甘氨酸检验操作规程

甘氨酸检验操作规程
1.目的：建立甘氨酸测定操作规程，便于检验人员规范操作。

2.范围：适用于配制各种氨基酸注射液的甘氨酸测定。

3.责任：质检科检验员对实施本规程负责。

4.程序：
4.1性状：白色结晶性粉末，无臭、味甜。

4.2鉴别试验
4.2.1本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集929图）一致。

4.3 酸度（pH值）测定
4.3.1测定范围：
5.9～
6.4
4.3.2配制溶液：
取本品1.0g，加新沸过的冷水20ml，溶解。

4.3.3操作步骤：在pH计上测定（操作见pH值测定操作规程）
4.4溶液的透光度测定
4.4.1测定范围：>99.0%
4.4.2溶液配制；
取本品1.0g，加水20ml溶解。

4.4.3操作步骤：
照分光光度法，在430nm波长处测定其透光率（操作见分光光度法测定操作规程）。

4.5氯化物测定
4.5.1测定范围：<0.007%
4.5.2试剂和试液：6mol/L HCL：取54ml盐酸稀释至100ml，即得。

4.5.3操作步骤：
4.5.3.1称取本品1.0g，置50ml纳氏比色管中，加水溶解至25ml，再加稀硝酸10ml，加水使成40ml，摇匀，再加入硝酸银液(0.1mol/L)1.0ml，用水稀释至50ml，在暗处放置5分钟，作样品管。

4.5.3.2以标准氯化钠溶液7ml，作对照液，用4.5.3.1同样方法同时操作，作对照管。

4.5.3.3两管以黑色为背景底，从上方向下观察比较，所产生的浑浊度，样品管应浅于对照管。

4.6硫酸盐测定
4.6.1测定范围：<0.006%
4.6.2试剂和试液：
4.6.2.1稀盐酸溶液：取盐酸23.4ml，加水稀释至100ml，即得。

4.6.2.2 25%氯化钡试液：取氯化钡25g ，加适量的水溶解，并稀释至100ml，即得。

4.6.2.3标准硫酸钾溶液：1ml＝100µg
4.6.3操作步骤：
4.6.3.1称取本品2.5g，置50ml纳氏比色管中，加水溶解成40ml，加稀盐酸2ml，摇匀；加入25%氯化钡溶液5ml，用水稀释使成50ml，充分振摇，放置10分钟，作为样品管。

4.6.3.2以标准硫酸钾溶液1.5ml作对照液，同4.6.3.1操作。

4.6.3.3两管以黑色为背景底，从上方向下方观察比较所产生的浑浊度，样品管应浅于对照管。

4.7铵盐测定
4.7.1测定范围：<0.02%
4.7.2试剂和试液：
4.7.2.1氧化镁（AR）
4.7.2.2稀盐酸：同硫酸盐。

4.7.2.3无氨水：取纯化水1000ml，加稀硫酸1ml与高锰酸钾试液1ml，蒸馏，即得。

检查：取本品50ml，加碱性碘化汞钾1ml，不得显色。

4.7.2.4氢氧化钠试液（1mol/L）：取氢氧化钠4.3g，加水使成100ml，即得。

4.7.2.5碱性碘化汞钾试液：取碘化钾10g，加水10ml溶解后，缓缓加入二氯化汞的饱和水溶液，随加随搅拌，至生成的红色沉淀不再溶解，加氢氧化钾30g溶解后再加二氯化汞的饱和溶液≥1ml，并用适量的水稀释使成200ml静置，使沉淀即得。

用时须取上层澄清液。

4.7.2.6标准氯化铵溶液：称取氯化铵31.5mg置1000ml量瓶中，加水适量使溶解并稀
释至刻度，摇匀即得（每1ml相当于10ug的NH
）。

4
4.7.3.操作步骤：
4.7.3.1取本品0.1g置蒸馏瓶中，加200ml无氨水，加氧化镁1g蒸馏，馏出液导入加有稀盐酸1滴与无氨水5ml的纳氏比色管中，待馏出液达40ml时停止蒸馏。

