14760233_抗牛传染性鼻气管炎病毒囊膜gD糖蛋白的单链抗体在昆虫细胞中表达及活性检测

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吴 ! 靖%0许 ! 健0黄 秀 芬0沈 俊 俊0何 后 军%李 永 清0"
%'江西农业大学动物科学技术学院南昌 **&&)20'北京市农林科学院畜牧兽医研究所 畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京 %&&&3/
摘!要为了获得具有生物学活性的 牛 传 染 性 鼻 气 管 炎 病 毒 $-X8,7$#9Z\#[$-86Y$-#76B,Y8$7$Z[$69ZUA>fK< 蛋 白特异性单链抗体试验采用 @;> 方法扩增杂交瘤 细 胞 的 ,<OD 单 链 抗 体 重 链 可 变 区 fR和 轻 链 可 变 区 fT 基因通过重叠延伸 @;> 及 T$-.86序列获得完整的单链抗体基因将单链抗体基因克隆至杆状病毒载体5]A!TU;! AZ8中构建重组转移载体 5]A!fR!fT将其转化至大肠杆菌 <R%&AB,感受态细胞中制备重 组 杆 粒6AB,H$"!fR! fT将重组杆粒6AB,H$"!fR!fT 转染至 =X3细胞中获得携带单 链 抗 体 基 因 的 重 组 杆 状 病 毒 该 重 组 杆 状 病 毒 在 =X3细胞中表达了分子质量约为*&.9的 单 链 抗 体 蛋 白 W8Z786-\:#77$-K 结 果 显 示重 组 单 链 抗 体 蛋 白 能 被 R$Z 标签抗体特异性结合也能特异性结合 K< 蛋白间接免疫荧光试验结果显示该单链抗体蛋白能够 识 别 感 染 牛 肾 细胞 P<Ae 中的UA>f本研究在昆虫细胞中成功表达 了 具 有 识 别UA>f 的 K< 蛋 白 特 异 性 单 链 抗 体为 牛 传 染 性鼻气管炎的诊断与治疗奠定了基础 关键词牛传染性鼻气管炎病毒囊膜糖蛋白 K<单链抗体杆状病毒表达系统 中图分类号=120n(2d3n%!!!!文献标识码D !!!!文章编号%(/%!/0*(0&%/&1!0)/2!&1
收 稿 日 期 0&%/!&*!&% 基金项目国家重点研发计划b畜禽重大疫病防控与高效安全养殖综合技术研发0&%(M]<&2&&3&&现代农业产业技术体系北京市奶 牛 创 新
团 队 岗 位 专 家 资 助 经 费 项 目 \+,EZ7F!-E!* 作 者 简 介 吴 ! 靖 %330!女 湖 南 益 阳 人 硕 士 生 研 究 方 向 畜 禽 疫 病 防 控 G!HB$:J9+$-K%330&)%3!%0(',#H " 通 信 作 者 李 永 清 研 究 员 研 究 方 向 动 物 病 毒 分 子 生 物 学 ?8:&%&!2%2&*%32G!HB$:,Y9-E9"B"E!Z$-B',#H
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在 诸 多 治 疗 性 生 物 制 剂 里 !抗 体 是 最 直 接 ( 有 效 的 !然 而 传 统 的 抗 体 如 康 复 动 物 的 血 清 (卵 黄 抗 体 及 单 克 隆 抗 体 !由 于 成 分 复 杂 以 及 异 源 动 物 间 的 免 疫 排 斥 现 象 !越 来 越 不 适 合 临 床 应 用 ' 0& 世 纪 1& 年 代 初 !随 着 分 子 生 物 学 的 发 展 !人 们 开 始 利 用 基 因 工 程 抗 体 !如 嵌 合 抗 体 (人 源 化 抗 体 (单 链 抗 体 "Z$-K:8 ,YB$- X6BKH8-7 [B6$B\:8! =,][#等 '=,][是 由 抗 体 重 链 可 变 区 "fR#和 抗 体 轻 链 可 变 区 "fT#通 过 一 段 连 接 肽 连 接 而 成 的 一 种 小 分 子 基 因 工 程 抗 体 ' *0!*+ 它 不 仅 具 备 完 整 抗 体 与 抗 原 特 异 性 结 合 的 特 性 !还 具 有 易 于 构 建 和 大 规 模 表 达 (分 子 质 量 小 (穿 透 力 强 (免 疫 原 性 低 等 优 点 *)!2+!