几种常见的DNA、RNA含量测定方法
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内，其浓度与光密度值成线性关系。样品中少量脱氧核糖核酸(DNA)存在对测定 无干扰，蛋白质、粘多糖在含量高时会干扰测定。
二、RNA含量的测定方法 2.苔黑酚法
实验仪器
分光光度计
二、RNA含量的测定方法 2.苔黑酚法
实验方法
(1)标准曲线绘制：取试管6支，按下表编号并加入试剂：
管号 试剂 1 2 3 4 5 6
一、DNA含量的测定方法 1.光密度测定法
实验仪器
分光光度计
一、DNA含量的测定方法 1.光密度测定法
实验方法
(1)取5ulDNA样品或4ulRNA样品加水到1ml (2)用1ml水做空白
(3)把样品杯放在分光光度计比色槽上，测定A260
(4)每ml中DNA浓度(mg)将是OD值的10倍，例如稀释后样品在260nm处OD 值为0.2，则原DNA或RNA样品浓度为2ug/ml （注：若样品不能达到绝对纯度也可以通过绘制标准曲线来计算样品DNA浓度）
DNA%＝
X 100
一、DNA含量的测定方法 3.二苯胺法
应用范围
仅限于对于提取的DNA不含有其他糖及糖的衍生物、芳香醛、蛋白质等杂质且浓 度大于50mg/l的情况下适用
一、DNA含量的测定方法 3.二苯胺法
优点： 缺点：
操作简便，有一定精确性，常用作教学性实验
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
对DNA样品纯度有一定要求，实验试剂非实验室常用试剂
2
4
1.6
4
1.2
4
0.8
4
0.4
4
0
4
60℃恒温水浴中保温1h，冷却，在595nm波长处比色 光密度值
一、DNA含量的测定方法 3.二苯胺法
实验方法
（2）测量及计算：取待测样品2mL，加入二苯胺溶液4mL，摇匀，60℃保温1h，
然后在595nm波长出测定光密度值。根据测得的光密度值，从标准曲线上查得相 应的DNA的ug数，按下式计算待测样品的DNA的含量。 待测样品中测得的DNA的mg数 待测样品液中样品的mg数
优点： 缺点：
操作简单方便快速适用性广，精确性高
对RNA样品的浓度和纯度有较大要求
二、RNA含量的测定方法 1.光密度测定法
2.苔黑酚法
二、RNA含量的测定方法
实验原理
RNA由碱基、磷酸和戊糖组成。在酸性条件下，戊糖转化成糠醛，其可与地衣酚 生成绿色复合物，反应如下：
这种复合物在670 nm波长处有最大光吸收。当RNA的浓度10-100μ g/ml范围
电泳槽中，电极缓冲液应淹没过胶
（3）电泳：取琼脂糖凝胶，滴加加样缓冲液3ul和DNA样品20ul，混匀，用移液枪 加入样品槽中。点样端朝负极，通电。电压为10v/cm。至溴酚蓝移到距边1cm处，
取出凝胶，紫外灯下检测
（4）检测：通过与已知浓度相同分子量Marker亮度的对比大致读出目标DNA的浓 度
一、DNA含量的测定方法 2.琼脂糖电泳凝胶检测法
应用范围
通过灵活使用琼脂糖凝胶浓度和Marker几乎所有的DNA样品浓度都可以被测定
一、DNA含量的测定方法 2.琼脂糖电泳凝胶检测法
优点： 缺点：
操作简单方便快速适用性广，可以对不同分子量DNA的混合样品进行一次性检测
不能精确测量出DNA的浓度
二、RNA含量的测定方法 1.光密度测定法
实验仪器
分光光度计
二、RNA含量的测定方法 1.光密度测定法
实验方法
(1)RNA粗品的制备：称取8g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%NaOH溶液40ml， 沸水浴加热30min，经常搅拌。冷却，然后4000r|min离心15分钟。取上清液，加 入95%酸性乙醇40ml，边加边搅。加毕，静置5-10min离心。滤液先用95%乙醇洗 2次，继而用无水乙醇洗2次，洗涤时可用细玻璃棒小心搅动沉淀。乙醇滤干后，滤 渣即为粗RNA。
二、RNA含量的测定方法 2.苔黑酚法
优点： 缺点：
操作简便，有一定精确性，灵敏度高，常用作教学性实验
