CDK2 shRNA慢病毒载体的构建及其基因沉默效应

CDK2 shRNA慢病毒载体的构建及其基因沉默效应
晋佳路;朱仁书;谢育媛;刘红春
【期刊名称】《中国老年学杂志》
【年(卷),期】2015(0)16
【摘要】目的：构建CDK2 shRNA慢病毒载体，并在黑色素瘤细胞B16－F1中鉴定其基因沉默效应。

方法体外构建3个慢病毒重组目的质粒pUL－CDK2－shRNAs和1个阴性对照慢病毒重组质粒pUL－NC－shRNA，转化感受态细胞，PCR鉴定后进一步测序验证；293T细胞中测定病毒滴度；用重组慢病毒感染B16－F1细胞测定其感染效率，RT－PCR和Western印迹检测其对 B16－F1细胞中CDK2的基因沉默效应。

结果 PCR鉴定后进一步测序表明，成功构建了重组慢病毒质粒；病毒滴度为4．5×107～5．5×107 TU／ml；用重组慢病毒感染 B16－F1细胞，当感染复数（MOI）为10时，感染效率可达90％；RT－PCR和Western印迹结果表明，与未感染组和NC－shRNA感染组细胞相比，CDK2－shRNA1、CDK2－shRNA2、CDK2－shRNA3感染的细胞中CDK2 mRNA和蛋白表达均受到不同程度抑制（P＜0．05），以 CDK2－shRNA3感染组的抑制率最高，RT－PCR和 Western Blot 检测其抑制率分别为78．5％±4．23％和70．5％±3．54％。

结论利用RNAi技术成功构建了3种CDK2－shRNA重组慢病毒载体，均可有效感染B16－F1细胞并具有一定的基因沉默效应，其中以针对靶位点1012－1020的pUL－CDK2－shRNA3基因沉默效应最强，为进一步研究CDK2基因沉默对黑色素瘤化疗敏感性的影响奠定了基础。

【总页数】3页(P4483-4485)
【作者】晋佳路;朱仁书;谢育媛;刘红春
【作者单位】鹤壁职业技术学院医学院，河南鹤壁 458030;鹤壁职业技术学院医学院，河南鹤壁 458030;湖北省食品药品监督检验研究院;郑州大学第一附属医院【正文语种】中文
【中图分类】R73-3
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