UPLC_MS法测定大鼠血浆中积雪草苷的浓度及其药代动力学研究
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-1
,l 加内标溶液 ( 0 98 mg L 黄芪甲苷甲醇溶液 ) 20 , l 旋涡 30 s混匀, 加入 0 2 m l甲醇 , 震荡 3 m in, 于 10% 12 000 r m in 离心 10 m in , 取上层溶液 2
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3 个浓度平行 3 份评价。
1 . 10 稳定 性考 察 考 察 积雪 草 苷血 浆 样品 在 - 20 % 冰箱内冷冻保存, 1 w k 内样品稳定性 , 室温 放置 24 h 及反复冻融两次的稳定性。 1 . 11 数据处理 大鼠静脉注射积雪草苷后所得的 血药 浓度时间数据 用 DAS1 0 软 件 ( B eijing Bosom Science & T echno lo gy Co . L td) 进行处理, 选择适宜的 数学模型拟合 , 并进行药代动力学参数计算。 2 结果 2 . 1 色谱行为 本色谱条件下, 积雪草苷和黄芪甲 苷 ( 内标 ) 的保留时间分别为 1 41 m in 和 1 80 m in ( F ig 1)。采用选择性离子检测方式 , 其专属性强, 灵敏度高 , 血浆中杂质不干扰样品的测定。 2 . 2 标准曲线及最低定 量限 ( LLOQ ) 按 ! 2 1∀ 项下 方 法 测 定 的 标 准 曲 线 为 Y ^ = 1 89796 X + 0 012712 , r = 0 9979(权重 W = 1 /CC, n = 5)。积雪 草苷血药浓度在 0 038 ~ 7 6 m g L 范围内线性 关系良好, 相关系数大于 0 997 。最低定量下限为 38 g L 。
57 该
m in 、( 23 44 kg- 1 、( 8 92
ห้องสมุดไป่ตู้
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9 60 ) m in 、( 0 19 kg- 1。 结论
m in- 1
6 68) L
收稿日期 : 2009 - 11- 24 , 修回日期 : 2009- 12- 21 基金项目 : 科技部 ! 十一五 ∀支撑计划课题 ( N o 2006BA I14B 07 ) ; 江苏 省中医药领军人才项目 作者简 介 : 刘子 修 ( 1983 - ) , 男 , 硕士 生 , E m ai:l l iuz ixiu3221@ 126. com; 居文政 ( 1965- ) , 男 , 主任药 师 , 博士 生导师 , 研究 方向 : 中 药 临 床 药 代 动 力 学, 通 讯 作 者 , Te: l 025 86617141 80518 , E m ai:l n j w z1008@ j lon line. com
中国药理学通报
Chinese Pharmaco logical Bulletin
2010 A pr ; 26 ( 4) : 543~ 6
543
UPLC M S法测定大鼠血浆中积雪草苷的 浓度及其药代动力学研究
刘子修 , 刘史佳 , 居文政 , 张
( 1. 南京中医药 大学药学院 , 江苏 南京
1 1, 2 2
- 1
血浆测定 , 记录峰面积比值。根据随行标准曲线求 得准确度与精密度。 1 . 9 提取回收率及介质效应 度为 0 06 、 0 6、 6 mg
- 1
配制含积雪草苷浓
L 的 血浆样 品各 3 份 , 按
! 血浆样品处理 ∀项下操作测定。取空白血浆, 除不 加内标外, 其 余按 ! 血浆 样品处理 ∀项 操作得 上清 液, 加入适当浓度的积雪草苷标准液进行测定, 计算 提取回收率。 介质效应由以血浆为介质测定的积雪草苷峰面 积和以水为 介质测 定的积 雪草 苷峰 面积 之比, 在 0 06 、 0 6 、 6 mg L
方法操作简便、 快速、 灵敏、 专 属性强 , 可用 于积 雪草 苷的体 内大批量样品定量分析及药代动力学研究。 关键词 : 积雪草苷 ; 超高效液相色谱 - 质谱联用法 ; 药代动力 学 ; 血药浓度 ; 大鼠 ; 吸收
的血浆中药物浓度 , 并用 DA S 软件求算 其药代动力 学参数。 积雪草苷的血 药浓度在 0 038~ 7 6 m g g 线性关系良好 , 最低检测限为 38 苷 40 m g L- 1, 提取 回收率 大于
军 , 陈 玟 , 谈恒山
210002)
2
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3
210009 ; 2 . 南京中医药大学附属医院临床药理科 , 江苏 南京
210029;
3. 南京军区总医院 , 江苏 南京
中国图书分类号 : R 332; R 282 71; R 969 1 文献标识码 : A 文章编号 : 1001- 1978( 2010) 04- 0543- 04 摘要 : 目的 建立测定积雪草苷血浆药物浓度的超高效 液相 色谱 - 电喷 雾离 子化 - 质谱 ( U PLC ES IM S) 联 用的 分析 方 法 , 探讨其在大鼠体内的药动学。 方法 量静注 ( 40 m g 结果 SD 大 鼠 8 只 , 单剂 kg- 1 ) 积雪草苷 , 用 U PLC M S 法测定给 药后 L- 1 范 围内
物制品检定所 , 批号 : 110892 200403 ) , 黄芪甲苷对 照品 ( 中 国 药 品 生 物 制 品 检 定 所 , 批 号: 0781
preventive effects o f Danshengubao . M ethods
- 1 - 1
4