显 示 出 比 完 整 长 度 的 单 克 隆 抗 体 更 大 的 优 势 !更 加 适 合 临 床 应 用 'K< 糖 蛋 白 位 于UA>f 囊 膜 及 感 染 细 胞 的 表 面 !是 UA>f 表 面 的 主 要 糖 蛋 白 之 一 *(+!在 病 毒 吸 附 (侵 入 宿 主 细 胞 的 过 程 中 发 挥 着 重 要 作 用 !不 仅 能 诱 导 体 液 免 疫 !还 能 诱 导 细 胞 免 疫 */!1+!且 抗 K< 单 克 隆 抗 体 还 具 有 中 和 活 性 !可 中 和 病 毒 ' 因 此 !本 研 究 在 制 备 抗 K< 单 克 隆 抗 体 的 基 础 上 !利 用 >?!@;> 从 杂 交 瘤 细 胞 的 >OD 中 获 得 =5UB 基 因 !然 后 利 用 杆 状 病 毒 表 达 系 统 制 备 抗 UA>f 的 =,][!进 一 步检测了其生物学活性'
#! 材 料 与 方 法
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<R%&AB,感 受 态 细 胞(P<Ae 细 胞(5]A!TU;!AZ8 载体均由 畜 禽 疫 病 防 控 技 术 北 京 市 重 点 实 验 室 保
存&5TA!Z$H5:8![8,7#6载 体 购 自 天 根 生 化 科 技 "北 京#有限公 司&大 肠 杆 菌 ?#5%& 感 受 态 细 胞 购 自 北 京康为世纪生物科技有限公司'
#J!! 主 要 试 剂 ";?@("4?@("O?@Z(>O8BZE P$-$e$7(hUD!
I9$,. @;> @96$X$,B7$#- e$7(hUD5685 =5$- P$-$! 5685e$7(@:BZH$" PBF$e$7及 48:GF76B,7$#- e$7 均购自 hUDO4GO 公司&]BZ7h9B-7>?=9586P$F ]BZ7h9B-7,<OD 第 一 链 合 成 预 混 试 剂(<T0&&& <OD PB6.86(<T%2&&&<OD PB6.86(@;> 相 关 试 剂(增强型 R>@!<DA 底 物 显 色 试 剂 盒 均 购 自 天 根 生化科技"北京#有限 公 司&GF$ ( 酶(E+2> ( 酶 均 购 自 OGA 公 司&;8::X8,7$- $ >8BK8-7(U-Z8,7! S568ZZ无血清 培 养 基 均 购 自 T#-LB 公 司&@6#A#-" @96$X$,B7$#-K=EZ78H 试 剂 盒 购 自U-[$76#K8- 公 司& 羊抗鼠!UK4!R>@ 购自 =$KHB公司' #JM! 引 物 设 计 及 合 成
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抗牛传染性鼻气管炎病毒囊膜BS 糖蛋白的单链抗体 在昆虫细胞中表达及活性检测
! ! 牛 传 染 性 鼻 气 管 炎 "$-X8,7$#9Z\#[$-86Y$-#76B! ,Y8$7$Z!UA>#是 由 牛 传 染 性 鼻 气 管 炎 病 毒 "$-X8,7$#9Z\#[$-86Y$-#76B,Y8$7$Z[$69Z!UA>f#感 染引起的严重危害 养 牛 业 的 传 染 病!在 国 内 外 的 养 牛场 广 泛 流 行'UA>f 为 & 疱 疹 病 毒 成 员!能 在 牛 的 神 经 节 细 胞 潜 伏 并 导 致 持 续 性 感 染*%+!以 至 于 即 使高效的疫苗也无 法 根 除 潜 伏 在 牛 体 内 的 病 毒!因 此只能利 用 抗 病 毒 制 剂 来 杀 灭 和 清 除 细 胞 内 的 病 毒'目前!普遍使用 的 抗 疱 疹 病 毒 制 剂 包 括 化 学 药 物和生物制剂!由于 化 学 药 物 的 毒 副 作 用 和 药 物 残 留 极 易 对 动 物 本 身 (畜 产 品 安 全 造 成 危 害 !因 此 靶 向 性抗病毒生物制剂才是解决UA>f 持续性感染及治 疗患病牛的重要手段'
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