HPV16 E5、E6和 E7基因重组慢病毒载体的构建及其感染口腔上皮细胞

HPV16 E5、E6和 E7基因重组慢病毒载体的构建及其感染
口腔上皮细胞
项先旺;江彤;陈传俊
【期刊名称】《安徽医科大学学报》
【年(卷),期】2016(51)7
【摘要】目的：分别构建 HPV16 E5、E6和 E7癌基因的重组慢病毒载体感染人
口腔上皮细胞，为研究 E5基因对口腔上皮细胞的致癌机制奠定基础。

方法克隆HPV16 E5、E6和E7基因，分别构建 pLVX－AcGFP－E5、 pLVX－AcGFP－E6和pLVX－AcGFP－E7重组慢病毒载体，与包装质粒共转染293T细胞。

收集3
种慢病毒上清液，分别感染口腔上皮细胞、腺嘌呤素筛选感染细胞，RT－PCR 和Western blot 法检测目的基因的表达。

结果成功构建 pLVX－AcGFP－E5、pLVX －AcGFP－E6和 pLVX－AcGFP－E7重组慢病毒载体，获得3种慢病毒上清液，筛选得到3个稳定的细胞株。

RT－PCR 和 Western blot均可检测到 HPV16 E5、E6和 E7基因在口腔上皮细胞内表达。

结论本研究构建的3个重组慢病毒载体能
成功感染口腔上皮细胞。

%Objective To provide the basis for the study of HPV16 E5 gene inthe pathogenesis of oral squamous cell carcinoma by constructing three lentiviral vectors expressing HPV 16 E5, E6 or E7 oncogene and transfecting o-ral epithelial cells with the vectors.Methods HPV16 E5, E6 or E7 oncogene was amplified using PCR and liga -ted into the lentiviral vector pLVX-AcGFP-N1 respectively to construct vectors pLVX -AcGFP-E5, pLVX-AcGFP-E6 and pLVX-AcGFP-E7, then respectively cotransfected 293T cells with packaging plasmids , viral supernatant was
collected to respectively transfect oral epithelial cells .Afterpuromycin screening,oral epithelial cells with HPV 16 E5, E6,or E7 oncogene transfection were constructed , then reverse transcription PCR and western blotassays were performed for verifying HPV16 E5, E6 or E7 expression.Results pLVX-AcGFP-E5, pLVX-AcGFP-E6 and pLVX-AcGFP-E7 were successfully constructed, oral epithelial cells expressing HPV 16 E5, E6 or E7 oncogene wereacquired, HPV16 E5,E6 or E7 expression was confirmed in oral epithelial cellsthrough reverse transcription PCR and western blot assays.Conclusion Three lentiviral vectors expressing HPV16 E5, E6 or E7 oncogene can successfully infect oral epithelial cells .
【总页数】5页(P940-943,944)
【作者】项先旺;江彤;陈传俊
【作者单位】安徽医科大学第三附属医院，合肥 230061;安徽农业大学植物保护学院，合肥 230036;安徽医科大学第三附属医院，合肥 230061; 皖南医学院口腔医学院，芜湖 241002
【正文语种】中文
【中图分类】R739.8
【相关文献】
1.宫颈癌细胞系中HPV16 E6、E7及E6/E7基因对STK31基因甲基化状态及表达的影响 [J], 殷复粉;王宁;于啸;毕晓宁;徐小惠;王言奎
2.女性尖锐湿疣和宫颈上皮内瘤变HPV16型E2、E6、E7基因突变及E6、E7抗原表达 [J], 黄灵;潘超;廉成翔;李晓霞;王官清
3.HPV16 E6/E7永生化口腔上皮细胞的上皮-间叶变 [J], 潘红芽;张志愿;周晓健;蒋欣泉;李江;陈万涛
4.HPV16^+治疗性无佐剂蛋白疫苗——HPV16z-Hsp65-E6/E7的构建、表达及纯化工艺研究 [J], 王小兵;李茉;刘毅;田海梅;刘朝阳;李艳芬;曹冬艳;梁智;程冬婉;邵长君;张伟
5.HPV16 E6/E7对永生化口腔上皮细胞p53、p21表达的影响 [J], 帕提曼;曹俊;张志愿
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。