对RNA样品纯度有一定要求，特异性较差，实验试剂非实验室常用试剂
二、RNA含量的测定方法 2.苔黑酚法
一、DNA含量的测定方法 1.光密度测定法
应用范围
仅限于对于提取的DNA几乎不含有其它杂质且浓度大于0.25ul/ml的情况下适用
一、DNA含量的测定方法 1.光密度测定法
优点： 缺点：
操作简单方便快速适用性广，精确性高
对DNA样品的浓度和纯度有较大要求
一、DNA含量的测定方法 1.光密度测定法
(2)样品的处理：称取0.2~0.25g粗品RNA，加2ml0.2%NaOH和1ml H2O溶解，调
成糊状，再加入40~50mlH2O,溶解，调PH至7.0，后定容至100ml（再取2ml 定容 至100ml待测，此过程重复三次）
二、RNA含量的测定方法 1.光密度测定法
实验方法
(3)标准曲线的绘制：取六支试管，编号，按表加入试剂
实验仪器
分光光度计
一、DNA含量的测定方法 3.二苯胺法
实验方法
（1）制作标准曲线：取12只试管分成6组，按下表操作。取2管的平均值，以
DNA浓度为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线。
试管 标准DNA/mL 0 0 1 0.4 2 0.8 3 1.2 4 1.6 5 2.0
蒸馏水/mL
二苯胺试剂/mL
DNA、RNA含量的测定方法
一、DNA含量的测定方法
1.光密度测定法
一、DNA含量的测定方法
实验原理
嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键，使碱基、核苷、核苷酸和核酸在240~290nm 的紫外波段有一强烈的吸收峰，因此核酸具有紫外吸收特性。DNA钠盐的紫 外吸收在260nm附近有最大吸收值，在230nm处为吸收低谷，其吸光率以 A260表示，A260是核酸的重要性质，对于纯的核酸溶液，测定A260即可利 用核酸的比吸光系数计算溶液中核酸的量，核酸的比吸光系数是指浓度为1μ g/ ml的核酸水溶液在260nm处的吸光率，天然状态的双链DNA的比吸光系数 为0.020，变性DNA和RNA的比吸光系数为0.022。据朗波－比尔光吸收定律 A＝-lgT＝εbc知，c＝A/εb，而b通常为1cm，所以，通常以1OD值相当于 50μ g/ml双螺旋DNA。
一、DNA含量的测定方法 2.琼脂糖电泳凝胶检测法
3.二苯胺法
一、DNA含量的测定方法
实验原理
在酸性溶液中，DNA与二苯胺共热生成蓝色化合物，该物质在595nm有最大吸 收，在40～400mg/mL范围内其峰值与DNA含量成正比。
100℃
NH
DNA
+
冰醋酸，少量硫酸
蓝色物质
一、DNA含量的测定方法 3.二苯胺法
dna钠盐的紫外吸收在260nm附近有最大吸收值在230nm处为吸收低谷其吸光率以a260表示a260是核酸的重要性质对于纯的核酸溶液测定a260即可利用核酸的比吸光系数计算溶液中核酸的量核酸的比吸光系数是指浓度为1gml的核酸水溶液在260nm处的吸光率天然状态的双链dna的比吸光系数为0020变性dna和rna的比吸光系数为0022
实验方法
(2)样品的测定 取1.0ml样液置试管内，加蒸馏水1.0ml 及苔黑酚试剂2.0ml，沸水浴中保温 45min，冷却，测定其A670nm。根据标准曲线求RNA的质量（ug）。
二、RNA含量的测定方法 2.苔黑酚法
应用范围
仅限于对于提取的RNA不含有其他糖及糖的衍生物、芳香醛、蛋白质等杂质且浓 度不能太低
试管 标准 RNA(ml) 蒸馏水 （ml） RNA浓度 μ g/ml 吸光度
二、RNA含量的测定方法 1.光密度测定法
1 0
2 1
3 2
4 3
5 4
6 5
10 0
9 10
8 20
7 30
6 40
5 50
应用范围
仅限于对于提取的RNA几乎不含有其它杂质且浓度相对不要太低的情况下适用
二、RNA含量的测定方法 1.光密度测定法
一、DNA含量的测定方法 3.二苯胺法
二、RNA含量的测定方法
1.光密度测定法
二、RNA含量的测定方法
实验原理
