人胃癌细胞系 MKN-45中二甲双胍对顺铂的拮抗作用
谈参芪抑瘤方抑制胃癌细胞MKN-45 增殖和侵袭转移作用机制
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中医药在胃癌防控方面有其优势，但尚缺少理想的中成药，其探索尚需深化。
近年来当归贝母苦参丸( 苦参丸) 加味治疗宫颈和前列腺的癌症取得了明显效果。
研究表明苦参丸可以对顺铂化疗H22 荷瘤小鼠肿瘤起到增效减毒的作用。
抑瘤方由苦参丸加黄芪等组成，契合了肿瘤正气不足，痰( 湿) 浊、癌毒、瘀血内阻的病机。
其组成中药所含有效成分黄芪多糖、当归多糖、阿魏酸、贝母碱、土贝母苷甲、苦参碱，全蝎蛋白组分等对多种癌细胞均有抑制作用。
前期研究表明抑瘤方可抑制H22 移植瘤的增殖，苦参丸可抑制SGC-7901的增殖。
但其机制并未完全阐明，本课题在前期研究的基础上采用抑瘤方药物血清干预MKN-45细胞的方法，选择侵袭转移相关的肿瘤标记物环氧合酶-2( COX-2) 和人第10 号染色体缺失的磷酸酶( PTEN) ，从分子水平探讨该方抑制胃癌侵袭转移的作用机制。
1 材料1. 1 动物和细胞SPF 级Wistar 大鼠60 只，体重( 200 ± 20) g，由甘肃中医药大学科研中心提供，合格证号SCXK( 甘) 2011-0001。
MKN-45 细胞株由北京协和肿瘤研究所提供。
1. 2 试剂和药物DMEM 培养基，胰蛋白酶( Hyclone 公司，批号分别为NZH1205，J130025) ，胎牛血清( 杭州四季青公司，批号130215 ) ，噻唑蓝( MTT) ，二甲基亚砜( Sigma 公司，批号分别为3BH0357，WXBB5403V) ，RNAisoTM Plus ( Takara Bio公司，批号D9810A) ，the PrimeSeript RT reagent，SYBR Premix Ex TaqTM ( Takara Bio 公司，批号分别为DRRO37A，DRR081A) ; 结晶紫( Solarbio 公司，批号C8470) ; COX-2，PTEN 抗体( 中杉金桥生物技术有限公司，批号均为ZA0251) ; 二抗( 中杉金桥公司，批号K135627C) ; 抑瘤方( 苦参15 g，黄芪30 g，当归15 g，浙贝母10 g 等) 由甘肃中医药大学附属医院中药房提供，经甘肃中医药大学附属医院杨仓锡主任药师鉴定为正品。
二甲双胍通过抑制MAPK信号通路增强卵巢癌细胞对顺铂的敏感性
【 ２ ０ ］ Ｐ ａ ｕ ｌ Ｅ，Ｂ ａ ｉ ｌ ｅ ｙ Ｍ，Ｖ ａ ｎ Ｌ ｉ ｎ ｔ Ａ，ｅ ｔ ａ １ ． Ｐ ｅ ｒ ｆ ｏ ｍａ ｒ ｎ ｃ ｅ ｏ ｆ ＡＰ ＡＣ Ｈ Ｅ Ⅲ
基金项 目：国家 自然科学 基金 （ ８ １ ２ ０ ２ ０ ７ ０ ） ①郑州大学第一附属医院 通信作者 ：谢娅 河南 郑州 ４ ５ ０ ０ ５ ２
［ １ ３ 】 Ｇ ｏ ｅ ｌ Ａ，Ｐ ｉ ｎ ｅ ｋ ｎ ｅ ｙ Ｒ Ｇ，Ｌ ｉ ｔ ｔ ｅ ｎ ｂ ｅ ｒ ｇ Ｂ ． ＡＰ ＡＣ Ｈ Ｅ Ｉ Ｉ ｐ ｒ ｅ ｄ ｉ ｃ ｔ ｓ ｌ ｏ ｎ ｇ —
ｒ ｅ ｓ ｐ ｉ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ ｆ ａ ｉ ｌ ｕ ｒ ｅ ｉ ｎ ａ ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ ｉ ｎ ｔ ｅ ｎ ｓ ｉ ｖ ｅ ｃ ａ ｒ ｅ ｕ ｎ ｉ ｔ ［ Ｊ ］ ． Ｊ Ｆ ｏ ｒ ｍｏ ｓ Ｍｅ ｄ
ＡＳ Ｓ Ｏ Ｃ ，２ ０ ０ １ ，１ ０ ０（ ７） ： ４ ３ ７ — ４ ４ ２ ．
Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ方法 检测顺铂联合 或者不联 合二 甲双胍对 Ｓ Ｋ Ｏ Ｖ ３ 细胞增殖 的影 响 ；二甲双胍联合或者不联合 Ｍ Ａ Ｐ Ｋ信号通 路 阻断剂后 Ｂ Ｒ Ｄ Ｕ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ方法检测细胞增殖 的变化。Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ ｂ ｌ ｏ ｔ ｔ ｉ ｎ ｇ 检测二 甲双 胍作 用下卵巢癌细胞 系 Ｓ Ｋ Ｏ Ｖ ３的 磷酸化 Ａ Ｍ Ｐ Ｋ ／ 总Ａ Ｍ Ｐ Ｋ 水 平和磷 酸化 ｐ ３ ８ Ｍ Ａ Ｐ Ｋ ／ 总Ｍ Ａ Ｐ Ｋ水平 的变化 。结果 ： （ １ ） 二 甲双胍不仅能抑制卵巢癌细 胞系Ｓ Ｋ Ｏ Ｖ ３ 细胞 的增 殖 ，而且能提高对顺 铂的敏感性 ，并且 这种 作用是依赖 于 Ａ Ｍ Ｐ Ｋ激活 的； （ ２ ） ｐ ３ ８ Ｍ Ａ Ｐ Ｋ阻 断剂 Ｓ Ｂ ２ ０ ３ ５ ８ ０ 能够抑制 Ｓ Ｋ Ｏ Ｖ ３的增殖 ，二 甲双胍能够增强这种 抑制作用。结论 ：二 甲双胍可增强顺铂对 卵巢癌 细胞 的抑制作用 ，并且二 甲双胍可能通过激活 Ａ Ｍ Ｐ Ｋ信号通路进 而抑 制 Ｍ Ａ Ｐ Ｋ信号通路增加顺铂对 卵巢 癌细胞的 抑制增殖作用。
二甲双胍对人胃癌细胞株MKN45增殖和迁徙的影响
Ｂａ ｋ ｒ ｕ ｄ Ｍｅｆ ｒ ｎ ｈ ｓ ｒ ｃ ｎｌ ｅ ｎ ｓ ｏ ｏ ｈ ｖ ｏｅ ｔ ｌａ ｔ ｕ ｒｅｆ ｃ， ｂ ｔ ｈ ｔ ｄｅ ｎ ｄｇ ｓｉｅ ｃｇ ｏ ｎ ： ｔ ｍｉ ａ ｅ ｅ ｔ ｂ ｅ ｈ ｗｎ ｔ ａ ｅ ｐ ｔｎ ｉ ｎ ｉ ｍｏ ｆ ｔ ｏ ｙ ａ ｔ ｅ ｕ ｅ ｓ ｉｓ ｏ ｉｅ ｔ ｔ ｕ ｖ ｓ ｓｅ ｔ ｍｏ ｓ ｅ ｐ ｃ ａｌ ｈ ａ ｔ ｃ ｃ ｎ ｅ ｒ ａｅ Ａｉ ｓ ｙ ｔ ｍ ｕ ｒ ｓ ｅ ｉｌ ｔ ｅ ｇ ｓｒ ａ ｃ ｒａｅ ｒ ｒ ． ｙ ｉ ｍ ： Ｔ ｎ ｅ ｔ ａｅ ｔ ｅ ｅｆ ｃ ｆｍｅ ｏ ｍｉ ｎ ｐ ｏ ｉ ｒ ｔ ｎ ａ ｄ ｏ ｉ ｖ ｓｉ ｔ ｈ ｆ ｔｏ ｆ ｒ ｎ ｏ ｒ ｌ ｅａｉ ｎ ｇ ｅ ｆ ｏ
ｈ ｍ ｎｇｓ ｃｃｌｌ ｅＭＫ ４ ａ ｃ ｂｔ ｉ ０ｍ ］ ｔｒ ｎｗｔ ｏ ｉ ｏ ｔ －ｕ ｒｕａｉｆＦ ）Ｓ ｒｉ ｌａ ｕ ａ ａｔ ｅ ｎ Ｎ ５ｗ ｓ ｎｕ ａ ｄｗｔ １ ｍｏＬｍｅｏｍｉ ｉ ｒ ｔ ｕ ｆ ｏｏｒｃ 一Ｕ． ｕｖｖ ｔ ｉ ｒ ｌｉ ｉ ｅ ｈ ／ ｆ ｈ ｗｈ ５ ｓ ｃｃ ｎ ｅ ｅｌｌ ｅ ＭＫＮ４ ， ｎ ｏ ａ ｐ ａ ｓ ｈ ｏ ｓ ｌ ｏ ｅ ｔ ｌｍｅ ｈ ｎ ｓ Ｍ ｅ ｈ ｄ ： Ｃ ｌ ｒ ｄ ｇ ｔ ｆｈ ｍａ ａ ｔ ａ ｃ ｒｃ ｌ ｉ ｒ ｏ ｉ ｒ ｎ ５ ａ ｄ ｔ ｐ ｒ ｉｅｔ ｅ ｐ ｓ ｉ ｅ ｐ ｔ ｎｉ ｃ ａ ｉｍ． ｂ ａ ｔｏ ｓ ｕｔ ｅ ｕ
促 进 细 胞 凋亡
细胞焦亡在胃癌中的生物学作用研究进展
细胞焦亡在胃癌中的生物学作用研究进展细胞焦亡是由Gasdermin（GSDM）家族蛋白诱导的程序性细胞死亡，表现为细胞质膜形成膜孔，细胞膜破裂，内容物释放。
在形态学特征上，发生焦亡的细胞和凋亡一样可出现DNA 损伤、核固缩，但细胞核较凋亡保持完整，DNA 损伤程度较凋亡低，TUNEL 染色呈阳性。
其次，细胞焦亡过程中会形成质膜孔隙，导致细胞肿胀和渗透溶解，大量炎症因子释放。
随着研究的深入，细胞焦亡在癌症中的生物学作用日益凸显。
本文基于细胞焦亡的分子机制及胃癌与细胞焦亡的相关研究探讨该生物学过程在胃癌中的作用，为胃癌的治疗提供新的思路。
一、细胞焦亡定义及机制细胞焦亡的定义从发现至今经过了多次变化。
细胞死亡命名委员会（NCCD）在2018 年将其修正为：一种依赖于Gasdermin 家族蛋白诱导细胞质膜形成膜孔的可调控的细胞死亡，通常但不总因炎症性Caspase 的活化而完成。
细胞焦亡涉及几个关键组分：炎症小体、Caspase 家族、Gasdermin 家族。
炎症小体是一种细胞内多蛋白信号复合物，通常围绕模式识别受体（pattern-recognition receptors，PRR）组装完成。
PRR 可识别胞内病原相关分子模式（pathogen-associated molecular patterns，PAMPs）、损伤信号（damage-associated molecular patterns，DAMPs）从而激活Caspase 家族蛋白诱导细胞焦亡。
PRR 家族通常包括Toll 样受体（Toll-like receptors，TLRs）、NOD 样受体（NOD-like receptors，NLRs）等，受体激活Caspase 家族蛋白诱导细胞焦亡，但若受体上不含Caspase 招募结构域（Caspase activation and recruitment domain，CARD），则另需通过（pyrin-like domain，PYD）结构域与含有CARD 结构域的凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain，ASC）结合，最终通过CARD 结构域激活Caspase 家族蛋白诱导细胞焦亡。
二甲双胍的多通路抗癌作用
中国乡村医药二甲双胍的多通路抗癌作用周 骅 王 增二甲双胍为治疗T2DM的一线用药，通过提高患者对胰岛素的敏感性，减轻高胰岛素血症及胰岛素抵抗，达到抑制胰岛素的促有丝分裂及促生长作用的目的。
由于其不刺激胰岛素的分泌，故可降低癌细胞对胰岛素的应答。
Bodmer等[1]发现，长期使用二甲双胍能降低女性乳腺癌的发病率，使消化道癌症的发病率下降。
提示二甲双胍具有一定的抗肿瘤作用，但抗癌机制尚未完全阐明，存在多种可能机制。
笔者现将二甲双胍可能的抑癌机制综述如下：1 二甲双胍对肝激酶B1-磷酸腺苷激活的蛋白激酶-哺乳动物雷帕霉素蛋白受体信号通路的作用肝激酶B1（LKBl）由抑癌基因LKB1编码，对下游1 4个磷酸腺苷激活的蛋白激酶（AMPK）家族成员有激活作用，能将细胞周期阻滞在G1期[2]。
AMPK是研究代谢性疾病的关键分子，广泛表达于各种代谢相关的器官中，能对多种刺激产生应答。
哺乳动物雷帕霉素蛋白受体（mTOR）是一种高度保守的Ser/Thr蛋白激酶，通过调节mRNA翻译过程中关键酶的磷酸化，间接促进蛋白的合成。
癌细胞中，LKB1-AMPK对蛋白质合成的负向调节被极大减弱[3]，mTOR则出现过表达现象。
