前列腺癌组织血管内皮生长因子-C及其受体-3、核干因子表达与病理分级的相关性
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【关 键词］ 前列腺癌 ；血管内皮生长因子－ｃ；血管 内皮生长 因子受 体．３；核 干因子 ；病理分级 ［中圈分类号］ １１７３７．２５ ［文献标识码］ Ａ ［文章编号） １００５－９２０２（２０１８）１７－４１５５－０３：ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．ｉ００５－９２０２．２０１＆１７．０２３
前列 腺癌 为男 性泌 尿 系统最 为 常见 的恶性 肿瘤 之 一 ， 研 究 表 明 ，其 发 生 率 占男 性 肿 瘤 的 ９．７％ ［１．２】。前 列腺癌因临床表现隐匿、自然病程长 ，目前 尚未普及检 查 ，故多数患者诊断时已处 于疾病晚期。前列腺癌发 生发展与多种 因子相关 ，内皮 生长 因子 （ＶＥＧＦ）一Ｃ为 ＶＥＧＦ家族成员 ，而其受体 （ＶＥＧＦＲ）－３为 ＶＥＧＦ—Ｃ酪 氨酸激酶受体 ，两者结合后具有促进机体血管及 淋巴 管生成 作用 ．４Ｊ。研究 证 实 ，ＶＥＧＦ—Ｃ与 ＶＥＧＦＲ－３ 结合后 ，可促进肿瘤 中心及外周淋 巴管生成 ，并具有诱 导 血管 新 生及 维持 血管 内皮 完整 性等 作用 。核 干 因子 （Ｎｓ）为 ｐ５３结合蛋 白，其于已分化组织 中不表达 ，干 细胞或者肿瘤细胞表达水平显著升高 ，且于干细胞及 多种癌细胞增 殖过程 中发挥 了重要作用 。ＶＥＧＦ—Ｃ、 ＶＥＧＦＲ－３及 ＮＳ于多 种恶 性肿 瘤组 织 中表 达水 平 异 常 已有研究证实 ，但前列腺癌组织表 达及其 与病理分级 之间关 联 尚未 见报 道。本 研 究探 讨 前 列腺 癌 组 织 ＶＥＧＦ．ｃ、ＶＥＧＦＲ．３及 ＮＳ水平及其与病理分级之 间相 关性 。
２．６）ｋｇ／ｍ ，术前总前列腺特异性抗原 （ＰＳＡ）（１４９．６±
４３．６）ｎｇ／ｍｌ，游 离 ＰＳＡ水平 （１６，３￣６．９）ｎｇ／ｍｌ，前列 腺
体积 （１３９．６￣４５．６）ｍｌ，Ｇｌｅａｓｏｎ评分（６．３ ４－２．１），ＴＮＭ
第 一作 者 ：王县平 （１９６２－），男 ，副主任 医师 ，主要 从事泌尿系结石 、前列 腺增生及 肿瘤研 究。
分级 Ｔ１ｃ级 ６例 ，ｒ２ｂ级 １３例 ，Ｔ２ｃ级 １６例 ，ｒｌ３ａ级 ５ 例 。术 前均 未接 受 手术 、化 疗及 放 疗 干 预 、中药 治 疗 ； 取癌旁组织 ４０份 （癌旁组织组 ），均经病理检查证实。 选 择 同期行 前列 腺手 术 患者经 病理 检查 为正 常组 织者 ４ｏ例 （对 照 组 ），年 龄 ４９—８１岁 ，平 均 年 龄 （７Ｏ．３± ９．３）岁 ，体质量指数 （２２．９±２．７）ｋｇ／ｍ 。三组基本资 料 差异无 统 计学 意义 （Ｐ＞０．０５）。 １．