氨基酸态氮的测定方法之双指示剂甲醛滴定法

4.2 电位滴定法
(1)原理
根据氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性 ，使羧基显示出酸性，将酸度计的玻璃电极及甘汞电极同 时插入被测液中构成电池，用氢氧化钠标准溶液滴定，依 据酸度计指示的pH值判断和控制滴定终点。
(2)仪器
酸度计（附磁力搅拦器）
磁力搅拌器
(3)试剂
酚酞乙醇指示液：1% 硼砂（标准物质）缓冲液：PH9.22 称取3.8克 Na2B4O7 溶解后，定容至1000mL 甲醛：36%-----38% 0.0500mol/l氢氧化钠标准溶液
(4) 试验步骤
①吸取含氨基酸约20mg的样品溶液，置于100mL容量瓶 中，加水至刻度，混匀后吸取20.0mL烧杯中，加 60mL水，开动磁力搅拌器，用0.05mol/L氢氧化钠 标准溶液滴定至酸度计指示pH8.2（记下消耗 0.05mol/L氢氧化钠标准溶液的毫升数，可计算总酸 含量）。
②加入0.1mL甲醛溶液，混匀。再用0.05mol/L氢氧化钠 标准的溶液继续滴定至pH9.2，记下消耗0.05mol/L 氢氧化钠标准溶液的毫升数。
种，而在构成的氨基酸中，亮氨酸、 异亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨算、蛋氨酸、苏氨酸、色氨酸和缬氨酸等8种氨基酸在人体中不能合成，
必须依靠食品供给，故被称为必需氨基酸，它们对人体有着极其重要的生理功能，常会因其在体内缺乏而导致患病或通过补充而增强
了新陈代谢作用。
根据氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出酸性，将酸度计的玻璃电极及甘汞电极同时插入被测液中构成电
Na2B4O7 溶解后，定容至1000mL
0.
式中 c ——氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L;
另1份加入3滴百里酚酞指示剂及中性甲醛20ml，摇匀，静置1分钟，用0.
M氮----氮的摩尔质量，14.
双指示剂甲醛滴定法：原理、试
05mol/L氢氧化钠溶液调节至pH为8.
1%mol/L氢氧化钠标准溶液
必须依靠食品供给，故被称为必需氨基酸，它们对人体有着极其重要的生理功能，常会因其在体内缺乏而导致患病或通过补充而增强
了新陈代谢作用。
1 双指示剂甲醛滴定法
①40%中性甲醛溶液：以百里酚酞作指示剂，用氢氧化钠将40%甲醛中和至淡蓝色。
氨基酸是构成蛋白质的最基本物质，虽然从各种天然源中分离得到的氨基酸已达175种以上，但是构成蛋白质的氨基酸主要是其中的20
(2) 方法特点及应用
此法简单易行、快速方便，与亚硝酸氮气容量法分析 结果相近。在发酵工业中常用此法测定发酵液中氨基酸含 量的变化，以了解可被微生物利用的氮源的量及利用情况 ，并以此作为控制发酵生产的指标之一。普氨酸与甲 作 用时产生不稳定的化合物，使结果偏高;溶液中若有 存在 也可与甲醛反应，往往使结果高。
(5) 结果计算
氨基酸态氮（%）
式中 c ——氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L;
V1——用中性红作指示剂滴定时消耗氢氧化钠标 准溶液的体积，mL;
V2——用百里酚酞作指示剂滴定时消耗氢氧化钠 标准溶液的体积，mL;
m——测定用样品溶液相当于样品的质量，g 0.014——氮的毫摩尔质量，g/m mol
③ 同时取80mL水，先用0.05mol/L氢氧化钠溶液调节至 pH为8.2，再加入10.0mL甲醛溶液，用0.05mol/L氢氧化 钠标准溶液滴定至pH9.2，做试剂空白试验。
式中 ρ------氨基酸态氮质量 浓度，g/100mL;
c-------氢氧化钠浓度， mol/L；
V1-----加入甲醛后耗 NaOH的量，ml；
V2------空白试验加甲醛 后耗NaOH量，ml；
V3------测定用样品稀释 液的量，ml；
M氮----氮的摩尔质量， 14.01g/mol；
思考题
1、蛋白质系数是如何计算出来的？ 2、蛋白质的测定方法有哪些？国家标准是哪一种方法？ 3、为什么说用凯氏定氮法测出的是粗蛋白的含量？
谢谢欣赏
剂、测定方法、结果计算、说明
M氮----氮的摩尔质量，14.