传统观点认为，在LKB1的参与下，二甲双胍通过抑制呼吸链，降低三磷腺苷（ATP）水平，上调AMP/ATP比例而激活AMPK。
AMPK通过直接或间接的方式负向调控mTOR，抑制蛋白的合成。
Lin等[4]在肺癌细胞株AS2/S3C上，证实了二甲双胍通LKB1-AMPK-mTOR途径抑制信号转导因子和STAT3的活性。
二甲双胍还可通过不激活AMPK的方式下调mTOR，降低下游70kDA核糖蛋白s6激酶及真核起始因子4E结合蛋白的磷酸化，减少肿瘤细胞蛋白质的合成[5]。
訾富明[6]用二甲双胍对敲除AMPK后的多发性骨髓瘤细胞进行处理，发现其抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡的能力反而增强。
对于AMPK在肿瘤进程肿所扮演的角色，目前尚未完全阐明。
二甲双胍联合照射抑制人肺癌细胞的侵袭和转移的研究
二甲双胍联合照射抑制人肺癌细胞的侵袭和转移的研究王雯臖;列璞怡;郭敏章;何建行【摘要】Objective To investigate the effect of metformin combined with irradiate on migration and invasion capacity in lung cancer so as to shed new light on the development of target therapy for lung cancer.Methods Inhibitory effect of metformin combined with irradiation on A549 cells was detected by MTT.The migration and invasion capacity of tumor cells were assessed by wound healing assay and transwell chamber with matrigelgel,respectively.Expression of MMP -2,MMP -6,VEGF was measured by Western blot.Results MTT assay showed an obvious suppression of A549 cells proliferation in response to Met-formin treatment.12 h and 24 h migration distances in the metformingroup,irradiation group and combined treatment group were lower than the control group.The combined treatment with metformin and Irradiation also caused a significantly higher inhibition rate of A549 cells invasion than metformin or Irradiate alone.The combined treatment group could down regulate the expression of VEGF,MMP -9 and MMP -2.Conclusion Metformin reduced the growth of lung cancer tumor cells,down regulated the ex-pression of MMP -2,MMP -9 and VEGF,inhibited the lung cancer cell invasion.It suggests that metformin can play an impor-tant role in the metastasis of lung cancer and maybe a potential therapy for lung cancer.%目的：探讨二甲双胍联合照射对人肺癌细胞的侵袭和转移能力的影响，为研发肺癌有效的靶向治疗方案提供新思路。
二甲双胍激活AMPK促进顺铂对肝癌细胞凋亡的初步研究
二甲双胍激活AMPK促进顺铂对肝癌细胞凋亡的初步研究张阳德;王宁;廖明媚;陈玉祥【期刊名称】《中国现代医学杂志》【年(卷),期】2013(23)10【摘要】目的探讨二甲双胍与顺铂合用对肝癌细胞的作用,为进一步的体内研究奠定基础.方法 MTT法检测不同浓度、不同时间二甲双胍、顺铂单用及两者合用于SMMC7721、HepG2肝癌细胞所致细胞增殖及凋亡；Hoechst33258检测二甲双胍、顺铂单用及合用对HepG2细胞核形态变化的影响.Western blot检测细胞内AMPK/p-AMPK的表达.结果二甲双胍、顺铂单用及合用于SMMC7721、HepG2,随着作用时间及浓度增加抑制率增加,呈时间-浓度依赖性；Hoechst33258结果显示合用组细胞凋亡最严重；Western blot结果显示二甲双胍、顺铂单用及合用均激活AMPK,联合用药组p-AMPK上调最明显.结论二甲双胍联合低浓度顺铂可激活AMPK,增加其对SMMC7721、HepG2癌细胞的毒性.【总页数】4页(P20-23)【作者】张阳德;王宁;廖明媚;陈玉祥【作者单位】中南大学卫生部肝胆肠外科研究中心,长沙湖南410008;中南大学卫生部肝胆肠外科研究中心,长沙湖南410008;中南大学卫生部肝胆肠外科研究中心,长沙湖南410008;中南大学卫生部肝胆肠外科研究中心,长沙湖南410008【正文语种】中文【中图分类】R735.7;R730.5【相关文献】1.FBXO31基因促进顺铂诱导的肝癌细胞凋亡 [J], 何惠娟;黄海丽;王镇南;杨拉维;陈婷;吴平2.FBXO31基因促进顺铂诱导的肝癌细胞凋亡 [J], 何惠娟;黄海丽;王镇南;杨拉维;陈婷;吴平;3.二甲双胍激活AMPK抑制特发性肺纤维化的研究进展 [J], 何远芬;闵香玉;谢婷婷;杨信容;赵勇4.抗菌肽LL-37通过激活AMPK介导的自噬对结肠癌HT-29细胞凋亡的研究 [J], 谢亚锋;许志杰;丁雅婷;闫圣玉;张侨;刘菀莹;刘丽兵5.酮康唑通过下调COX-2过度激活线粒体自噬促进肝癌细胞凋亡的分子机制【据《J Hepatol》2019年1月报道】题:酮康唑通过下调COX-2过度激活线粒体自噬促进肝癌细胞凋亡的分子机 [J], 制(作者ChenY等)因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
二甲双胍联合化疗药物对人胃癌 AG S细胞的作用
二甲双胍联合化疗药物对人胃癌 AG S细胞的作用吴诗文;张自森;刘谦;王世超;司远方;赵胜男;夏兴洲【摘要】目的：探讨二甲双胍（Met）联合化疗药物对人胃癌AGS细胞的影响。
方法：应用Met及其分别联合顺铂（ DDP）、阿霉素（ ADM）、紫杉醇（ PTX）处理人胃癌AGS细胞，应用CCK-8、Transwell模型、流式细胞术检测细胞增殖、迁移能力、侵袭能力及细胞凋亡。
结果：Met可呈时间-剂量依赖性抑制AGS细胞增殖（P均＜0．001），IC50为10 mmol／L。
10 mmol／L Met、2 mg／L 的DDP、0．02 mg／L的ADM、0．02 mg／L的PTX单用均可降低AGS细胞的迁移、侵袭能力，促其凋亡（P均＜0．05），Met可协同3种化疗药物促进AGS细胞凋亡（P＜0．05）。
结论：Met有望用于胃癌的辅助化疗。
%Aim:To investigate the effect of metformin ( Met) combined with chemotherapeutic agents on human gas-tric cancer cell lineAGS .Methods:AGS cells were treated with Met alone or in combination of cisplatin ( DDP) , doxoru-bicin(ADM) or paclitaxel(PTX).CCK-8, Transwell, and flow cytometry were used to detect cell proliferation , migration, invasion and apoptosis.Results:Met could inhibit cell proliferation in adose-and time-dependent manner(P<0.001), and IC50 was 10 mmol/L.10 mmol/L Met,2 mg/L DDP,0.02 mg/L ADM,0.02 mg/L PTX separate application could de-crease the migration, invasion capabilities and prompt apoptosis of AGS cells (P<0.05), and Met had synergistic effected when being used with DDP, ADM or PTX in cellapoptosis(P<0.05).Conclusion: Met might be used for adjuvant chemotherapy for gastric cancer .【期刊名称】《郑州大学学报（医学版）》【年(卷),期】2017(052)001【总页数】5页(P37-41)【关键词】二甲双胍;胃癌;顺铂;阿霉素;紫杉醇【作者】吴诗文;张自森;刘谦;王世超;司远方;赵胜男;夏兴洲【作者单位】郑州大学第五附属医院消化内科郑州450052;郑州大学第五附属医院肿瘤科郑州450052;郑州大学第五附属医院消化内科郑州450052;郑州大学第五附属医院消化内科郑州450052;郑州大学第五附属医院消化内科郑州450052;郑州大学第五附属医院消化内科郑州450052;郑州大学第五附属医院消化内科郑州450052【正文语种】中文【中图分类】R735.2#通信作者，男，1964年9月生，硕士，主任医师，研究方向：胃癌的临床基础研究，E-mail:****************近年来研究[1-4]发现二甲双胍(metformin,Met)能够抑制多种肿瘤细胞的生长，其抗肿瘤作用得到了广泛关注。
神药”二甲双胍,又有新作用!