核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统，能 够强烈吸收250~280nm 波长的紫外光。核酸(DNA，RNA)的最大紫外吸收值在 260nm 处。据朗波－比尔光吸收定律A＝-lgT＝εbc知，c＝A/εb，而b通常为 1cm，所以，通常以1OD值相当于40μ g/ml RNA。而在本实验中因不能提取出较 纯的RNA所以在实验操作中选测使用建立标准曲线的方式对其含量进行大致计算。
2.琼脂糖电泳凝胶检测法
一、DNA含量的测定方法
实验原理
DNA分子在高于其等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。DNA分 子在电场中通过介质而泳动。对于线形DNA分子，其电场中的迁移率与其分子量、 电荷量、分子大小及构象有关。因此通过电泳可大致将分子量不同的DNA分离开。 之后通过在凝胶中加入少量EB（其分子可插入DNA的碱基之间，形成一种光络合 物，在254~365nm波长紫外光照射下呈现荧光）来对DNA进行检测和分析。而 相同分子量DNA浓度与其荧光亮度呈正比。因此DNA片段的浓度可与已知浓度的 DNA同时进行电泳，通过结合的EB荧光强度，来估计其含量。
一、DNA含量的测定方法 2.琼脂糖电泳凝胶检测法
实验仪器
微波炉
一、DNA含量的测定方法 2.琼脂糖电泳凝胶检测法
实验仪器
凝胶电泳槽
一、DNA含量的测定方法 2.琼脂糖电泳凝胶检测法
实验仪器
凝胶成像系统
一、DNA含量的测定方法 2.琼脂糖电泳凝胶检测法
实验方法
（1）制备琼脂糖溶液 （2）将琼脂糖溶液倒入电泳支架上，放上梳子，梳子须离开电泳 支架底部1mm左右。待凝胶凝聚后，小心拔去梳子，将支架放入 装有电极缓冲液的
RNA标准液/ml 蒸馏水/ml 苔黑酚试剂/ml
0 2.0 2.0
0.4 1.6 2.0
0.8 1.2 2.0
1.2 0.8 2.0
1.6 0.4 2.0
2.0 0 2.0
混匀，置沸水中加热45min，冷却，测定各管A670nm。以A670nm为纵坐
标，RNA量(μ g)为横坐标作图
二、RNA含量的测定方法 2.苔黑酚法
二、RNA含量的测定方法 2.苔黑酚法
实验仪器
分光光度计
二、RNA含量的测定方法 2.苔黑酚法
实验方法
(1)标准曲线绘制：取试管6支，按下表编号并加入试剂：
管号 试剂 1 2 3 4 5 6
一、DNA含量的测定方法 1.光密度测定法
实验仪器
分光光度计
一、DNA含量的测定方法 1.光密度测定法
实验方法
(1)取5ulDNA样品或4ulRNA样品加水到1ml (2)用1ml水做空白
(3)把样品杯放在分光光度计比色槽上，测定A260
(4)每ml中DNA浓度(mg)将是OD值的10倍，例如稀释后样品在260nm处OD 值为0.2，则原DNA或RNA样品浓度为2ug/ml （注：若样品不能达到绝对纯度也可以通过绘制标准曲线来计算样品DNA浓度）
DNA%＝
X 100
一、DNA含量的测定方法 3.二苯胺法
应用范围
仅限于对于提取的DNA不含有其他糖及糖的衍生物、芳香醛、蛋白质等杂质且浓 度大于50mg/l的情况下适用
一、DNA含量的测定方法 3.二苯胺法
优点： 缺点：
操作简便，有一定精确性，常用作教学性实验
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
对DNA样品纯度有一定要求，实验试剂非实验室常用试剂
2
4
1.6
4
1.2
4
0.8
4
0.4
4
0
4
60℃恒温水浴中保温1h，冷却，在595nm波长处比色 光密度值
一、DNA含量的测定方法 3.二苯胺法
实验方法
（2）测量及计算：取待测样品2mL，加入二苯胺溶液4mL，摇匀，60℃保温1h，
然后在595nm波长出测定光密度值。根据测得的光密度值，从标准曲线上查得相 应的DNA的ug数，按下式计算待测样品的DNA的含量。 待测样品中测得的DNA的mg数 待测样品液中样品的mg数
优点： 缺点：
操作简单方便快速适用性广，精确性高