bone form ation o f T x w as decreased in perio steal sur faces bu t enhanced in endoco rtical surfaces in RA group . Com pared w ith RA g roup , the biom echan ica l propert ie s of LV4 w ere increased sign ificantly in low and m ed ium dose of Danshengubao groups. Conc lu sions RA can decrease the size and the b iom echani cal properties o f LV, but it can not change the percent age trabecu lar area . T he m echanism m ay be related to the act that RA can in hibit cance llo us bone for m ation , decrease th e m odelin g o f cortical bone in perio stea l surfaces and enhance the rem olding of co rt ic al bone in endocortical surfaces . Danshengubao can i m prove b io m echan ics of LV induced by RA in ra ts . K ey w ord s : osteroporosis ; retino ic acid ; Danshen ; bone h istom orphom e try ; b iom echan ica l properties ; rat
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中国药理学通报
Ch inese Phar m acolog ical Bulletin
2010 A pr ; 26 ( 4)
200109), 积雪草苷原料药 ( 含量 87% , 购自上海秀 龙中药有限公司 ) , 甲醇、 乙腈为色谱 纯, 实验用水 为超纯水。其余试剂为分析纯。 1 . 2 仪器 W aters Quattro P rem ier 液质联用仪 ( 美 国 W aters公司 ) , 色谱工作站 : M asslynx 4 1 ; 梅特勒 - 托利多 AE240 电子天平 (上海梅特勒 - 托利多有 限公司 ); Ther m o M icro 17 冷冻 高速离心 机 ( 美国 Ther m o 公司 ) ; M illipo re D rict Q5 超 纯水 机 ( 法国 M illipore 公司 ); WH 2 微型旋涡 混合仪 ( 上海沪西 分析仪器厂 ) 。 1 . 3 动物及给药方法 Sprague Daw ley( SD ) 大鼠 8 只 ( # ∃ 各半 ), 体重 ( 230 20) g, 由南京中医药大 学实验动物中心提供 , 试验前 12 h 禁食不禁水。分 别尾静脉注射积 雪草苷溶液 ( 10 g
积雪草 ( C entella asiati ca L. U rban) 为伞形 ( 科 积雪草属植物积雪草的干燥全草。积雪草中积雪草 苷 ( asia ticosid e) 具有抗肿瘤、 抗静脉机能不全、 抗溃 疡、 促进创伤愈合、 抗抑郁和恢复神经功能等药理作 [ 1] 用 , 其临床主要用于治 疗外伤、 手 术创伤、 烧 伤、 胃溃疡、 疤痕疙瘩及硬皮病 。 有关积雪草苷药代动力学研究文献国内未见报 道。本研究首 次采用 UPLC M S 联 用技术 , 建 立简 便、 快速、 较高灵敏度的体内分析方法 , 研究积雪草 苷在大鼠体内的药代动力学过程 , 为积雪草苷在体 内的吸收和代谢研究提供参考。 1 材料与方法 1 . 1 药品与试剂 积雪草苷对照品 ( 中国药品生
m on th old fem a le Sprague Daw ley rats w ere g iv en RA at 70 mg kg d and w ere g iven Danshengubao at different doses at the sam e ti me . A ll rats w ere treated by ora l gavaged for 28 days . The static and dynam ic pa ram eters in cancellous bone o f the fifth lumbar verte brae ( LV 5) w ere ex a m ined and th e dynam ic changes of the tib ial shaft ( T x) w ere observed w ith histom or phom etrica l ana ly ses ; the fo rth lum bar vertebrae ( LV4) w as used to perfor m the compression tes. t Re sults Com pared w ith contro l g roup , b iom echan ic al properties of LV4 , th e static param eters ( tota l tissue area , trabecular area , trabecu lar peri m eter) and the dynam ic param eters o f LV 5 w ere sig nificantly de creased in RA group . Com pared w ith control group ,