神药”二甲双胍，又有新作用！1 二甲双胍可护胃，降低胃癌风险近日，世界顶级科学期刊《CELL》的子刊《Cell Stem Cell》官网更新了有关二甲双胍的最新研究：二甲双胍可以调节胃内干细胞的代谢，促使它们分化为产胃酸的胃壁细胞。
研究显示，AMPK代谢通路促进干细胞生成分泌酸的壁细胞，二甲双胍通过激活AMPK和KLF4减慢祖细胞增殖的同时，也可以通过激活AMPK 和PGC1a诱导壁细胞成熟，这为二甲双胍为何会增加酸分泌并降低人患胃癌的风险提供了潜在的暗示。
据奇点网解读，简单来说，就是二甲双胍可以支持胃内的干细胞分化出更多保护胃的细胞，这就能有一定的护胃效果——公开资料显示，胃壁细胞的大量受损是胃癌发生的重要一步，而二甲双胍激活AMPK时，干细胞分化成胃壁细胞的速度会接近一倍，胃壁细胞的存活时间也明显延长。
此外，2018年一项研究表明：二甲双胍的使用以持续和剂量反应的方式使幽门螺旋杆菌根除的糖尿病患者，胃癌风险降低了51%。
据国际癌症中心统计，2018年全球新增癌症1807.9万例，死亡955.5万例，且2022年全球老年人口将从2015年的12%增加到22%，预计未来几十年癌症发病率将增加70%，肺癌是我国最常见的癌症，其次是结直肠癌、胃癌、肝癌及乳腺癌，前五大癌症占据我国新增癌症患者近60%，新增胃癌是全球相应类别新增病例的44%。
米内网数据显示，二甲双胍作为全球核心糖尿病药物，2018年度在中国公立医疗机构、实体药店等销售终端合计市场规模超过60亿元，作为非专利药，赛柏蓝在国家药监局官网以“二甲双胍”为关键词搜索，共有306个批文，涉及大批企业。
2治疗潜力，20个新发现随着研究深入，神药二甲双胍的治病潜力不断被拓展，但此次研究“护胃”和“降低胃癌风险”的结论还属首次，意味着二甲双胍继抗老、减肥、心血管保护、或可治疗三阴乳腺癌外，又下一城，拓宽在胃病用药领域的新发现。
多个研究显示，二甲双胍可为使用者带来“意外之喜”。
二甲双胍对胃癌抗肿瘤作用的研究进展
Advances in Clinical Medicine 临床医学进展, 2019, 9(7), 831-836Published Online July 2019 in Hans. /journal/acmhttps:///10.12677/acm.2019.97128Research Progress on Anti-Tumor Effect ofMetformin in Gastric CancerLiqin He, Shuangshuang Zhang, Yichao FengYan’an University Affiliated Hospital, Yan’an ShaanxiReceived: Jun. 23rd, 2019; accepted: Jul. 8th, 2019; published: Jul. 15th, 2019AbstractAt present, more and more evidence that metformin has the effect of lowering blood sugar; it also can reduce the cancer risk of diabetes. Previous research has shown that metformin may work alone or in combination with some anticancer drugs synergy, through single adenosine phosphate activated protein kinase (Adenosine 5'-monophosphate (AMP)-activated protein kinase, AMPK) signaling pathway having antitumor effects on various types of cancer. However, metformin re-search on antitumor effect of gastric cancer is less in this paper. Combined with domestic and for-eign literature, this paper introduces the metformin in different mechanisms of antitumor, gastric cancer from genes, signaling pathways to the function of gastric cancer cell lines and gastric can-cer stem cells and the interaction between tumor cells and tumor microenvironment. And they summarized as follows.KeywordsMetformin, Gastric Cancer, Anti-Tumor Effect二甲双胍对胃癌抗肿瘤作用的研究进展贺礼琴，张双双，冯义朝延安大学附属医院，陕西延安收稿日期：2019年6月23日；录用日期：2019年7月8日；发布日期：2019年7月15日摘要目前越来越多的证据表明，二甲双胍除了具有降低血糖的作用外，还可降低糖尿病患者的癌症发生风险，贺礼琴等先前的研究表明二甲双胍可以单独作用或与某些抗癌药物协同作用，通过腺苷单磷酸活化蛋白激酶(Adenosine 5'-monophosphate (AMP)-activated protein kinase，AMPK)信号通路对各种类型的肿瘤产生抗肿瘤作用。
二甲双胍联合顺铂对人肺癌裸鼠移植瘤治疗作用的研究
㊃论 著㊃D O I :10.3760/c m a .j .i s s n .1673-436X.2015.06.003基金项目:河北省卫生厅项目(20120348)作者单位:050051石家庄,河北医科大学第三医院呼吸内科通信作者:陈刚,E m a i l :c h e n g a n g.8@h o t m a i l .c o m 二甲双胍联合顺铂对人肺癌裸鼠移植瘤治疗作用的研究陈玉琴 陈刚ʌ摘要ɔ 目的 研究二甲双胍联合常用的化疗药物顺铂对于人肺癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用及对生存素(S u r v i v i n )㊁基质金属蛋白酶-2(MM P -2)和K i 67分子表达的影响,致力于探索治疗肺癌的新的有效药物㊂方法 建立肺癌裸鼠移植瘤模型,将裸鼠随机分为二甲双胍组㊁顺铂组㊁二甲双胍联合顺铂组及对照组,给药42d 后,处死动物,留取肿瘤组织,免疫组织化学法及实时荧光定量P C R 法检测肿瘤组织中S u r v i v i n ㊁MM P -2和K i 67蛋白及m R N A 的表达㊂结果 二甲双胍组㊁顺铂组和二甲双胍联合顺铂组抑瘤率分别为28.97%㊁35.34%和54.65%㊂与对照组比较,顺铂组及二甲双胍联合顺铂组S u r v i v i n ㊁MM P -2和K i 67蛋白及m R N A 表达水平均降低(P 值均<0.05),二甲双胍组MM P -2蛋白及m R N A 表达水平降低(P 值均<0.05);与二甲双胍组㊁顺铂组比较,二甲双胍联合顺铂组S u r v i v i n ㊁MM P -2和K i 67蛋白及m R N A 表达水平均降低(P 值均<0.05)㊂结论 二甲双胍组可抑制MM P -2的表达,顺铂组及二甲双胍联合顺铂组均可抑制S u r v i v i n ㊁MM P -2和K i 67的表达,二甲双胍和顺铂联合应用可以增强抗肿瘤的疗效㊂ʌ关键词ɔ 肺癌;二甲双胍;顺铂;生存素;基质金属蛋白酶-2;K i 67E f f e c t s o fm e t f o r m i na n d c i s p l a t i no nh u m a n l u n g c a n c e r x e n o g r a f t i nn u d em i c e C h e nY u q i n ,C h e nG a n g .D e p a r t m e n t o f R e s p i r a t o r y M e d i c i n e ,t h eT h i r d H o s p i t a l o f H e b e iM e d i c a lU n i v e r s i t y ,S h i j i a z h u a n g050051,C h i n aC o r r e s p o n d i n g a u t h o r :C h e nG a n g ,E m a i l :c h e n g a n g .8@h o t m a i l .c o m ʌA b s t r a c t ɔ O b je c t i v e T h i ss t u d y i sd e s i g n e dt oe v a l u a t e t h eef f e c t so fm e t f o r m i nc o m b i n e d w i t h c i s p l a t i no nt u m o rg r o w th ,e x p r e s si o n so fS u r v i v i n ,m a t r i x m e t a l l o p r o t e i n a s e -2(MM P -2),a n d K i 67i n l u n g c a n c e r x e n o g r a f t o nn u d em i c e ,t o p o t e n t i a l l y d e v e l o p n e we f f e c t i v ed r u g s f o r t h e t r e a t m e n t o f l u n g c a n e r .M e t h o d s H u m a nl u n g c a n c e r x e n o g r a f ts t u d y m o d e l w a se s t a b l i s h e d .T h e n u d e m i c e w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o m e t f o r m i n -t r e a t e d g r o u p ,c i s p l a t i n -t r e a t e d g r o u p ,m e t f o r m i n c o m b i n e d w i t h c i s p l a t i n -t r e a t e d g r o u p a n dc o n t r o l g r o u p .F o r t y -t w od a y sa f t e ra d m i n i s t r a t i o n ,a l l t h en u d e m i c e w e r e s a c r i f i c e d a n d t u m o r t i s s u e sw e r e s a m p l e d .T h e e x p r e s s i o n s o f S u r v i v i n ,MM P -2,a n dK i 67p r o t e i n s i n t h e t u m o r t i s s u e sw e r e d e t e c t e db y i mm u m o h i s t o c h e m i c a lm e t h o d .T h ee x p r e s s i o n so fS u r v i v i n ,MM P -2,a n d K i 67m R N Ai nt h et u m o rt i s s u ew e r ed e t e c t e db y f l o r e s c e n tr e a l -t i m e q u a n t i t a t i v eP C R.R e s u l t s T h e t u m o r i n h i b i t i o nr a t e i n