对RNA样品的浓度和纯度有较大要求
二、RNA含量的测定方法 1.光密度测定法
2.苔黑酚法
二、RNA含量的测定方法
实验原理
RNA由碱基、磷酸和戊糖组成。在酸性条件下，戊糖转化成糠醛，其可与地衣酚 生成绿色复合物，反应如下：
这种复合物在670 nm波长处有最大光吸收。当RNA的浓度10-100μ g/ml范围
电泳槽中，电极缓冲液应淹没过胶
（3）电泳：取琼脂糖凝胶，滴加加样缓冲液3ul和DNA样品20ul，混匀，用移液枪 加入样品槽中。点样端朝负极，通电。电压为10v/cm。至溴酚蓝移到距边1cm处，
取出凝胶，紫外灯下检测
（4）检测：通过与已知浓度相同分子量Marker亮度的对比大致读出目标DNA的浓 度
一、DNA含量的测定方法 2.琼脂糖电泳凝胶检测法
应用范围
通过灵活使用琼脂糖凝胶浓度和Marker几乎所有的DNA样品浓度都可以被测定
一、DNA含量的测定方法 2.琼脂糖电泳凝胶检测法
优点： 缺点：
操作简单方便快速适用性广，可以对不同分子量DNA的混合样品进行一次性检测
不能精确测量出DNA的浓度
二、RNA含量的测定方法 1.光密度测定法
实验仪器
分光光度计
二、RNA含量的测定方法 1.光密度测定法
实验方法
(1)RNA粗品的制备：称取8g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%NaOH溶液40ml， 沸水浴加热30min，经常搅拌。冷却，然后4000r|min离心15分钟。取上清液，加 入95%酸性乙醇40ml，边加边搅。加毕，静置5-10min离心。滤液先用95%乙醇洗 2次，继而用无水乙醇洗2次，洗涤时可用细玻璃棒小心搅动沉淀。乙醇滤干后，滤 渣即为粗RNA。
二、RNA含量的测定方法 2.苔黑酚法
优点： 缺点：
操作简便，有一定精确性，灵敏度高，常用作教学性实验
对RNA样品纯度有一定要求，特异性较差，实验试剂非实验室常用试剂
二、RNA含量的测定方法 2.苔黑酚法
一、DNA含量的测定方法 1.光密度测定法
应用范围
仅限于对于提取的DNA几乎不含有其它杂质且浓度大于0.25ul/ml的情况下适用
一、DNA含量的测定方法 1.光密度测定法
优点： 缺点：
操作简单方便快速适用性广，精确性高
对DNA样品的浓度和纯度有较大要求
一、DNA含量的测定方法 1.光密度测定法
(2)样品的处理：称取0.2~0.25g粗品RNA，加2ml0.2%NaOH和1ml H2O溶解，调
成糊状，再加入40~50mlH2O,溶解，调PH至7.0，后定容至100ml（再取2ml 定容 至100ml待测，此过程重复三次）
二、RNA含量的测定方法 1.光密度测定法
实验方法
(3)标准曲线的绘制：取六支试管，编号，按表加入试剂
实验仪器
分光光度计
一、DNA含量的测定方法 3.二苯胺法
实验方法
（1）制作标准曲线：取12只试管分成6组，按下表操作。取2管的平均值，以
DNA浓度为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线。
试管 标准DNA/mL 0 0 1 0.4 2 0.8 3 1.2 4 1.6 5 2.0
蒸馏水/mL
二苯胺试剂/mL
DNA、RNA含量的测定方法
一、DNA含量的测定方法
1.光密度测定法
一、DNA含量的测定方法
实验原理
嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键，使碱基、核苷、核苷酸和核酸在240~290nm 的紫外波段有一强烈的吸收峰，因此核酸具有紫外吸收特性。DNA钠盐的紫 外吸收在260nm附近有最大吸收值，在230nm处为吸收低谷，其吸光率以 A260表示，A260是核酸的重要性质，对于纯的核酸溶液，测定A260即可利 用核酸的比吸光系数计算溶液中核酸的量，核酸的比吸光系数是指浓度为1μ g/ ml的核酸水溶液在260nm处的吸光率，天然状态的双链DNA的比吸光系数 为0.020，变性DNA和RNA的比吸光系数为0.022。据朗波－比尔光吸收定律 A＝-lgT＝εbc知，c＝A/εb，而b通常为1cm，所以，通常以1OD值相当于 50μ g/ml双螺旋DNA。