２ ＶＥＧＦ—Ｃ、ＶＥＧＦＲ－３水 平 测定 制作 病 理组 织 石 蜡 块 、切 片 ，将石蜡 切 片常 规脱 蜡 、蒸 馏水 冲洗后 ，再 以 磷 酸盐 缓 冲液 （ＰＢＳ）浸 泡 ；将 切 片 置 入 高 压 锅 ３ ｒａｉｎ 后冷却 ；再以 ＰＢＳ浸泡 ３次 ，每次 ５ ｍｉｎ；滴加增强剂工 作液后置于室温下孵育 １０ ｍｉｎ；滴加一抗后置于 ４℃ 冰箱 内过夜 ，取 出后 再 滴 加增 强 剂 工 作 液 置 于室 温 环 境下孵育 ２０ ｍｉｎ；再滴加酶标羊抗鼠／兔聚合物工作液 （购 自北京 中杉 金 桥 生 物 技 术 有 限 公 司 ）置 于 室 温 环 境下孵育 ３０ ｍｉｎ；再以 ＰＢＳ浸泡 ３次 ，每次 ５ ｒａｉｎ；再以 二 氨基 联苯 胺 （ＤＡＢ）显 色 、苏 木 素 复 染 ，常 规 脱 水 透 明后使用 中性树 胶封 片 ，置于显 微镜 下观 察 。 １．３ ＮＳ水平测定 常规脱蜡 ，应用胰 酶抗原修复 ；再 应用 ３％Ｈ：Ｏ 消 除内源性 过氧化物酶活性后应用正 常兔 血清封 闭 ；滴 加 羊 抗 人 Ｎｓ抗 体 ，置 于 ４℃ 冰 箱 过 夜 ；滴加生物素标记 的兔抗羊 二抗 ，置 于室温环境下 ２０ ｍｎｉｎ；ＰＢＳ清 洗后 滴加 辣 根过 氧 化 物 酶标 记 的链 卵 白素 ，置 于室温 下孵 育 ２０ ｒａｉｎ；再 以 ＤＡＢ显色 ，苏 木素 复染 ，封 片 ，置 于显微 镜下 观察 。 １．４ 结果评估 （１）ＶＥＧＦ—Ｃ结果判定 ：将封 片置 于 ２００倍显微镜下观察 ，以细胞核不染色 、细胞质内发现 棕色或者棕黄色颗粒作为 阳性染色标准 ，其 中，阴性 ： 染色细胞数＜１０％；弱 阳性 ：染色细胞数 １０％ 一２５％ ； 阳性 ：染色细胞数 ２６％ ～５０％；强阳性｛染色 细胞数 ＞ ５０％ ¨。（２）ＶＥＧＦＲ－３结 果 判 定 ：细胞 质 内及 细 胞 膜
王
前 列 腺 癌组 织 血 管 内皮 生 长 因子 ．Ｃ及其 受 体 ．３、核 干 因子表 达 与 病 理 分 级 的相 关 性
王县平 严海员 杨 锋 胡 俊 吴 奥 王 炜 （武汉市第九医院泌尿外科 ，湖北 武汉 ４３００８１）
［摘 要 ） 目的 观察前列腺癌组织血管 内皮生 长 因子 （ＶＥＧＦ）．Ｃ、ＶＥＧＦ受体 （ＶＥＧＦＲ）．３及 核干 因子 （Ｎｓ）水 平 ，并分析 其 与病理分 级相关性 。方法 前列腺癌患者 ４ＪＤ例（前列腺癌组 ）均经术后病 理检查证 实 ，并取 癌旁组织 ４０份 为癌旁组 织组 ，取 同期 正常前 列腺组织 ４ＪＤ份为对照组 。采取免疫组化法测定 ＶＥＧＦ．Ｃ、ＶＥＧＦＲ－３及 Ｎｓ水平 。结果 与对照组 比较 ，前列腺癌组及癌旁组 织组 ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦＲ￣及 Ｎｓ阳性 率 均显 著增 高 （均 Ｐ＜Ｏ．０５）；与癌旁 组 织 组 比较 ，前 列 腺 癌组 ＶＥＧＦ．Ｃ阳性率 显 著增 高 （Ｐ＜ ０．０５）。与 Ｔｌｃ级 比较 ，Ｔ２ｂ，Ｔ２ｃ及 ，Ｉ３ａ级 Ⅶ ＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦＲ￣ 及 Ｎｓ表达显著增强 （均 Ｐ＜０．０５）；与 Ｔ２ｂ级 比较 ， ｃ及 －Ｉ３ａ级 ＶＥＧＦ． Ｃ、ＶＥＧＦＲ￣ 及 ＮＳ表达显著增强 （均 Ｐ＜Ｏ．０５）；与 Ｔ２ｃ比较 ，１３ａ级 ＶＥＧ￣Ｃ、ＶＥＧＦＲ￣及 Ｎｓ表达显著增强 （Ｐ＜０．０５）。结论 前列 腺癌组织 ＶＥＧＦ·Ｃ、ＶＥＧＦＲ￣ 及 ＮＳ水平 均升高 ，且前列腺癌病理 分级越高 ＶＥＧＦ．Ｃ、ＶＥＧＦＲ￣及 Ｎｓ表达越强 ，ＶＥＧＦ．Ｃ、ＶＥＧＦＲ￣ 及 ＮＳ可能在前列腺癌进展 中发挥重要作用 。
１ 临医院２０１５年 １月至 ２０１６