m e t f o r m i n -t r e a t e d g r o u p ,c i s p l a t i n -t r e a t e d g r o u p ,a n d m e t f o r m i nc o m b i n e d w i t h c i s p l a t i n -t r e a t e d g r o u p w a s28.97%,35.34%,a n d54.65%,r e s p e c t i v e l y .T h ee x p r e s s i o n so fS u r v i v i n ,MM P -2,a n dK i 67p r o t e i na n d m R N Ai nc i s p l a t i n -t r e a t e d g r o u p a n d m e t f o r m i nc o m b i n e dw i t hc i s p l a t i n -t r e a t e d g r o u p w e r e l o w e r t h a nt h o s e i nc o n t r o l g r o u p (a l l P <0.05).C o m p a r e dw i t hc o n t r o l g r o u p,t h e e x p r e s s i o n s o fMM P -2p r o t e i na n d m R N Ai n m e t f o r m i n -t r e a t e d g r o u p w e r er e d u c e d (a l l P <0.05).C o m p a r e dw i t hm e t f o r m i n -t r e a t e d g r o u p a n d c i s p l a t i n -t r e a t e d g r o u p ,t h e e x p r e s s i o n s o f S u r v i v i n ,MM P -2,a n dK i 67p r o t e i na n dm R N Ai nm e t f o r m i nc o m b i n e dw i t hc i s p l a t i n -t r e a t e d g r o u p w e r e r e d u c e d (a l l P <0.05).C o n c l u s i o n s M e t f o r m i nc o u l d i n h i b i t MM P -2e x p r e s s i o n .C i s pl a t i no rm e t f o r m i nc o m b i n e d w i t h ㊃014㊃国际呼吸杂志2015年3月第35卷第6期 I n t JR e s pi r ,M a r c h2015,V o l .35,N o .6c i s p l a t i n c a n i n h i b i t t h ee x p r e s s i o n so fS u r v i v i n,MM P-2,a nd K i67.C o m b i n a t i o nd r u g o fme tf o r m i na n d c i s p l a t i n c a ne n h a n c e t h e a n t i-t u m o r e f f i c a c y.ʌK e y w o r d sɔ L u n g c a n e r;M e t f o r m i n;C i s p l a t i n;S u r v i v i n;M a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e-2;K i67近年研究发现应用二甲双胍可减少糖尿病患者恶性肿瘤发生风险,抑制肿瘤细胞生长,增强化疗药物的作用㊂其抗肿瘤作用或是否作为一种抗肿瘤药物已受到糖尿病和肿瘤学术领域的重视㊂近年的临床研究发现,服用二甲双胍治疗的糖尿病患者,肿瘤发生率明显下降[1],从而揭开了二甲双胍在肿瘤领域研究的序幕,并逐渐成为研究的 亮点 ㊂有研究显示,二甲双胍与顺铂联合应用,两者有协同作用,有利于抑制顺铂化疗的耐药[2]㊂其中的作用机制需要进一步研究,本实验旨在研究二甲双胍及其联合顺铂对肺癌裸鼠移植瘤的影响作用,并检测生存素(S u r v i v i n)㊁基质金属蛋白酶-2(MM P-2)和K i67在肿瘤中表达的变化,从而在分子方面探讨其作用机制,也许能为肺癌的治疗提供新的思路和策略㊂1材料和方法1.1细胞培养人肺腺癌细胞株A549进行细胞培养,使用含12%进口胎牛血清㊁100U/m l青霉素和100U/m l链霉素的F12k培养基,在37ħ含5%C O2培养箱中培养㊂1.2细胞接种 B A L B/c雄性裸小鼠33只,体质量20~24g,周龄4~5周,购自北京华阜康生物科技股份有限公司,实验动物合格证编号:S C X K京-204-0004㊂在I V C环境中应用无菌饲料及灭菌纯净水饲养,环境温度㊁湿度适宜㊂取处于对数生长期的A549细胞,制成单细胞悬液,裸鼠皮肤消毒后用1m l注射器在左侧腋部皮下接种上述细胞悬液0.2m l㊂1.3裸鼠分组与处理使用游标卡尺测量肿瘤结节的长径㊁短径,按公式体积=长径ˑ短径2/2,估算肿瘤近似体积㊂待移植瘤平均直径约4mm时,去除肿瘤体积最小的1只裸鼠,将裸鼠随机分为对照组㊁二甲双胍组㊁顺铂组㊁二甲双胍联合顺铂组,每组8只㊂顺铂组裸鼠给予顺铂注射液(南京制药厂有限公司,批准文号:国药准字H2003075),采用腹腔注射给药,剂量为每次5m g/k g,每周给药1次,同时口服灭菌蒸馏水;二甲双胍组给予口服二甲双胍(中美上海施贵宝制药有限公司,批准文号:国药准字H20023370),采用灌胃给药,剂量为200m g㊃k g-1㊃d-1,同时腹腔注射等量生理盐水;二甲双胍联合顺铂组给予二甲双胍200m g㊃k g-1㊃d-1灌胃和顺铂注射液每次5m g/k g,每周1次,腹腔注射;对照组口服等量灭菌蒸馏水,腹腔注射等量生理盐水㊂给药42d后,颈椎脱臼法处死裸鼠留取肿瘤组织,肿瘤组织部分置于4%多聚甲醛溶液中固定,进行常规包埋切片,免疫组织化学检测,部分置于含R N A保存液的E P管中,液氮中冻存以进行P C R 的检测㊂抑瘤率的计算公式为:抑瘤率=对照组平均体积-治疗组平均体积对照组平均体积ˑ100%1.4免疫组织化学检测肿瘤组织S u r v i v i n㊁MM P-2和K i67蛋白的表达1.4.1标本处理将剥取的肿瘤组织置于4%多聚甲醛溶液中固定,梯度乙醇脱水(乙醇浓度分别为75%㊁80%㊁90%㊁95%ˑ2㊁100%ˑ2;二甲苯ˑ2),浸蜡2次,石蜡包埋㊂1.4.2试剂 S u r v i v i n兔抗人多克隆抗体(抗体使用浓度均为1ʒ200)购自b i o w o r l d公司;MM P-2兔抗人多克隆抗体(抗体使用浓度均为1ʒ200)购自b i o w o r l d公司;K i67鼠抗人单克隆抗体(抗体使用浓度为1ʒ200)购自基因科技(上海)有限公司;D A B及兔二抗均购自北京中杉公司㊂1.4.3免疫组织化学染色采用S P法㊂切片厚4μm,常规脱蜡至水,抗原热修复,待修复液温度高于93ħ时将切片浸入0.01m o l/L枸橼酸缓冲液,修复12m i n,室温45m i n降温,用蒸馏水浸泡5m i nˑ3次,3%H2O237ħ温箱孵育20m i n,以消除内源性过氧化物酶活性,蒸馏水浸泡5m i n,浸入P B S溶液5m i nˑ3次,滴加一抗,4ħ冰箱内过夜㊂浸入P B S 溶液5m i nˑ3次,滴加二抗,37ħ温箱孵育30m i n,D A B显色,以显微镜下特定部位表达最大时终止显色,自来水冲洗10m i nˑ3次,苏木精复染1m i n,分化㊁返兰各30s,脱水封片㊂用P B S缓冲液代替一抗作为标本染色的阴性对照㊂用公司提供的阳性切片做阳性对照,光学显微镜下观察并拍照㊂1.4.4S u r v i v i n㊁MM P-2和K i67蛋白表达阳性结果判断及定量分析S u r v i v i n阳性产物位于胞质或胞核中,呈棕黄色判定为阳性㊂MM P-2阳性产物位于胞膜和胞浆,呈棕黄色判定为阳性㊂K i67阳性产物位于细胞核,胞核呈棕黄色或棕褐色为阳性㊂先在低倍镜下对组织切片全面观察,随后于200倍光镜下,随机观察10个视野,以北航真彩色病理图像㊃114㊃国际呼吸杂志2015年3月第35卷第6期I n t JR e s p i r,M a r c h2015,V o l.35,N o.6分析系统计算平均积分光密度值㊂1.5 荧光定量R T -P C R 法检测肿瘤组织S u r v i v i n ㊁MM P -2和K i 67m R N A 的表达1.5.1 目的基因引物的合成 引物由上海生工生物工程有限公司合成㊂引物序列如下:G A P D H 上游引物:5ᶄ-T G A A C G G G A A G C T C A C T G G -3ᶄ,下游引物:5ᶄ-G C T T C A C C A C C T T C T T G A T G T C -3ᶄ;S u r v i v i n 上游引物:5ᶄ-T T T C T C A A G G A C C A C -C G C A -3ᶄ,下游引物:5ᶄ-A G T C T G G C T C G T T C T -C A G T G -3ᶄ;MM P -2上游引物:5ᶄ-A A C T A C G A T -G A T G A C C G C A A G -3ᶄ,下游引物:5ᶄ-G A C A G A -C G G A A G T T C T T G G T G -3ᶄ;K i 67上游引物:5ᶄ-G C T A T G C C T T T G T G G A G T T T G -3ᶄ,下游引物:5ᶄ-A T A C C G T T T C A C T G C T G G A T G -3ᶄ㊂1.5.2 组织总R N A 提取 取组织50m g ,按下列程序提取总R N A :在冰浴匀浆器中加入1m l T r i z o l及50m g 组织,迅速研磨,室温静置5m i n ,加入200μl 氯仿,剧烈震摇15s ,4ħ,12000r /m i n 离心15m i n ,取上层水相转移至另一E P 管中,加等体积的异丙醇,轻微震荡15s ,混匀,4ħ,12000r /m i n 离心10m i n ,弃上清,加1000μl75%乙醇轻轻混匀,4ħ,7500r /m i n 离心5m i n ,叩干,加30μlD E P C 处理的去离子水溶解沉淀,-80ħ保存备用㊂1.5.3 提取R N A 的定量 用756型紫外分光光度计测量O D 260/O D 280比值,可检测R N A 的纯度和含量,选用O D 260/O D 280比值为1.8~2.0的R N A 用作反转录㊂R N A 含量采用紫外分光光度计检测法㊂表1 人肺癌A 549细胞裸鼠移植瘤组织中S u r v i v i n ㊁MM P -2㊁K i 67蛋白在不同组间的表达(x -ʃs)组别鼠数S u r v i v i nMM P -2K i 67对照组8149.813ʃ13.711168.763ʃ7.923152.350ʃ10.628二甲双胍组8139.763ʃ8.180b136.988ʃ11.734a b140.913ʃ7.234b顺铂组8116.450ʃ9.390a b128.250ʃ10.440a b115.088ʃ10.051a b 二甲双胍联合顺铂组863.763ʃ15.921a71.225ʃ14.508a 66.088ʃ15.985a 注:S u r v i v i n 为生存素;MM P -2为基质金属蛋白酶-2;与对照组比较,a P <0.05;与二甲双胍联合顺铂组比较,b P <0.051.5.4 c D N A 第一链合成 c D N A 第一链合成反应液组成:1ˑR.T.b u f f e r5μl ,10m o l /L d N T P2.5μl ,20U /μlR N a s i n2μl ,8g /L R N A5.3μl ,0.1g /L R a n d o m P r i m e r1μl ,5U /μl M -M L V 6μl ,N u c l e a s r -F r e eW a t e r 3.2μl ,总共25μl ㊂其中1ˑR.T.b u f f e r 组成:50mm o l /L T r i s -H C l (p H 8.3),50mm o l /L K C l ,10mm o l /L M g C l 2,10mm o l /LD T T ,0.5mm o l /Ls pe r m i d i n e ㊂42ħ反转录50m i n ,95ħ5m i n 灭活反转录酶㊂1.5.5 S Y B R G r e e n 荧光定量P C R 检测 P C R 反应液组成:R.T.pr o d u c t1μl ,2ˑM a s t e r M i x 10μl ,P r i m e r 2μl ,H 2O7μl ,合计20μl ㊂P C R 热循环参数:95ħ10m i n,然后三步反应:95ħ15s ,58ħ20s ,72ħ27s ,进行40个循环,于每个循环的第3步72ħ27s 收集荧光信号㊂1.5.6 实时荧光定量P C R 结果分析 扩增完毕后进入结果分析界面,以G A P D H 为内参照基因,与对照组相比,得到目的基因表达的相对定量值(R Q值),将R Q 值用于统计分析㊂1.6 统计学处理 所得数据用S P S S13.0软件进行统计分析㊂各组数据以x -ʃs 进行描述,不同组间比较用单因素方差分析,P <0.05为差异有统计学意义㊂2 结果2.1 成瘤及裸鼠一般情况 接种裸鼠33只,33只裸鼠成瘤,成瘤率为100%,成瘤时间为细胞种植后第5~8天㊂肿瘤细胞种植后第12天,肿瘤直径平均达4mm ㊂成瘤后早期裸鼠的体质量㊁活动情况没有明显改变,随着肿瘤形成并逐渐增大,裸鼠逐渐出现消瘦,活动减少,在实验期内,裸鼠未出现死亡㊂2.2 二甲双胍及顺铂对裸鼠人肺癌移植瘤生长的影响 治疗结束后,各组移植瘤体积分别为:对照组(1439.63ʃ97.74)mm 3,二甲双胍组(1022.63ʃ101.97)mm 3,顺铂组(930.88ʃ97.31)mm 3,二甲双胍联合顺铂组(652.88ʃ75.26)mm 3㊂二甲双胍组㊁顺铂组和二甲双胍联合顺铂组抑瘤率分别为28.97%㊁35.34%和54.65%㊂方差分析组间比较显示,二甲双胍组㊁顺铂组和二甲双胍联合顺铂组肿瘤生长较对照组明显缓慢(P <0.05)㊂二甲双胍组和顺铂组中移植瘤生长抑制作用无明显差异(P >0.05)㊂2.3 二甲双胍联合顺铂对人肺癌裸鼠移植瘤S u r v i v i n ㊁MM P -2和K i 67蛋白表达的影响 见表1㊂2.3.1 S u r v i v i n 蛋白的表达 S u r v i v i n 在肿瘤细胞的阳性表达主要见于胞核或胞浆,为棕黄色颗粒(图1)㊂与对照组相比,顺铂组㊁二甲双胍联合顺铂组S u r v i v i n 蛋白表达水平降低(P <0.05),二甲双㊃214㊃国际呼吸杂志2015年3月第35卷第6期 I n t JR e s pi r ,M a r c h2015,V o l .35,N o .6胍组S u r v i v i n 蛋白表达水平变化不大(P >0.05)㊂与二甲双胍组㊁顺铂组比较,二甲双胍联合顺铂组S u r v i v i n 蛋白表达水平下降(P <0.05)㊂注:S u r v i v i n 为生存素;A 为对照组;B 为二甲双胍组;C 为顺铂组;D 为二甲双胍联合顺铂组图1 人肺癌A 549细胞裸鼠移植瘤组织中S u r v i v i n 蛋白的表达 I H C ˑ20注:MM P -2为基质金属蛋白酶-2;A 为对照组;B 为二甲双胍组;C 为顺铂组;D 为二甲双胍联合顺铂组图2 人肺癌A 549细胞裸鼠移植瘤组织中MM P -2蛋白的表达 I H C ˑ20注:A 为对照组;B 为二甲双胍组;C 为顺铂组;D 为二甲双胍联合顺铂组图3 人肺癌A 549细胞裸鼠移植瘤组织中K i 67蛋白的表达 I H C ˑ200表2 人肺癌A 549细胞裸鼠移植瘤组织中S u r v i v i n ㊁MM P -2㊁K i 67m R N A 在不同组间的表达(x -ʃs)组别鼠数S u r v i v i nMM P -2K i 67对照组80.595ʃ0.1070.761ʃ0.1350.773ʃ0.079二甲双胍组80.509ʃ0.097b0.467ʃ0.158a b0.715ʃ0.054b顺铂组80.338ʃ0.070a b 0.344ʃ0.109a b 0.435ʃ0.078a b 二甲双胍联合顺铂组80.193ʃ0.066a 0.148ʃ0.091a 0.217ʃ0.063a 注:S u r v i v i n 为生存素;MM P -2为基质金属蛋白酶-2;与对照组比较,a P <0.05;与二甲双胍联合顺铂组比较,b P <0.052.3.2 MM P -2蛋白的表达 MM P -2在肿瘤细胞的阳性表达主要见于胞膜或胞浆,为棕黄色颗粒(图2)㊂与对照组比较,二甲双胍组㊁顺铂组㊁二甲双胍联合顺铂组MM P -2蛋白表达水平下降(P <0.05)㊂二甲双胍组与顺铂组MM P -2蛋白表达水平变化不大(P >0.05)㊂与二甲双胍组㊁顺铂组相比,二甲双胍联合顺铂组MM P -2蛋白表达水平下降(P <0.05)㊂2.3.3 K i 67蛋白的表达 K i 67在肿瘤细胞的阳性表达位于细胞核中,为棕黄色或棕褐色颗粒(图3)㊂与对照组相比,顺铂组㊁二甲双胍联合顺铂组K i 67蛋白表达水平降低(P <0.05),二甲双胍组K i 67蛋白表达水平变化不大(P >0.05)㊂与二甲双胍组㊁顺铂组比较,二甲双胍联合顺铂组K i 67蛋白表达水平下降(P <0.05)㊂2.4 二甲双胍联合顺铂对裸鼠人肺癌移植瘤S u r v i v i n ㊁MM P -2和K i 67m R N A 表达的影响 见表2㊁图4㊂㊃314㊃国际呼吸杂志2015年3月第35卷第6期 I n t JR e s pi r ,M a r c h2015,V o l .35,N o .6注:S u r v i v i n为生存素;MM P-2为基质金属蛋白酶-2图4人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤组织中S u r v i v i n㊁MM P-2㊁K i67m R N A在不同组间的表达2.4.1 S u r v i v i n m R N A的表达与对照组相比,顺铂组㊁二甲双胍联合顺铂组S u r v i v i nm R N A表达水平降低(P<0.05),二甲双胍组S u r v i v i nm R N A 表达变化不大(P>0.05)㊂与二甲双胍组及顺铂组比较,二甲双胍联合顺铂组S u r v i v i nm R N A表达降低(P<0.05)㊂2.4.2 MM P-2m R N A的表达与对照组相比,二甲双胍组㊁顺铂组和二甲双胍联合顺铂组MM P-2 m R N A表达水平降低(P<0.05)㊂与二甲双胍组㊁顺铂组相比,二甲双胍联合顺铂组MM P-2m R N A 表达水平降低(P<0.05)㊂2.4.3 K i67m R N A的表达与对照组相比,顺铂组和二甲双胍联合顺铂组K i67m R N A表达水平降低(P<0.05),二甲双胍组K i67m R N A表达变化不明显(P>0.05)㊂与二甲双胍组㊁顺铂组比较,二甲双胍联合顺铂组K i67m R N A表达水平降低(P<0.05)㊂3讨论肺癌是全球主要的死亡原因之一,每年大约有百万人,包括85万名男性和33万名女性死于肺癌㊂根据组织学分类,它有2个主要亚型,即小细胞肺癌和非小细胞肺癌,后者占所有肺癌病例的85%,超过60%非小细胞肺癌患者在诊断时已是晚期或存在转移,并且已无手术机会[3]㊂因此对于肺癌的治疗迫切需要有新的策略延缓它的进展并改善其生存率,提高患者的生存质量㊂二甲双胍为双胍类口服降糖药物,广泛适合于2型糖尿病体质量指数>25k g/m2的患者及具有胰岛素抵抗的患者,是美国糖尿病学会和欧洲糖尿病研究协会共识推荐的糖尿病一线治疗的最佳选择㊂近年研究发现应用二甲双胍可减少糖尿病患者恶性肿瘤发生风险,抑制肿瘤细胞生长,增强化疗药物的作用㊂其抗肿瘤作用或是否作为一种抗肿瘤药物已受到糖尿病和肿瘤学术领域的重视㊂近年来多项研究显示二甲双胍可能有降低肿瘤发病率的作用,其机制有:①通过A T M-L K B1-AM P K-m T O R途径,二甲双胍直接抑制肿瘤作用[4];②二甲双胍可以降低胰岛素水平,这一机制可能是二甲双胍抑制恶性肿瘤的重要间接机制;③二甲双胍可以诱导细胞周期停滞和凋亡,并能降低生长因子信号[5];④降低细胞周期蛋白水平;⑤抑制原癌基因H E R2[6];⑥抗炎作用;⑦提高T细胞的记忆[7];⑧其他㊂二甲双胍可以通过抑制m i R N A-222从而抑制肺癌细胞的增殖[8],还可以通过阻断S T A T3磷酸化而抑制I L-6介导的上皮间叶细胞转化[9]㊂二甲双胍可以与表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂联合应用治疗非小细胞肺癌,减少表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂的耐药,延长生存[10],还可以提高吉非替尼对肺鳞癌的敏感性[11]㊂与化疗药物有协同作用,可以增强顺铂的细胞毒性[2]㊂但关于二甲双胍对于肿瘤转移相关因子的研究很少,本研究通过二甲双胍及与顺铂联合应用,观察对肿瘤转移相关因子的影响,从而了解其抗肿瘤作用㊂3.1二甲双胍联合顺铂对S u r v i v i n表达的影响S u r v i v i n是最近发现的凋亡抑制蛋白家族中可以抑制程序性细胞死亡(凋亡)和调节细胞分裂的独特的双功能蛋白[12],表达在细胞周期的G2/M期[13],它的功能还包括调节血管生成㊁免疫信号和肿瘤转移[14]㊂其最显著的特点之一是其在肿瘤与正常组织之间的差异表达;S u r v i v i n的过表达有致癌的潜能,因为它可以克服G2/M期监视,加强有丝分裂使细胞增多[13]㊂在人类肿瘤中,发现非小细胞肺癌细胞表达S u r v i v i n的水平最高[15],抑制S u r v i v i n将阻止其在非小细胞肺癌中的抗凋亡和有丝分裂进程[13]㊂有研究表明,从97例接受手术治疗的患者中收集非小细胞肺癌组织和癌旁正常肺组织标本,并用免疫组织化学染色方法研究,与癌旁正常肺组织相比,S u r v i v i n在肺癌组织中的表达显著增多[16]㊂S h e n等[17]研究表明抑制S u r v i v i n基因的表达可显著抑制肺癌细胞的增殖和诱导凋亡㊂二甲双胍可加强吉西他滨诱导的胰腺癌细胞凋亡,与化疗药物有协同作用[18]㊂本研究结果表明,与对照组相比,顺铂组和二甲双胍联合顺铂组S u r v i v i n的表达水平均下降,二甲双胍联合顺铂组S u r v i v i n的表达较二甲双胍组及顺铂组下降,提示:顺铂对S u r v i v i n的表达有抑制作用,二甲双胍与顺铂对肿瘤的抑制具有协同作用㊂3.2二甲双胍联合顺铂对MM P-2表达的影响㊃414㊃国际呼吸杂志2015年3月第35卷第6期I n t JR e s p i r,M a r c h2015,V o l.35,N o.6远处转移是癌症的主要死亡原因㊂细胞外基质的降解是形成转移的必要过程,使肿瘤侵入局部组织,浸润并外渗出血管,形成新的转移病灶[19]㊂而一些研究已经证明酶在转移中的重要作用,比如MM P s可以降解细胞外基质和基底膜的组成部分,促进肿瘤细胞的分离,并通过组织屏障而侵入相邻组织[20],它们参与癌症的所有发展阶段,不仅在肿瘤的侵袭和转移中发挥作用,也参与增殖㊁黏附㊁迁移㊁分化㊁血管生成㊁衰老㊁细胞自噬㊁细胞凋亡和免疫系统的逃避[21]㊂MM P-2存在于人类许多肿瘤的瘤组织和基质细胞及炎症细胞周围[22],其活性的精确调节分3个水平:①转录表达;②蛋白水解酶激活(因为这些酶作为潜酶原形式被分泌);③与组织特异性抑制剂的作用[23]㊂阻断肿瘤细胞MM P s的表达可以显著降低肿瘤的侵袭和转移[24]㊂MM P-2的表达越高,肿瘤复发的可能性越大[25]㊂病理检查表明, MM P-2的表达与肿瘤转移密切相关,并且始终与患者的生存期呈负相关[25]㊂MM