一、DNA含量的测定方法 2.琼脂糖电泳凝胶检测法
3.二苯胺法
一、DNA含量的测定方法
实验原理
在酸性溶液中，DNA与二苯胺共热生成蓝色化合物，该物质在595nm有最大吸 收，在40～400mg/mL范围内其峰值与DNA含量成正比。
100℃
NH
DNA
+
冰醋酸，少量硫酸
蓝色物质
一、DNA含量的测定方法 3.二苯胺法
dna钠盐的紫外吸收在260nm附近有最大吸收值在230nm处为吸收低谷其吸光率以a260表示a260是核酸的重要性质对于纯的核酸溶液测定a260即可利用核酸的比吸光系数计算溶液中核酸的量核酸的比吸光系数是指浓度为1gml的核酸水溶液在260nm处的吸光率天然状态的双链dna的比吸光系数为0020变性dna和rna的比吸光系数为0022
实验方法
(2)样品的测定 取1.0ml样液置试管内，加蒸馏水1.0ml 及苔黑酚试剂2.0ml，沸水浴中保温 45min，冷却，测定其A670nm。根据标准曲线求RNA的质量（ug）。
二、RNA含量的测定方法 2.苔黑酚法
应用范围
仅限于对于提取的RNA不含有其他糖及糖的衍生物、芳香醛、蛋白质等杂质且浓 度不能太低
试管 标准 RNA(ml) 蒸馏水 （ml） RNA浓度 μ g/ml 吸光度
二、RNA含量的测定方法 1.光密度测定法
1 0
2 1
3 2
4 3
5 4
6 5
10 0
9 10
8 20
7 30
6 40
5 50
应用范围
仅限于对于提取的RNA几乎不含有其它杂质且浓度相对不要太低的情况下适用
二、RNA含量的测定方法 1.光密度测定法
一、DNA含量的测定方法 3.二苯胺法
二、RNA含量的测定方法
1.光密度测定法
二、RNA含量的测定方法
实验原理
核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统，能 够强烈吸收250~280nm 波长的紫外光。核酸(DNA，RNA)的最大紫外吸收值在 260nm 处。据朗波－比尔光吸收定律A＝-lgT＝εbc知，c＝A/εb，而b通常为 1cm，所以，通常以1OD值相当于40μ g/ml RNA。而在本实验中因不能提取出较 纯的RNA所以在实验操作中选测使用建立标准曲线的方式对其含量进行大致计算。
2.琼脂糖电泳凝胶检测法
一、DNA含量的测定方法
实验原理
DNA分子在高于其等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。DNA分 子在电场中通过介质而泳动。对于线形DNA分子，其电场中的迁移率与其分子量、 电荷量、分子大小及构象有关。因此通过电泳可大致将分子量不同的DNA分离开。 之后通过在凝胶中加入少量EB（其分子可插入DNA的碱基之间，形成一种光络合 物，在254~365nm波长紫外光照射下呈现荧光）来对DNA进行检测和分析。而 相同分子量DNA浓度与其荧光亮度呈正比。因此DNA片段的浓度可与已知浓度的 DNA同时进行电泳，通过结合的EB荧光强度，来估计其含量。
一、DNA含量的测定方法 2.琼脂糖电泳凝胶检测法
实验仪器
微波炉
一、DNA含量的测定方法 2.琼脂糖电泳凝胶检测法
实验仪器
凝胶电泳槽
一、DNA含量的测定方法 2.琼脂糖电泳凝胶检测法
实验仪器
凝胶成像系统
一、DNA含量的测定方法 2.琼脂糖电泳凝胶检测法
实验方法
（1）制备琼脂糖溶液 （2）将琼脂糖溶液倒入电泳支架上，放上梳子，梳子须离开电泳 支架底部1mm左右。待凝胶凝聚后，小心拔去梳子，将支架放入 装有电极缓冲液的
RNA标准液/ml 蒸馏水/ml 苔黑酚试剂/ml
0 2.0 2.0
0.4 1.6 2.0
0.8 1.2 2.0
1.2 0.8 2.0
1.6 0.4 2.0
2.0 0 2.0
混匀，置沸水中加热45min，冷却，测定各管A670nm。以A670nm为纵坐
标，RNA量(μ g)为横坐标作图
二、RNA含量的测定方法 2.苔黑酚法