氨基酸态氮的测定 0500mol/l氢氧化钠标准溶液
在发酵工业中常用此法测定发酵液中氨基酸含量的变化，以了解可被微生物利用的氮源的量及利用情况，并以此作为控制发酵生产的 指标之一。
①40%中性甲醛溶液：以百里酚酞作指示剂，用氢氧化钠将40%甲醛中和至淡蓝色。
随着食品科学的发展和营养知识的普及，食物蛋白质中必 需氨基酸含量的高低及氨基酸的构成，愈来愈得到人们的 重视。为提高蛋白质的生理效价而进行食品氨基酸互补和 强化的理论，对食品加工工艺的改革，对保健食品的开发 及合理配膳等工作都具有积极的指导作用。因此，食品及 其原料中氨基酸的分离、鉴定和定量也就具有极其重要的 意义
知识点：氨基酸态氮的测 定方法之双指示剂甲醛滴
定法
情景四：食品中常规成分的检测 任务五：蛋白质和氨基酸的测定
食品Байду номын сангаас析与检验技术
蛋白质可以被酶、酸或碱水解，其水解的最终产物为氨 基酸。氨基酸是构成蛋白质的最基本物质，虽然从各种天 然源中分离得到的氨基酸已达175种以上，但是构成蛋白 质的氨基酸主要是其中的20种，而在构成的氨基酸中， 亮氨酸、 异亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨算、蛋氨酸、苏氨 酸、色氨酸和缬氨酸等8种氨基酸在人体中不能合成，必 须依靠食品供给，故被称为必需氨基酸，它们对人体有着 极其重要的生理功能，常会因其在体内缺乏而导致患病或 通过补充而增强了新陈代谢作用。
0. 05mol/L氢氧化钠溶液调节至pH为8.
电位滴定法：原理、试剂、仪器、
测定方法、结果计算 氨基酸是构成蛋白质的最基本物质，虽然从各种天然源中分离得到的氨基酸已达175种以上，但是构成蛋白质的氨基酸主要是其中的20
种，而在构成的氨基酸中，亮氨酸、 异亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨算、蛋氨酸、苏氨酸、色氨酸和缬氨酸等8种氨基酸在人体中不能合成，
(3) 试剂
①40%中性甲醛溶液：以百里酚酞作指示剂，用氢氧化钠 将40%甲醛中和至淡蓝色。 ②0.1%百里酚酞乙醇溶液 ③0.1%中性红50%乙醇溶液 ④0.1%mol/L氢氧化钠标准溶液
(4) 操作方法
移取含氨基酸约20～30mg的样品溶液2份，分别置于 250ml锥形瓶中，各加50ml 蒸馏水，其中1份加入3滴中 性红置试剂，用0.1mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至由红 变为 琥珀色为终点；另1份加入3滴百里酚酞指示剂及中 性甲醛20ml，摇匀，静置1分钟，用0.1ml/L氢氧化钠标 准溶液滴定至淡蓝色为终点。分别纪录两次所消耗的碱液 ml数。
0mL甲醛溶液，用0.
③ 同时取80mL水，先用0.
反应式（有三种不同的推论）如下：
1mL甲醛溶液，混匀。
1mL甲醛溶液，混匀。
1%mol/L氢氧化钠标准溶液
(2) 方法特点及应用
1、蛋白质系数是如何计算出来的？
酸度计（附磁力搅拦器）
Na2B4O7 溶解后，定容至1000mL
m——测定用样品溶液相当于样品的质量，g
池，用氢氧化钠标准溶液滴定，依据酸度计指示的pH值判断和控制滴定终点。
4.1 双指示剂甲醛滴定法
(1) 原理
氨基酸具有酸性的-COOH基和碱性的-NH2基。它们相 互租用而使氨基酸成为中性的内盐。当加入甲醛溶液时， -NH2基与甲醛结合，从而使其碱性消失。这样就可以用 强碱标准溶液来滴定-COOH基，并用间接的方法测定氨 基酸的总量。反应式（有三种不同的推论）如下：