P-2的价值在于其可评估存在严重侵袭性疾病的患者[26]㊂二甲双胍可以抑制黑色素瘤的侵袭,抑制MM P-2的表达[27]㊂二甲双胍可以抑制MM P-2的表达,能起到抗癌作用[28]㊂本研究结果表明,与对照组相比,二甲双胍组㊁顺铂组和二甲双胍联合顺铂组MM P-2的表达水平下降,二甲双胍联合顺铂组较二甲双胍组及顺铂组MM P-2表达下降㊂提示:二甲双胍㊁顺铂对于MM P-2的表达有抑制作用,同时二甲双胍可能通过某种机制增强了顺铂的抗肿瘤作用㊂3.3二甲双胍联合顺铂对K i67表达的影响 K i67抗原是一种非组织蛋白,可以识别不具有阶段特异性的多产细胞㊂它表达在细胞周期的活跃阶段[29]㊂K i67表达的增多表明有丝分裂细胞活性的增加[30]㊂Z h u等[31]表明,K i67的表达与子宫内膜癌的临床分期和病理分级有关㊂L i u等[30]研究发现, K i67的表达与卵巢上皮癌的进展及预后有关㊂K i67的表达在宫颈癌淋巴结转移者中高于非淋巴结转移者,另外发现肿瘤细胞的分化程度越低,K i67的表达越高,表明癌细胞增生活跃[32]㊂本研究结果表明,与对照组相比,顺铂组和二甲双胍联合顺铂组K i67的表达水平下降,二甲双胍联合顺铂组较二甲双胍组及顺铂组K i67表达下降㊂提示:二甲双胍可能通过某种机制增强了顺铂的抗肿瘤作用㊂本研究显示,免疫组织化学及荧光实时定量P C R结果显示,二甲双胍组可抑制MM P-2的表达,提示二甲双胍抗肿瘤作用可能与MM P-2基因调控有关㊂二甲双胍联合顺铂组均可抑制S u r v i v i n㊁MM P-2和K i67的表达,且二甲双胍联合顺铂组较二甲双胍组和顺铂组抑制作用更加明显,其分子机制有待进一步研究,因此考虑两药的联合应用,既可降低顺铂的不良反应,也可能在抗肿瘤方面提高疗效㊂参考文献[1]S o r a n n aD,S c o t t iL,Z a m b o n A,e ta l.C a n c e r r i s ka s s o c i a t e dw i t hu s eo fm e t f o r m i na n ds u l f o n y l u r e a i nt y p e2d i a b e t e s:am e t a-a n a l y s i s[J].O n c o l o g i s t,2012,17(6):813-822.[2] L i n C C,Y e h HH,H u a n g W L,e ta l.M e t f o r m i n e n h a n c e sc i s p l a t i nc y t o t o x i c i t y b y s u p p r e s s i n g s i g n a lt r a n sd u ce ra n da c t i v a t o ro f t r a n s c r i p t i o n-3a c t i v i t y i n d e p e n d e n t l y o f t h e l i v e rk i n a s eB1-AM P-a c t i v a t e d p r o t e i nk i n a s e p a t h w a y[J].A m JR e s p i rC e l lM o l B i o l,2013,49(2):241-250.[3] C o h e nV,K h u r i F R.C h e m o p r e v e n t i o no f l u n g c a n c e r:c u r r e n ts 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[32]滕燕伊,刘晓云,郑洪,等.K i-67㊁MM P-7㊁MM P-2在宫颈C I N和宫颈癌中的表达及意义[J].重庆医科大学学报,2010,35(7):989-991.(收稿日期:2014-10-30)㊃614㊃国际呼吸杂志2015年3月第35卷第6期I n t JR e s p i r,M a r c h2015,V o l.35,N o.6。
二甲双胍增强Ishikawa细胞对顺铂化疗敏感性的实验研究
二甲双胍增强Ishikawa细胞对顺铂化疗敏感性的实验研究邓守恒;蔡晓军;李林均;王贤和;汤继英;曹风军【期刊名称】《山西医药杂志》【年(卷),期】2017(046)006【摘要】目的观察二甲双胍体外增强顺铂对子宫内膜癌Ishikawa细胞化疗敏感性的作用,并探讨可能的作用机制.方法实验分为空白对照组、二甲双胍组(培养液中二甲双胍终浓度为10 mmol/L)、顺铂组(培养液中顺铂终浓度为20 μmol/L)、联合组(培养液中二甲双胍和顺铂的终浓度分别为10 mmol/L和20 μmol/L),各组作用24 h,CCK-8法和细胞克隆形成法检测细胞增殖抑制率和存活率,金氏公式评价二药协同效果;Transwell法检测细胞侵袭力;流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡率;蛋白质印迹法检测葡萄糖调节蛋白(GRP)78蛋白表达水平.结果二甲双胍、顺铂均可抑制Ishikawa细胞增殖、诱导细胞凋亡、降低细胞存活率和侵袭力;二甲双胍可阻滞细胞周期于G0/G1期,顺铂单独或联用二甲双胍可阻滞细胞周期于G2/M 期,并能下调GRP78蛋白表达水平(P<0.05),二药联用上述作用效果更为显著(P<0.01).结论二甲双胍能够增强顺铂对子宫内膜癌Ishikawa细胞的化疗敏感性,这种作用部分是通过下调GRP78蛋白实现的.%Objective To observe the effect of metformin′s enhancing chemotherapy sensitivity of cisplatin on human endometrial cancer cell line, Ishikawa cell in vitro and to explore its possible mechanism.Methods There were four groups: control group, metformin group(Ishikawa cells were pretreated by 10 mmol/L metformin), cisplatin group(Ishikawa cells were pretreated by 20 μmol/L cisplatin), metformin/cisplatin group(Ishikawa cells were pretreated by 10 mmol/Lmetformin and 20 μmol/L cisplatin).After treated for 24 h, the growth and proliferation of Ishikawa cell was detected by CCK-8 assay and clone formation test.Jin′s formula was used to assess the synergistic effects of two drugs.Cell phase and apoptosis were detected by the flow cytometry.Cell invasive ability was measured with Transwell method.The expression of GRP78 protein was detected by Western blotting.Results Metformin, cisplatin alone could inhibit cell proliferation, induce cell apoptosis, decrease cell survival rate and invasive ability and down-regulate the expression of GRP78 in Ishikawa cells(P<0.05).Metformin could arrest cell cycle in G0/G1 phase while csplatin alone or combination with metformin could arrest cell cycle in G2/M phase.The effect above of cisplatin combination with metformin was better than that of cisplatin, metformin alone(P<0.01).Conclusion Metformin could enhance chemotherapy sensitivity of cisplatin on human endometrial cancer Ishikawa cell in vitro, which was partly related to the down-regulation of GRP78 protein in tumor cells.【总页数】4页(P618-621)【作者】邓守恒;蔡晓军;李林均;王贤和;汤继英;曹风军【作者单位】442000 十堰,湖北医药学院附属人民医院肿瘤中心;442000 十堰,湖北医药学院附属人民医院肿瘤中心;442000 十堰,湖北医药学院附属人民医院肿瘤中心;442000 十堰,湖北医药学院附属人民医院肿瘤中心;442000 十堰,湖北医药学院附属人民医院肿瘤中心;442000 十堰,湖北医药学院附属人民医院肿瘤中心【正文语种】中文【相关文献】1.EGCG 增强食管癌细胞对顺铂化疗敏感性的实验研究 [J], 张润华;王贤和;陈萍;邓守恒2.赫赛汀诱导子宫内膜癌 Ishikawa 细胞凋亡并增强其对化疗的敏感性 [J], 沈媛;陆琳;王晓玉3.白细胞介素37对宫颈癌HeLa细胞顺铂化疗敏感性的增强作用 [J], 邓子亮;王森;黎鹏;解奎龙;李淑贤;周世雄;贺晓舟;陈东;郭洪胜4.硼替佐米诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡并增强其化疗敏感性 [J], 沈媛;胡海燕;陆琳5.IGFBP-3对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的实验研究 [J], 李艳辉;张晓燕;王泽华;汪宏波因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
EGCG 对人胃癌细胞株MKN 45 中Bcl-2 家族相关基因表达的影响
Expression of the Bcl-2 family is influenced by Epigallocatechin-3 -gallate in human gastric cancer cell MKN 45
Jin-Lu Tong, Zhi-Hua Ran, Xiang Chen, Shu-Dong Xiao Jin-Lu Tong, Zhi-Hua Ran, Xiang Chen, Shu-Dong Xiao, Renji Hospital, School of Medicine, Shanghai Jiao Tong University; Shanghai Institute of Digestive Diseases, Shanghai 200001, China Supported by Shanghai Leading Academic Discipline Project, No. Y0205 Correspondence to: Zhi-Hua RAN, Renji Hospital, School of Medicine, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai Institute of Digestive Diseases, Shanghai 200001, China. z-ran@ Received: 2006-08-23 Accepted: 2006-09-21
摘要 目的: 探讨EGCG干预人胃癌细胞株MKN45 后Bcl-2 家族相关基因表达的变化情况.