[ 2, 3]
95% , 日间、 日内 R SD 均小于 10% 。大鼠单剂量静注积 雪草 kg- 1 后 , 血 药浓度 - 时间曲线 呈二室模型。 主要
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药动学参 数 AUC ( 0- t) 、 T 1 、CL、 Vd 分别为 : ( 81 443 67 156 81) 0 07) L g L
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虽有报道用柱切换的方法测定大鼠血浆及胆汁中的积雪草苷浓度但其繁琐和复杂的操作技术限制了它的检测限和灵敏度uplcms与之相比显示出特别的优越性样品在14min即出峰分析时间短检测灵敏度高专属性强需用血浆量较少利于大鼠连续取血得到的数据稳定为积雪草苷的临床前研究提供8反复冻融两次的测定结果分别为985中国药理学通报chinesepharmacologicalbulletin2010apr
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L
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) 40 m g
kg , 于给药前及给药后 5 、 10 、 20 、 30 、 50 、 70 、 90 、 120 m in , 眼眶静脉丛采血约 0 4 m l 。将取得的全血置肝 -1 素抗凝处理过的离心管中, 4 000 r m in 离心 10 m in , 取上层血浆 , 置 - 20% 保存待测。 1 . 4 血样 样品处理 方法 精密吸取 血浆样 品 50
,l 加内标溶液 ( 0 98 mg L 黄芪甲苷甲醇溶液 ) 20 , l 旋涡 30 s混匀, 加入 0 2 m l甲醇 , 震荡 3 m in, 于 10% 12 000 r m in 离心 10 m in , 取上层溶液 2
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3 个浓度平行 3 份评价。
1 . 10 稳定 性考 察 考 察 积雪 草 苷血 浆 样品 在 - 20 % 冰箱内冷冻保存, 1 w k 内样品稳定性 , 室温 放置 24 h 及反复冻融两次的稳定性。 1 . 11 数据处理 大鼠静脉注射积雪草苷后所得的 血药 浓度时间数据 用 DAS1 0 软 件 ( B eijing Bosom Science & T echno lo gy Co . L td) 进行处理, 选择适宜的 数学模型拟合 , 并进行药代动力学参数计算。 2 结果 2 . 1 色谱行为 本色谱条件下, 积雪草苷和黄芪甲 苷 ( 内标 ) 的保留时间分别为 1 41 m in 和 1 80 m in ( F ig 1)。采用选择性离子检测方式 , 其专属性强, 灵敏度高 , 血浆中杂质不干扰样品的测定。 2 . 2 标准曲线及最低定 量限 ( LLOQ ) 按 ! 2 1∀ 项下 方 法 测 定 的 标 准 曲 线 为 Y ^ = 1 89796 X + 0 012712 , r = 0 9979(权重 W = 1 /CC, n = 5)。积雪 草苷血药浓度在 0 038 ~ 7 6 m g L 范围内线性 关系良好, 相关系数大于 0 997 。最低定量下限为 38 g L 。
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m in 、( 23 44 kg- 1 、( 8 92
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收稿日期 : 2009 - 11- 24 , 修回日期 : 2009- 12- 21 基金项目 : 科技部 ! 十一五 ∀支撑计划课题 ( N o 2006BA I14B 07 ) ; 江苏 省中医药领军人才项目 作者简 介 : 刘子 修 ( 1983 - ) , 男 , 硕士 生 , E m ai:l l iuz ixiu3221@ 126. com; 居文政 ( 1965- ) , 男 , 主任药 师 , 博士 生导师 , 研究 方向 : 中 药 临 床 药 代 动 力 学, 通 讯 作 者 , Te: l 025 86617141 80518 , E m ai:l n j w z1008@ j lon line. com
中国药理学通报
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UPLC M S法测定大鼠血浆中积雪草苷的 浓度及其药代动力学研究
刘子修 , 刘史佳 , 居文政 , 张
( 1. 南京中医药 大学药学院 , 江苏 南京
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血浆测定 , 记录峰面积比值。根据随行标准曲线求 得准确度与精密度。 1 . 9 提取回收率及介质效应 度为 0 06 、 0 6、 6 mg
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配制含积雪草苷浓
L 的 血浆样 品各 3 份 , 按
! 血浆样品处理 ∀项下操作测定。取空白血浆, 除不 加内标外, 其 余按 ! 血浆 样品处理 ∀项 操作得 上清 液, 加入适当浓度的积雪草苷标准液进行测定, 计算 提取回收率。 介质效应由以血浆为介质测定的积雪草苷峰面 积和以水为 介质测 定的积 雪草 苷峰 面积 之比, 在 0 06 、 0 6 、 6 mg L
方法操作简便、 快速、 灵敏、 专 属性强 , 可用 于积 雪草 苷的体 内大批量样品定量分析及药代动力学研究。 关键词 : 积雪草苷 ; 超高效液相色谱 - 质谱联用法 ; 药代动力 学 ; 血药浓度 ; 大鼠 ; 吸收