4.7.3.2馏出液加1mol/L氢氧化钠试液5滴，加无氨水至50ml，加碱性碘化汞钾试液2ml，摇匀，放置15分钟作样品管。

4.7.3.3以标准氯化铵溶液2ml，按4.7.3.1和4.7.3.2项同步操作，作对照管。

4.7.3.4将两管作比色对照，样品管黄色应浅于对照管。

4.8铁盐测定
4.8.1测定范围：<0.001%
4.8.2需要试剂：
4.8.2.1稀盐酸：同硫酸盐
4.8.2.2过硫酸铵 AR
4.8.2.3 30%硫氰酸铵溶液：称取硫氰酸铵30g，加水使溶解并稀释至100ml即得。

4.8.2.4标准铁溶液：1ml＝10µg。

4.8.3.操作步骤：
4.8.3.1称取样品1.50g，加水溶解至25ml，加稀盐酸4ml、过硫酸铵50mg，用水稀释使成35ml，加30% 硫氰酸铵溶液3ml，再加水至50ml作样品管。

4.8.3.2以标准铁溶液1ml按4.8.3.1项同步操作，作对照管。

4.8.3.3两管作色泽对照，样品管应浅于对照管。

4.9重金属测定
4.9.1测定范围：<百万分之十。

4.9.2需要试液
4.9.2.1醋酸盐缓冲液（pH3.5）：取醋酸铵25g加水25ml溶解后，加7mol/L盐酸溶液38ml，用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液准确调节至pH=3.5，用水稀释至100ml即得。

4.9.2.2硫代乙酰胺试液：取硫代乙酰胺4g加水使溶解成100ml，置冰箱中保存。

临用前以混合液（由1mol/L氢氧化钠液15ml，水
5.0ml及甘油20ml组成）5.0ml，加上述硫代乙酰胺溶液1.0ml置水浴上加热20秒钟，冷却立即使用。

4.9.2.3标准铅溶液：1ml＝10µg
4.9.3操作步骤：
4.9.3.1取本品1.0g加适量水溶解于纳氏比色管中，加醋酸盐缓冲液（pH=3.5）2ml，加水稀释至25ml，再加硫代乙酰胺试液2ml摇匀，放置2分钟作样品管。

4.9.3.2另取标准铅溶液1ml，按4.10.3.1同步操作，作对照管。

4.9.3.3两管作色泽对照，以白色为衬底，从上往下观察，样品管应浅于对照管。

4.10砷盐测定
4.10.1测定范围：<0.0001%
4.10.2需要试液：
4.10.2.1盐酸AR
4.10.2.2碘化钾试液：称取碘化钾16.5g，加水使溶解成100ml即得。

4.10.2.3酸性氯化亚锡：取氯化亚锡20g，加盐酸使溶解成50ml滤过即得（使用期三个月）。

4.10.2.4锌粒：以能通过1号筛的细粒为宜，若使用较大锌粒时，用量应酌量增加，反应时间应延长1小时。

4.10.2.5醋酸铅试液：取醋酸铅10g，加新煮沸冷水溶解后，滴加醋酸使溶液澄清，再加新煮沸冷水使成100ml即得。

4.10.2.6醋酸铅棉花：脱脂棉1g，浸入醋酸铅试液与水等体积混合液12ml中，湿透后，挤压去过多的溶液，并使之疏松，在100 ℃下干燥后，贮于玻璃瓶中，盖塞备用。

4.10.2.7标准砷：1ml＝1µg
4.10.2.8溴化汞试纸：取滤纸条浸入乙醇制溴化汞试液中，1小时后取出，在暗处干燥即得。

4.10.3操作步骤：
4.10.3.1取本品2g，加水23ml，加5ml盐酸再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟，加锌粒2g，立即将带有醋酸铅棉花的导气管(上置溴化汞试纸小块)塞于三角烧瓶中，并将放在25-40℃水浴上反应45分钟，取出溴化汞试纸，作样品。