方法: 运用半定量RT-PCR法和蛋白免疫印迹 法分别检测EGCG干预人胃癌细胞株MKN 45 后不同时间点上(0, 12, 24, 36 h)抗凋亡相关基 因Bcl-xl和Bcl-2及促凋亡相关基因Bax、Bid 和Bad的mRNA和蛋白表达水平, 并比较不同 时间点的Bcl-2与Bax的比值. 结果: 促凋亡相关基因 B a x 、 B i d 和 B a d 的 m R N A 与蛋白表达水平随着 E G C G 作用于 人胃癌细胞株M K N45的时间延长(0,12, 24, 36 h) 逐渐升高 (Bax 蛋白 : 0.6292 ± 0.08, 0.6454 ± 0.04, 0.8069 ± 0.09, 0.8992 ± 0.07,
二甲双胍逆转人卵巢癌细胞株对顺铂耐药的实验研究
Ｆｉ ｒ ｓ ｔ Ｐｅ ｐｏ ｌ ｅ ＇ ｓ Ｈｏ ｓ ｐｉ ｔ ａ１ ．Ｇｕ ａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ ５１ ０１ ８ ０． ｉ ｎ ａ
Ｃ ｏ ｒ ｒ ｅ ｓ ｐ ｏ ｎ ｄ ｉ ｎ ｇ ａ ｕ ｔ ｈ ｏ ｒ ： Ｋ ａ ｎ ｇ ｉ ｆ ａ ｌ ｉ １ ９ ６ １ ＠２ １ ｃ ｎ ． ｃ ｏ ｍ ，
・
１ ２・
临床 肿 瘤 学 杂 志 ２ ０ １ ７年 １ 月第 ２ ２卷 第 １ 期
Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ Ｏ ｎ ｃ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， Ｊ ａ ｎ ． ２ ０ １ ７ ， Ｖ ｏ １ ． ２ ２ ， Ｎ ｏ ． １
二 甲双 胍 逆 转 人 卵巢 癌 细胞 株 对 顺 铂 耐药 的 实验 研 究
数为 １ ． ６ ２ 。亲本组 中 Ｇ Ｒ Ｐ ７ ８ ｍＲ Ｎ Ａ和蛋 白的相对表达水平分别为 ０ ． ３ ８ ￣ ０ ． ０ ２和 ０ ． ２ ４ ＋ ０ ． ０ ４ ； 顺铂组 、 二 甲双胍 组和联合 用药 组的 Ｇ Ｒ Ｐ ７ ８ ｍ Ｒ Ｎ Ａ的相对表达水平分别为 ０ ． ９ ３ ￣ ０ ． ０ ２ 、 ０ ． ６ ８ ＋ － ０ ． ０ ２ 、 ０ ． ４ ９ ＋ ０ ． ０ ７ ， 与空 白对 照组 的 ０ ． ８ ３ ￣ ０ ． ０ ４比较 ， 联合用 药组
二甲双胍对ALDH~+胃癌干细胞的抑制作用及其机制
Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｍ ｅｔｆｏｒｍ ｉｎ ｏｎ ａｌｄｅｈｙｄｅ ｄｅｈｙｄｒ０ｇｅｎａｓｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｍ ｅｃｈａｎｉｓｍ ＷＡＮＧ Ｙｉ ，ＸＩＡＮ Ｇ Ｙｏｎｇ—ｐｉｎｇ ，。，ＬＩＵ Ｄａｎ—ｄａｎ ，ＬＩＵ Ｌｉ—ｊｉｎ ’。，ＪＩＡＮＧ Ｗ ｅｉ Ｊ ＬＩＪｉｎ—ｙｉ
表 明 ＡＬＤＨ 细 胞 具 有 肿 瘤 干 细 胞 特 性 。 实 验 结 果 显 示 ，ＭＫＮ４５细 胞 组 、ｌｍｍｏｌ／Ｌ Ｍｅｔ组 、５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｍｅｔ组 ＡＬＤＨ 细 胞 比 例 分 别 为 ３６．５％±５．４％、１５．６％±１．９％和 ７．６％±１．６％，三 组 差 异 有 统 计 学 意 义 （Ｐ＜Ｏ．０１）。ＲＴ．ＰｃＲ结 果 显 示 ，Ｍｅｔ处 理 后
力 、裸 鼠移 植瘤 实 验 ，鉴定 其是 否 为 胃癌干 细胞及 是 否具 备肿 瘤 干细胞 特性 。实验设 置 ｌｍｍｏｌ／Ｌ Ｍｅｔ组 、５ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｍｅｔ组和ＭＫＮ４５细胞组 ，分别作 用４８ｈ后 ，检测 各组ＡＬＤＨ 细胞 的比例 ；ＲＴ ＰＣＲ实验 检测各组Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ２、ＡＫＴ基因表 达 量 的变 化 。结 果 细胞 鉴定实验 结果显 示 ，ＡＬＤＨ 细胞 的 自我更 新能 力 、分化 能力 、致 瘤能力 均高于ＡＬＤＨ一细胞 ，
可作为 临床治疗 胃癌 的靶点药 物。
［关键 词］ 肿瘤干细胞 ；乙醛脱 氢酶 ；二 甲双胍 ；Ｏｃｔ４；Ｓｏｘ２；ＡＫＴ
［中图分类号］ Ｒ７３５
［文献标 志码］ Ａ ［文 Nhomakorabea编号］ ０５７７．７４０２（２０１８）０１．０００７．０５
［ＤＯＩ］ １０．１１８５５／ｊ．ｉｓｓｎ．０５７７—７４０２．２０１８．０１．０２
二甲双胍抗肿瘤机制研究进展二甲双胍机制
二甲双胍抗肿瘤机制研究进展二甲双胍机制二甲双胍（Metformin）是一种用于治疗2型糖尿病的口服降血糖药物，它通过抑制肝糖原的形成、减少肝糖原分解和促进周围组织对葡萄糖的利用，起到降低血糖的作用。
然而近年来的研究发现，二甲双胍不仅对糖尿病患者的高血糖有显著疗效，还具有抗肿瘤的潜力。
关于二甲双胍的抗肿瘤机制研究已经取得了一定的进展。
首先，二甲双胍可以通过激活AMPK（AMP-activated protein kinase）信号通路来抑制肿瘤细胞的增殖和生长。
AMPK是一种广泛存在于细胞中的蛋白激酶，在细胞能量代谢和平衡的调控中起到重要作用。
二甲双胍可以通过增加细胞内AMP/ATP的比值，激活AMPK信号通路，从而抑制肿瘤细胞的能量代谢和增殖。
研究表明，AMPK的激活可以通过抑制mTOR（mammaliantarget of rapamycin）信号通路、靶向肿瘤干细胞和调节肿瘤细胞的凋亡等多个途径来抑制肿瘤发生和发展。
其次，二甲双胍还可以通过改变肿瘤细胞的代谢模式来抑制肿瘤生长。
肿瘤细胞的代谢模式与正常细胞存在明显的差异，主要表现为更倾向于无氧糖酵解和乳酸生成。
二甲双胍可以抑制肿瘤细胞的无氧糖酵解，并促使其转向有氧氧化磷酸化，从而减少肿瘤细胞的生长和存活。
此外，二甲双胍还可以改变肿瘤细胞的微环境，增加肿瘤细胞的代谢途径多样性，从而增加对抗肿瘤药物的敏感性。
最后，二甲双胍还可以通过抑制炎症反应、调节肿瘤免疫应答和降低胰岛素、胰高血糖素等内分泌激素的水平来抑制肿瘤的发生和发展。
研究表明，二甲双胍可以通过抑制肿瘤细胞产生炎症因子和促血管生成因子来减少肿瘤的生长和侵袭。
此外，二甲双胍还可以增加肿瘤患者的免疫应答能力，提高肿瘤治疗的效果。
总的来说，二甲双胍作为一种口服降血糖药物，具有广泛的抗肿瘤作用。
其主要机制包括通过激活AMPK信号通路、改变肿瘤细胞的代谢模式、抑制炎症反应和调节肿瘤免疫应答等方式来抑制肿瘤生长和发展。
RRM2对人胃癌细胞MKN-45增殖、侵袭及顺铂耐药作用的研究
RRM2对人胃癌细胞MKN-45增殖、侵袭及顺铂耐药作用的研究侯志斌;李菊英;苟笑丹【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2018(024)013【摘要】目的研究核糖核苷酸还原酶亚单位M2(RRM2)基因在人胃癌MKN-45细胞增殖、侵袭、耐药中的作用,并初步探讨其可能的机制.方法设计两组靶向RRM2基因的小干扰RNA,分别转染胃癌细胞MKN-45以抑制RRM2基因的表达,并同时设立阴性对照组(NC组)及未转染组.转染后琼脂糖电泳检测各组细胞RRM2基因表达,Western-blot检测各组细胞RRM2蛋白表达.CCK-8法对各组细胞增殖能力进行检测.不同浓度顺铂处理各组细胞进行耐药能力检测.采用Transwell小室对各组细胞侵袭能力进行检测.结果琼脂糖电泳及Western-blot检测显示转染RRM2-siRNA后,RRM2在基因水平及蛋白水平表达均明显下调.转染RRM2-siRNA的人胃癌MKN-45细胞的增殖能力、侵袭能力均显著低于未转染组及NC 组(P<0.05),转染组顺铂IC50分别为0.081μg/mL及0.079μg/mL,明显低于未转染组(0.14μg/mL)及NC组(0.136μg/mL)(P<0.01).结论 RRM2基因具有促进胃癌细胞增殖、侵袭的作用,并与顺铂耐药相关.【总页数】5页(P2684-2688)【作者】侯志斌;李菊英;苟笑丹【作者单位】西宁市第二人民医院病理科,西宁810003;青海大学病理学教研室,西宁 810016;青海大学附属医院病理科,西宁810001【正文语种】中文【中图分类】R735.2【相关文献】1.槐耳醇提物抑制人胃癌细胞MKN-45增殖的实验研究 [J], 黄挺;陈佳辉;徐志远;吕航;程向东;2.人几丁质酶-3样蛋白-1在人胃癌细胞中的表达及其对人胃癌细胞增殖和侵袭能力的影响研究 [J], 司仙科;李炜;于昆;张计训;曹亦军;杨佳华3.夏枯草通过HMGB1诱导人胃癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其作用机制 [J], 段莎; 王宗艳4.HS3ST1对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及顺铂耐药的作用机制研究 [J], 李梅芳;林景辉;廖锦容;何志勇5.敲低膜联蛋白A5对人胃癌细胞系MKN-45增殖的作用 [J], 赵依纳;王小杰;吴雪艳;代雅蕊;张佳璐;李欣因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
二甲双胍对人胃癌细胞株MKN45增殖和迁徙的影响
