猪IFN-α基因在干酪乳酸杆菌中的表达及反应活性鉴定

猪IFN-α基因在干酪乳酸杆菌中的表达及反应活性鉴定马世杰;李坤;付朋飞;郭晓庆;高晓云;崔保安;陈红英
【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2015(043)007
【摘要】[目的]构建能够稳定表达猪α-干扰素(IFN-α)成熟蛋白的重组干酪乳酸杆菌(Lactobacillus casei CECT5276),为将其作为口服疫苗来提高动物机体免疫力奠定基础.[方法]从质粒pMD18-IFN-α扩增出猪IFN-α成熟蛋白基因,再将其定向克隆到干酪乳酸杆菌整合型表达载体pMJ67的lac启动子下游,得到重组质粒
pMJ67-IFN-α,电穿孔转化干酪乳酸杆菌.抽提干酪乳酸杆菌基因组DNA,进行PCR 扩增及测序鉴定.采用半定量RTPCR检测猪IFN-α mRNA在干酪乳酸杆菌中的转录水平;采用Western blot对重组干酪乳酸杆菌菌体进行分析,检测其表达产物的活性;用双抗体夹心ELISA法确定最适的乳糖诱导质量浓度.[结果]PCR扩增获得了501 bp的IFN-α,成功构建了重组质粒pMJ67-IFN-α,转化干酪乳酸杆菌后获得了重组乳酸杆菌.半定量RT-PCR结果显示,IFN-α mRNA在诱导16h时表达水平最高;Western blot分析表明,构建的重组干酪乳酸杆菌成功表达出了相对分子质量约19 ku的重组蛋白,其可与鼠抗猪IFN-α抗体发生特异性反应.ELISA结果表明,当乳糖诱导质量浓度达到8g/L时,猪IFN-α成熟蛋白的表达量达到最大,为1.3
μg/L.[结论]将猪IFN-α成熟蛋白基因整合到干酪乳酸杆菌基因组中,构建的重组乳酸杆菌能够稳定表达猪IFN-α成熟蛋白.
【总页数】6页(P29-34)
【作者】马世杰;李坤;付朋飞;郭晓庆;高晓云;崔保安;陈红英
【作者单位】河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002;河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002;河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002;河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002;河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002;河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002;河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002
【正文语种】中文
【中图分类】S852.65+1
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