年 ９月手 术及 均经 术后 病理 检查 证实 的前 列腺 癌患 者
４ｏ例为前列腺癌组 ，结合相关实验室检查结果及术后
病理 检查 均 符 合 前 列 腺 癌 诊 断 标 准 Ｊ，年 龄 ５ｌ一７９
岁 ，平 均 年 龄 （６９．９±９．８）岁 ，体 重 指 数 （２２．３±
前列 腺癌 为男 性泌 尿 系统最 为 常见 的恶性 肿瘤 之 一 ， 研 究 表 明 ，其 发 生 率 占男 性 肿 瘤 的 ９．７％ ［１．２】。前 列腺癌因临床表现隐匿、自然病程长 ，目前 尚未普及检 查 ，故多数患者诊断时已处 于疾病晚期。前列腺癌发 生发展与多种 因子相关 ，内皮 生长 因子 （ＶＥＧＦ）一Ｃ为 ＶＥＧＦ家族成员 ，而其受体 （ＶＥＧＦＲ）－３为 ＶＥＧＦ—Ｃ酪 氨酸激酶受体 ，两者结合后具有促进机体血管及 淋巴 管生成 作用 ．４Ｊ。研究 证 实 ，ＶＥＧＦ—Ｃ与 ＶＥＧＦＲ－３ 结合后 ，可促进肿瘤 中心及外周淋 巴管生成 ，并具有诱 导 血管 新 生及 维持 血管 内皮 完整 性等 作用 。核 干 因子 （Ｎｓ）为 ｐ５３结合蛋 白，其于已分化组织 中不表达 ，干 细胞或者肿瘤细胞表达水平显著升高 ，且于干细胞及 多种癌细胞增 殖过程 中发挥 了重要作用 。ＶＥＧＦ—Ｃ、 ＶＥＧＦＲ－３及 ＮＳ于多 种恶 性肿 瘤组 织 中表 达水 平 异 常 已有研究证实 ，但前列腺癌组织表 达及其 与病理分级 之间关 联 尚未 见报 道。本 研 究探 讨 前 列腺 癌 组 织 ＶＥＧＦ．ｃ、ＶＥＧＦＲ．３及 ＮＳ水平及其与病理分级之 间相 关性 。
２．６）ｋｇ／ｍ ，术前总前列腺特异性抗原 （ＰＳＡ）（１４９．６±
４３．６）ｎｇ／ｍｌ，游 离 ＰＳＡ水平 （１６，３￣６．９）ｎｇ／ｍｌ，前列 腺
体积 （１３９．６￣４５．６）ｍｌ，Ｇｌｅａｓｏｎ评分（６．３ ４－２．１），ＴＮＭ
第 一作 者 ：王县平 （１９６２－），男 ，副主任 医师 ，主要 从事泌尿系结石 、前列 腺增生及 肿瘤研 究。
分级 Ｔ１ｃ级 ６例 ，ｒ２ｂ级 １３例 ，Ｔ２ｃ级 １６例 ，ｒｌ３ａ级 ５ 例 。术 前均 未接 受 手术 、化 疗及 放 疗 干 预 、中药 治 疗 ； 取癌旁组织 ４０份 （癌旁组织组 ），均经病理检查证实。 选 择 同期行 前列 腺手 术 患者经 病理 检查 为正 常组 织者 ４ｏ例 （对 照 组 ），年 龄 ４９—８１岁 ，平 均 年 龄 （７Ｏ．３± ９．３）岁 ，体质量指数 （２２．９±２．７）ｋｇ／ｍ 。三组基本资 料 差异无 统 计学 意义 （Ｐ＞０．０５）。 １．２ ＶＥＧＦ—Ｃ、ＶＥＧＦＲ－３水 平 测定 制作 病 理组 织 石 蜡 块 、切 片 ，将石蜡 切 片常 规脱 蜡 、蒸 馏水 冲洗后 ，再 以 磷 酸盐 缓 冲液 （ＰＢＳ）浸 泡 ；将 切 片 置 入 高 压 锅 ３ ｒａｉｎ 后冷却 ；再以 ＰＢＳ浸泡 ３次 ，每次 ５ ｍｉｎ；滴加增强剂工 作液后置于室温下孵育 １０ ｍｉｎ；滴加一抗后置于 ４℃ 冰箱 内过夜 ，取 出后 再 滴 加增 强 剂 工 作 液 置 于室 温 环 境下孵育 ２０ ｍｉｎ；再滴加酶标羊抗鼠／兔聚合物工作液 （购 自北京 中杉 金 桥 生 物 技 术 有 限 公 司 ）置 于 室 温 环 境下孵育 ３０ ｍｉｎ；再以 ＰＢＳ浸泡 ３次 ，每次 ５ ｒａｉｎ；再以 二 氨基 联苯 胺 （ＤＡＢ）显 色 、苏 木 素 复 染 ，常 规 脱 水 透 明后使用 中性树 胶封 片 ，置于显 微镜 下观 察 。 １．３ ＮＳ水平测定 常规脱蜡 ，应用胰 酶抗原修复 ；再 应用 ３％Ｈ：Ｏ 消 除内源性 过氧化物酶活性后应用正 常兔 血清封 闭 ；滴 加 羊 抗 人 Ｎｓ抗 体 ，置 于 ４℃ 冰 箱 过 夜 ；滴加生物素标记 的兔抗羊 二抗 ，置 于室温环境下 ２０ ｍｎｉｎ；ＰＢＳ清 洗后 滴加 辣 根过 氧 化 物 酶标 记 的链 卵 白素 ，置 于室温 下孵 育 ２０ ｒａｉｎ；再 以 ＤＡＢ显色 ，苏 木素 复染 ，封 片 ，置 于显微 镜下 观察 。 １．４ 结果评估 （１）ＶＥＧＦ—Ｃ结果判定 ：将封 片置 于 ２００倍显微镜下观察 ，以细胞核不染色 、细胞质内发现 棕色或者棕黄色颗粒作为 阳性染色标准 ，其 中，阴性 ： 染色细胞数＜１０％；弱 阳性 ：染色细胞数 １０％ 一２５％ ； 阳性 ：染色细胞数 ２６％ ～５０％；强阳性｛染色 细胞数 ＞ ５０％ ¨。（２）ＶＥＧＦＲ－３结 果 判 定 ：细胞 质 内及 细 胞 膜
王
前 列 腺 癌组 织 血 管 内皮 生 长 因子 ．Ｃ及其 受 体 ．３、核 干 因子表 达 与 病 理 分 级 的相 关 性
王县平 严海员 杨 锋 胡 俊 吴 奥 王 炜 （武汉市第九医院泌尿外科 ，湖北 武汉 ４３００８１）
［摘 要 ） 目的 观察前列腺癌组织血管 内皮生 长 因子 （ＶＥＧＦ）．Ｃ、ＶＥＧＦ受体 （ＶＥＧＦＲ）．３及 核干 因子 （Ｎｓ）水 平 ，并分析 其 与病理分 级相关性 。方法 前列腺癌患者 ４ＪＤ例（前列腺癌组 ）均经术后病 理检查证 实 ，并取 癌旁组织 ４０份 为癌旁组 织组 ，取 同期 正常前 列腺组织 ４ＪＤ份为对照组 。采取免疫组化法测定 ＶＥＧＦ．Ｃ、ＶＥＧＦＲ－３及 Ｎｓ水平 。结果 与对照组 比较 ，前列腺癌组及癌旁组 织组 ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦＲ￣及 Ｎｓ阳性 率 均显 著增 高 （均 Ｐ＜Ｏ．０５）；与癌旁 组 织 组 比较 ，前 列 腺 癌组 ＶＥＧＦ．Ｃ阳性率 显 著增 高 （Ｐ＜ ０．０５）。与 Ｔｌｃ级 比较 ，Ｔ２ｂ，Ｔ２ｃ及 ，Ｉ３ａ级 Ⅶ ＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦＲ￣ 及 Ｎｓ表达显著增强 （均 Ｐ＜０．０５）；与 Ｔ２ｂ级 比较 ， ｃ及 －Ｉ３ａ级 ＶＥＧＦ． Ｃ、ＶＥＧＦＲ￣ 及 ＮＳ表达显著增强 （均 Ｐ＜Ｏ．０５）；与 Ｔ２ｃ比较 ，１３ａ级 ＶＥＧ￣Ｃ、ＶＥＧＦＲ￣及 Ｎｓ表达显著增强 （Ｐ＜０．０５）。结论 前列 腺癌组织 ＶＥＧＦ·Ｃ、ＶＥＧＦＲ￣ 及 ＮＳ水平 均升高 ，且前列腺癌病理 分级越高 ＶＥＧＦ．Ｃ、ＶＥＧＦＲ￣及 Ｎｓ表达越强 ，ＶＥＧＦ．Ｃ、ＶＥＧＦＲ￣ 及 ＮＳ可能在前列腺癌进展 中发挥重要作用 。
１ 临医院２０１５年 １月至 ２０１６
年 ９月手 术及 均经 术后 病理 检查 证实 的前 列腺 癌患 者
４ｏ例为前列腺癌组 ，结合相关实验室检查结果及术后
病理 检查 均 符 合 前 列 腺 癌 诊 断 标 准 Ｊ，年 龄 ５ｌ一７９
岁 ，平 均 年 龄 （６９．９±９．８）岁 ，体 重 指 数 （２２．３±