈｅａｔ－ｓｔｒｅｓｓｅｄ ｌａｙｉｎｇ ｈｅｎｓ
ｂｒｏｔｈ ｄｅｃｌｉｎｅｄ ａｔ ｅａｒｌｉｅｒ ｓｔａｇｅ，ｂｕｔ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｌａｔｅｒ．Ｔｈｅ ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ ｏｘｙｇｅｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ
ｇｒａｄｕａｌｌｙ．Ａｆｔｅｒ ｂｅｉｎｇ ｓｕｂｊｅｃｔｅｄ ｔｏ ｐＨ ２ ｆｏｒ ３ ｈ，ｌｏｓｓ ｏｆ ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｗａｓ ２４％．Ｆｏｒ ｐＨ ３ ａｎｄ ４ ｆｏｒ ３ ｈ，ｔｈｅ ｌｏｓｓ Ｗａｓ ｌｅｓｓ ｔｈａｎ １ ０％．０．３％ｂｉｌｅ ｓａｌｔ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｉ，ｒｍｉｓ ｔＯ ８９．１％ａｆｔｅｒ ｗｏｒｋｉｎｇ ｆｏｒ ３ ｈ．Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｃｏｕｌｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ和Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ。 关键词：地农芽孢杆菌，蛋鸡，热应激，肠道，微生物区系
Ａｂｓｔｒａｃｔ
Ｔｈｉｓ ｔｈｅｓｉｓ ｉｎｃｌｕｄｅｄ ｆｏｕｒ ｐａｒｔｓ．Ｆｉｒｓｔｌｙ，ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｂａｃｉｌｌｕｓ
摘要
本论文共包括四个部分。首先通过体外试验研究了所选地农芽孢杆菌的生物学特性和Ｚｉ｛生特 性；然后通过生产试验研究了日粮添加不同剂量的该菌对热应激蛋鸡生产性能、蛋品质和血液指 标的影响，确定了最佳添加剂最；最后通过研究该茵对热应激蛋鸡肠道屏障功能和肠道微生物区 系的影响探讨了该菌缓解蛋鸡热应激作用的可能机制。
ｉｎ ｉｌｅｕｍ ａｎｄ ｃｅｃｕｍ，ａｎｄ ＥＧＦ ｉｎ ｃｅｃｕｍ（Ｐ＜０．０５）．１ ０００ ｍｇ／ｋｇ ｄｉｅｔａｒｙ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｃｏｕｌｄ
ｉｍｐｒｏｖｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｖｉｌｌｉ，ｅｎｈａｎｃｅ ｖｉｌｌｕｓ ｈｅｉｇｈｔ ｏｆ ｉｌｅｕｍ ａｎｄ ｃｅｃｕｍ ａｎｄ Ｖ：Ｃ ｏｆ ｃｅｃｕｍ， ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｃｒｙｐｔ ｄｅｐｔｈ ｏｆ ｃｅｃｕｍ，ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｌＥＬｓ ａｎｄ ａｒｅａ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｆｏｒ ｓｌｇＡ，ａｎｄ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｍａｓｔ ｃｅｌｌ ｎｕｍｂｅｒ ｉｎ ｉｌｅｕｍ ａｎｄ ｃｅｃｕｍ（Ｐ＜０．０５）．Ａｌｓｏ，ｉｔ ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ ｔｈｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｇｏｂｌｅｔ ｃｅｌｌｓ．１ ０００
Ｅｘｐ．３ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｏｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｂａｒｒｉｅｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅａｔ－ｓｔｒｅｓｓｅｄ ｌａｙｉｎｇ
ｈｅｎｓ
Ｈｅａｔ ｄａｍａｇｅｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｖｉｌｌｉ ｉｎ ｈｅｎｓ，ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｖｉｌｌｕｓ ｈｅｉｇｈｔ ａｎｄ Ｖ：Ｃ ｏｆ ｉｌｅｕｍ ａｎｄ ｃｅｃｕｍ，ｅｎｈａｎｃｅｄ ｃｒｙｐｔ ｄｅｐｔｈ ｏｆ ｃｅｃｕｍ，ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ＩＥＬｓ ａｎｄ ａｒｅａ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｆｏｒ ｓｌｇＡ，ａｎｄ
ｏｆ ｈｅａｔ－ｓｔｒｅｓｓｅｄ ｌａｙｉｎｇ ｈｅｎｓ．Ｓｏ，ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｄｏｓａｇｅ Ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ａｔ ｌａｓｔ，ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ
Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒＪ竹括ｏｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｂａｒｒｉｅｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ ｏｆ ｈｅａｔ·ｓｔｒｅｓｓｅｄ ｈｅｎｓ ｗａｓ ｅｖａｌｕａｔｅｄ
试验一地衣芽孢杆菌的生物学特性研究
本试验研究了所选地农芽孢杆菌的生长、耐酸和耐胆盐、抗菌及体外黏附特性。结果表明： 该菌从第１２ ｈ进入对数生长期，持续至２２ ｈ。发酵液ｐＨ值先卜降，后升高，溶氧浓度逐渐降低。 ｐＨ ２作用３ ｈ活性损失２４％，ｐＨ ３和４则小于１０％。０．３％胆盐作用３ ｈ后存活率为８９．１％。该菌 的发酵产物对大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的平板生长有明显抑制作用。该菌能 黏附到肠道枯蛋白并抑制上述■种病原菌的黏附。
ｃｅｃｕｍ，ｒｅｄｕｃｅｄ ｔｈｅ ｃｅｃａｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｄ Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ，ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ Ｅ．ｃｏｌｉ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｉｌｅｕｍ ａｎｄ ｃｅｃｕｍ（Ｐ＜０．０５）．Ｄｉｅｔ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｗｉｔｈ １ ０００ ｍｇ／ｌ（ｇ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ＤＧＧＥ ｂａｎｄｓ ａｎｄ Ｓｈａｎｎｏｎ ｉｎｄｅｘ ｆｏｒ ｃｅｃｕｍ，ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｉｎ ｃｅｃｕｍ ｏｆ ｌａｙｅｒｓ ｕｎｄｅｒ ｈｅａｔ ｓｔｒｅｓｓ（Ｐ＜０．０５）．Ｆｉｖｅ ｃｏｍｍｏｎ ｏｒ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｂａｎｄｓ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ ｔｏ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ，Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．，Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｉｌ，Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ，ａｎｄ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ，Ｌａｙｉｎｇ ｈｅｎ，Ｈｅａｔ ｓｔｒｅｓｓ，Ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ，Ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ
ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｍａｓｔ ｃｅｌｌ ｎｕｍｂｅｒ ｉｎ ｉｌｅｕｍ ａｎｄ ｃｅｃｕｍ．Ｓｈｏｒｔｓ ｓｔｒｅｓｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆｇｏｂｌｅｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ
பைடு நூலகம்
ｃｅｃｕｍ，ｗｈｉｌｅ ｌｏｎｇ ｓｔｒｅｓｓ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｉｔ．Ｈｅａｔ ｄｅｐｒｅｓｓｅｄ ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｏｆ ｏｃｃｌｕｄｉｎｇ ａｎｄ ｃｌａｕｄｉｎ—Ｊ