二甲双胍对人胃癌细胞株MKN45增殖和迁徙的影响薛知新;赵丹瑜;许慈;孙萍胡;姚静静;钟捷【期刊名称】《胃肠病学》【年(卷),期】2010(15)5【摘要】背景:近年发现二甲双胍具有潜在抑制肿瘤的作用,但其在消化系肿瘤尤其是胃癌中的研究较少.目的:研究二甲双胍对人胃癌细胞株MKN45增殖和迁徙的影响,并初步探讨其可能机制.方法:体外培养人胃痛细胞株MKN45,予10 mmol/L二甲双胍进行干预(联合或不联合5-氟尿嘧啶),以MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡、线粒体膜电位,细胞划痕实验检测迁徙速率,RT-PCR检测AMPKα1、cyclin D1、Bc1-2、Bax、MMP-2、MMP-9 mRNA表达.结果:与对照组相比,二甲双胍作用后,MKN45细胞存活率显著降低,并呈浓度-时间依赖性,细胞凋亡率显著增加,线粒体膜电位显著下降,平均迁徙速率显著降低,cyclin D1、MMP-2、MMP-9 mRNA表达均显著减少,Bc1-2、BaxmRNA表达显著增加但两者之比降低,AMPKα1 mRNA表达无明显差异.二甲双胍与5-氟尿嘧啶联用对MKN45细胞的存活率无明显协同作用.结论:二甲双胍能抑制人胃癌细胞株MKN45增殖、迁徙,可通过改变线粒体膜通透性促进细胞凋亡.【总页数】4页(P280-283)【作者】薛知新;赵丹瑜;许慈;孙萍胡;姚静静;钟捷【作者单位】上海交通大学医学院附属瑞金医院消化科,200025;上海交通大学医学院附属瑞金医院消化科,200025;上海交通大学医学院附属瑞金医院消化科,200025;上海交通大学医学院附属瑞金医院消化科,200025;上海交通大学医学院附属瑞金医院消化科,200025;上海交通大学医学院附属瑞金医院消化科,200025【正文语种】中文【相关文献】1.荜茇酰胺对人胃癌细胞株 MKN45增殖、凋亡的影响及其机制研究 [J], 段超勤;邓超;邹晓平2.5-氮杂-2’-脱氧胞苷诱导CDX2基因表达对人胃癌细胞株MKN45增殖和凋亡的影响 [J], 张健锋;蒋伟;蒯小玲;董丽娟;张弘;鞠少卿;毛振彪3.siRNA 靶向沉默PcG蛋白EZH2对人胃癌细胞株 MKN45增殖和侵袭力的影响[J], 蔡干慧;陈晓宇4.胃泌素及其受体拮抗剂对人胃癌细胞株MKN45增殖及HB-EGF表达的影响 [J], 穆媛媛;吴会超;杨莹莹;苏薇5.胃泌素及其受体拮抗剂对人胃癌细胞株MKN45增殖及TFF1、TFF3表达的影响[J], 杨莹莹;吴会超;穆媛媛;苏薇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
二甲双胍抗肿瘤血管及抑制胃癌细胞生长的实验研究
二甲双胍抗肿瘤血管及抑制胃癌细胞生长的实验研究童陈琦;王维;梁斌鑫【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2015(000)031【摘要】目的：探讨二甲双胍对肿瘤血管及胃癌细胞生长的抑制作用。
方法利用人脐静脉血管内皮细胞(HU-VEC)细胞划痕试验、Transwell侵袭实验、Matrigel血管状结构形成实验，研究二甲双胍对血管内皮细胞侵袭、迁移及血管状结构形成的影响，且运用流式细胞仪检测二甲双胍对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响；利用胃癌细胞BGC823的MTT实验、苏木精凋亡染色、Annexin-吁细胞凋亡实验、定量PCR凋亡因子检测实验，研究二甲双胍对胃癌细胞增殖、凋亡的影响。
结果二甲双胍能够明显抑制HUVEC的迁移、侵袭、血管状结构形成，并且明显减少细胞VEGF的表达；二甲双胍对胃癌BGC823细胞的增殖有明显的抑制作用，且具有浓度依赖性，其中最大抑制率为68.80%，半抑制浓度(IC50)为(11.97±1.84)mmol/L；二甲双胍可以诱导胃癌BGC823细胞凋亡，具有浓度依赖性，10 mmol/L二甲双胍组凋亡比例接近60%；二甲双胍组BGC823细胞的Bcl-2 mRNA减少，而AMP-Kα1、Bax、Bad mRNA的表达增加。
结论二甲双胍能够抑制肿瘤血管形成和胃癌细胞增殖，并诱导胃癌细胞凋亡，发挥抗胃癌细胞生长作用。
%Objective To investigate the inhibiting effect of Metformin on the tumor angiogenesis and gastric cancer cell growth. Methods The cell scratch test, Transwell invasion assay and Matrigel vascular structure formation experi-ment of human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) were used to study the effect of Metformin on vascular en-dothelial cellmigration, invasion and the vascular structure formation, and the influence of Metformin on VEGF ex-pression was illuminated by flow cytometry; then MTT assay, hematoxylin apoptosis of dyeing, Annexin-Ⅴ apoptosis and quantitative PCR detection for apoptosis factors of gastric cancer BGC823 cells were conducted to research the ef-fect of Metformin on gastric cancer cell proliferation and apoptosis. Results Metformin could significantly inhibit en-dothelial cell migration, invasion, vascular structureof HUVEC, and reduce VEGF expression; Metformin had an obvi-ous inhibiting effect in gastric cancer BGC823 cells proliferation, with the concentration-dependence, the biggest inhi-bition rate was 68.80%, the 50% inhibiting concentration (IC50) was (11.97±1.84) mmol/L; Metformin could also in-crease cell apoptosis of BGC823 cells, with the concentration-dependence, the apoptosis rate of 10 mmol/L Metformin was close to 60%; the Bcl-2 mRNA of BGC823 cells treated by Metformin decreased, and the expression of AMPKα1, Bax, Bad mRNA increased. Conclusion Metformin can inhibit gastric cancer growth by inhibiting tumor angiogenesis and gastric cancer cell proliferation, and inducing gastric cancer apoptosis, which plays a role of inhibiting gastric can-cer cell growth.【总页数】6页(P25-29,34)【作者】童陈琦;王维;梁斌鑫【作者单位】浙江省人民医院药学部，浙江杭州310014;浙江省人民医院药学部，浙江杭州 310014;浙江省人民医院药学部，浙江杭州 310014【正文语种】中文【中图分类】R735.7【相关文献】1.二甲双胍抗肿瘤血管及抑制胃癌细胞生长的实验研究 [J], 徐晨;胡家平;李太原2.地塞米松抑制视网膜新生血管及血管内皮生长因子表达的实验研究 [J], 刘文慧;李一壮;吴永青3.靶向抑制磷脂酰肌醇3-激酶110β因子的表达对人胃癌细胞生长影响的实验研究[J], 许慈;蔡懿婷;董晴晴;王碧君;戴强;朱黎明4.人参皂苷Rg5调控lncRNA-PCAT12抑制胃癌细胞生长实验研究 [J], 卓少华; 丘远聪; 郑俊德; 殷蕾; 王惠颖5.二甲双胍对AGS胃癌细胞生长侵袭的抑制作用 [J], 薛知新;钟捷;赵丹瑜;许慈;孙萍胡;姚静静因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
二甲双胍通过抑制MAPK信号通路增强卵巢癌细胞对顺铂的敏感性
二甲双胍通过抑制MAPK信号通路增强卵巢癌细胞对顺铂的敏感性目的：探讨二甲双胍是否可以提高卵巢癌细胞对顺铂的敏感性及相关的作用机制。
方法：BRDU ELISA方法检测顺铂联合或者不联合二甲双胍对SKOV3细胞增殖的影响；二甲双胍联合或者不联合MAPK信号通路阻断剂后BRDU ELISA方法检测细胞增殖的变化。
Western blotting检测二甲双胍作用下卵巢癌细胞系SKOV3的磷酸化AMPK/总AMPK水平和磷酸化p38 MAPK/总MAPK水平的变化。
结果：（1）二甲双胍不仅能抑制卵巢癌细胞系SKOV3细胞的增殖，而且能提高对顺铂的敏感性，并且这种作用是依赖于AMPK激活的；（2）p38 MAPK 阻断剂SB203580能够抑制SKOV3的增殖，二甲双胍能够增强这种抑制作用。
结论：二甲双胍可增强顺铂对卵巢癌细胞的抑制作用，并且二甲双胍可能通过激活AMPK信号通路进而抑制MAPK信号通路增加顺铂对卵巢癌细胞的抑制增殖作用。
卵巢癌是死亡率最高的一种妇科恶性肿瘤，大约70%的患者就诊时已经是晚期（FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期）。
卵巢癌的标准治疗是首次肿瘤细胞减灭术，接着每3周1次的铂类和紫杉醇联合化疗。
虽然卵巢癌手术和化疗技术已经得到很大发展，但由于对化疗不敏感和化疗耐药的发生，目前晚期卵巢癌5年生存率不到30%[1-3]。
因此，急需找寻一种新的提高化疗效果的治疗方法以改善卵巢癌患者的预后。
MAPK信号通路在多种恶性肿瘤（包括卵巢癌）细胞的增殖、凋亡和化疗药物作用及化疗药物耐受发生中起重要作用[4-6]。
MAPK家族包括p38 MAPK、细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）、c-jun氨基末端激酶（JNK）等多个亚家族。
这些亚族组成多条信号通路，其中最主要的有P38途径、ERK1/2途径和JNK途径。
MAPK家族成员被磷酸化激活后，将细胞外的各种刺激信号传递到细胞内，引起细胞内级联反应，调节细胞的增殖、凋亡及对药物的敏感性[7]。