4.10.3.2另取标准砷溶液2ml，与4.10.3.1同样操作，作对照。

4.10.3.3两者作对照，观察溴化汞试纸上的砷斑，样品不得深于对照。

4.11其它氨基酸测定
4.11.1测定范围：<0.5%
4.11.2需要试剂：
4.11.2.1 2%茚三酮的丙酮溶液：同亮氨酸。

4.11.2.2展开剂：正丁醇∶冰醋酸∶水应为3∶1∶1。

4.11.3操作步骤：
4.11.3.1供试品溶液配制：精密称定40mg样品，加水适量使溶解并稀释至10ml。

4.11.3.2自身对照溶液配制：将上述溶液稀释至1ml=20μg。

4.11.3.3取供试品溶液5μl和自身对照溶液5μl同时点在一硅胶G板上，点样时要慢，点样完毕后放在有以上展开剂的层析缸中，待展开至板顶端，取出、晾干，喷以2%茚三酮丙酮溶液在80℃干燥10分钟。

4.11.3.4板上出现杂质斑点颜色，样品显示的杂质斑点颜色应浅于自身对照品的杂质斑点。

4.12干燥失重测定
4.12.1测定范围：<0.2%
4.12.2操作步骤：称取1g样品于已恒重的扁形称量瓶中，均匀平铺，置于干燥箱中，温度105℃，经过三小时干燥后称重。

4.12.3计算公式：
干燥失重%= W
1
+W
2
-W
3
×100%
W
1
式中：W
1
为样品的重量。

W
2
为称量瓶恒重的重量。

W
3
为(称量瓶+供试品)恒重的重量。

4.13炽灼残渣测定
4.13.1测定范围：<0.1%
4.14.2操作步骤：
称取1g样品于已恒重的30ml空坩埚中，在通风橱内先在煤气灯上缓缓灼烧，灼烧至供试品全部炭化呈黑色，并不冒浓烟，放冷至室温，滴加硫酸0.5-1.0ml，使炭化全部湿润，继续在煤气灯上加热至硫酸蒸气除尽，白烟消失，将坩埚置于高温炉内，在700℃-800℃灼烧约1小时后取出置于干燥器内，放冷，称重，必须再重复上述操作，进行恒重。

4.14.3计算公式：
炽灼残渣%= 残渣及坩埚重-空坩埚重
×100% 样品重量
4.14含量测定
4.14.1测定范围：>99.0%
4.14.2试剂和试液
4.14.2.1无水甲酸AR
4.14.2.2冰醋酸AR
4.14.2.3 α-萘酚苯甲醇指示剂：取α-萘酚苯甲醇0.5g，加冰醋酸100ml使溶解，即得。

变色范围：黄→绿。

4.1
5.2.4高氯酸滴定液(0.1mol/L)
4.14.3操作步骤：
4.14.3.1取样品约70mg，精密称定，加无水甲酸1.5ml使溶解，加冰醋酸25ml，照电位滴定法（见电位滴定法检查操作规程）,用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定,并将滴定的结果用空白试验校正。

4.14.3.2做一空白试验校正。

4.14.4计算公式：
甘氨酸含量%= F×（V
样
-V
空
）×0.007507
×100% 样品重（g）
式中： 0.007507—为每1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于甘氨酸（C
2H
5
NO
2
）的克
数。

4.15细菌内毒素检查
4.1
5.1测定范围：<10EU/g （5% <0.5 EU/ml）
4.1
5.2需要试剂：0.9%氯化钠注射液
4.1
5.3操作步骤
4.1
5.3.1溶液配制：称取本品5g，加0.9%氯化钠注射液100ml，溶解，在沸水中煮沸30分钟。

4.1
5.3.2将已配制上述溶液作细菌内毒素检查，（操作见细菌内毒素检查操作规程）。