的血浆中药物浓度 , 并用 DA S 软件求算 其药代动力 学参数。 积雪草苷的血 药浓度在 0 038~ 7 6 m g g 线性关系良好 , 最低检测限为 38 苷 40 m g L- 1, 提取 回收率 大于
军 , 陈 玟 , 谈恒山
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210029;
3. 南京军区总医院 , 江苏 南京
中国图书分类号 : R 332; R 282 71; R 969 1 文献标识码 : A 文章编号 : 1001- 1978( 2010) 04- 0543- 04 摘要 : 目的 建立测定积雪草苷血浆药物浓度的超高效 液相 色谱 - 电喷 雾离 子化 - 质谱 ( U PLC ES IM S) 联 用的 分析 方 法 , 探讨其在大鼠体内的药动学。 方法 量静注 ( 40 m g 结果 SD 大 鼠 8 只 , 单剂 kg- 1 ) 积雪草苷 , 用 U PLC M S 法测定给 药后 L- 1 范 围内
物制品检定所 , 批号 : 110892 200403 ) , 黄芪甲苷对 照品 ( 中 国 药 品 生 物 制 品 检 定 所 , 批 号: 0781
preventive effects o f Danshengubao . M ethods
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中国药理学通报
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2010 A pr ; 26 ( 4)
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积雪草 ( C entella asiati ca L. U rban) 为伞形 ( 科 积雪草属植物积雪草的干燥全草。积雪草中积雪草 苷 ( asia ticosid e) 具有抗肿瘤、 抗静脉机能不全、 抗溃 疡、 促进创伤愈合、 抗抑郁和恢复神经功能等药理作 [ 1] 用 , 其临床主要用于治 疗外伤、 手 术创伤、 烧 伤、 胃溃疡、 疤痕疙瘩及硬皮病 。 有关积雪草苷药代动力学研究文献国内未见报 道。本研究首 次采用 UPLC M S 联 用技术 , 建 立简 便、 快速、 较高灵敏度的体内分析方法 , 研究积雪草 苷在大鼠体内的药代动力学过程 , 为积雪草苷在体 内的吸收和代谢研究提供参考。 1 材料与方法 1 . 1 药品与试剂 积雪草苷对照品 ( 中国药品生
m on th old fem a le Sprague Daw ley rats w ere g iv en RA at 70 mg kg d and w ere g iven Danshengubao at different doses at the sam e ti me . A ll rats w ere treated by ora l gavaged for 28 days . The static and dynam ic pa ram eters in cancellous bone o f the fifth lumbar verte brae ( LV 5) w ere ex a m ined and th e dynam ic changes of the tib ial shaft ( T x) w ere observed w ith histom or phom etrica l ana ly ses ; the fo rth lum bar vertebrae ( LV4) w as used to perfor m the compression tes. t Re sults Com pared w ith contro l g roup , b iom echan ic al properties of LV4 , th e static param eters ( tota l tissue area , trabecular area , trabecu lar peri m eter) and the dynam ic param eters o f LV 5 w ere sig nificantly de creased in RA group . Com pared w ith control group ,
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95% , 日间、 日内 R SD 均小于 10% 。大鼠单剂量静注积 雪草 kg- 1 后 , 血 药浓度 - 时间曲线 呈二室模型。 主要
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药动学参 数 AUC ( 0- t) 、 T 1 、CL、 Vd 分别为 : ( 81 443 67 156 81) 0 07) L g L
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虽有报道用柱切换的方法测定大鼠血浆及胆汁中的积雪草苷浓度但其繁琐和复杂的操作技术限制了它的检测限和灵敏度uplcms与之相比显示出特别的优越性样品在14min即出峰分析时间短检测灵敏度高专属性强需用血浆量较少利于大鼠连续取血得到的数据稳定为积雪草苷的临床前研究提供8反复冻融两次的测定结果分别为985中国药理学通报chinesepharmacologicalbulletin2010apr
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