MDA含量的测定SOP

主要目的：
——为了测定样品中的MDA含量，作为机体内脂质过氧化的程度的一个指标。

主要原理：
——测定原理为过氧化脂质降解产物中的丙二醛可与硫代巴比妥酸（TBA）缩合，形成红色产物，在532 nm 波长下有最大吸收峰[100]。

用酶标仪在532 nm处测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

因底物为硫代巴比妥酸，所以此法称为TBA 法。

实验室签章
一、试剂
——无水乙醇（分析纯）
——硫代巴比妥酸
——冰醋酸
——双蒸水
——丙二醛（MDA）测定试剂盒（南京建成生物研究所）二、仪器设备
——96孔酶标板
——UV-Vis可见多功能酶标仪
——旋涡混匀器
——水浴锅
——移液枪及相应量程枪头
三、实验方法
根据试剂盒说明书具体操作步骤如下：
1.向标准管0.1 mL标准品，空白管加入0.1 mL无水乙醇，测试管和对照管加入稀释后的血清或组织上清液0.1 mL，然后各管中再分别加入0.1 mL试剂一，摇动几下试管架晃匀，向各管中分别加入3 mL的试剂二和1ml的试剂三，同时只向对照管中加入50%冰醋酸1 mL。

2.旋涡混匀器混匀，试管口用保险薄膜扎紧，用针头刺一小孔，95℃水浴40分钟，取出后流水冷却，然后4000转/分，1cm光径，双蒸水调零，测定各管吸光度值。

3.血清中MDA含量计算公式
MDA 含量（nmol/mL）
-
-
=
测定OD值对照OD值
标准OD值空白OD值
×标品浓度×样本前稀释倍数
组织中MDA含量计算公式
MDA 含量（nmol/mgprot）
-
-
=
测定OD值对照OD值
标准OD值空白OD值
×标品浓度÷样品蛋白浓度
（mgprot/mL）
Lu T C, Ko Y Z, Huang H W, et al. Analgesic and anti-inflammatory activities of aqueous extract from Glycine tomentella root in mice[J]. Journal of ethnopharmacology, 2007, 113(1): 142-148.。