杜鹃组培实验方案

杜鹃组培实验方案
1 材料
1．1 供试材料
新天地大棚苗圃培育的盆栽杜鹃（Rhododendron）。

1．2 试剂器材
1.2.1 试剂
IAA、ZT、硝酸钾、硝酸铵、硝酸钙、硫酸铵、氢氧化钠、二水氯化钙、七水硫酸镁、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、过硫酸铵、氯化钾、过磷酸钙、氢氧化钾、盐酸、乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）、乙二胺四乙酸铁钠（EDTA-FeNa）、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸锌、硼酸、碘化钾、钼酸钠、氯化钴、硫酸铜、葡萄糖、酵母浸粉、甘露醇、柠檬酸、D-果糖、 D-山梨醇、甘氨酸、蔗糖、苯扎溴铵溶液、无水乙醇、乙醇医用95% 次氯酸钠、甲醛、高锰酸钾、升汞
1.2.2器材
天平、冰箱、pH试纸、水浴锅、微量移液器、高压蒸汽灭菌锅、干燥箱、微孔过滤灭菌器、紫外线杀菌灯、超净工作台、接种器械杀菌器、接种箱、解剖镜、培养架
2 试验设计与方法
2．1 外植体的获取与灭菌
选取生长正常无病害的植株，摘取当年新发嫩茎，在自来水下冲洗30 m in ，边洗边用牙刷刷洗表面，在高浓度的洗衣粉液中浸泡10 ~ 20 m in ，自来水下冲净；在超净工作台上，用75％酒精消毒30 -60 s，0.1％升汞液消毒l2 —15 m in ，无菌水漂洗1 次；再用10％双氧水液浸泡3 ～5 m in ，无菌水漂洗5 次；最后用无菌滤纸吸干表面水分，用解剖刀、剪刀等分出茎尖、茎段(带 2 —4 芽苞) 接种到培养基上。

2.2 基本培养基的筛选
试验以M S、改良W PM 、1／2M S 3种培养基为基本培养基，不添加任何激素，以茎段为外植体进行预培养。

培养基中含琼脂1．0％，蔗糖3．0％，pH 5．4(以下培养基琼脂、蔗糖含量、pH 均相同)。

每个处理接种3个材料，试验重复3 次。

每天观察、记录外植体生长情况，连续观察 3 个月。

2．3 培养材料筛选
以杜鹃当年生茎尖、茎段为外植体，以1／ 4 培养基为基本培养基，附加ZT 0．5 m g／L 和N A A 0．01m g／L ，观察记录茎尖、茎段的存活率、萌发率、萌发时间等。

每个处理接种3个材料，试验重复3 次。

2 ．4 外源激素的筛选
以杜鹃茎段为外植体，以1／ 4 培养基为基本培养基，利用ZT和NAA不同浓度配比设置一个二因素两水平正交实验，记录具体浓度配比，力求找出合适杜鹃茎段培养的激素种类及浓度。

每个处理接种3个材料，试验重复3 次。

3 培养条件
培养温度(25±1) ℃，光照时间12 h／d，光照强度40 ～60μm ol /(m ·s) 。